成束神经移植物、其制造方法及将其用于治疗的方法与流程

成束神经移植物、其制造方法及将其用于治疗的方法
相关申请的交叉引用
1.本专利申请要求获得2021年10月20日提交的美国非临时专利申请第17/451,489号的优先权，该申请要求获得2020年10月22日提交的美国临时专利申请第63/104,437号的优先权，这些申请的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
2.本公开一般而言是关于神经生物学及医学领域。更具体而言，本公开是关于成束神经移植物、制造此种神经移植物的方法及使用此种神经移植物治疗神经缺陷的方法。


背景技术：

3.神经损伤可引起各种类型的慢性疼痛，包括神经性疼痛。周边神经损伤是由多种意外损伤引起的常见临床挑战，且呈现急剧上升之趋势。周边神经损伤通常会导致瘫痪、麻痹及失去对相应之身体区域的自主控制。虽然神经损伤的手术修复目前是此类损伤的常见治疗方法，但结果并不理想。因此，需要新的策略来改善神经损伤后的轴突再生及目标器官之神经支配。
4.周边神经系统的神经元被理解为具有比中枢神经系统的神经元更高的内在再生能力，并且可以在合适的环境条件下再生轴突。然而，周边神经再生过程复杂且受多种因素控制，例如与神经再生有关的微环境。尽管如此，自体神经移植已被公认为修复周边神经缺损的黄金标准。
5.在许多临床情况下，没有足够的神经组织来允许通过被横切的神经之直接的端对端接合进行之周边神经的无张力重建。在这些情况下，可使用不同来源的神经移植物来桥接神经间隙。自体神经移植通常需要第二个手术部位，这需要额外的手术时间、永久性疤痕及供体神经区域的感觉丧失，且可能导致持续性之术后疼痛。自体神经移植物的替代物是使用经加工之同种异体神经移植物或经加工过之异种神经移植物，两者皆为神经再生提供生物基质，并且与自体神经移植物一样，可在没有免疫抑制的情况下使用。尽管如此，目前可用的商品级移植物技术是有限的，因为它们可能并非“适配”任何特定的手术需求。神经移植物的质量及可用性，特别是适合任何特定患者所需之长度及直径尺寸仍为一大挑战。事实上，目前可用的商品级神经移植物在长度及直径方面的尺寸有限，可能无法满足所有患者的需求。


技术实现要素：

6.根据本公开，提供了一种成束神经移植物，其包括一个或多个神经束，其中该成束神经移植物基本上不含神经外鞘及原生细胞外基质物质。
7.此外，根据本公开，提供了一种制备成束神经移植物的方法，该方法包括：提供至少一种神经组织，该神经组织包括一个或多个神经束且包括原生细胞外基质物质及神经外鞘；以降解该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的酶处理该至少一种神经组织；清洗经处
理的该至少一种神经组织以基本上将该酶去除及/或去活化并且基本上去除该原生细胞外基质物质之降解产物及该神经外鞘之降解产物，从而产生基本上不含该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的一个或多个神经束；以及从基本上不含该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的该一个或多个神经束之至少一个神经束形成成束神经移植物。
8.本技术领域中具有通常知识者将理解，本文公开的神经移植物、制备神经移植物的方法及使用神经移植物的治疗方法可用于人类及其他脊椎动物的外科手术，以及用于实验室之研究、比较及分析。
9.本技术领域中具有通常知识者还将理解，除了具体举例者之外，起始材料、生物材料、生物相容性材料、组分、生长因子、试剂、酶及溶液、疗法、药物以及制备与治疗方法可以在本公开的实践中使用而无需过度的实验。任何此类材料及方法之所有本领域中已知的功能等效物旨在包括于本公开中。
10.本文所述之使用成束神经移植物的制备与提供治疗的方法可以更好地使用可能会因其直径或束之数量不足而被拒绝使用的低产量供体。例如，本公开提供组合分离自多于一个的所采集之神经之束，以产生具有所欲长度及直径的成束神经移植物。因此，所公开的方法例如可以提高可用供体神经的产量，并使移植过程更有效率且更为经济。
11.由以下详细描述，本公开的其他目的、特征及优点将变得明显。然而，应当理解，详细描述及示例虽然指示了本公开的示例性实施方式，但仅通过说明的方式提出，因为在本发明的精神及范围内的各种改变及修改因详细描述而对本技术领域中具有通常知识者而言将变得显而易见。应注意，单纯因为特定化合物属于一个通式并非意指其不会也属于另一通式。
12.除非上下文另有规定，否则单数形式“一”及“该”包括复数之参考。术语“大约”及“约”是指与参考数字或值几乎相同。如本文所用，术语“大约”及“约”通常应理解为涵盖指定量或值的
±
5％。申请专利范围中使用的术语“或”用于表示“及/或”，除非明确指出仅指替代方案、或替代方案为互斥的，尽管本公开支持仅指替代方案与“及/或”的定义。如本文所使用，“另一个”可表示至少第二者或更多。在本技术中，术语“约”用于表示一个值包括装置误差的固有变异、用于确定该值的方法或存在于研究对象之间的变异。
13.以上的一般描述及以下的详细描述都只是示例性及说明性的，而不对所要求保护的特征有所限制。如本文所用，术语“包括”、“包含”、“具有”、或该等之其他变体旨在涵盖非排他性的包含，从而包括组件列表的过程、方法、物品或设备不仅包括该等组件，还可以包括未明确列出的或此类过程、方法、物品或设备固有的其他组件。另外，本文中使用的术语“示例性”之意义为“示例”而非“理想”。此外，用于描述值范围的术语“之间”旨在包括本文所述的最小值及最大值。
14.已采用的术语及表达被用作描述性术语而非限制性术语，并且无意在使用此类术语及表达时排除所示及所描述的特征或其部分之任何等效物，但应理解，在所要求保护的公开范围内可以进行各种修改。
附图说明
15.以下图式构成本说明书的一部分并且被包括在内以进一步展示本公开的某些方面。通过参考这些图式之一者或多者并结合本文呈现之示例性实施方式的详细描述，能够
更佳地理解本公开。
16.图1示出周边神经组织的截面图。
17.图2示出去除神经外鞘及原生细胞外基质物质，并将个别神经束分离后的图1所示之周边神经组织的神经束。
18.图3示出放置于生物材料片材上之图2所示的个别神经束。
19.图4示出由图3所示的神经束及生物材料片材形成的神经移植物。
20.图5示出以酶处理神经组织之前的反映神经束及细胞外基质物质之经染色的神经组织。
