用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品领域，具体涉及一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.芽孢杆菌属于芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，是一类能产生抗力内生孢子的革兰氏阳性菌，细胞呈杆状且外层覆盖大量的吡啶二羧酸钙。芽孢又称为孢子，是自然界已经发现的最具耐受性的细胞。处于休眠状态的芽孢对热、干燥、辐射、酸、碱和有机溶剂等杀菌因子具有极强的抵抗力。芽孢能在不利的环境条件下存活达十余年，甚至成千上万年。当环境条件适宜时，芽孢又可萌发形成能够分裂繁殖的菌体细胞。
3.芽孢杆菌发酵产物可作为化妆品原料用于化妆品，如中国专利申请《包括短小芽孢杆菌菌株或其培养液的用于预防或改善老化的组合物》(公开号为cn 110872568a)公开了一种包括短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)菌株或其培养液的化妆品组合物，其菌株或其培养液作为有效成分用于预防或改善皮肤老化。中国专利申请《一种解淀粉芽孢杆菌ba-1，溶胞产物及其制备方法，在化妆品中的应用和面霜》(公开号为cn 115011531 a)公开了一种解淀粉芽孢杆菌ba-1，溶胞产物及其制备方法，所述溶胞产物毒性低，且对人皮肤成纤维细胞具有一定的保护效果，经过uva的照射后，使人皮肤成纤维细胞的存活率保持较高水平。目前芽孢杆菌发酵产物在化妆品领域的研究和应用一般为发酵滤液或营养细胞的溶胞产物，极少涉及到芽孢体及芽孢体的裂解物。


技术实现要素：

4.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法和应用。本发明首次将芽孢体裂解物应用于化妆品原料制备领域，本发明所获得的芽孢杆菌发酵产物具有优良的修护和保湿的功效，能抑制金黄色葡萄球菌，具有平衡皮肤微生态的效果，具有极高的商业价值。
5.本发明的技术方案是：
6.一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
7.s1培养基中培养芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体；
8.s2将步骤s1所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物；
9.s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心、浓缩、加热，即得用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物。
10.进一步地，所述步骤s1所述芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌。
11.进一步地，所述步骤s1培养基中培养芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体的具体步骤为：
12.(1)将芽孢杆菌菌种接入种子培养基中，在30～37℃的温度下好氧培养，培养时间为10～20h，得种子液；
13.(2)将步骤(1)所得种子液移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在30～37℃的温度下好氧培养，培养时间为36～72h，得发酵液；
14.(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为4000～6000r/min，离心时间为12～20分钟，收集沉淀物为芽孢杆菌芽孢体。
15.进一步地，所述步骤(2)所述碳源包括葡萄糖、玉米淀粉、玉米粉、大米粉；所述氮源包括酵母浸膏、蛋白胨、玉米浆、麸皮；所述无机盐包括磷酸二氢钾、硫酸锰、氯化钠。
16.进一步地，所述步骤s2将步骤s1所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物的具体步骤为：
17.(a)向芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使芽孢杆菌芽孢体的质量分数为1％～10％，加入溶菌酶，在50～55℃的温度下处理，处理时间为6～12h；
18.(b)继续加蛋白酶，在45～50℃的温度下处理，处理时间为4～8h，得料液；
19.(c)将步骤(b)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为800bar～1500bar，均质时间为10min～30min，即得芽孢体裂解产物。
20.进一步地，所述步骤(a)所述溶菌酶的添加量为芽孢杆菌芽孢体质量的0.1～0.5％。
21.进一步地，所述步骤(b)所述蛋白酶的添加量为芽孢杆菌芽孢体质量的0.1～0.5％。
22.进一步地，所述步骤s2所述蛋白酶为中性蛋白酶。
23.本发明的另一目的在于提供所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法制得的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物。
24.本发明的再一目的在于提供所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物在制备用于修护和保湿的化妆品中的应用。
