三氟噻吨在治疗脑血管疾病中的应用

1.本发明属于药物技术，具体涉及三氟噻吨在治疗脑血管疾病中的应用。


背景技术：

2.脑卒中是一组以脑组织缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，又称脑中风或脑血管意外。该病发病急，有极高的致残率和致死率，是当今世界导致死亡的第二大病因，且随着人口老龄化变得越来越严重。急性缺血性脑卒中（急性脑梗死）是最常见的卒中类型，占我国脑卒中的69.6%~70.8%。
3.缺血性脑卒中的发病机制复杂，涉及过氧化、能量代谢障碍、钙超载、兴奋性氨基酸毒性等多种机制。目前唯一被美国fda批准用于缺血性脑卒中治疗的药物是组织型纤维酶原激活剂（tissue plasminogen activator, t-pa，静脉注射），它可以溶解血栓，使血管再通，从而恢复血流。但由于组织型纤维酶原激活剂( t-pa)的治疗窗较窄（卒中后4.5小时使用有效）及易引起出血，仅有小部分患者得到溶栓治疗。因此，寻找治疗缺血性脑卒中新的靶点，具有新作用机制、不良反应少的药物是一件急需解决的问题。


技术实现要素：

4.本发明公开了三氟噻吨在治疗脑血管疾病中的应用；确定三氟噻吨具有治疗缺血性脑卒中的作用，为缺血性脑卒中等脑血管疾病的药物研发提供新靶点、新作用机制及新思路。
5.本发明采用如下技术方案：三氟噻吨在制备治疗脑血管疾病药物中的应用。
6.三氟噻吨在制备减少脑梗死体积药物中的应用。优选的，三氟噻吨在制备减少脑卒中急性期脑梗死体积药物中的应用；进一步优选的，三氟噻吨在制备减少局灶性缺血性脑卒中急性期脑梗死体积药物中的应用。
7.三氟噻吨在制备抑制反应性星形胶质细胞增生药物中的应用。
8.三氟噻吨在制备改善神经症状评分药物中的应用。优选的，三氟噻吨在制备改善脑缺血急性期的神经症状评分药物中的应用。
9.本发明中，药物的活性成分为三氟噻吨或其盐，可以独自作为药物成份，也可以与药学上可接受的辅料一起组成药物，比如分散剂等，具体为常规技术；药物剂型也为常规选择，比如溶液剂、膏剂、栓剂、片剂、粉剂等。
10.本发明中，疾病为缺血性疾病，具体为缺血性脑血管疾病，比如缺血性脑卒中。
11.三氟噻吨是一种具有口服活性的 d1/d2 多巴胺受体拮抗剂和新型 pi3k 抑制剂 (pi3kα ic
50
=127nm)，三氟噻吨具有对癌细胞的抗增殖活性并诱导细胞凋亡。本发明首次公开的三氟噻吨针对抗缺血性脑卒中的有效治疗未见报道，本发明创造性提出三氟噻吨明显减少局灶性脑缺血小鼠急性期脑梗死体积，说明三氟噻吨可以用于治疗缺血性脑卒中。
附图说明
12.图1为三氟噻吨的抑制曲线。
13.图2为三氟噻吨对于减少脑缺血小鼠急性期的脑梗死体积的影响图。
14.图3为三氟噻吨对改善脑缺血小鼠的神经症状的影响示意图。
15.图4为三氟噻吨对棕榈酰化转移酶dhhc5和反应性星形胶质细胞gfap的影响示意图。
16.图5为三氟噻吨、2-溴十六烷酸、依达拉奉右坎醇的对照比较实验结果图。
具体实施方式
17.三氟噻吨为现有化合物，其化学结构式如下：
18.本发明涉及的试剂、原料等为现有技术，具体实验方法以及测试为常规技术，动物实验符合苏州大学相关要求；动物实验给药剂量范围可以为10mg/kg～30mg/kg，药物为三氟噻吨，常规用生理盐水溶解。
19.western blotting法。
20.1. 蛋白样品制备：小鼠大脑皮层组织加入ripa 裂解液 (强)（主要成分为20mm tris(ph7.5)、150mm nacl、1% triton x-100），超声破碎细胞，4℃，12000 g，离心15 min，转移上清液至一新的离心管中。
21.2. 蛋白浓度测定：蛋白于37℃恒温箱放置30 min后，用酶标仪，以570 nm检测吸光度。
22.3.电泳：依据所跑蛋白的分子量，配制对应浓度的胶，加入制备好的脑组织或人星形胶质细胞样品。电压90v跑胶，跑胶结束后转膜，转膜条件200 ma，90 min。
23.4. 免疫反应：转膜完毕后，将pvdf膜移至有封闭液（5% 脱脂牛奶）的平皿中，室温下摇床上封闭1 h。将一抗用1%的bsa稀释，加在封了膜的杂交袋里，赶尽气泡封口，室温转3 h或4℃摇床上过夜。tbst洗膜3次，每次10 min，加荧光二抗，室温转1 h。tbst洗膜3次，每次10 min。以odyssey红外荧光扫描成像系统显影。
24.实施例一
25.图1为三氟噻吨的半数抑制浓度（ic
50
），使用不同浓度的三氟噻吨处理人星形胶质细胞24小时后使用cck-8方法检测细胞在450nm处的吸光度，ic
50
=9.363μm。具体实验过程：细胞计数后，按每孔103个细胞接种于 96 孔板中，每孔 100 μl；待细胞贴壁后，用生理盐水将三氟噻吨稀释成不同浓度，每组5个复孔，作用24h后进行细胞增殖检测；每孔加入 10μl cck-8 溶液，37℃孵育2小时后，酶标仪测定450 nm 处的吸光度。计算每组细胞抑制率，以药品浓度为横坐标、抑制率为纵坐标，得到50%抑制率时候的药物浓度就是ic
50
。
26.实施例二
27.三氟噻吨对缺血性脑卒中的作用。雄性c57小鼠，随机分为对照组（sham）、模型组（i/r）、给药组(i/r+三氟噻吨)，每组10只。采用线栓法制作小鼠短暂性大脑中动脉闭塞模型（tmcao）。缺血60 min后再灌注，再灌注时立即腹腔注射三氟噻吨（20mg/kg），单次给药。24小时后将小鼠断头取脑并切片ttc染色观察三氟噻吨对脑缺血急性期脑梗死体积的影响。在处死小鼠前采用longa法对再灌注后（i/r）的小鼠进行脑缺血急性期的神经症状评分，评分越高，神经功能缺陷越明显。如表1所示为神经症状评分标准。
[0028][0029]
图2为三氟噻吨对于减少脑缺血小鼠急性期的脑梗死体积的影响图；由图可知：三氟噻吨能够减少脑缺血小鼠急性期的脑梗死体积（p《0.0001，具有极显著差异）。
[0030]
图3为三氟噻吨对改善脑缺血小鼠的神经症状的影响示意图。
[0031]
图4为三氟噻吨对棕榈酰化转移酶dhhc5和反应性星形胶质细胞gfap的影响示意图，由图可知：模型组明显提升dhhc5、gfap的表达，三氟噻吨能够有效抑制棕榈酰化转移酶dhhc5和反应性星形胶质细胞gfap的表达。
[0032]
现有技术认为三氟噻吨是一种具有口服活性的 d1/d2 多巴胺受体拮抗剂和新型 pi3k 抑制剂，具有对癌细胞的抗增殖活性并诱导细胞凋亡。本发明首次公开的三氟噻吨针对抗缺血性脑卒中的有效治疗未见报道，本发明公开了三氟噻吨能够有效抑制棕榈酰化转移酶dhhc5和反应性星形胶质细胞gfap的表达，明显减少局灶性脑缺血小鼠急性期脑梗死体积，可以用于治疗缺血性脑卒中。
[0033]
实施例三
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雄性c57小鼠，随机分为模型组（i/r）、给药组(i/r+2-溴十六烷酸20mg/kg、i/r+依达拉奉右莰醇10mg/kg、i/r+三氟噻吨10mg/kg)，每组10只。采用线栓法制作小鼠短暂性大脑中动脉闭塞模型（tmcao）。缺血60 min后再灌注，再灌注时立即腹腔注射药物，单次给药。24小时后观察脑内dhhc5的变化，参见图5可知，与现有的棕榈酰化抑制剂2-溴十六烷酸、临床上常用的脑血管疾病药物依达拉奉右坎醇相比，三氟噻吨作用最好。
[0035]
因此，三氟噻吨明显抑制dhhc5棕榈酰化转移酶，减少局灶性缺血性脑卒中小鼠急性期脑梗死体积，显著改善其神经行为学症状。三氟噻吨可以作为一种有前景的治疗脑血管疾病的药物，作为常识，也可以作为活性成分与药物辅料常规组合。本发明可任意混合的辅料根据剂型、给药形式等可以改变。辅料包括赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、香
味剂、着色剂和甜味剂等。所述药物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜或静脉等。所述药物可以是胶囊剂、散剂、片剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、糖浆剂、口服液、吸入剂、霜剂、软膏剂、栓剂或贴剂等制剂学上常规的制剂形式。