21.图6示出以酶处理神经组织之后的经染色的神经束。
具体实施方式
22.本公开的神经移植物可制备成多种长度及直径以匹配多种手术需求。因此，本公开可提供更为成功的神经再生及更好的患者成果。示例性神经移植物、用于其制备的相关方法及使用神经移植物的相关治疗方法于下文详细描述。
23.根据本公开的一些实施方式，制备神经移植物包括提供具有一个或多个神经束的神经组织。
24.图1至4示出用于制备成束神经移植物114的神经组织100的示例。图1至4仅是说明性的，而不对本公开范围有所限制。图1示出神经组织100的截面图，包括神经束102、原生细胞外基质(ecm)物质104及神经外鞘106。神经组织100可包括一个神经束，或一个以上之神经束102，如图1所示。适用于本公开的神经组织100可从动物获得，例如哺乳动物如人类或非人类哺乳动物。一种以上的神经组织100可用于本文所述的方法中，并且来自一种以上类型的神经组织100例如人类神经组织及非人类神经组织之神经束102，或来自不同非人类哺乳动物之非人类神经组织，可在制备成束神经移植物114时进行组合。图4所示之成束神经移植物114可从分离自人类、非人类动物或其他脊椎动物的神经组织100制备。起始神经材料可源自体内任何合适的神经组织。起始神经材料可包括周边神经组织或脊神经组织，并可最终被使用在形成用于周边或脊神经移植的神经移植物。
25.根据本公开的成束神经移植物(包括图示之成束神经移植物114)对于欲以成束神经移植物进行治疗的患者可为同种异体的或异种的。在图1至4的例子中，成束神经移植物114包括神经组织100的三维显微构造架构，且可包括神经组织100固有的蛋白质组分。本文还考虑了包括一种或多种免疫抑制技术的方法，该技术在植入患者体内之前及/或之后被执行于神经组织(例如神经组织100)及/或由神经组织制备的成束神经移植物(例如，由神经组织100制备的成束神经移植物114)。例如，在将束合并入成束神经移植物之前，捐赠的神经组织可被处理以选择性地去除细胞组分及/或碎屑，及/或在根据本文之方法进行治疗之前，神经组织可被加工以选择性地去除细胞组分及/或碎片。
26.根据本文方法制备示例性成束神经移植物114可包括用一种或多种酶处理神经组织100，该酶至少部分地或完全地降解原生ecm物质104及神经外膜鞘106。该酶可包括在以水为基底之溶液如磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline，pbs)或盐水中浓度高至1:20之例如iv型胶原蛋白酶、其他类型的胶原蛋白酶(i或iii，浓度高至1mg/ml)或基质金属肽酶(matrix metallopeptidase，mmp)(例如mmp7或mmp12)。
27.以一种或多种酶处理神经组织(例如，神经组织100)可在约4℃与约37℃之间的温度进行，例如在约4℃与约15℃之间、约10℃与约20℃之间，或约20℃与约30℃之间。此外，以酶处理神经组织100可进行约2小时至约24小时之间的时间段，例如约2小时与约5小时之间、约8小时与约12小时之间、约16小时与约24小时之间，或约6小时与约12小时之间。在至少一个示例中，以一种或多种酶处理神经组织100可在约35℃至约40℃的温度进行约2小时至约6小时之间的时间段，并且，更具体而言，在约37℃的温度进行约2小时至约4小时之间的时间段。在至少一个示例中，以酶处理神经组织100可在约4℃至约6℃的温度进行约4小时至24小时之间的时间段。以酶处理神经组织100可利用搅拌而进行。
28.然后可以清洗包括个别神经束(例如，神经束102)之经处理的神经组织以从经处理的神经组织去除任何残留的酶及/或碎屑。即，该方法还可包括清洗经处理的神经组织以去除酶、残留的原生ecm物质或神经外鞘降解产物。在一些方面，清洗经处理的神经组织可通过平衡ph值将酶去活化。通过进行清洗步骤可以完全或至少部分地去除酶及/或将酶去活化。例如，可以使用如磷酸盐缓冲液(pbs)、含丝氨酸的血清或该等之组合的溶液来清洗经处理的神经组织。清洗经处理的神经组织可利用搅拌而进行。此外，清洗经处理的神经组织的步骤可在约4℃至约40℃之间的温度进行。此外，清洗经处理的神经组织的步骤可进行约1分钟至约4小时之间的时间段。更进一步，清洗经处理的神经组织的步骤可执行一次以上，例如两次、三次或四次或更多次。经处理的神经组织可被充分清洗以去除原生ecm物质及神经外鞘，从而产生一个或多个不包括或基本上不含原生ecm物质及神经外鞘的神经束。如本文所用，术语“基本上不含原生ecm物质”是指去除全部或至少50％的原生ecm物质。在某些实施方式中，一个或多个基本上不含原生ecm物质的神经束已经去除了至少约85％或至少约95％的原生ecm物质。在其他实施方式中，基本上不含原生ecm物质的一个或多个神经束已经去除了至少约99％或全部的原生ecm物质。此外，基本上不含神经外鞘的一个或多个神经束已经去除了至少约95％、至少约99％或全部的神经外鞘。
29.附加地或替代地，该方法还可包括在溶液中将经处理及清洗的神经组织进行悬浮及培养。培养可在约4℃与约37℃之间的温度进行，如约4℃与约15℃之间、约10℃与约20℃之间、或约20℃与约30℃之间。培养可进行约45分钟至约24小时的时间段，例如约1小时与约2小时之间、约3小时与约8小时之间、约6小时与约12小时之间或约12小时与约24小时之间。例如，培养可在约4℃的温度进行6小时至约24小时的时间段。在另一示例中，培养可在约37℃的温度进行约45分钟至60分钟的时间段。在一些方面，培养可在37℃进行约3小时至约5小时的时间段，例如在37℃进行约4小时。虽然本文列出了持续时间及温度的示例性范围，但一般而言，随着培养温度降低，培养的持续时间可能增加。悬浮神经组织、培养神经组织或两者也可利用搅拌而进行。用于悬浮及培养的溶液可包括丝氨酸组分，包括至少α-抗胰蛋白酶及α-2-巨球蛋白。溶液可为含丝氨酸的血清。例如，该溶液可包含胎牛血清、山羊血清、马血清、猪血清、绵羊血清、鸡血清或兔血清。
30.附加地或替代地，该方法还可包括以缓冲溶液清洗悬浮及培养之神经组织的步骤，以去除用于悬浮经清洗的神经组织之步骤中的溶液。缓冲溶液可具有约6.8与约7.8之间的ph，例如约7.2、约7.4或约7.6。在至少一个示例中，悬浮的神经组织可在约37℃的温度以缓冲溶液清洗约45分钟至约55分钟的时间段。在至少一个示例中，悬浮的神经组织可在约4℃的温度以缓冲溶液清洗约1小时至约6小时的时间段。此外，可利用搅拌而进行以缓冲