25.本发明用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物由培养基中培养芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体；将所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物；将所得芽孢体裂解产物离心、浓缩、加热，制备而成。本发明将所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，只有经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理三个步骤的特定组合，才能得到合格的溶孢物，缺少任何步骤均难得到合格的溶孢物。
26.与现有技术相比，本发明具有以下优势：
27.芽孢杆菌属的芽孢体具有耐受力强的特点，一般取代营养体细胞作为益生菌广泛应用于饲料和肥料领域，可以提高饲养动物的免疫力，能防治多种植物病害。本发明首次将芽孢体裂解物应用于化妆品原料制备领域，本发明所获得的芽孢杆菌发酵产物具有优良的修护和保湿的功效，能抑制金黄色葡萄球菌，具有平衡皮肤微生态的效果，具有极高的商业价值。
附图说明
28.图1为本发明用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备工艺流程图；
29.图2为实施例1中种子液、发酵液、中性蛋白酶水解后所得料液、超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片；其中，图2a为实施例1中种子液的显微镜镜检图片；图2b为实施例1中发酵液的显微镜镜检图片；图2c为实施例1中中性蛋白酶水解后所得料液的显微镜镜检图片；图2d为实施例1中超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片；
30.图3为实施例2中种子液、发酵液、中性蛋白酶水解后所得料液、超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片；其中，图3a为实施例2中种子液的显微镜镜检图片；图3b为实施例2中发酵液的显微镜镜检图片；图3c为实施例2中中性蛋白酶水解后所得料液的显微镜镜检图片；图3d为实施例2中超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片；
31.图4为实施例2制备得到的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的图片；
32.图5为对比例1中经超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片；图6为对比例2中经过溶菌酶和超高压均质处理后的芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片。
具体实施方式
33.以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
34.本发明中所用原料如无特殊说明，均为市售。如溶菌酶可购自南宁庞博生物工程有限公司提供；蛋白酶为中性蛋白酶，规格13万u/g，可购自南宁东恒华道生物科技有限责任公司；巨大芽孢杆菌为购自北海业盛旺生物科技有限公司的巨大芽孢杆菌微生物菌剂；枯草芽孢杆菌可购自北海强兴生物科技有限公司；地衣芽孢杆菌可购自广东省微生物菌种保藏中心，gdmcc编号1.863。
35.本发明用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备工艺流程图如图1所示。
36.实施例1、一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法
37.所述用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
38.s1培养基中培养巨大芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体，具体步骤为：
39.(1)将巨大芽孢杆菌用接种环接入种子培养基(mrs培养基，广东环凯微生物科技有限公司)中，在30℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速180转/min)，培养时间为15h，得种子液；实施例1中种子液的显微镜镜检图片图如图2a所示，由图2a可以看出显微镜下观察菌体呈长链状，无芽孢；
40.(2)将步骤(1)所得种子液以10％接种量移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在30℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速220转/min)，培养时间为40h，得发酵液；所述发酵培养基包括以下组分及其质量百分数：大米粉1％，蛋白胨1.5％，无水硫酸锰0.02％，氯化钠0.5％，磷酸二氢钾0.1％，水96.88％；实施例1中发酵液的显微镜镜检图片如图2b所示，由图2b可以看出显微镜下观察菌体呈游离芽孢体状；
41.(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为4000r/min，离心时间为15分钟，收集沉淀物为巨大芽孢杆菌芽孢体。
42.s2将步骤s1所得巨大芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压
均质机处理，得到巨大芽孢体裂解产物，具体步骤为：
43.(a)向巨大芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使巨大芽孢杆菌芽孢体的质量分数为5％，加入溶菌酶，所述溶菌酶的添加量为巨大芽孢杆菌芽孢体质量的0.3％，在52℃的温度下处理，处理时间为10h；
