一种成人化实验小鼠模型的建立方法

1.本发明属于实验小鼠模型技术领域，具体是一种成人化实验小鼠模型的建立方法。


背景技术：

2.人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，通过观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。
3.spf级小鼠一直生长于无菌环境，免疫细胞组成接近新生儿，与临床长期暴露在环境微生物中的病人不同，越来越多的人担心实验室老鼠和人类免疫系统不同，以此动物模型的研究成果不易转化到临床。
4.文献报道通过spf级c57小鼠接触野生或宠物商店小鼠后引入的共生和致病微生物，可显著影响免疫系统的细胞组成和功能。spf级小鼠缺乏有效分化和粘膜分布的记忆t细胞，这更像新生儿而不是成年人。通过引入致病微生物，使小鼠cd8+t细胞分化发生改变，效应记忆t细胞(cd44hi,cd62llo)比例升高，免疫系统更接近成人。
5.文献报道通过将spf级c57小鼠与宠物鼠共饲养，可以引起c57小鼠免疫细胞组成发生变化，效应记忆t细胞比例升高，抗感染能力升高，但未见balb/c小鼠在其方面的相关报道，建立一个合适的合笼方法用在balb/c小鼠上很重要，因为这样可以进行老鼠与老鼠之间的实验，例如骨髓移植。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种成人化实验小鼠模型的建立方法。
7.为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：一种成人化实验小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：
8.(1)野生雌性宠物鼠与6～8周spf级雌性balb/c小鼠共饲养，共饲养时间为4周，4周之后分开单独饲养，饲养在处于普通室内环境的笼子里；
9.(2)合笼共饲养四周后，尾静脉取血20μl，标记抗体30min：cd3-fitc,cd4-bv421，cd8-percp-cy5.5，cd44-apc，cd62l-pe，流式细胞术检测合笼后balb/c小鼠效应记忆t细胞的比例，确定合笼是否成功。
10.优选地，上述步骤(1)中野生雌性宠物鼠与spf级雌性balb/c小鼠的饲养比例为2:6。
11.优选地，上述步骤(1)中笼子长宽高分别为28cm、17cm和16cm，垫料为玉米芯，饲料为高压鼠粮。
12.优选地，上述步骤(2)中确定合笼是否成功的条件为：效应记忆t细胞比例小于8％视为合笼不成功，大于8％视为合笼成功。
13.本发明提供一种成人化实验小鼠模型的建立方法，本发明与现有技术相比，优点在于：本发明通过将农场购买的野生雌性宠物小鼠与6～8周spf级雌性balb/c小鼠合笼共饲养，通过一个合适的比例2:6和一个合适的合笼时间4周，既可以引起balb/c小鼠的免疫系统发生变化，又不至于引起过多小鼠死亡；通过流式细胞术检测合笼后balb/c小鼠效应记忆t细胞(cd44hi,cd62llo)的比例，当比例小于8％视为合笼不成功，比例大于8％时，视为合笼成功；合笼4周后，将balb/c小鼠与野生宠物鼠分开饲养，接下来的7周观察发现合笼成功的小鼠健康状况更好，合笼后的balb/c小鼠免疫系统发生变化，更接近成人的免疫系统；利用该种合笼方法获得成人化实验小鼠简单，方便，利用合笼成功的balb/c小鼠进行实验研究，更有利于将实验结果转化到临床。
附图说明
14.图1为本发明小鼠饲养的环境及笼子图。
15.图2为spf级饲养的balb/c小鼠和合笼4周后的balb/c小鼠的效应记忆t细胞比例的流式代表图。
16.图3为本发明合笼后的balb/c小鼠效应记忆t细胞比例大于8％时及小于8％时balb/c小鼠的体重分布条形图。
具体实施方式
17.为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例中对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
18.实施例1
19.本发明将6～8周spf级雌性balb/c小鼠与农场购买的野生雌性宠物鼠共饲养，我们不断探讨，最终确定比例为6:2，在普通环境笼子里共饲养四周后分开单独饲养，笼子长宽高分别为28cm、17cm和16cm，垫料为吴氏购买的玉米芯，饲料为吴氏购买的高压鼠粮，这样小鼠的存活率可达95.8％，取得了很大的突破。合笼共饲养四周后，尾静脉取血20μl,标记抗体30min:cd3-fitc,cd4-bv421,cd8-percp-cy5.5,cd44-apc,cd62l-pe，流式细胞术检测效应记忆t细胞的比例，效应记忆t细胞比例大于8％视为合笼成功。合笼成功的balb/c小鼠比例可高达为83.3％。接下来的观察中，与效应记忆t细胞比例低于8％的小鼠相比，合笼成功的小鼠健康状况更好。如图3所示，合笼后的balb/c小鼠，当效应记忆t细胞比例大于8％时，balb/c小鼠体重高。
20.以此共饲养合笼的方法获得成人化实验小鼠模型简单方便，可以为科学研究提供一种新的成人化实验小鼠模型。
21.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。


技术特征：
1.一种成人化实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)野生雌性宠物鼠与6～8周spf级雌性balb/c小鼠共饲养，共饲养时间为4周，4周之后分开单独饲养，饲养在处于普通室内环境的笼子里；(2)合笼共饲养四周后，尾静脉取血20μl，标记抗体30min：cd3-fitc,cd4-bv421，cd8-percp-cy5.5，cd44-apc，cd62l-pe，流式细胞术检测合笼后balb/c小鼠效应记忆t细胞的比例，确定合笼是否成功。2.根据权利要求1所述的一种成人化实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，上述步骤(1)中野生雌性宠物鼠与spf级雌性balb/c小鼠的饲养比例为2:6。3.根据权利要求1所述的一种成人化实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，上述步骤(1)中笼子长宽高分别为28cm、17cm和16cm，垫料为玉米芯，饲料为高压鼠粮。4.根据权利要求1所述的一种成人化实验小鼠模型的建立方法，其特征在于，上述步骤(2)中确定合笼是否成功的条件为：效应记忆t细胞比例小于8％视为合笼不成功，大于8％视为合笼成功。

技术总结
本发明公开了一种成人化实验小鼠模型的建立方法，特别涉及于实验小鼠模型技术领域，本发明通过将农场购买的野生雌性宠物小鼠与6～8周SPF级雌性Balb/c小鼠合笼共饲养，通过一个合适的比例2:6和一个合适的合笼时间4周，既可以引起Balb/c小鼠的免疫系统发生变化，又不至于引起过多小鼠死亡，通过流式细胞术检测合笼后Balb/c小鼠效应记忆T细胞的比例，合笼4周后，将Balb/c小鼠与野生宠物鼠分开饲养，接下来的7周观察发现合笼成功的小鼠健康状况更好，合笼后的Balb/c小鼠免疫系统发生变化，更接近成人的免疫系统，利用该种合笼方法获得成人化实验小鼠简单，方便，利用合笼成功的Balb/c小鼠进行实验研究，更有利于将实验结果转化到临床。到临床。到临床。


技术研发人员：张娜 林仁章 许云禄 林佳 孙华琴 蓝瑞隆
受保护的技术使用者：福建医科大学附属协和医院
技术研发日：2023.05.10
技术公布日：2023/8/16