棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的检测方法与流程

1.本技术属于化学领域，具体涉及一种棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的分析方法。


背景技术：

2.棕榈酸帕利哌酮注射液是一种用于治疗成人精神分裂症长效药物，是第2代抗精神病药帕利哌酮的长效注射制剂，活性成分为帕利哌酮。原料药棕榈酸帕利哌酮具有很强的疏水性，原料的密度比水小，和水混合时会漂浮于水面上，需要在水中加入聚山梨醇酯，经过适当的搅拌，才能使得原料分散在水相中，从而更好混合后进行研磨。
3.聚山梨醇酯(polysorbates)是一种常见的兼有疏水/亲水特性的非离子型表面活性剂，其化学组成为聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。近年，发现聚山梨醇酯可能会引起不良反应，它能诱导细胞产生脱颗粒，引起过敏活性物质释放，此外，聚山梨醇酯中的不饱和脂肪酸也容易氧化降解而产生多种有毒有害物质。因此，为确保药物使用安全，需要检测药物制剂中聚山梨醇酯的含量。
4.因此，为了提高棕榈酸帕利哌酮注射液的质量标准，需要建立制剂中聚山梨醇酯20的检验方法和控制要求。对于原辅料中聚山梨醇酯20(商品名，吐温20)的检测，2020版《中国药典》中收纳的方法为气相色谱测定脂肪酸组成，参照聚山梨醇酯80使用二氯甲烷萃取法测定含量。但由于棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯20是作为辅料使用，含量较低，且制剂中除原料药外，还有聚乙二醇4000、枸橼酸、无水磷酸氢二钠、一水磷酸二氢钠、氢氧化钠，组分较为复杂，聚山梨醇酯20本身也是混合物，且辅料之间存在一定影响，因此上述方法不适用于棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯20的含量的测定。
5.此外，现有技术中公开了采用示差折光检测器检测聚山梨醇酯20的含量，但仅适用于单一聚山梨醇酯20物质存在的前提下进行测定，由于棕榈酸帕利哌酮注射液中组分较为复杂，辅料之间存在一定影响，色图谱峰型较差、出峰时间长、准确度差等问题，因此该方法不适合用于棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯20的含量的检测。
6.因此，针对上述问题，为了提高棕榈酸帕利哌酮注射液制剂的质量，亟需提供一种简单、快速、准确、可靠性高和适用性广的检测棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯含量的液相方法。


技术实现要素：

7.本技术的目的在于提供一种棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的分析方法，其操作简单、快速、准确、可靠性高和适用性广。
8.本技术第一方面提供了一种棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的检测方法，其包括以下步骤：
9.步骤1：使用溶剂稀释棕榈酸帕利哌酮注射液，得到样品溶液；
10.步骤2：将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，检测聚山梨醇酯，所述高效液相色
谱仪的检测器为cad检测器。
11.在一个实施方式中，所述方法还包括以下步骤：步骤3：记录色谱图，根据外标法计算棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的含量。
12.在一个实施方式中，所述聚山梨醇酯为选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80和聚山梨醇酯85中的1种以上，优选地，所述聚山梨醇酯为选自聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80中的1种以上，更优选地，所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。