技术特征：
1.三氟噻吨在制备治疗脑血管疾病药物中的应用。2.三氟噻吨在制备减少脑梗死体积药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，三氟噻吨在制备减少脑卒中急性期脑梗死体积药物中的应用。4.三氟噻吨在制备抑制反应性星形胶质细胞增生药物中的应用。5.三氟噻吨在制备改善神经症状评分药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，三氟噻吨在制备改善脑缺血急性期的神经症状评分药物中的应用。7.根据权利要求1至6任意一项所述的应用，其特征在于，药物的活性成分为三氟噻吨或其盐。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，药物还可以包括辅料。9.根据权利要求1至6任意一项所述的应用，其特征在于，药物剂型包括溶液剂、膏剂、栓剂、片剂、粉剂。10.根据权利要求1至6任意一项所述的应用，其特征在于，疾病为缺血性疾病。

技术总结
本发明属于药物技术，具体涉及三氟噻吨在治疗脑血管疾病中的应用。三氟噻吨是一种具有口服活性的D1/D2多巴胺受体拮抗剂和新型PI3K抑制剂，三氟噻吨具有对癌细胞的抗增殖活性并诱导细胞凋亡。本发明首次公开的三氟噻吨针对抗缺血性脑卒中的有效治疗未见报道，尤其是本发明创造性提出三氟噻吨明显减少局灶性脑缺血小鼠急性期脑梗死体积，说明三氟噻吨可以用于治疗缺血性脑卒中。于治疗缺血性脑卒中。于治疗缺血性脑卒中。


技术研发人员：张慧灵 马玉琪 徐元 刘源 杜华平
受保护的技术使用者：苏州大学
技术研发日：2023.06.09
技术公布日：2023/8/24