一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法及其应用

1.本发明属于材料制备技术领域，本发明涉及一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法及其应用。


背景技术：

2.伤口愈合是指皮肤等组织受到破坏后各种组织的再生、增生，这个过程避免不了的问题就是对伤口杀菌，防止感染。研究人员们近些年来已经开始着手设计和开发纳米材料，特别是金属纳米材料，作为治疗包括伤口愈合等各种病理的候选物。
3.抗菌光动力疗法(photodynamic therapy，apdt)是针对产生耐药性菌株的光动力疗法，用来杀死或消除病原体。现有研究表明，抗菌光动力疗法的关键是在于光敏剂(photosensitizer，ps)产生的氧自由基，其强烈的氧化性对细菌的细胞膜产生一定的破坏作用，降低了细菌的生理活性。但是氧自由基的产量不足一直是阻碍抗菌光动力学疗法推广的主要因素。
4.phindile khoza在研究中将酞菁(phthalocyanine，pc)与银纳米颗粒(silver nanoparticles，agnps)结合，在光照下酞菁的单线态氧产量有所增加，提高材料的光催化作用，但其并未在抑菌效果以及伤口愈合上展开研究。陈静怡等人将光敏剂与银纳米颗粒结合在一起，来提供更加出色的抑菌效果，从而促进伤口愈合。但是仅通过织物浸泡的方式得到伤口敷料，这对材料的抑菌效果以及伤口愈合的效率大打折扣，并且浸泡后的织物容易自身产生潮湿的氛围引起细菌滋生。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术的不足，同时提高伤口的愈合效率，本发明提供了一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法及其应用，提供了一种新型环境友好的反应体系。将一定浓度的金属酞菁(metal phthalocyanine，mpc)以及使用生物模板法制备的agnps@bsa共同添加到壳聚糖溶液(chitosan solution，cs)中，搅拌均匀后放在聚四氟乙烯模具内，经真空冷冻干燥机中冻干，得到呈海绵状的负载agnps@bsa和mpc的壳聚糖膜(chitosan film，cf)。复合伤口敷料通过小鼠伤口愈合实验发现，确实对伤口愈合具有很好的促进作用。该伤口敷料是一种从抑菌、促进细胞生长和加快凝血等方面促进伤口愈合的绿色环保生物材料。
6.本发明第一个目的是请求保护一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，原料绿色环保，操作简单方便，使用生物材料牛血清蛋白(bsa)、壳聚糖以及微量的agno3和mpc作为制备原料，通过水浴以及冻干等操作步骤即可得到复合材料。
7.本发明第二个目的请求保护上述制备方法所制备的光敏性银纳米壳聚糖膜中光敏剂为酞菁类光敏剂。
8.本发明第三个目的请求保护上述制备方法所制备的光敏性银纳米壳聚糖膜在作为伤口敷料的应用。具体为在抑菌方面的应用。
9.本发明第四个目的请求保护上述制备方法所制备的光敏性银纳米壳聚糖膜在作
为伤口敷料的应用。具体为在伤口愈合促进作用方面的应用。
10.本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
11.一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，以硝酸银为原料、以牛血清蛋白作为还原剂封端剂制备银纳米材料(agnps@bsa)；将agnps@bsa和光敏剂加入到cs中，混合均匀后冻干制备成海绵状膜。其中硝酸银与牛血清蛋白的质量比为1:1.27～2.35。
12.所述光敏剂为金属酞菁类mpc，浓度为1
×
10-3
mol/l，后续实验需进一步稀释。
13.具体制备步骤如下所示：
14.s1.称取硝酸银，溶于超纯水中，并滴加0.05ml浓氨水，溶液先变浑浊，后变成澄清溶液，得到15mmol/l的银氨溶液；
15.s2.称取0.05～0.15g的牛血清蛋白，溶超纯水中，得到0.01～0.03mg/l牛血清蛋白溶液；