13.在一个实施方式中，步骤1中，用于稀释棕榈酸帕利哌酮注射液的溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙醚、二甲基乙二醚、甲基叔丁基醚、1,4-二氧六烷、1,3-二氧六烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、碳原子数4-12的饱和烷烃、碳原子数3-12的氟代或者氯代烷烃、苯、甲苯、二甲苯、三甲苯、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、丙酮、n-甲基吡咯烷酮、乙腈和碳原子数3-12的饱和烷基腈中的一种以上，优选地，所述溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿和四氯化碳中的一种以上；更优选地，所述溶剂为二氯甲烷和异丙醇的混合溶剂；更优选地，所述二氯甲烷和异丙醇的体积比为(0.1-10):1，优选为(0.3-8):1，更优选为(0.5-5):1，进一步优选为(0.5-3):1进一步优选为0.5:1或1:1或2:1或3:1，最优选为1:1。
14.在一个实施方式中，高效液相色谱仪中的固定相为亲水亲脂型填料，优选地，高效液相色谱仪中的色谱柱为hilic色谱柱或hrp色谱柱；更优选地，高效液相色谱仪中的色谱柱为dionex solex hrp，进一步优选地，所述dionex solex hrp的型号为12-14μm，(2.1
±
0.2)mm
×
(20
±
2)mm。
15.在一个实施方式中，高效液相色谱仪中的色谱柱柱温为20℃-80℃，例如为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，优选为30℃-40℃，例如为30℃、35℃、40℃，更优选为30℃。
16.在一个实施方式中，高效液相色谱仪中的流动相由流动相a和流动相b组成，
17.所述流动相a包含水，任选地包含或不包含酸性剂1；
18.所述流动相b包含有机溶剂1，任选地包含或不包含酸性剂2；
19.有机溶剂1选自醇类溶剂或乙腈，所述醇类溶剂为具有1-5个碳原子的醇的溶剂，其选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇和正戊醇中的1种以上，优选地，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的1种以上，特别优选为甲醇；
20.所述酸性剂1和酸性剂2独立地是无机酸或有机酸，优选地，无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、碳酸、磷酸、二硫化氢中的一种以上，有机酸选自对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、重酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡糖酸、葡糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸中的一种以上。
21.在一个实施方式中，所述流动相a为水，所述流动相b为甲醇。
22.在一个实施方式中，所述流动相采用梯度洗脱；所述梯度洗脱包括：
23.0-2min：流动相b的体积百分比为5
±
2％；
24.2-3min：流动相b的体积百分比从5
±
2％上升到60
±
2％；
25.3-5min：流动相b的体积百分比为60
±
2％；
26.5-8min：流动相b的体积百分比从60
±
2％上升到95
±
2％；
27.8-17min：流动相b的体积百分比为95
±
2％；
28.17-17.1min：流动相b的体积百分比从95
±
2％降低到5
±
2％；
29.17.1-20min：流动相b的体积百分比为5
±
2％。
30.在一个实施方式中，所述cad检测器的参数包括：氮气压力：35
±
5psi；采集频率：10
±
2hz；蒸发管温度：35
±
5℃；和/或，还可选地包括阀切换程序，所述阀切换程序包括：
31.0-6min：连接cad检测器；
32.6-16min：收集废液；
33.16min以后：连接cad检测器。
附图说明
34.图1为表示使用elsd检测器的分析结果的图(从上到下，依次为棕榈酸帕利哌酮注射液供试样品、聚山梨酯20对照溶液、稀释剂溶液)。
35.图2为表示使用cad检测器的分析结果的图。
36.图3为表示使用c18色谱柱的分析结果的图。
37.图4为表示使用c18色谱柱的分析结果的图。
38.图5为显示使用hilic色谱柱的分析结果的图。
39.图6为显示使用hrp色谱柱的分析结果的图。
40.图7为显示使用hrp色谱柱的分析结果的图。
41.图8为显示空白溶液的专属性的分析结果的图。
42.图9为显示对照溶液的专属性的分析结果的图。
43.图10为显示供试溶液的专属性的分析结果的图。
具体实施方式
44.除非另有定义，本文所用所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。若存在矛盾，则以本技术提供的定义为准。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。本文引用的所有专利、已经公开的专利申请和出版物均通过引用并入到本文中。