44.(b)继续加中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的添加量为巨大芽孢杆菌芽孢体质量的0.3％，在48℃的温度下处理，处理时间为6h，得料液；实施例1中中性蛋白酶水解后所得料液的显微镜镜检图片如图2c所示，由图2c可以看出芽孢体部分破裂，有溶孢物质析出；
45.(c)将步骤(b)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为800bar，均质时间为30min，即得芽孢体裂解产物。实施例1中超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片如图2d所示，由图2d可以看出，芽孢体几乎全部破裂，完整的游离芽孢体极少；
46.s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心，离心速度为5000r/min，离心时间为15分钟，收集上清液，将上清液浓缩至干物质含量为3％，加热至120℃，保温20min，灭酶活和残余活菌，即得用于修护和保湿的巨大芽孢杆菌发酵产物。
47.实施例2、一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法
48.所述用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
49.s1培养基中培养枯草芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体，具体步骤为：
50.(1)将枯草芽孢杆菌用接种环接入种子培养基(营养肉汤，广东环凯微生物科技有限公司)中，在37℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速180转/min)，培养时间为20h，得种子液；实施例2中种子液的显微镜镜检图片图如图3a所示，由图3a可以看出显微镜下观察菌体呈长链状，无芽孢；
51.(2)将步骤(1)所得种子液以10％接种量移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在37℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速220转/min)，培养时间为48h，得发酵液；所述发酵培养基包括以下组分及其质量百分数：葡萄糖1％，酵母浸膏0.8％，无水硫酸锰0.02％，氯化钠0.5％，磷酸二氢钾0.1％，水97.58％；实施例2中发酵液的显微镜镜检图片如图3b所示，由图3b可以看出显微镜下观察菌体呈游离芽孢体状；
52.(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为5000r/min，离心时间为15分钟，收集沉淀物为枯草芽孢杆菌芽孢体。
53.s2将步骤s1所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到枯草芽孢体裂解产物，具体步骤为：
54.(a)向枯草芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使枯草芽孢杆菌芽孢体的质量分数为10％，加入溶菌酶，所述溶菌酶的添加量为枯草芽孢杆菌芽孢体质量的0.5％，在55℃的温度下处理，处理时间为12h；
55.(b)继续加中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的添加量为枯草芽孢杆菌芽孢体质量的0.5％，在50℃的温度下处理，处理时间为4h，得料液；实施例2中中性蛋白酶水解后所得料液的显微镜镜检图片如图3c所示，由图3c可以看出芽孢体部分破裂，有溶孢物质析出；
56.(c)将步骤(b)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为1200bar，均质时间为20min，即得芽孢体裂解产物。实施例2中超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片如图3d所示，由图3d可以看出，芽孢体几乎全部破裂，完整的游离芽孢体极少；
57.s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心，离心速度为6000r/min，离心时间为15分
钟，收集上清液，将上清液浓缩至干物质含量为3％，加热至120℃，保温20min，灭酶活和残余活菌，即得用于修护和保湿的枯草芽孢杆菌发酵产物。实施例2制备得到的用于修护和保湿的枯草芽孢杆菌发酵产物的图片如图4所示，由图4可以看出本发明制备得到的枯草芽孢杆菌发酵产物颜色为无色至淡黄色，适合用于化妆品配制。
58.实施例3、一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法
59.所述用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
60.s1培养基中培养地衣芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体，具体步骤为：
61.(1)将地衣芽孢杆菌用接种环接入种子培养基(营养肉汤，广东环凯微生物科技有限公司)中，在35℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速180转/min)，培养时间为16h，得种子液；