16.s3.将银氨溶液加入到牛血清蛋白溶液中，40～60℃水浴加热90～120min，得到澄清的淡黄色液体，即为银纳米材料即agnps@bsa；
17.s4.称取一定量的mpc，溶于10ml的dmso中，得到浓度为1
×
10-3
mol/l的mpc溶液，后续实验需进一步稀释。
18.s5.称取2g壳聚糖粉末，溶于5～10％(v/v)的冰醋酸溶液，搅拌至完全溶解，溶液呈透明状；在40～60g新鲜制备的cs中加入200～400μl agnps@bsa与100～200μl mpc，混合均匀，得到蓝绿色的混合溶液(agnps@bsa@mpc/cs)；
19.s6.将步骤s5得到的混合溶液材料称取10～20g倒入聚四氟乙烯模具中，放入-20℃冰箱中冻成固体，然后经真空冷冻干燥机冻干，得到海绵状的复合膜(agnps@bsa@mpc/cf)。
20.进一步的，步骤s4中所述的实验过程需要全程避光，溶解过程需要超声辅助。
21.进一步的，步骤s5中agnps@bsa、mpc和cs需要混合搅拌10～20min。
22.进一步的，步骤s5中所述mpc浓度应在1
×
10-7
～1
×
10-5
mol/l的范围内，达到光敏剂最佳激发浓度。
23.进一步的，步骤s6中冻干机的冻干工艺需要54h。
24.上述制备方法所制备的agnps@bsa@mpc/cf在作为伤口敷料方面的应用，具体为作为促进伤口愈合材料方面的应用。
25.本发明与现有技术相比的有益效果是：
26.(1)本发明使用牛血清蛋白作为模板制备纳米材料，并使用壳聚糖冻干成海绵膜，所用材料均为一些绿色环保生物材料，制备过程所用到的化学试剂如硝酸银、酞菁锌的浓度几乎都处在10-6
的浓度范围，相当微量，并且制备的冻干海绵膜属于生物材料，对伤口的副作用小，并且容易保存，具有可塑性，可以通过模具得到需要尺寸或形状的材料。
27.(2)本发明中，金属酞菁具有较高的三重态能量量子产率(ф
t
＞0.4)、长的三重态寿命(τ
t
＞100μs)以及足够的三重态能量(e
t1
＝1.2ev)，进而有效产生单线态氧(ф
δ
＞0.4)。光照下，单独金属酞菁容易产生聚集，因银纳米材料的存在，可缓解金属酞菁聚集，使金属酞菁浓度提高，进而使其在光照下释放的单线态氧含量有所提高。单线态氧的产量提高，会使更多的银纳米颗粒中银原子转变成为ag
+
并释放在溶液中，使得材料整体的抑菌性能产生1+1＞2的效果。
28.(3)agnps@bsa@mpc/cf可以促进小鼠伤口愈合。其中关键一点就是，agnps@bsa与mpc在光照下相互作用，会产生一种很强的抑菌效果，从而对伤口起到消毒作用，减少伤口炎症发生，加速伤口愈合。另外mtt法评估agnps@bsa@mpc/cf对l929细胞相容性，结果发现其对细胞的活力基本都在144％以上，甚至可以达到159％，说明该复合膜对细胞没有毒性，甚至因为其制备来源均为多糖或蛋白质，对细胞生长起到一定促进作用。也可以加速伤口愈合。另外凝血实验的结果也显示出敷料具有一定的止血功能，也有助于伤口恢复。
29.本发明以壳聚糖材料为载体，负载agnps与ps，在它们的相互作用下，ag+在特定的光照条件下，能够在apdt中诱导光敏剂产生更多自由基，达到高效的抑菌作用。另外将整个材料制备成膜，以扩大该光敏性复合生物纳米材料的应用范围。
附图说明
30.图1为实施例1、实施例2、实施例3中制备的不同壳聚糖溶液(a)以及壳聚糖膜(b)的颜色。从上到下依次为cf，agnps@bsa/cf和agnps@bsa@znpc/cf。
31.图2为实施例3中agnps@bsa@znpc/cf的sem图。
32.图3为应用例1中应用验证结果图，其中(a)为小鼠伤口随着时间的愈合程度图，(b)为伤口愈合率随时间变化图，(c)为伤口闭合痕迹图。
33.图4为应用例1中各实验组伤口组织的he染色图像。
34.图5为中agnps@bsa@znpc/cf的细胞相容性结果。
35.图6为agnps@bsa@znpc/cf的溶血率结果。
36.图7为agnps@bsa@znpc/cf的bci指数。
37.图8为agnps@bsa@znpc/cf作用下e.coli(a)和s.aureus(b)的生长曲线。
具体实施方式
38.下面通过具体实施例详述本发明，但不限制本发明的保护范围。如无特殊说明，本发明所采用的实验方法均为常规方法，所用实验器材、材料、试剂等均可从商业途径获得。
