一种防淬灭真菌荧光染色液的制作方法

1.本发明涉及医学诊断技术领域，尤其涉及一种防淬灭真菌荧光染色液。


背景技术：

2.真菌广泛分布于自然界，绝大多数对人类无害甚至有益，但其中400余种可引起人类疾病，亦即为我们所称致病性真菌。致病真菌可分为皮肤癣菌、酵母菌和霉菌。真菌引起的疾病称为真菌病，临床上真菌病可分为浅部真菌病和深部真菌病或系统性真菌病。在我国90％以上的真菌病属于浅部真菌病。
3.近年来，随着免疫缺陷患者如恶性肿瘤、血液病、艾滋病和使用免疫抑制药的器官移植或自身免疫性炎性疾病患者的增加，真菌感染的发病率急剧增加。医学真菌学检查是诊断真菌病的重要依据，随着真菌感染病例的日益增多，对实验室的诊断也提出了更高的要求。不论是患者浅部或深部感染诊断，几乎全依赖于临床标本的真菌学检查。特别是系统性真菌感染，其早期特异的诊断方法是挽救患者生命的关键，而病原真菌的形态结构十分多样，在不同条件下同一真菌也可有不同特点的形态。因此，在真菌的实验室检查中，必须熟练掌握各类真菌的形态特征以及在不同条件下的演变规律，才能获得对致病真菌正确的诊断。
4.真菌常规染色方法主要有阿尔辛蓝-高碘酸无色品红法(ab-pas法)、六胺银染色法、苏木精-伊红染色法(he染色法)、乳酸酚棉蓝染色法等。临床上这些真菌常规染色技术都有一定局限性；ab-pas法染色过程复杂，需要8步，一个标本要手工操作45分钟，虽然灵敏度较高，但只能检测曲霉、隐球菌。相对于ab-psa法，he染色法只需要10-20分钟，但是灵敏度较低，只适用于曲霉。六胺银染色法步骤减少到了6步，灵敏度也不错，但是时间要100-200分钟，且只适用于组织样本中的真菌。现在临床上用的大多是乳酸酚棉蓝染色法，只要一步，时间也只要1分钟，但只适用细胞学样本中的真菌且灵敏度很低。因此临床上急需一种时间短，操作简单，标本适用范围广的检测方法。
5.真菌荧光染色法中的荧光素可与各种真菌细胞壁的几丁质和纤维素等特异性地结合，从而呈现出明显的荧光，可以在荧光显微镜下很容易地观察，这种荧光使菌丝与孢子更为明显，使真菌菌丝、孢子清晰显现，检测灵敏度大幅提高。弥补了传统的koh湿片法在真菌数量少时检出率不高的不足，并且缩短了染色时间，仅需2分钟，结果直观。适用于皮屑、脓液、分泌物、痰液、肺泡灌洗液、尿液、胸水、脑脊液、组织等标本类型。是一款新型的快速检测真菌感染的产品，通用性强，可用于检测人体组织或体液样本等可能存在的各类真菌。但是，依然存在真菌与背景对比度不够，染色效果欠佳，染色后荧光效果淬灭快、镜下有结晶物质和其他荧光杂质干扰、试剂长期存储出现明显结晶等缺陷。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供了一种防淬灭真菌荧光染色液，通过添加抗荧光淬灭剂，可有效减缓荧光淬灭，增强真菌染色荧光强度；该真菌荧光染色液可一步操作在数秒内对
真菌进行荧光标记，且不需要在暗室中操作，大大增加了操作的便利性。
7.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
8.本发明提供了一种防淬灭真菌荧光染色液，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.12-1.5份、背景染料0.01-0.5份、抗荧光淬灭剂0.1-5份、促溶剂1-10份、渗透剂15-25份、稳定剂10-20份、表面活性剂0.5-3份、去离子水30-80份；所述抗荧光淬灭剂为抗坏血酸、三乙烯二胺、没食子酸丙酯、柠檬酸钾中的一种或几种。
9.作为优选，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.15-1份、背景染料0.015-0.1份、抗荧光淬灭剂0.15-4份、促溶剂1.5-5份、渗透剂20-26份、稳定剂11-18份、表面活性剂0.8-1.5份、去离子水45-68份。
10.作为优选，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.2份、背景染料0.02份、抗荧光淬灭剂0.2-3.5份、促溶剂2份、渗透剂21-24份、稳定剂12-15份、表面活性剂1.1份、去离子水55-60份。
11.作为优选，所述背景染料为伊文思蓝、溴甲酚蓝、溴酚蓝中的一种或几种；所述促溶剂为氢氧化钾和/或氢氧化钠；所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、n-n-二甲基甲酰胺中的一种或几种；所述稳定剂为丙二醇、丁二醇、山梨醇中的一种或几种；所述表面活性剂为吐温20。
12.本发明还提供了所述防淬灭真菌荧光染色液的制备方法，将荧光增白剂-28、背景染料、抗荧光淬灭剂、渗透剂、稳定剂、表面活性剂依次溶解于促溶剂溶液中，过滤后，即得所述防淬灭真菌荧光染色液。
13.作为优选，所述促溶剂溶液为将促溶剂溶于去离子水中形成的溶液。
14.作为优选，所述溶解的过程伴随搅拌，所述搅拌的速度为100-1500rpm，所述搅拌的时间为5-20min。