45.术语“约”、“大约”当与数值变量并用时，通常在指定数值的
±
10％内，或更宽范围内。
46.术语“任选”或“任选存在”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。
47.表述“包含”或与其同义的类似表述“包括”、“含有”和“具有”等是开放性的，不排除额外的未列举的元素、步骤或成分。表述“由
…
组成”排除未指明的任何元素、步骤或成分。表述“基本上由
…
组成”指范围限制在指定的元素、步骤或成分，加上任选存在的不会实质上影响所要求保护的主题的基本和新的特征的元素、步骤或成分。应当理解，表述“包含”涵盖表述“基本上由
…
组成”和“由
…
组成”。
48.除非文中另有说明，单数形式指代如“一种”、“该”，包含复数指代。
49.术语“一种或多种”或者“至少一种”可以表示一、二、三、四、五、六、七、八、九种或更多种。
50.当公开了数值范围的下限和上限时，落入该范围中的任何数值和任何包括的范围
都被具体公开。特别地，本文公开的值的每个取值范围应理解为表示涵盖于较宽范围中的每个数值和范围。
51.除非另有说明，或者明显不适用，本文中所用的比例(包括百分比)按重量计。
52.术语“聚山梨醇酯”指兼有疏水/亲水特性的非离子型表面活性剂，化学组成为聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。其实例包括但不限于聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85或其组合(或混合物)。聚山梨醇酯(polysorbate)的商品名为吐温(tween)，因此在本文中也可以用吐温(tween)表示聚山梨醇酯或相应的特定聚山梨醇酯，如吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85等。
53.术语“cad检测器”是指电喷雾检测器(charged aerosol detector)。其可以商购的，例如thermo公司生产的那些(比如thermo u3000 cad)。在一个实施方案中，cad检测器参数可以是：evaporator temperature:high；filter:3.6；data collection rate:5；waitready:
±
5。
54.术语“溶剂”为选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙醚、二甲基乙二醚、甲基叔丁基醚、1,4-二氧六烷、1,3-二氧六烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、碳原子数4-12的饱和烷烃(例如，甲烷、乙烷、丙烷、异丙烷、正丁烷、异丁烷、叔丁烷、戊烷，异戊烷、叔戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷)、碳原子数3-12的氟代或者氯代烷烃、苯、甲苯、二甲苯、三甲苯、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、丙酮、n-甲基吡咯烷酮、乙腈、碳原子数3-12的饱和烷基腈(例如，丙腈)中的任意一种或几种。优选的，溶剂为选自二氯甲烷和异丙醇中的一种以上。
55.术语“醇类”溶剂为具有1-5个碳原子的醇的溶剂。醇类溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇或其组合，优选地。选自甲醇、乙醇、异丙醇及其组合，特别优选为异丙醇。
56.在本发明方法中，棕榈酸帕利哌酮注射液，除了聚山梨醇酯以外，还可以包含其他辅料，例如缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐或其它有机酸盐；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯己双铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁基或苯甲基醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；及间甲酚)；低分子量(低于10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白或明胶；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或者赖氨酸；单糖、二糖或寡糖(由3～10个单糖分子聚合而成)，例如葡萄糖、甘露糖或蔗糖；螯合剂，例如edta；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或者山梨醇；成盐反离子如钠离子。