溶液清洗悬浮的神经组织之步骤。缓冲溶液可包括例如磷酸盐缓冲液或其他合适的缓冲液。
31.经处理及清洗的神经组织的神经束接着可彼此分离，从而产生分离的神经束。图2示出源自神经组织100的五个分离的神经束108(即，图2的五个分离的神经束108对应于图1中描绘的六个神经束102中的五个)。接着可将任意数量的分离的神经束基本上对齐(可选地与从一个或多个其他神经组织样本中获得的一个或多个神经束组合，包括其中那些从不同来源获得的神经组织样本)，并且非末端侧通过缠绕或滚动被管状包夹来制备成束神经移植物(例如，成束神经移植物114)，该成束神经移植物包含一个或多个神经束，没有或基本上不含原生ecm物质及/或神经外鞘。图3示出七个分离的神经束108，包括源自图3所示的神经组织100的五个分离的神经束108，以及源自不同神经组织的两个另外的分离的神经束108。也就是说，参考图3及图4，成束神经移植物114可由至少一个分离的神经束(例如，多个分离的神经束108)及包括围绕神经束108的生物相容性材料之管状包裹材料(entubulation material)110形成。用于形成成束神经移植物114的所有神经束108可以来自相同的神经组织，或者一个或多个神经束108可与从其他神经组织获得的一个或多个其他神经束组合。此种其他神经束可从以与上述相同的方式处理及清洗的神经组织获得。
32.用于制备根据本公开的成束神经移植物(例如成束神经移植物114)的个别之束基本上没有被用于处理神经组织(例如神经组织100)的处理方法以及随后的清洗及培养所改变及损坏。酶基本上消化神经组织的原生ecm物质(例如，神经组织100的原生ecm物质104)及神经外鞘(例如，神经外鞘106)，而基本上不会损坏神经束。适用于消化原生ecm物质及神经外鞘而不会改变或损坏神经束的酶包括以上所述者，例如专一性及非专一性胶原蛋白酶或胶原蛋白专一性酶或化学药品。例如，iv型胶原蛋白酶可用于去除原生ecm物质及神经外鞘。不改变或损坏神经束的酶是使神经束及围绕各神经束的神经束膜(perineurium)基本上完整且具有足够的质量来处理神经束的酶。此外，在处理神经组织的过程中，围绕各束之神经束膜可能会受到影响，同时保持基本上完整及足够的质量来处理神经束。如本文所用，术语“基本上完整且具有足够的质量来处理”是指以下一项或多项：神经束能够被操作，例如使用诸如镊子之工具拾取，而神经束无需分离散开；神经束可以维持与原生神经组织中的神经束(例如，神经组织100中的神经束102)相似的形式及形状；神经束保持为没有流动性的固态；或者神经束的物理特性如拉伸强度及弹性模量，例如可与原生神经组织中的神经束(例如，神经组织100的神经束102)的物理特性相似。图5示出在根据本文的方法以一种或多种酶进行处理之前被原生ecm物质104围绕之经层连结蛋白染色的神经束102。图6示出处理后之相同的经层连结蛋白染色的神经束102，其中神经束102保持完整，而原生ecm物质104及神经外鞘106被去除。以下的示例1描述根据本公开之处理及清洗神经组织如神经组织100的方法。
33.根据一些实施方式，将经处理、分离的神经束对齐(如果使用多于一个神经束)及管状包夹(entubulate)，包括通过以生物相容性材料之管状包夹材料包裹。管状包夹材料可为具有足够强度的任何材料，其能够被操作例如以工具如镊子拾取，同时保持其形状，且可为例如片材、鞘、管、凝胶或粘合剂。管状包夹材料可为能够将束保持在一起呈现代表原生神经(例如，神经组织100)的形状之形状的任何材料。此外，管状包夹材料可由具有足够强度的任何材料或材料之组合形成，该材料能够承受缝合线的插入以将管状包夹材料附接
于神经末梢或另一种材料。图3示出如图3所示之片材形式的示例性管状包夹材料110。或者，神经束(例如，神经束108)可通过以包括生物相容性材料之管围绕束的非末端侧而被管状包夹。管状包夹材料可包括各种材料或材料的组合，其可为天然的或合成的。适合用作形成本文的成束神经移植物之管状包夹材料的示例性生物相容性材料包括但不限于完整的ecm、胶原蛋白(包括但不限于分离的i型胶原蛋白或其他类型的胶原蛋白，包括ii、iii、iv、v、vi型)、合成的生物可降解材料(例如聚酯，如聚乳酸(pla)、聚乳酸-乙醇酸共聚物(polylactiv-co-glycolic acid，plga)、聚-l-乳酸(poly-l-lactic acid，plla)、聚乙二醇(peg)或聚己内酯(pcl))、多糖(包括例如几丁聚糖、海藻酸盐、纤维素)、氧环己酮聚合体(polydioxanone，pds)、聚合物(包括例如基于蛋白质的聚合物)、纤维蛋白原、纤维蛋白、明胶及水凝胶。用作管状包夹材料的生物相容性材料可为生物可降解的。以下列出合适的生物相容性材料的进一步之细节。可将管状包夹材料片材放置成环绕并包含一个或多个具有所欲构造及尺寸、包括根据患者的需求定制的构造及尺寸的个别神经束。在一些示例中，生物相容性粘合剂或密封剂可用于制备成束神经移植物。例如，如果管状包夹材料包括一个或多个需要闭合的接缝(例如，卷成管的片材)，则接缝可通过使用生物相容性粘合剂或密封剂而被闭合(例如，片材的边缘可被接合并密封在一起)。根据本公开之可用于闭合接缝的粘合剂或密封剂的示例包括但不限于源自生物的或合成的材料，包括但不限于peg、纤维蛋白胶、分离的i型胶原蛋白(或其他类型的胶原蛋白，包括ii、iii、iv、v及vi型)及光硬化粘合剂。密封剂或粘合剂可确保与周边神经组织相似的机械特性及弹性模量。
34.替代地或除了对至少一个神经束(例如，神经束108)进行管状包夹之步骤，制备成束神经移植物(例如，成束神经移植物114)可包括将神经束包埋于涂覆材料或以涂覆材料涂覆，该涂覆材料为生物相容性材料或生物相容性材料的组合。涂覆材料可为例如凝胶形式，或者可包括粘合剂，或者可包括凝胶及粘合剂两者。在将神经束包裹在管状包夹材料中并以涂覆包覆材料包埋或涂覆的情况下，用作涂覆材料的生物相容性材料可与上述用作管状包夹材料的生物相容性材料相同或不同。例如，将神经束排列整齐于管状包夹材料上之后，对齐的神经束可以包埋于涂覆材料中，然后包裹于管状包夹材料中。或者，例如，将神经束对齐于管状包夹材料上对齐并包裹于管状包夹材料中之前，能够以涂覆材料包埋或涂覆神经束。并且，作为涂覆步骤的另一个替代方案，在将神经束对齐于管状包夹材料上并将神经束包裹于管状包夹材料中之前，管状包夹材料可涂有涂覆材料(即，涂覆材料(例如图3及图4所示之涂覆材料112)散布于管状包夹材料上)。