39.实施例1
40.一种壳聚糖膜(cf)的制备方法，包括以下步骤：
41.(1)称取2g壳聚糖粉末，溶于10％(v/v)的冰醋酸溶液，搅拌至完全溶解，溶液呈透明状；
42.(2)将得到的壳聚糖溶液称取20g倒入聚四氟乙烯模具中，放入-20℃冰箱中冻成固体，然后经真空冷冻干燥机冻干，得到呈海绵状cf，如图1a。
43.实施例2
44.一种银纳米壳聚糖膜(agnps@bsa/cf)的制备方法，包括以下步骤：
45.(1)配制银氨溶液。称取0.0637g硝酸银，溶于微量超纯水中，滴加0.05ml浓氨水，溶液先变浑浊，后变成澄清溶液，移至25ml容量瓶定容，得到15mmol/l的银氨溶液。
46.(2)配制牛血清蛋白。称取0.05g牛血清蛋白，溶于5ml超纯水中，配置0.01mg/l的牛血清蛋白溶液。
47.(3)合成银纳米颗粒。将硝酸银加入到牛血清蛋白溶液中，50℃水浴加热90min，得到澄清淡黄色液体，即为银纳米材料即agnps@bsa。
48.(4)称取2g壳聚糖粉末，溶于10％(v/v)的冰醋酸溶液，搅拌至完全溶解，溶液呈透明状；将制备好的agnps@bsa加入到壳聚糖溶液中，混合均匀，得到淡黄色混合材料；
49.(5)将得到的混合溶液材料称取20g倒入聚四氟乙烯模具中，放入-20℃冰箱中冻成固体，然后经真空冷冻干燥机冻干，得到呈海绵状的agnps@bsa/cf，如图1b。
50.实施例3
51.一种光敏性的银纳米壳聚糖膜(agnps@bsa@mpc/cf)的制备方法，选择znpc作为mpc的代表，具体包括以下步骤：
52.(1)配制银氨溶液。称取0.0637g硝酸银，溶于微量超纯水中，滴加0.05ml浓氨水，溶液先变浑浊，后变成澄清溶液，移至25ml容量瓶定容，得到15mmol/l的银氨溶液。
53.(2)配制牛血清蛋白。称取0.05g牛血清蛋白，溶于5ml超纯水中，配置0.01mg/l的牛血清蛋白溶液。
54.(3)合成银纳米颗粒。将硝酸银加入到牛血清蛋白溶液中，50℃水浴加热90min，得到澄清的淡黄色液体，即为银纳米材料即agnps@bsa。
55.(4)配制酞菁锌溶液。称取0.0056g的酞菁锌，加入10ml的dmso中，超声辅助溶解，得到浓度为1
×
10-6
mol/ml的酞菁锌溶液。该过程需要避光操作。
56.(5)称取2g壳聚糖粉末，溶于10％(v/v)的冰醋酸溶液，搅拌至完全溶解，溶液呈透明状；将制备好的agnps@bsa与znpc加入到壳聚糖溶液中，混合均匀，得到蓝绿色的混合材料；
57.(6)将得到的混合溶液材料称取20g倒入聚四氟乙烯模具中，放入-20℃冰箱中冻成固体，然后经真空冷冻干燥机冻干，得到呈海绵状的agnps@bsa@znpc/cf，如图2。
58.应用例1
59.检验实施例3制备的agnps@bsa@znpc/cf对小鼠伤口愈合的促进作用。
60.(1)动物准备。购买21只健康昆明雄性小鼠(24-26g)，然后饲养在大连大学spf级动物房，饲养一周使小鼠适应当前环境。(实验遵守国家对动物实验的要求)
61.(2)敷料制备。准备直径为2cm的医用无菌纱布，作为实验a组。另外将制备好的agnps@bsa@znpc@cf敷料裁剪成直径为2cm的圆形，灭菌。将裁剪灭菌后的敷料分为两组，其中一组在使用前需要使用氙灯光照20min，未光照的记作实验b组，光照后的材料记作实验c组。
62.(3)伤口建模。建模前12h，将小鼠背部脊柱附近大约直径为4cm的毛剔除。使用质量分数为10％的乌拉坦溶液对已处理过的小鼠进行腹腔注射，使用剂量为0.005ml/g。注射过后观察小鼠状态，待到完全麻醉后进行建模实验。使用酒精棉搽拭背部，然后使用消毒的剪刀和镊子在其背部建立伤口直径为1
±
0.1cm，深度达到肌筋膜层的伤口。
63.(4)伤口处理。将建模的小鼠按照敷料分为三组，每组7只小鼠。a组的伤口敷料为医用纱布，作为对照组；b组的伤口敷料为未光照的agnps@bsa@znpc@cf材料；c组的伤口敷料为光照后的agnps@bsa@znpc@cf材料。
64.每隔3天更换敷料，更换时观察小鼠伤口的生长情况，拍照并计算伤口的恢复率。应该注意在更换敷料时避免拉扯伤口造成二次伤害。伤口恢复率由公式(1)计算
65.66.其中α伤口恢复率，为a0和an分别为初始伤口和测量时伤口面积。