62.(2)将步骤(1)所得种子液以10％接种量移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在35℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速220转/min)，培养时间为40h，得发酵液；所述发酵培养基包括以下组分及其质量百分数：玉米粉2％，麸皮0.3％，玉米浆1.5％，无水硫酸锰0.02％，氯化钠0.5％，磷酸二氢钾0.1％，水95.58％；
63.(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为6000r/min，离心时间为15分钟，收集沉淀物为地衣芽孢杆菌芽孢体。
64.s2将步骤s1所得地衣芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到地衣芽孢体裂解产物，具体步骤为：
65.(a)向地衣芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使地衣芽孢杆菌芽孢体的质量分数为1％，加入溶菌酶，所述溶菌酶的添加量为地衣芽孢杆菌芽孢体质量的0.1％，在50℃的温度下处理，处理时间为6h；
66.(b)继续加中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的添加量为地衣芽孢杆菌芽孢体质量的0.1％，在45℃的温度下处理，处理时间为8h，得料液；
67.(c)将步骤(b)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为1500bar，均质时间为10min，即得芽孢体裂解产物。
68.s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心，离心速度为4000r/min，离心时间为15分钟，收集上清液，将上清液浓缩至干物质含量为3％，加热至120℃，保温20min，灭酶活和残余活菌，即得用于修护和保湿的地衣芽孢杆菌发酵产物。对比例1、本对比例所述枯草芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
69.s1培养基中培养枯草芽孢杆菌，获得枯草芽孢杆菌芽孢体，具体步骤为：
70.(1)将枯草芽孢杆菌用接种环接入种子培养基(营养肉汤，广东环凯微生物科技有限公司)中，在37℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速180转/min)，培养时间为20h，得种子液；
71.(2)将步骤(1)所得种子液以10％接种量移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在37℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速220转/min)，培养时间为48h，得发酵液；所述发酵培养基包括以下组分及其质量百分数：葡萄糖1％，酵母浸膏0.8％，无水硫酸锰0.02％，氯化钠0.5％，磷酸二氢钾0.1％，水97.58％；
72.(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为5000r/min，离心时间为15分钟，收集沉淀物为枯草芽孢杆菌芽孢体。
73.s2将步骤s1所得枯草芽孢杆菌芽孢体不经过溶菌酶和蛋白酶处理而是直接进行超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物，具体步骤为：
74.(a)向枯草芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使枯草芽孢杆菌芽孢体的质量分数为10％；
75.(b)将步骤(a)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为1200bar，均质时间为20min，即得芽孢体裂解产物。
76.对比例1中经超高压均质处理后所得芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片如图5所示，由图5可以发现大量芽孢体仍保持完整的孢子形态，将芽孢体裂解产物在营养琼脂培养可知大量芽孢体存活，并未经过高压均质而灭杀。
77.s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心，离心速度为6000r/min，离心时间为15分钟，收集上清液，将上清液浓缩至干物质含量为3％，加热至120℃，保温20min，灭酶活和残余活菌，即得。
78.对比例2、本对比例所述枯草芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：
79.s1培养基中培养枯草芽孢杆菌，获得枯草芽孢杆菌芽孢体，具体步骤为：
80.(1)将枯草芽孢杆菌用接种环接入种子培养基(营养肉汤，广东环凯微生物科技有限公司)中，在37℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速180转/min)，培养时间为20h，得种子液；
81.(2)将步骤(1)所得种子液以10％接种量移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在37℃的温度下好氧培养(回旋式摇床，转速220转/min)，培养时间为48h，得发酵液；所述发酵培养基包括以下组分及其质量百分数：葡萄糖1％，酵母浸膏0.8％，无水硫酸锰0.02％，氯化钠0.5％，磷酸二氢钾0.1％，水97.58％；
82.(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为5000r/min，离心时间为15分钟，收集沉淀物为枯草芽孢杆菌芽孢体。