35.此外，替代地或除了嵌入或涂覆神经束的步骤，制备成束神经移植物可包括以填充材料至少部分地或完全地填充神经束之间的空间的步骤，该填充材料包含生物相容性材料或生物相容性材料的组合，包含凝胶、胶原蛋白、明胶、多糖、水凝胶、纤维蛋白、纤维蛋白原、海藻酸盐、纤维素、几丁聚糖或细胞外基质物质之一者或多者。用作填充材料的生物相容性材料与用作管状包夹材料的生物相容性材料可相同也可不同，且在其中除了涂覆神经束的步骤之外还执行填充步骤的情况下，与用作涂覆材料的生物相容性材料可相同或不同。例如，一层填充材料可填充神经束及管状包夹材料之间的空间，及/或神经束之间的空间。即，制备成束神经移植物的方法可包括，例如，在将神经束对齐于管状包夹材料上并将已排列整齐的神经束包裹在管状包夹材料中之后，可例如通过注射将填充材料添加至被管状包夹的神经束之间的管状包夹材料内之空间。
36.本文的方法可用于生产所欲尺寸的神经移植物，具有所欲之长度、周长及横截面尺寸(宽度，例如圆柱形神经移植物的情况下之直径)。为此，用于制备成束神经移植物的个别神经束之数量可包括适于实现所欲宽度(或直径)的神经移植物之任何数量的神经束，且例如可包含两个或更多束。即，在一些实施方式中，成束神经移植物包括单个神经束，并且在其他实施方式中，成束神经移植物包括一个以上之神经束108。例如，成束神经移植物可包括多个神经束，例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少8个、至少10个、至少12个或至少16个神经束。在一些示例中，神经移植物包括2至20个神经束、5至15个神经束、14至18个神经束，或者甚至超过20个神经束，取决于神经束的尺寸、患者体内将要使用成束神经移植物的位置、以及成束神经移植物将要附接的神经之特性。
37.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可具有适合患者手术需求的尺寸，并且用于形成成束神经移植物之神经束的数量可以至少部分地基于一个或多个神经束的尺寸及成束神经移植物之所欲尺寸来决定，包括由其使用之位置及患者体内手术部位的细节而决定者。根据本公开的一些方面，成束神经移植物可包括直径彼此基本相似的神经束，或者成束神经移植物可包括两个或更多个直径彼此基本上不同的个别之神经束，并且进而成束神经移植物可包括个别之神经束，其中一些神经束具有与另一神经束基本上相似的直径，而其他神经束具有与另一神经束基本上不同的直径。各神经束(例如，各神经束108)的直径可为约50μm与约1mm之间、约50μm与约5mm之间，例如约100μm与约500μm之间，约250μm与约750μm之间、约600μm与约900μm之间、约750μm与约1mm之间、或约750μm与约5mm之间。
38.选择成束神经移植物的尺寸以匹配受体神经的成束区域及/或总直径。因此，可以选择用于形成神经移植物的束之数量及尺寸以将成束神经移植物的总体尺寸与受体神经的束之数量及/或尺寸进行匹配。成束神经移植物(例如成束神经移植物114)的直径可为约50μm与约10mm之间，例如约100μm与约500μm之间、约250μm与约750μm之间、约600μm与约约900μm之间、或约750μm与约5mm之间。个别之束可具有约10μm的最小直径。对于成束神经移植物的任何单一之所欲直径，可从一个束或一个以上之束制备成束神经移植物。在成束神经移植物由一个以上之神经束形成的情况下，用于形成成束神经移植物的神经束之直径可为基本上相似。如本文所用，“直径基本上相似”是指神经束的直径为彼此的
±
20％以内。或者，用于形成成束神经移植物的神经束可以彼此不同。并且，如上所述，所使用的束之数量可取决于神经束的尺寸、以及患者体内将要使用成束神经移植物的位置、与成束神经移植物将要附接的神经之特性。
39.本文中形成成束神经移植物(例如，成束神经移植物114)的方法可包括修改多个神经束(例如，神经束108)之长度的步骤，以提供例如多个神经彼此基本上相同的长度。例如，在将神经束结合于通过上述任何方法制备的成束神经移植物之前、期间或之后，可例如通过任何适当的技术修剪或切割神经束，其可包括如上所述之管状包夹、包埋或涂覆及/或填充的步骤之一者或多者。在某些方面，各神经束应该从神经移植物的一端延续到另一端，以最佳地防止轴突脱离或形成神经瘤。成束神经移植物可以形成为具有约3mm与约200mm之间的长度，例如约5mm与约100mm之间，约20mm与约50mm之间、约45mm与约75mm之间、或约15mm至约40mm之间。此外，例如，成束神经移植物可限定范围为约5mm3至约55000mm3的总体积，例如约100mm3至约25000mm3、约500mm3至约10000mm3、约1000mm3至约5000mm3、约500mm3至约2000mm3、约100mm3至约5000mm3或约7500mm3至约15000mm3。
40.本文描述的成束神经移植物(例如成束神经移植物114)还可包括神经生长因子、细胞、包括混合细胞群中的多种细胞类型之细胞混合物、细胞组分、非类固醇型抗炎剂或免疫抑制剂之一者或多者，其中之任一者都可在形成成束神经移植物中之任何时间点随时被包含，及/或可在形成成束神经移植物后添加至成束神经移植物中。此外，通过引用整体而并入本文之美国临时申请案第63/071635号中描述的免疫抑制技术及免疫亲和剂(immunophilic agent)可用于本公开之成束神经移植物中的再生活性及免疫抑制活性。
41.根据本文描述的方法制备的成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可用于治疗患者的方法，例如重建周边神经之不连续性以支持跨神经间隙之轴突再生。患者可为人类或非人类动物(例如猫、狗、马等)。例如，根据本文之方法用于治疗的成束神经移植物可经由外科手术进行移植。在示例性程序中，若有需要，外科医生或其他医疗专业人员可在所关注的部位检查患者的组织并切除愈伤组织(scar tissue)。受损神经的近端及远程节段可例如通过视觉及触觉征象被清创至健康组织。进而，外科医生可以测量限定神经间隙的神经末端之间的距离及受损神经的直径，以便选择合适长度及直径的成束神经移植物。然后可以将根据本公开制备之成束神经移植物植入患者体内。外科医生可以使用缝合线将成束神经移植物连接于限定神经间隙的神经末端。可选地，治疗患者还可包括镇痛疗法及/或非类固醇型抗炎剂、生长因子或免疫抑制剂的施用。如上所述，此类药剂可被导入成束神经移植物中，及/或可分开地施用于患者。非类固醇型抗炎剂，例如非类固醇抗发炎药(nsaid)如布洛芬，可以减轻疼痛、退烧、预防血栓，且在相对较高的剂量下可以减少炎症。此种nsaid可为非选择性地抑制两种环氧合酶(cox-1及cox-2)的活性，或选择性地抑制cox-2的活性。免疫抑制剂可帮助防止对植入的成束神经移植物产生不必要的免疫反应。可用于本公开的免疫抑制剂可包括但不限于类固醇(包括但不限于睪固酮及雌激素)、糖皮质素、细胞增殖抑制剂、抗体、作用于亲免素之药物及其他免疫抑制药物。亲免素配位体，如fk506，提供免疫抑制特性，同时经由独立的作用机制改善神经再生。