15.作为优选，所述过滤的孔径为0.25-0.45μm。
16.通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：
17.本发明通过添加抗荧光淬灭剂，可有效减缓荧光淬灭，增强真菌染色荧光强度；同时本发明将各组分稳定在一个溶液体系中，可长期室温稳定保存。本发明所述染色液可一步操作在数秒内对真菌进行荧光标记，且不需要在暗室中操作，大大增加了操作的便利性；并且还具有操作简便、荧光强度高、猝灭时间长、染色时间短等优点；相对于常规真菌染色液，荧光染色液更直观，检测的特异性更强；可以适用于多种标本类型，包括组织、痰液、肺泡灌洗液、脑脊液及其他体液，检测通用性好，具有较好的临床应用前景。
附图说明
18.图1为实施例1制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
19.图2为实施例2制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
20.图3为实施例3制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
21.图4为实施例4制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
22.图5为实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
23.图6为实施例6制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
24.图7为实施例7制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的检测结果；
25.图8为实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的热稳定检测结果；
26.图9为实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的冷稳定检测结果；
27.图10为实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的当天的检测结果；
28.图11为实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的3个月后的检测结果；
29.图12为实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液染色后10倍镜下的6个月后的检测结果。
具体实施方式
30.本发明提供了一种防淬灭真菌荧光染色液，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.12-1.5份、背景染料0.01-0.5份、抗荧光淬灭剂0.1-4份、促溶剂1-10份、渗透剂15-25份、稳定剂12-25份、表面活性剂0.5-3份、去离子水30-80份。进一步的优选为荧光增白剂-280.15-1份、背景染料0.015-0.1份、抗荧光淬灭剂0.15-3.5份、促溶剂1.5-5份、渗透剂20-23份、稳定剂15-20份、表面活性剂0.8-1.5份、去离子水45-65份；更进一步的优选为荧光增白剂-280.2份、背景染料0.02份、抗荧光淬灭剂0.2-3.3份、促溶剂2份、渗透剂22份、稳定剂18份、表面活性剂1.1份、去离子水55-60份。
31.在本发明中，所述抗荧光淬灭剂为抗坏血酸、三乙烯二胺、没食子酸丙酯、柠檬酸钾中的一种或几种。本发明所述抗荧光淬灭剂可有效用于延长荧光染色时间，减缓荧光淬灭。
32.在本发明中，所述促溶剂为氢氧化钾和/或氢氧化钠，可促进荧光素溶解。所述渗透剂优选为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、n-n-二甲基甲酰胺中的一种或几种，进一步的优选为二甲基乙酰胺和/或n-n-二甲基甲酰胺，该渗透剂可促进组织中荧光素染色。所述稳定剂为丙二醇、丁二醇、山梨醇中的一种或几种，本发明所述稳定剂可用于稳定各组分处于溶解状态，防止组分析出。所述背景染料为伊文思蓝、溴甲酚蓝、溴酚蓝中的一种或几种，用于压制背景颜色；所述表面活性剂优选为吐温20，由于荧光素在有机相和水相中的溶解性都不是很好，很容易析出，表面活性剂主要用于使水相和有机相互相溶解，防止组分析出，更好地促进各组分互相溶解。
33.本发明还提供了所述防淬灭真菌荧光染色液的制备方法，将荧光增白剂-28、背景染料、抗荧光淬灭剂、渗透剂、稳定剂、表面活性剂依次溶解于促溶剂溶液中，过滤后，即得所述防淬灭真菌荧光染色液。
34.在本发明中，首先制备促溶剂溶液，所述促溶剂溶液为将促溶剂溶于去离子水中形成的溶液。由于溶解释放热，所以本发明促溶剂在溶于去离子水后要自然冷却，至25
±