83.s2将步骤s1所得枯草芽孢杆菌芽孢体只经过溶菌酶处理而不经过蛋白酶处理，之后再经过超高压均质机处理，得到枯草芽孢体裂解产物，具体步骤为：
84.(a)向枯草芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使枯草芽孢杆菌芽孢体的质量分数为10％，加入溶菌酶，所述溶菌酶的添加量为芽孢杆菌芽孢体质量的0.5％，在55℃的温度下处理，处理时间为12h；
85.(b)将步骤(a)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为1200bar，均质时间为20min，即得枯草芽孢体裂解产物。
86.对比例2中经过溶菌酶和超高压均质处理后的枯草芽孢体裂解产物的显微镜镜检图片如图6所示，由图6可以发现大量芽孢体仍保持完整的孢子形态，将料液在营养琼脂培养可知大量芽孢体存活，并未经过溶菌酶和超高压均质处理而灭杀。
87.s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心，离心速度为6000r/min，离心时间为15分钟，收集上清液，将上清液浓缩至干物质含量为3％，加热至120℃，保温20min，灭酶活和残余活菌，即得。
88.试验例一、抑菌实验
89.①
接种菌液的制备：用5ml tsb洗脱金黄色葡萄球菌斜面上，洗脱液分别收集在三个10ml离心管中，用比浊法将菌液浓度调至105～106cfu/ml，用平板法进行活菌计数计数。
90.②
平板涂布：倾注18-20ml琼脂培养基于一次性培养皿，倾注厚度约5-6mm。待平板凝固后，无菌吸取100μl目标菌液于培养基表面，迅速用无菌涂布棒均匀涂开菌液。
91.③
牛津杯法抑菌操作：将灭菌的牛津杯(内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形不锈钢小管)，放置在涂布后的培养基上，轻轻按压，使其与培养基接触无空隙。向牛津杯中滴加约200μl的待测样品，勿使其外溢，每个待测样品做3组平行，细菌在37℃
±
1℃环境下培养48-72h，观察结果。
92.④
结果处理：肉眼观察透明环抑菌圈并用游标卡尺测定抑菌圈直径，记下3组平行数据后，取平均值，抑菌敏感度判定标准如表1所示，抑菌实验结果如表2所示。
93.表1抑菌敏感度判定标准
94.抑菌圈直径(毫米)抑菌敏感度20以上极敏15～20高敏10～14中敏10以下低敏0不敏
95.表2抑菌实验结果
96.待测样品抑菌圈直径(毫米)抑菌敏感度实施例110.55中敏实施例212.13中敏实施例310.04中敏
97.由表2可以看出，本发明实施例1-3制备的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物能抑制金黄色葡萄球菌，具有平衡皮肤微生态的效果。
98.试验例二、修护皮肤屏障的功效实验
99.①
测试前准备：受试者的选择：12位健康男女各半，且前臂无瘢痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其他瑕疵等影响试验结果判定的志愿者，年龄在18-50岁之间。
100.②
其他实验仪器和材料：低致敏外用胶带(美国3m公司)，经皮水分流失仪vapometer(型号swl5648)。
101.③
实验方法：在受试者左、右手前臂内侧分别随机标记3个面积为3cm
×
3cm大小的皮肤作为试验区，并分别标记为实施例1-3组、对比例组1-2和空白对照组，测量皮肤经皮水分流失值(tewl值)，作为建模前的基础值，记为t0。用透明胶带分别在实施例组、对比例组和空白对照组测试区域内进行撕拉处理，再次测量皮肤经皮水分流失值(tewl值)，作为建模后的基础值，记为t1。在测试区域内使用对应测试实施例、对比例样品，空白对照组不使用样品，在恒温恒湿环境中静坐等待1h后再次测量皮肤经皮水分流失值(tewl值)，作为建模后的修复值，记为t2，结果计算：皮肤修复率％＝(t1-t2)/(t1-t0)*100％。
102.④
实验结果：实验结果如表3所示。
103.表3修护皮肤屏障的功效实验结果
[0104][0105]
由表3可以看出，使用本发明实施例1-3制备的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的受试者的皮肤修复率远高于空白对照组，优于对比例1-2，说明本发明制备的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物具有修复破损皮肤屏障，减少表皮水分散失的效果。
[0106]
试验例三、保湿的功效实验
[0107]
选择10位健康男女，男女各5名，随机分成5组，每组男性和女性各1人。在试验前，要求受试者手臂部并在清洗后2h进入气候控制室(22
±
1℃，相对湿度50％)静坐20min以上，并保持放松状态，且前臂无瘢痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其他瑕疵等影响试验结果判定的志愿者。在受试者左、右前臂内侧分别随机标记3个面积为3cm
×
3cm大小的皮肤作为试验区，每个受试者试验区涂抹量为(2.0
±
0.1)mg/cm2的实施例1-3和对比例1-2制得的芽孢杆菌发酵产物，时间间隔1h、2h、4h、6h进行皮肤水分含量的测试，采用德国ck公司多功能皮肤测试仪的皮肤水分含量corneometer测试探头，测试皮肤水分含量，计算皮肤水分含量变化量并算出平均值。
[0108]
实验结果如表4所示。
[0109]
表4皮肤水分含量的平均值变化表
[0110]
组别1h(％)2h(％)4h(％)6h(％)实施例1组15.3712.638.285.90实施例2组15.8512.298.116.07实施例3组15.2512.217.855.82对比例1组14.5911.186.414.75对比例2组14.3511.296.884.93