67.(5)组织染色。为了观察小鼠伤口组织的愈合情况，将三组小鼠在第6、12天分别处死3只。取伤口附近组织，浸泡在10％福尔马林中保存。使用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining，h&e)来对小鼠伤口组织染色，其中细胞质会被伊红染成红色，细胞核会被苏木精染成蓝色。
68.表1小鼠伤口愈合率
[0069][0070]
注1：*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001
[0071]
注2：其中gauze的*是gauze与agnps@bsa@znpc/cf(-)的差异性；
[0072]
agnps@bsa@znpc/cf(-)的*是agnps@bsa@znpc/cf(-)与agnps@bsa@znpc/cf(+)的差异性；
[0073]
agnps@bsa@znpc/cf(+)的*是agnps@bsa@znpc/cf(+)与gauze的差异性。
[0074]
根据图3和表1可知，agnps@bsa@znpc/cf复合膜组小鼠比纱布组小鼠的伤口愈合效果好，另外光照过的agnps@bsa@znpc/cf复合膜组小鼠的愈合速率比不光照小鼠伤口愈合得更快。
[0075]
图4可知，agnps@bsa@znpc/cf复合膜光照组小鼠显示出最快的伤口愈合速度，其结缔组织有序排列，上皮细胞有序生长，皮下细胞更为完整，并且还出现了一些毛囊。结果表明agnps@bsa@znpc/cf复合膜可以促进创面组织生长，能够促进伤口愈合。
[0076]
为了验证材料是一种安全健康的伤口敷料，对应用例进行补充实验研究。
[0077]
实验研究1
[0078]
检验实施例3制备的agnps@bsa@znpc/cf对l929细胞的细胞相容性。
[0079]
(1)细胞培养。将在-80℃贮存的小鼠成纤维细胞(l929)放在37℃的水浴锅中融化，添加了2ml培养基后，以1000rpm的旋转速度进行离心4-6min。弃掉上清。加入2ml培养基将已沉淀的细胞重新悬浮，并充分地分散于培养基中。加入到培养瓶中，置于5％co2、37℃的环境下培养。
[0080]
(2)细胞传代。每隔12h观察培养瓶中的颜色。如果发现红色变淡，则通过显微镜观察细胞密度。若到达80％以上，就进行细胞传代；若是没有，就添加新的培养基继续培养。
[0081]
(3)细胞计数。取上述传至第6代或者第7代的细胞，使用胰酶将细胞脱壁后离心。再使用2ml培养基重悬沉淀细胞，并摇匀，取10μl滴入含有20μl台盼蓝中，将其摇匀。使用血球计数板来对重悬液的细胞浓度进行计算，计算公式(2)如下：
[0082][0083]
其中n为细胞个数，x为细胞计数，v为培养基体积。
[0084]
(4)细胞毒性测试。通过mtt法来评估agnps@bsa@znpc@cf对细胞的毒性。我们选择1
×
104左右的细胞加入96孔板中，然后分别添加浓度为1mg/ml、3mg/ml和5mg/ml的浸取液以及对照组，培养24h。加入20μl的mtt(5mg/ml)溶液，继续培养。结束后pbs冲洗，随后吸取150μl的dmso溶液在摇床上孵化30min，结束后使用酶标仪测量od
490
。实验设置5个平行实验。细胞存活率公式(3)如下：
[0085][0086]
α为细胞存活率，as和ac分别为实验组和对照组的od
490
。
[0087]
根据图5可知，我们制备的agnps@bsa@znpc/cf复合膜，不论浓度大小，对细胞均没有细胞毒性，反而有促进细胞增长趋势。因为复合膜成分基本上都是蛋白、多糖等生物材料，而金属ag以及光敏剂znpc的含量很低，不会对细胞造成损伤。因此agnps@bsa@znpc/cf中负载的agnps和znpc浓度很低，对小鼠动物的表现为几乎无毒，综上，agnps@bsa@znpc/cf复合膜显示出良好的细胞相容性。
[0088]
实验研究2
[0089]
检验实施例3制备的agnps@bsa@znpc/cf的溶血以及凝血性能。
[0090]
(1)溶血实验
[0091]
取新鲜小鼠眼睑血，添加柠檬酸钠混合保存。将agnps@bsa@znpc@cf裁剪成10mg、30mg和50mg重量进行灭菌，然后浸入1ml的0.9％ nacl溶液中浸泡5h，待用。然后用等体积的nacl溶液稀释小鼠眼睑血，取200μl血液加入到材料浸取液中静置60min。以na2co3溶液作为阳性对照组；以nacl溶液作为阴性对照组。之后将三组溶液离心10min，然后测量上清液od