42.如上所述，可通过将一个或多个神经束(例如神经束108)与一种或多种生物相容性材料以及其他可选的补充材料进行组合来形成本文描述的成束神经移植物(例如成束神经移植物114)。特别地，神经束可被管状包夹(例如，包裹于其中或被其包围)在管状包夹材料(例如图3及图4所示的管状包夹材料110)中、包埋于涂覆材料中或以涂覆材料涂覆(例如图3及4所示的涂覆材料112)、及/或被填充材料包围，其中管状包夹材料、涂覆材料及/或填充材料包括一种或多种生物相容性材料，包括生物可降解之生物相容性材料，以形成成束神经移植物。下面列出的生物相容性材料可用于填充束之间的空间。生物相容性材料可用于将束包埋于最终构造(即最终成束神经移植物)内。在一些方面，生物相容性材料可用于涂覆最终制品的外层。如下文更详细所描述，各种材料，包括非原生ecm物质、胶原蛋白、几丁聚糖、海藻酸盐、生物可降解之聚合物、纤维素、纤维蛋白原、纤维蛋白、蛋白质基聚合物、明胶、多糖(除几丁聚糖、海藻酸盐或纤维素以外者)之一者或多者，可选地以水凝胶的形式，可用于管状包夹及/或包埋或涂覆一个或多个神经束、及/或填充一个或多个神经束周围的空间。所列出的ecm物质及蛋白质被认为是可允许稳定成束神经移植物中的神经束并帮助防止所植入之组织内的软组织浸润之一般的生物相容性蛋白质。
43.如上所述，管状包夹材料及/或涂覆材料可以包括非原生ecm物质，也就是在去除原生ecm物质及神经外鞘的某些部分后添加的ecm物质。非原生ecm物质可来自不同类型的
组织或来自不同的物种。此外，非原生ecm物质包含蛋白质，该蛋白质可包括但不限于层连结蛋白(例如层连结蛋白α-2、层连结蛋白α-4、层连结蛋白α-5、层连结蛋白β-1、层连结蛋白β-2、层连结蛋白γ-1)、胶原蛋白(例如，胶原蛋白ivα-1(iv)链、胶原蛋白ivα-1/5(iv)链、胶原蛋白αiv-2链、胶原蛋白αiv-3链、胶原蛋白iα-1链、胶原蛋白α-2(i)链、胶原蛋白α-3(vi)链、胶原蛋白α-1(vi)链、胶原蛋白α-1(xxviii)链、胶原蛋白α-1(iii)链、胶原蛋白α-3(v)链、胶原蛋白α-1(xvi)链、胶原蛋白α-1(xxi)链、胶原蛋白α-2(vi)链、胶原蛋白α-1(viii)链、胶原蛋白α-1(v)链、胶原α-1(ii)链、胶原蛋白α-1(xiv)链、胶原蛋白α-1(xii)链)、纤网蛋白(例如纤网蛋白1(iii型4，7结构域))、无孢蛋白聚糖(asporin)、珍珠素(perlecan)、巢蛋白(nidogen)(例如，巢蛋白-1、巢蛋白-2)、基膜聚糖、皮连蛋白(dermatopontin)、角蛋白、ii型细胞骨架1、小纤维蛋白-1、核心蛋白聚糖(decorin)、玻璃粘连蛋白(vitronectin)、髓磷脂蛋白p0、髓磷脂p2蛋白、prolargin、双糖链蛋白聚糖(biglycan)、骨膜素(periostin)及α-水晶体蛋白b链。这些当中，至少以下蛋白质被认为有助于神经移植物的再生能力：层连结蛋白α-2、层连结蛋白α-4、层连结蛋白α-5、层连结蛋白β-1、层连结蛋白β-2、层连结蛋白γ-1、胶原蛋白ivα-1(iv)链、胶原蛋白ivα-1/5(iv)链、胶原蛋白αiv-2链、胶原蛋白αiv-3链、纤网蛋白1(iii型4，7结构域)、珍珠素、巢蛋白-1及巢蛋白-2。非原生ecm物质可包括一种或多种类型的原生ecm物质，该原生ecm物质在神经组织加工之前便存在于其中并且从该神经组织获得一个或多个神经束。
44.作为管状包夹材料及/或涂覆材料的生物相容性材料可附加地或替代地包括一种或多种类型的胶原蛋白。例如，胶原蛋白可为由薄片材形成之架构的形式。尽管其他类型的胶原蛋白例如胶原蛋白ii、iii、iv及/或v也可包括在组合物中，但特别考虑胶原蛋白i。其他类型的胶原蛋白，分为纤维状(i、ii、iii、v、xi型)、非纤维状、facit(fibril associated collagens with interrupted triple helices，具有中断之三重螺旋之纤维相关胶原蛋白)(ix、xii、xiv、xix、xxi型)、短链(viii、x型)、基底膜(iv型)、multiplexin(multiple triple helix domains with interruptions，具有中断之多重三重螺旋结构域)(xv、xviii型)、macit(membrane associated collagens with interrupted triple helices，具有中断之三重螺旋的膜相关胶原蛋白)(xiii、xvii型)或其他(vi、vii型)胶原蛋白。一般而言，较佳可为胶原蛋白i及胶原蛋白iii，因为这些类型的胶原蛋白包括原生ecm物质。例如，这些胶原蛋白可源自牛、马、猪或人类来源，并且可与聚硅氧、糖胺聚多糖、纤维母细胞及/或生长因子组合而使用。
45.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可以附加地或替代地包括一种或多种多糖作为生物相容性材料。可使用任何类型之生物相容性的、生物可降解的多糖。此类多糖可包括但不限于几丁聚糖、海藻酸盐或纤维素。纤维素可包括任何一种或多种类型的纤维素i、ii、iii或iv。
46.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可包括一种或多种生物相容性聚合物，例如一种或多种生物可降解之聚合物。附加地或替代地，成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可包括一种或多种蛋白质基聚合物。在一些示例中，成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可包括聚乙二醇(peg)，取决于其分子量也被称为聚环氧乙烷(peo)或聚氧乙烯(poe)。