1℃，备用。然后将所述的荧光增白剂-28、背景染料、抗荧光淬灭剂、渗透剂、稳定剂、表面活性剂依次溶解于促溶剂溶液中，不可以改变溶解顺序，改变后有可能会导致组分不能充分溶解，从而导致试剂配制失败。
35.在本发明中，所述溶解的过程伴随搅拌，所述搅拌优选的采用磁力搅拌，搅拌的速度优选为100-1500rpm，进一步的优选为500-1000rpm，更进一步的优选为600rpm；所述搅拌的时间优选为5-20min，进一步的优选为8-15min，更进一步的优选为10min。
36.在本发明中，所述过滤优选的采用纤维素膜，所述过滤的孔径优选为0.25-0.45μm，进一步的优选为0.28-0.4μm，更进一步的优选为0.3-0.35μm。
37.在本发明中，所述防淬灭真菌荧光染色液的使用方法优选为：吸取一定量真菌菌液作为样本，滴在载玻片上，再向该样本上滴加一定量的防淬灭真菌荧光染色液，并滴加纯化水水洗至无色，最后盖上盖玻片，压片得标本，进行观察即可。
38.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
39.实施例1
40.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：0.12％荧光增白剂-28、1.5％氢氧化钾、0.01％伊文思蓝、3％柠檬酸钾、20％二甲基亚砜、12％丙二醇、0.8％吐温20、62.57％去离子水。
41.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
42.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
43.(2)将荧光增白剂-28、伊文思蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
44.(3)将混合溶液通过孔径为0.3μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
45.实施例2
46.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：1％荧光增白剂-28、5％氢氧化钾、0.2％溴甲酚蓝、0.05％抗坏血酸、1.5％三乙烯二胺、0.05％没食子酸丙酯、25％二甲基乙酰胺、20％丁二醇、1.5％吐温20、45.7％去离子水。
47.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
48.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
49.(2)将荧光增白剂-28、溴甲酚蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
50.(3)将混合溶液通过孔径为0.25μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
51.实施例3
52.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：0.2％荧光增白剂-28、2％氢氧化钠、0.02％溴酚蓝、0.1％三乙烯二胺、0.05％没食子酸丙酯、3％柠檬酸钾、13％二甲基乙酰胺、9％n-n-二甲基甲酰胺、12.5％丁二醇、1.1％吐温20、59.03％去离子水。
53.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
54.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
55.(2)将荧光增白剂-28、溴酚蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
56.(3)将混合溶液通过孔径为0.33μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
57.实施例4
58.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：0.2％荧光增白剂-28、2％氢氧化钠、0.02％溴酚蓝、0.05％抗坏血酸、0.05％没食子酸丙酯、3％柠檬酸钾、13％二甲基乙酰胺、9％n-n-二甲基甲酰胺、12.5％丁二醇、1.1％吐温20、59.08％去离子水。
59.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
60.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
61.(2)将荧光增白剂-28、溴酚蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