540
。
[0092]
根据下述公式(4)计算agnps@bsa@znpc@cf的溶血率α。
[0093][0094]
其中，as、an和ap分别为agnps@bsa@znpc@cf浸取液、nacl溶液和na2co3溶液的od
540
。
[0095]
(2)凝血实验
[0096]
agnps@bsa@znpc@cf的对血液的凝固性能可以通过bci(blood clotting index)来进行研究。在裁剪五组100mg的agnps@bsa@znpc@cf上面滴加100μl的10mmol/l的高钙血。然后五组滴血的agnps@bsa@znpc@cf分别在37℃下放置1min、2min、5min、10min和15min。然后将未凝血液溶解在10ml超纯水中，测量od
540
。其中需要设置医用无菌纱布以及血液直接滴入超纯水中作为实验的两组对照。公式(5)可以得到bci。
[0097][0098]
其中as、ar和ao分别是agnps@bsa@znpc@cf、纱布和超纯水的od
540
。
[0099]
图6显示了agnps@bsa@znpc/cf复合膜的溶血率，溶血率会随着材料浓度的增加有所升高，但是当浓度在50mg/ml时，溶血率为1.3％左右，远低于国标(iso 10993-4-2017)规定的5％，所以agnps@bsa@znpc/cf在溶血方面适合作为医用外科伤口敷料。
[0100]
凝血实验通过bci可判定agnps@bsa@znpc/cf的凝血效果。bci大小可以反应凝血
效果的好坏，该值越大，说明血液凝固效果差。若皮肤出现创伤，必然会引起血管破裂，所以如果敷料具有一定的止血性能，对口愈合的效果会更好。我们从图7可知，agnps@bsa@znpc/cf的bci相比于医用纱布要更低，说明制备的该材料可以在杀菌消毒的同时提供止血功能。
[0101]
为了验证敷料材料能够对伤口进行抑菌消毒，对应用例1进行补充实验。
[0102]
实验研究3
[0103]
检验实施例3制备的agnps@bsa@znpc/cf对大肠杆菌(e.coli)和金黄色葡萄球菌(s.aureus)的抑菌效果。
[0104]
(1)配置lb培养基。称取1.0g的胰蛋白胨，0.5g的酵母提取物，0.5g的nacl置于250ml锥形瓶中，加入100ml去离子水，并滴加2.0mol/l的naoh调节ph，使溶液显中性。封口，置于灭菌锅灭菌。
[0105]
(2)培养菌液。将-80℃保存的e.coli和s.aureus接种在培养基，放入培养箱在37℃的环境下孵化12h。接种到液体培养基中，培养12h后，取2ml的菌液稀释，直到od
600
为0.6，再稀释1000倍，此时菌液浓度为1
×
106cfu/ml。
[0106]
(3)在含有3ml lb的试管中接种20μl e.coli(a组)和s.aureus(b组)菌液。裁剪实例1中制备的cf 0.5g作为空白对照；裁剪agnps@bsa@znpc@cf 0.5g，作为实验组。分别泡入上述菌液，记为a1组(对照组)和a2组(实验组)，每组做8个平行实验，在不同时间检测od
600
。另外为考虑光照对材料的影响，agnps@bsa@znpc@cf制备完成后，将其裁剪后在冰水溶液中用氙灯照射20min设置为a3组。随后在37℃恒温摇床培养箱中孵育，每6h取一瓶测量一次od
600
，到48小时。每组进行三次平行测试。
[0107]
结果如图8和表2所示，cf没有抑菌率作用，因cf膜本身属于多糖，可能会给细菌提供一定的营养成分，反而会促进细菌生长，如表中cf对e.coli的抑制率为负数。没有经过光照的材料，对e.coli有比较强的抑菌效果，对于s.aureus的抑菌效果相对较弱；但是光照后的材料，不论是以e.coli为代表的革兰氏阴性菌还是以s.aureus为代表的革兰氏阳性菌，抑菌率基本都可以达到98％以上，说明光照后的agnps@bsa@znpc/cf抑菌效果非常强。
[0108]
表2agnps@bsa@znpc/cf的抑菌率
[0109][0110]