47.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可以附加地或替代地包括纤维蛋白
(也称为因子ia)及/或纤维蛋白原。纤维蛋白或纤维蛋白原通常可促进束及成束神经移植物的稳定。
48.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可附加地或替代地包括来自胶原蛋白之明胶。明胶也可称为水解胶原蛋白、胶原蛋白水解物、明胶水解物及/或水解明胶。明胶通常可促进束及成束神经移植物的稳定。
49.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可包括水凝胶。水凝胶可由纤维素、纤维素的任何衍生物或玻尿酸之任一者或其组合组成，且不限于此。水凝胶也可交联以调整其机械特性。水凝胶可为天然来源或合成来源。
50.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)附加地或替代地可包括神经生长因子(nerve growth factor，ngf)，其可表达为7s、130-kda之三种蛋白质－α-ngf、β-ngf及γ-ngf的复合物(比例2:1:2)(prongf(ngf前驱物))，或者可为以下类型之一者：脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，bdnf)、神经营养因子-3(neurotrophin-3，nt-3)、神经营养因子-4(neurotrophin-4，nt-4，也称为nt4、nt5、ntf4及nt-4/5)，内源性类固醇去氢表雄酮(endogenous steroids dehydroepiandrosterone，dhea)及/或其硫酸酯，称为硫酸去氢表雄脂酮(dhea sulfate，dhea-s)。神经生长因子可增加再生其轴突之神经元数量，这可以增强运动及感觉恢复与目标肌肉之神经支配。
51.类固醇如睪固酮及/或雌激素也可用于成束神经移植物114。
52.成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可附加地或替代地包括细胞、包括混合细胞群中的多种细胞类型之细胞混合物、及/或细胞组分。细胞及混合细胞群中的细胞混合物之细胞类型包括但不限于许旺细胞、巨噬细胞、脂肪细胞、来自许旺细胞之胞外体与所提及之细胞类型。细胞的来源可为源自人类或从干细胞分化或从诱导性富潜能干细胞分化转移(transdifferentiate)。所添加的细胞可为能够改善神经再生之细胞激素及其他因子的来源。
53.如上所述，成束神经移植物(例如成束神经移植物114)可设置、储存于缓冲溶液中、及/或于缓冲溶液中制备及/或以缓冲溶液制备。关于储存，可将成束神经移植物置于储存容器中，然后将其维持在约-80℃至室温(约20℃至约22℃)之范围内的温度。储存容器可急骤冷冻并维持在-80℃或更低的温度数周、数月或数年。储存容器也可为基本上气密且以惰性气体回填。在一些示例中，如本文所公开地处理组织(例如，利用酶或消化溶液，并以可包括缓冲溶液的含丝氨酸之血清清洗一次或多次，并且可选地进行包含缓冲溶液的额外清洗)，然后转移至缓冲溶液，例如缓冲盐水溶液，其ph值之范围为约7.2至约7.6，例如约7.3至约7.5的ph值、例如约7.4的ph值，以在用于医疗程序之前进行储存。适用于储存根据本文方法制备的移植物之示例性缓冲溶液包括但不限于pbs、盐性阴极液(saline catholyte)、tris缓冲液(tris-buffered saline)、二甲胂酸盐缓冲液(cacodylate buffer)、索任生磷酸盐缓冲液(sorensen's phosphate buffer)、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液(phosphate-citrate buffer)及巴比妥缓冲液(barbital buffer)。实施例
54.通过以下非限制性示例可以进一步理解本公开。示例旨在说明上述公开而不应解释为缩小其范围。本技术领域中具有通常知识者将容易地理解这些示例提出了可以实践本公开的许多其他方式。应当了解，在保持于本公开之范围内的同时可以进行多种变化及修
改。实施例1
55.如下述般制备成束神经移植物之前，对神经组织进行处理以去除原生ecm物质及神经外鞘。以下步骤是在无菌条件下于层流柜中进行。首先，将100μl之iv型胶原蛋白专一性消化酶(例如，0.8mg/ml之胶原蛋白酶iv)溶液转移至1.5ml离心管中。将神经组织节段(约3mm长)及100μl(移液管之设置)之相应的酶溶液放入1.5ml离心管中，于37℃培养2至4小时。极为小心地使用球型移液管吸取消化酶溶液以免物理性地损坏节段。然后以1ml之pbs清洗节段3次，在清洗之间进行倒置藉此轻柔地混合。如上所述利用移液管去除清洗液。在每次清洗之间去除尽可能多的流体，确保不会损坏节段。避免测试节段与球型移液管尖端之间的接触。
56.接着，将吸出的pbs替换为例如500μl之胎牛血清(fbs)，然后在37℃下培养45分钟至55分钟。然后从1.5ml离心管中吸出培养基，确保不会损坏节段。这些步骤，即以fbs替换吸出的培养基，在37℃培养45分钟至55分钟，然后从培养箱中取出并吸出培养基，被重复两次。从1.5ml离心管吸出培养基，并替换为1ml之pbs。然后，使用解剖镜，利用精细之手术镊(例如，5号玉工镊(number 5jeweler forceps))从各节段之其余经消化的组织挑出视觉上被分离之束。使用显微剪刀小心地从经消化的组织中清除束。实施例2
57.根据示例1的程序，使用iv型胶原蛋白酶消化例如神经组织的原生ecm物质及神经外鞘，制备从动物或人来源获取之神经组织。未进行此类处理的神经组织被用作对照组。对照组神经组织及经处理之神经组织均包埋于石蜡中。获得厚度为8微米之神经样本的横切片。然后对切片进行层连结蛋白染色以辨识神经束。使用组织学上之蓝色试剂辨识原生ecm物质的存在。如图5所示，对照神经组织包括神经束周围的原生ecm物质，而如图6所示，经处理之神经组织在神经束周围几乎没有或不具原生ecm物质。