62.(3)将混合溶液通过孔径为0.33μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
63.实施例5
64.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：0.2％荧光增白剂-28、2％氢氧化钠、0.02％溴酚蓝、0.05％抗坏血酸、0.1％三乙烯二胺、3％柠檬酸钾、13％二甲基乙酰胺、9％n-n-二甲基甲酰胺、12.5％丁二醇、1.1％吐温20、59.03％去离子水。
65.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
66.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
67.(2)将荧光增白剂-28、溴酚蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
68.(3)将混合溶液通过孔径为0.33μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
69.实施例6
70.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：0.2％荧光增白剂-28、2％氢氧化钠、0.02％溴酚蓝、0.05％抗坏血酸、0.1％三乙烯二胺、0.05％没食子酸丙酯、3％柠檬酸钾、13％二甲基乙酰胺、9％n-n-二甲基甲酰胺、12.5％丁二醇、1.1％吐温20、58.98％去离子水。
71.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
72.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
73.(2)将荧光增白剂-28、溴酚蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
74.(3)将混合溶液通过孔径为0.33μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
75.实施例7
76.一种防淬灭真菌荧光染色液，具体由以下质量百分比的原料制备而成：0.2％荧光增白剂-28、2％氢氧化钠、0.02％溴酚蓝、13％二甲基乙酰胺、9％n-n-二甲基甲酰胺、12.5％丁二醇、1.1％吐温20、62.18％去离子水。
77.所述防淬灭真菌荧光染色液的制备过程为：
78.(1)将氢氧化钾溶于去离子水中形成氢氧化钾溶液，自然冷却至25
±
1℃，待用；
79.(2)将荧光增白剂-28、溴酚蓝、柠檬酸钾、二甲基亚砜、丙二醇以及吐温20依次添
加、溶解于氢氧化钾溶液，边添加边搅拌，600rpm搅拌10min，形成混合溶液；
80.(3)将混合溶液通过孔径为0.33μm的纤维素膜过滤，即得到所述防淬灭真菌荧光染色液。
81.将实施例1-7制备获得防淬灭真菌荧光染色液分别对白色念珠菌样本进行染色，染色操作步骤为：吸取一滴白色念珠菌液，直接向样本滴加一滴染色液，滴加纯化水水洗至无色；盖上盖玻片，轻轻压片，使标本尽量压成薄片，紫外荧光显微镜下观察。
82.然后利用荧光显微镜观察检测。检测结果见图1-7，可以看出，都可以看到菌丝和孢子，但不同实施例制得的染色液检测的菌丝与孢子结构的清晰度不同，荧光强度也不同。实施例1检测到的菌丝与孢子结构清晰，荧光强度一般；实施例2检测到的菌丝与孢子结构不清晰，荧光强度较弱；实施例3检测到的菌丝与孢子结构清晰，荧光强度较强于实施例1；实施例4检测到的菌丝与孢子结构较实施例3更清晰，荧光强度实施例3更强；实施例5检测到的菌丝与孢子结构最清晰，荧光强度最强，强于实施例4；实施例6检测到的菌丝与孢子结构清晰，荧光强度一般，与实施例3接近；实施例7检测到的菌丝与孢子结构清晰，荧光强度一般。
83.试验例1
84.基于实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液进行稳定性测试。
85.(1)热稳定性的测试：
86.将所述染色液测试样品置于80℃条件下避光、水浴一周后取出，可以看到液体没有明显的分层现象；取一滴置于载玻片上，盖上盖玻片，将其置于显微镜下观察，结果如图8所示。
87.由图8中可以看出染色液无结晶物质析出；用接种环挑取少许白色念珠菌置于载玻片，滴一滴真菌荧光染色液，随后盖上盖玻片，轻压后，置荧光显微镜下观察，真菌发亮蓝色荧光，菌丝结构清晰，与背景对比明显，荧光衰减周期大于7天。
88.(2)冷稳定性的测试：
89.将染色液测试样品置于-20℃冰箱，反复冻融10次，取出，可以观察到液体并没有明显分层；取一滴于载玻片上，盖上盖玻片，将其置于显微镜下观察，结果如图9所示。
90.由图9中可以看出染色液无结晶物质析出；用接种环挑取少许白色念珠菌置于载玻片，滴一滴真菌荧光染色液，随后盖上盖玻片，轻压后，置荧光显微镜下观察，真菌发亮蓝色荧光，菌丝结构清晰，与背景对比明显，荧光衰减周期大于7天。