[0111]
由表4可以看出，使用本发明实施例1-3制备的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的受试者的皮肤水分含量的平均值明显高于对比例1-2，说明本发明制备的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的保湿功效更强。
[0112]
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，上述仅为本发明的优选实施例而已，并不对本发明的保护范围起到任何限制作用。任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的技术方案的范围内，对本发明提出的技术方案和技术内容做任何形式的等同替换或修改等变动，均属未脱离本发明的技术方案的内容，仍属于本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1培养基中培养芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体；s2将步骤s1所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物；s3将步骤s2所得芽孢体裂解产物离心、浓缩、加热，即得用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物。2.如权利要求1所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤s1所述芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌。3.如权利要求1所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤s1培养基中培养芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体的具体步骤为：(1)将芽孢杆菌菌种接入种子培养基中，在30～37℃的温度下好氧培养，培养时间为10～20h，得种子液；(2)将步骤(1)所得种子液移种接入含有丰富碳源、氮源和无机盐的发酵培养基中，在30～37℃的温度下好氧培养，培养时间为36～72h，得发酵液；(3)将步骤(2)所得发酵液离心，离心速度为4000～6000r/min，离心时间为12～20分钟，收集沉淀物为芽孢杆菌芽孢体。4.如权利要求3所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)所述碳源包括葡萄糖、玉米淀粉、玉米粉、大米粉；所述氮源包括酵母浸膏、蛋白胨、玉米浆、麸皮；所述无机盐包括磷酸二氢钾、硫酸锰、氯化钠。5.如权利要求1所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤s2将步骤s1所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物的具体步骤为：(a)向芽孢杆菌芽孢体中加入纯水，使芽孢杆菌芽孢体的质量分数为1％～10％，加入溶菌酶，在50～55℃的温度下处理，处理时间为6～12h；(b)继续加蛋白酶，在45～50℃的温度下处理，处理时间为4～8h，得料液；(c)将步骤(b)所得料液用超高压均质机处理，均质压力为800bar～1500bar，均质时间为10min～30min，即得芽孢体裂解产物。6.如权利要求5所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)所述溶菌酶的添加量为芽孢杆菌芽孢体质量的0.1～0.5％。7.如权利要求5所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)所述蛋白酶的添加量为芽孢杆菌芽孢体质量的0.1～0.5％。8.如权利要求1所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，其特征在于，所述步骤s2所述蛋白酶为中性蛋白酶。9.如权利要求1-8任一项所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法制得的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物。10.如权利要求9所述的用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物在制备用于修护和保湿的化妆品中的应用。

技术总结
本发明属于化妆品领域，具体涉及一种用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物及其制备方法和应用。本发明用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物的制备方法，包括以下步骤：S1培养基中培养芽孢杆菌，获得芽孢杆菌芽孢体；S2将步骤S1所得芽孢杆菌芽孢体经过溶菌酶和蛋白酶处理后再经过超高压均质机处理，得到芽孢体裂解产物；S3将步骤S2所得芽孢体裂解产物离心、浓缩、加热，即得用于修护和保湿的芽孢杆菌发酵产物。本发明将芽孢体裂解物应用于化妆品原料制备领域，本发明所获得的芽孢杆菌发酵产物具有优良的修护和保湿的功效，能抑制金黄色葡萄球菌，具有平衡皮肤微生态的效果。具有平衡皮肤微生态的效果。具有平衡皮肤微生态的效果。


技术研发人员：仇俊鹏 戴仟福 韩志东 张娇
受保护的技术使用者：泉后（广州）生物科技研究院有限公司
技术研发日：2023.07.18
技术公布日：2023/9/9