58.应当理解，虽然已参考较佳之实施方式、示例性实施方式及可选特征作成本公开，但是本技术领域中具有通常知识者可凭借于本文公开的概念之修改及变化，且此种修改及变化被认为是在由所附申请专利范围限定的本公开之范围内。本文提供的具体实施方式及示例是本公开的有用实施方式之示例并且仅为非限制性及说明性的。对于本技术领域中具有通常知识者而言显而易见的是，可以使用本说明书中阐述的装置、装置组件、方法及步骤的大量变体来实施本公开。本技术领域中具有通常知识者将认知到，可用于本方法的方法及装置可以包括大量之各种可选的组合物及处理组件与步骤。

技术特征：
1.一种成束神经移植物，包括一个或多个神经束，其中该成束神经移植物基本上不含神经外鞘及原生细胞外基质物质。2.如权利要求1记载的成束神经移植物，其包括单个神经束。3.如权利要求1记载的成束神经移植物，其包括两个或更多个神经束。4.如权利要求3记载的成束神经移植物，其包括两个神经束至二十个神经束。5.如权利要求3或4记载的成束神经移植物，其中该成束神经移植物包括直径彼此基本上相近的神经束。6.如权利要求5记载的成束神经移植物，其中该神经束每一个的直径为约50μm与约1mm之间。7.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该成束神经移植物的直径为约50μm与约1mm之间。8.如权利要求3至7中任一项记载的成束神经移植物，其中该成束神经移植物包括长度彼此基本上相近的神经束。9.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该成束神经移植物的长度为约3mm与约200mm之间。10.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该一个或多个神经束被管状包夹材料所管状包夹，该管状包夹材料包括生物相容性材料。11.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该一个或多个神经束被包埋在涂覆材料中或被该涂覆材料涂覆，该涂覆材料包括生物相容性材料。12.如权利要求10或11记载的成束神经移植物，其中该管状包夹材料或该涂覆层材料之一者或两者的该生物相容性材料为生物可降解的。13.如权利要求10至12中任一项记载的成束神经移植物，其中该管状包夹材料及该涂覆材料之一者或两者的生物相容性材料为细胞外基质物质，该细胞外基质物质包括胶原蛋白、几丁聚糖、海藻酸盐、生物可降解之聚合物、纤维素、纤维蛋白原、纤维蛋白、蛋白质基聚合物、明胶、多糖、水凝胶或非原生细胞外基质物质之一者或多者。14.如权利要求10记载的成束神经移植物，其中凝胶、胶原蛋白、明胶、多糖、水凝胶、纤维蛋白、纤维蛋白原、海藻酸盐或非原生细胞外基质物质也被该管状包夹材料围绕。15.如权利要求10记载的成束神经移植物，其中该管状包夹材料包括接缝且该接缝被生物相容性粘合剂或密封剂密封。16.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该一个或多个神经束是来自人类、来自非人类之动物或来自两者。17.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该成束神经移植物进一步包括生长因子、细胞、包含混合细胞群中多种细胞类型的细胞混合物、细胞组分、非类固醇型抗炎剂或免疫抑制剂之一者或多者。18.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中该成束神经移植物为周边神经移植物或脊神经移植物。19.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中至少约50％、至少约85％、至少约95％、至少约99％或全部的原生细胞外基质物质已被去除。20.如前述权利要求中任一项记载的成束神经移植物，其中至少约95％、至少约99％或
全部的神经外鞘已被去除。21.一种制备成束神经移植物的方法，其特征在于，包括：提供至少一种神经组织，该神经组织包括一个或多个神经束且包括原生细胞外基质物质及神经外鞘；用降解该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的酶处理该至少一种神经组织；清洗经处理的该至少一种神经组织，以基本上将该酶去除及/或去活化且基本上去除该原生细胞外基质物质之降解产物及该神经外鞘之降解产物，从而产生基本上不含该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的一个或多个神经束；以及从基本上不含该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的该一个或多个神经束中至少一个神经束形成成束神经移植物。22.如权利要求21记载的方法，进一步包括将基本上不含原生细胞外基质物质及神经外鞘的该一个或多个神经束彼此分离，其中该成束神经移植物由基本上不含原生细胞外基质物质及神经外鞘的被分离的该一个或多个神经束形成。23.如权利要求22记载的方法，其中形成该成束神经移植物包括以管状包夹材料对被分离的该一个或多个神经束之至少一个神经束进行管状包夹。24.如权利要求21至23中任一项记载的方法，其中形成该成束神经移植物包括将该至少一个神经束包埋在涂覆材料中或以该涂覆材料涂覆，该涂覆材料包括凝胶、粘合剂或两者皆有。25.如权利要求23记载的方法，其中形成该成束神经移植物包括：以生物相容性材料至少部分地填充该管状包夹材料及该至少一个神经束之间的空间；在两个或更多个神经束被用于形成该成束神经移植物的情况下以该生物相容性材料至少部分地填充该两个或更多个神经束之间的空间；或上述两者，该生物相容性材料包括凝胶、胶原蛋白、明胶、多糖、水凝胶、纤维蛋白、纤维蛋白原、海藻酸盐、纤维素、几丁聚糖或细胞外基质物质之一者或多者。26.如权利要求23记载的方法，其中形成该成束神经移植物包括将涂覆材料放置在管状包夹材料片材上，并以经涂覆之该管状包夹材料对该至少一个神经束进行管状包夹。27.如权利要求22记载的方法，其中该至少一个神经束被包埋在涂覆材料中或被该涂覆材料涂覆，该涂覆材料包括凝胶、粘合剂或凝胶与粘合剂，且其中被包埋或被涂覆的该至少一个神经束接着被管状包夹于管状包夹材料中，该管状包夹材料包括一种或多种细胞外基质物质，该细胞外基质物质包括胶原蛋白、几丁聚糖、海藻酸盐、生物可降解之聚合物、纤维素、纤维蛋白原、纤维蛋白、蛋白质基聚合物、明胶、多糖及/或水凝胶之一者或多者。28.如权利要求23至27中任一项记载的方法，其中该管状包夹材料及该涂覆材料之一者或两者的该生物相容性材料为生物可降解的。29.如权利要求21至28中任一项记载的方法，其中该成束神经移植物包括单个神经束。30.如权利要求21至28中任一项记载的方法，其中该成束神经移植物包括两个或更多个神经束。31.如权利要求30记载的方法，其中该成束神经移植物包括两个神经束至二十个神经束。32.如权利要求30或31记载的方法，其中该成束神经移植物包括直径彼此基本上相近