根据实验研究结果显示，agnps@bsa@znpc/cf作为伤口敷料应用完全可行，说明agnps@bsa@znpc/cf是一种优于纱布的伤口敷料。
[0111]
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的全部实施例。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所做出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

技术特征：
1.一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，其特征是，以硝酸银为原料、以牛血清蛋白作为还原剂封端剂制备银纳米材料：agnps@bsa；将agnps@bsa和光敏剂加入到cs中，混合均匀后冻干制备成海绵状膜；其中硝酸银与牛血清蛋白的质量比为1:1.27～2.35。2.如权利要求1所述的一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，其特征是，所述光敏剂为金属酞菁类mpc，浓度为1
×
10-3
mol/l，后续实验需进一步稀释。3.如权利要求1所述的一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，其特征是，具体制备步骤如下所示，其中mpc选择znpc作为代表：s1.称取硝酸银，溶于超纯水中，并滴加0.05ml浓氨水，溶液先变浑浊，后变成澄清溶液，得到15mmol/l的银氨溶液；s2.称取0.05～0.15g的牛血清蛋白，溶超纯水中，得到0.01～0.03mg/l牛血清蛋白溶液；s3.将银氨溶液加入到牛血清蛋白溶液中，40～60℃水浴加热90～120min，得到澄清的淡黄色液体，即为银纳米材料即agnps@bsa；s4.称取一定量mpc，溶于10ml的dmso中，得到浓度为1
×
10-3
mol/l的mpc溶液，后续实验需进一步稀释；s5.称取2g壳聚糖粉末，溶于5～10％v/v的冰醋酸溶液，搅拌至完全溶解，溶液呈透明状；在40～60g新鲜制备的cs中加入200～400μl agnps@bsa与100～200μl mpc，混合均匀，得到蓝绿色混合溶液，即，即agnps@bsa@mpc/cs；s6.将步骤s5得到的混合溶液材料称取10～20g倒入聚四氟乙烯模具中，放入-20℃冰箱中冻成固体，然后使用真空冷冻干燥机冻干，得到呈海绵状的复合光敏性银纳米壳聚糖膜agnps@bsa@mpc/cf。4.如权利要求3所述的一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，其特征是，步骤s4中所述的实验过程需要全程避光，溶解过程需要超声辅助。5.如权利要求4所述的一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，其特征是，步骤s5中agnps@bsa、mpc和cs需要混合搅拌10～20min。6.如权利要求5所述的一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法，其特征是，步骤s6中冻干机的冻干工艺需要54h。7.如权利要求1-6任一项所述的制备方法所所制备的光敏性银纳米壳聚糖膜在作为伤口敷料方面的应用。

技术总结
本发明属于材料制备技术领域，公开了一种光敏性银纳米壳聚糖膜的制备方法及其应用。提供了一种新型环境友好的反应体系，将一定浓度的金属酞菁(Metal Phthalocyanine，MPc)以及使用生物模板法制备的AgNPs@BSA共同添加到壳聚糖溶液(Chitosan solution，CS)中，搅拌均匀后放在聚四氟乙烯模具内，经真空冷冻干燥机中冻干，得到呈海绵状的负载AgNPs@BSA和MPc的壳聚糖膜(Chitosan film，CF)。复合伤口敷料通过小鼠伤口愈合实验发现，确实对伤口愈合具有很好的促进作用。该伤口敷料是一种从抑菌、促进细胞生长和加快凝血等方面促进伤口愈合的绿色环保生物材料。色环保生物材料。


技术研发人员：唐乾 任文生 吴文玉 朱家俊 薛亚琦 先正平 曹洪玉 王立皓 郑学仿
受保护的技术使用者：大连大学
技术研发日：2023.05.29
技术公布日：2023/8/28