57.在一个实施方案中，棕榈酸帕利哌酮注射液的辅料包括聚乙二醇4000、枸橼酸、无水磷酸氢二钠、一水磷酸二氢钠、氢氧化钠和注射用水中的至少一种。
58.在一个实施方式中，高效液相色谱仪中的色谱柱柱温为20℃-80℃，例如为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，优选为30℃-40℃，例如为30℃、35℃、40℃，更优选为30℃。在一个实施方案中，上样量不超过色谱柱结合样品的容量。在一个实施方案中，hplc柱的长度和长径比为合适的值，这些值可以由本领域技术人员容易地确定，使得当进样体积为一定体积时，色谱过程的结合相结束时，样品层(结合了样品的填料层)长度不超过10cm，优选不超过6cm，例如不超过5cm，不超过4cm，不超过3cm，不超过2cm，特别优先为不超过2cm。在一个特别具体的实施方案中，可以采用规格为2.1mm
×
20mm的色谱柱。在一个特别具
体的实施方案中，进样体积为1ml以下，例如90μl以下、80μl以下、70μl以下、60μl以下、50μl以下、40μl以下、30μl以下，特别优选为20μl以下，例如20μl。
59.在一个实施方案中，色谱过程的流速为0.01-100ml/min，优选为0.01-10ml/min，更优选为0.1-5ml/min，例如0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min、1.5ml/min、2ml/min、3ml/min、4ml/min、5ml/min，特别优选为1.0ml/min。
60.在一个实施方案中，流动相的组成为：
61.流动相a，其包含水，任选地包含或不包含酸性剂1；
62.流动相b：其包含有机溶剂1，任选地包含或不包含酸性剂2；
63.在一个实施方案中，有机溶剂1选自醇类溶剂，优选甲醇、乙醇或异丙醇，更优选甲醇。
64.流动相b中有机溶剂1的含量为5％-95％，优选地，流动相b中有机溶剂1的含量为5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％；更优选地，流动相b中有机溶剂1的含量为5％、60％、95％；其中，b的含量随时间变化保持不变或梯度变化；酸性剂1和2独立地是无机酸或有机酸。应当理解，包含多个等度洗脱阶段时，该洗脱过程可以理解为梯度洗脱。
65.在一个实施方式中，所述液相色谱的梯度洗脱为：
66.0-2min：流动相b的体积百分比为5
±
2％；
67.2-3min：流动相b的体积百分比从5
±
2％上升到60
±
2％；
68.3-5min：流动相b的体积百分比为60
±
2％；
69.5-8min：流动相b的体积百分比从60
±
2％上升到95
±
2％；
70.8-17min：流动相b的体积百分比为95
±
2％；
71.17-17.1min：流动相b的体积百分比从95
±
2％降低到5
±
2％；
72.17.1-20min：流动相b的体积百分比为5
±
2％。
73.有益效果
74.由于聚山梨醇酯是不均一的物质，由不同的山梨醇和脂肪酸聚合而成，而且无紫外吸收特性。现有技术检测方法通常需要很长的样品制备过程，并且通量较小、耐用性较差。通过广泛的研究，本发明人发现了优异的检测分析方法，例如主要体现在以下一个或多个方面。1)稳定性高。2)准确性高，抗干扰强。3)简单易用，耐用性好。4)成本低。
75.实施例
76.实施例1检测器的选择
77.1-1、蒸发光散射检测器(elsd)方法考察
78.现有技术《high resolution analysis of tween 20by hplc with elsd.》中记载的色谱参数如表1所示。
79.表1：使用蒸发光散射检测器(elsd)进行检测的仪器参数
80.[0081][0082]
按照上述的参数，结合本技术发明的具体条件，对上述参数进行调整，调整后的色谱参数如表2所示。
[0083]
表2：调整后的使用蒸发光散射检测器(elsd)进行检测的仪器参数
[0084]
[0085][0086]
按照调整后的参数，依次对棕榈酸帕利哌酮注射液供试样品、聚山梨醇酯20对照溶液、稀释剂溶液进行分析，将分析的结果示于图1，根据图1可知，稀释剂溶液中无任何干扰；聚山梨醇酯20对照溶液中有多个色谱峰，为聚山梨醇酯20的混合物各组分色谱峰，由于各厂家每批次的聚山梨醇酯20的组分含量会有细微区别，选择任何单一组分进行测试都不具有代表性；供试样品中，由于原料药浓度太高，聚山梨醇酯20含量太低，原料药色谱峰掩盖聚山梨醇酯20色谱峰，聚山梨醇酯20峰面积小，积分困难。
[0087]
因此，使用蒸发光散射检测器(elsd)的分析方法可以检测聚山梨醇酯20，但是该分析方法不能用于棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯20的含量的检测。