91.试验例2
92.基于实施例5制备的防淬灭真菌荧光染色液进行荧光持续性测试。
93.刮取足癣患者患处皮屑样本，用实施例5制备的染色液进行染色，并置于荧光显微镜下观察，结果如图10所示，真菌发亮蓝色荧光，菌丝结构清晰，与背景对比明显。
94.将此真菌荧光染色后的切片用封片剂封固，切片保存柜存放3个月后，置于荧光显微镜下观察，结果如图11所示，真菌发亮蓝色荧光，菌丝结构清晰，与背景对比明显。
95.同样的，将此真菌荧光染色后的切片继续存放至荧光染色6个月后，置于荧光显微镜下观察，结果如图12所示，此真菌荧光染色后的切片中的真菌发亮蓝色荧光，菌丝结构清晰，同样与背景对比明显。
96.综上所述，由图10-12中可以看出本发明所述的防淬灭真菌荧光染色液的检测无
论是在染色当天还是在3个月、6个月后的荧光效果并无明显区别，所以抗荧光淬灭剂可以能够形成很好的保护层，有效的保护了荧光染料，使得其荧光持久不衰退。
97.由以上实施例和试验例可知，本发明提供了一种防淬灭真菌荧光染色液，该防淬灭真菌荧光染色液中的荧光素可与各种真菌细胞壁的几丁质和纤维素等特异性地结合，从而标记样品中存在的真菌，从而呈现出明显的荧光，可以在荧光显微镜下很容易地观察，这种荧光使菌丝与孢子更为明显，使真菌菌丝、孢子清晰显现，检测灵敏度大幅提高。本发明将各组分稳定在一个溶液体系中，可长期室温稳定保存；同时添加抗荧光淬灭剂，可有效减缓荧光淬灭，增强真菌染色荧光强度。该真菌荧光染色液可一步操作在数秒内对真菌进行荧光标记，且不需要在暗室中操作，大大增加了操作的便利性。
98.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种防淬灭真菌荧光染色液，其特征在于，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.12-1.5份、背景染料0.01-0.5份、抗荧光淬灭剂0.1-5份、促溶剂1-10份、渗透剂15-30份、稳定剂10-20份、表面活性剂0.5-3份、去离子水30-80份；所述抗荧光淬灭剂为抗坏血酸、三乙烯二胺、没食子酸丙酯、柠檬酸钾中的一种或几种。2.根据权利要求1所述的防淬灭真菌荧光染色液，其特征在于，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.15-1份、背景染料0.015-0.1份、抗荧光淬灭剂0.15-4份、促溶剂1.5-5份、渗透剂20-26份、稳定剂11-18份、表面活性剂0.8-1.5份、去离子水45-68份。3.根据权利要求1或2所述的防淬灭真菌荧光染色液，其特征在于，由包括以下重量份数的原料制备而成：荧光增白剂-280.2份、背景染料0.02份、抗荧光淬灭剂0.2-3.5份、促溶剂2份、渗透剂21-24份、稳定剂12-15份、表面活性剂1.1份、去离子水55-60份。4.根据权利要求1或2任一项所述的防淬灭真菌荧光染色液，其特征在于，所述背景染料为伊文思蓝、溴甲酚蓝、溴酚蓝中的一种或几种；所述促溶剂为氢氧化钾和/或氢氧化钠；所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、n-n-二甲基甲酰胺中的一种或几种；所述稳定剂为丙二醇、丁二醇、山梨醇中的一种或几种；所述表面活性剂为吐温20。5.权利要求1-4任一项所述防淬灭真菌荧光染色液的制备方法，其特征在于，将荧光增白剂-28、背景染料、抗荧光淬灭剂、渗透剂、稳定剂、表面活性剂依次溶解于促溶剂溶液中，过滤后，即得所述防淬灭真菌荧光染色液；所述促溶剂溶液为将促溶剂溶于去离子水中形成的溶液。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述溶解的过程伴随搅拌，所述搅拌的速度为100-1500rpm，所述搅拌的时间为5-20min。7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述过滤的孔径为0.25-0.45μm。

技术总结
本发明属于医学诊断技术领域。本发明提供了一种防淬灭真菌荧光染色液，由包括如下原料制备而成：荧光增白剂-28、背景染料、抗荧光淬灭剂、促溶剂、渗透剂、稳定剂、表面活性剂、去离子水，其中所述抗荧光淬灭剂为抗坏血酸、三乙烯二胺、没食子酸丙酯、柠檬酸钾中的一种或几种。将各组分稳定在一个溶液体系中，可长期室温稳定保存；同时添加抗荧光淬灭剂，可有效减缓荧光淬灭，增强真菌染色荧光强度。该真菌荧光染色液可一步操作在数秒内对真菌进行荧光标记，且不需要在暗室中操作，大大增加了操作的便利性。本发明具有操作简便、荧光强度高、猝灭时间长、染色时间短、特异性强、检测通用性好等优点，具有较好的临床应用前景。具有较好的临床应用前景。具有较好的临床应用前景。


技术研发人员：陈文芳 廖丽芳 蒲英飞
受保护的技术使用者：朗禾（天津）医疗科技有限公司
技术研发日：2023.06.05
技术公布日：2023/9/5