的神经束。33.如权利要求32记载的方法，其中该神经束各自的直径为约50μm与约1mm之间。34.如权利要求21至33中任一项记载的方法，其中该成束神经移植物的直径为约50μm与约1mm之间。35.如权利要求30或31记载的方法，其中该成束神经移植物包括长度彼此基本上相近的神经束。36.如权利要求21至35中任一项记载的方法，其中该成束神经移植物的长度为约3mm与约200mm之间。37.如权利要求30或31记载的方法，其中形成该成束神经移植物包括修正基本上不含该原生细胞外基质物质及该神经外鞘的该两个或更多个神经束之长度，以具有基本上相同的长度。38.如权利要求21至37中任一项记载的方法，其中该至少一个神经组织是来自人类动物、来自非人类之动物或来自两者。39.如权利要求21至38中任一项记载的方法，进一步包括将生长因子、细胞、包含混合细胞群中的多种细胞类型的细胞混合物、细胞组分、非类固醇型抗炎剂或免疫抑制剂之一者或多者导入该成束神经移植物中。40.如权利要求21至39中任一项记载的方法，其中该成束神经移植物为周边神经移植物或脊神经移植物。41.如权利要求21至40中任一项记载的方法，其中该至少一个神经组织包含两个或更多个神经组织，且该成束神经移植物由该两个或更多个神经组织的神经束形成。42.如权利要求21至41中任一项记载的方法，其中该酶为人类胶原蛋白酶、非人类专一性胶原蛋白酶或非专一性胶原蛋白酶之一者或多者，任选地其中该酶为i型胶原蛋白酶、iii型胶原蛋白酶、iv型胶原蛋白酶或基质金属肽酶。43.如权利要求21至42中任一项记载的方法，其中以该酶处理该神经组织是在约4℃与约37℃之间的温度进行。44.如权利要求21至42中任一项记载的方法，其中以该酶处理该神经组织进行约2小时至约24小时之间的时间段。45.如权利要求21至42中任一项记载的方法，其中以该酶处理该神经组织是在约37℃的温度进行约2小时至约4小时的时间段。46.如权利要求21至42中任一项记载的方法，其中以该酶处理该神经组织是在约4℃的温度进行约4小时至约24小时的时间段。47.如权利要求21至46中任一项记载的方法，其中以该酶处理该神经组织是利用搅拌而进行。48.如权利要求21至47中任一项记载的方法，其中清洗经处理的该神经组织是利用搅拌而进行。49.如权利要求21至48中任一项记载的方法，其中清洗经处理的该神经组织是在约4℃至约40℃之间的温度进行。50.如权利要求21至49中任一项记载的方法，其中清洗经处理的该神经组织的时间段范围为约1分钟至约6小时。
51.如权利要求21至50中任一项记载的方法，其中清洗经处理的该神经组织一次以上。52.如权利要求51记载的方法，进一步包括：使经清洗的该神经组织悬浮于溶液中；以及在该溶液中培养该悬浮的神经组织。53.如权利要求52记载的方法，其中使经清洗的该神经组织悬浮于该溶液中、在该溶液中培养该悬浮的神经组织、或两者皆是利用搅拌而进行。54.如权利要求52或53记载的方法，其中该悬浮的神经组织是在约4℃与约37℃之间的温度培养。55.如权利要求52至54中任一项记载的方法，其中该悬浮的神经组织被培养约45分钟至约24小时的时间段。56.如权利要求52至55中任一项记载的方法，其中该悬浮的神经组织是在约4℃的温度培养约6小时至约24小时的时间段。57.如权利要求52至56中任一项记载的方法，其中该悬浮的神经组织是在约37℃的温度培养约45分钟至约60分钟的时间段。58.如权利要求53至57中任一项记载的方法，其中该溶液包括丝氨酸组分，该丝氨酸组分至少包含α-抗胰蛋白酶及α-2-巨球蛋白。59.如权利要求52至57中任一项记载的方法，其中该溶液选自由胎牛血清、胎山羊血清、胎马血清及胎兔血清组成的组。60.如权利要求52至59中任一项记载的方法，进一步包括在培养后去除该溶液并以缓冲溶液清洗该神经组织。61.如权利要求60记载的方法，其中该缓冲溶液的ph值为约7.4。62.如权利要求60或61记载的方法，其中在约37℃的温度以该缓冲溶液清洗该神经组织至少45分钟的时间段。63.如权利要求60或61记载的方法，其中在约4℃的温度以该缓冲溶液清洗该神经组织至少1小时的时间段。64.如权利要求60至63中任一项记载的方法，其中以该缓冲溶液清洗该神经组织是利用搅拌而进行。65.如权利要求21至64中任一项记载的方法，其中至少约50％、至少约85％、至少约95％、至少约99％或全部的原生细胞外基质物质已被去除。66.如权利要求21至65中任一项记载的方法，其中至少约95％、至少约99％或全部的神经外鞘已被去除。67.一种治疗方法，其特征在于，包括将如权利要求1至20中任一项记载的神经移植物植入患者体内。68.一种治疗方法，其特征在于，包括将通过如权利要求21至66中任一项记载的方法制造的神经移植物植入患者体内。69.如权利要求67或68记载的方法，其中该患者为人类或非人类之动物。70.如权利要求67至69中任一项记载的方法，进一步包括以镇痛疗法、非类固醇抗发炎药、生长因子或免疫抑制剂治疗该患者。

技术总结
本公开提供可定制长度及直径的成束神经移植物及其制备方法。移植物是通过消化神经组织的神经束周围之原生细胞外基质(native extracellular matrix，ECM)及神经外膜而制成。一个或多个单独的束可接着被管状包夹于管状包夹材料中，包埋于涂覆材料或被涂覆材料涂覆，或两者皆有，以形成成束神经移植物。成束神经移植物是可定制的，且设计用于桥接神经间隙(nerve gap)；成束神经移植物的模块化允许复原几乎任何长度的神经缺损的连续性，并允许匹配患者之受体神经的直径。配患者之受体神经的直径。配患者之受体神经的直径。


技术研发人员：珍妮佛
受保护的技术使用者：阿克松根股份公司
技术研发日：2021.10.21
技术公布日：2023/8/9