[0088]
1-2、电喷雾检测器(cad)的方法考察
[0089]
按照现有技术，使用cad检测器测定蛋白组合物中聚山梨醇酯20的含量，相应的色谱参数如表3所示。
[0090]
表3：使用电喷雾检测器(cad)检测蛋白组合物中聚山梨醇酯20的仪器参数
[0091][0092]
按照表3所示的参数，依次对聚山梨醇酯20对照溶液、空白溶液进行分析，将分析的结果示于图2，根据图2可知，在该色谱条件下，流动相系统中存在较为明显的空白干扰，考虑到供试品中聚山梨醇酯20的浓度较低，干扰因素较大，该方法不适用棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯20的测试。
[0093]
此外，申请人对比较实施例1和比较实施例2进行比较，结果发现，在棕榈酸帕利哌
酮注射液中聚山梨醇酯20的含量测定中，cad的峰高比elsd的峰高明显高出很多，cad检测器明显比elsd检测器的灵敏度及响应要高，因此，在接下来的实施例中优先选择使用cad检测器，但是针对稀释剂、色谱柱、洗脱条件等还需要进行选择。
[0094]
实施例2稀释剂的选择
[0095]
2-1、甲醇对于检测结果的影响
[0096]
由于棕榈酸帕利哌酮注射液为混悬液，其中主成分api水溶性极低，文献中多采用甲醇稀释离心去除主成分，前处理也采用甲醇稀释供试品，通过涡旋震荡后高速离心的方式取上清液或过滤后，取续滤液检测棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯20的含量，该种前处理方式下，发现回收率偏低，不符合开发预期要求(90％～108％)。
[0097]
2-2、四氢呋喃、二氯甲烷对于检测结果的影响
[0098]
通过前期对混悬液中主成分颗粒的电镜扫描观察，判断主成分api颗粒表面吸附有聚山梨醇酯20，导致上述前处理方式过程中聚山梨醇酯20的损失，因此需要开发对供试品全部溶解的前处理方式。
[0099]
针对四氢呋喃、二氯甲烷两种对api溶解性良好的溶剂进行了考察，由于棕榈酸帕利哌酮注射液中同时存在水相和油相，单一使用四氢呋喃或二氯甲烷都不能保证混悬液能完全溶解。
[0100]
2-3、二氯甲烷-异丙醇对于检测结果的影响
[0101]
以二氯甲烷-异丙醇(1:1)两种极性不同溶剂混合后可保证棕榈酸帕利哌酮注射液全溶，同时不会对检测效果进行干扰。因此最终选择二氯甲烷-异丙醇(1:1)作为稀释剂。
[0102]
实施例3色谱柱的选择
[0103]
3-1、c18色谱柱对于检测结果的影响
[0104]
①
使用常规的c18色谱柱即acclaim 120c18(5μm，4.6mm
×
150mm)来考察聚山梨醇酯20的色谱保留情况，对聚山梨酯20对照溶液进行洗脱，其他色谱条件同表3。
[0105]
②
考虑到棕榈酸帕利哌酮原料药的溶解性及弱极性，为了兼顾原辅料均能从色谱柱上洗脱，使用50％乙腈-水作为流动相进行等度洗脱，将结果示于图3，如图3所示，聚山梨醇酯20在c18色谱柱上保留非常弱，可能与聚山梨醇酯20的亲水性强有关.
[0106]
此外，将色谱条件变更为0-15min内并利用5％-50％乙腈-水梯度洗脱，除此以外，与上述
①②
同样进行，将结果示于图4，如图4所示，即使降低有机相比例，仍然无法增长其保留时间(保留时间1.5min)。
[0107]
3-2、hilic色谱柱对于检测结果的影响
[0108]
考虑聚山梨醇酯20的亲水性，使用分析亲水性化合物的hilic色谱柱(acclaim hilic-10(3μm，4.6mm
×
150mm)，流动相为80％甲醇-水，其他色谱条件同表3，依次对聚山梨醇酯20对照溶液、空白溶液、供试溶液进行高效液相色谱分析。
[0109]
将结果示于图5，如图5所示，该色谱柱对聚山梨醇酯20有一定保留，但hilic模式中有机相比例较高，供试品溶液中其他成分也快速洗脱，无法与聚山梨醇酯20实现基线分离。
[0110]
3-3、hrp色谱柱对于检测结果的影响
[0111]
使用聚合物色谱柱dionex solex hrp(dionex solex hrp(12-14μm，2.1
×
20mm)，进行高效液相色谱分析，其中，流动相为水-甲醇，洗脱方式为梯度洗脱。此外，针对上述色
谱条件，未选择切换阀，其他洗脱条件如表4调整流动相梯度洗脱程序，依次对供试品溶液、空白辅料溶液、聚山梨醇酯20对照溶液+api进行高效液相色谱分析。
[0112]
将结果示于图6，如图6所示，进样供试溶液后，由于api浓度较大，出峰变大，且洗脱时间增长。
[0113]
此外，依次对增加阀切换的供试溶液、供试溶液、api前处理的供试溶液进行高效液相色谱分析，使色谱柱中api完全洗脱，同时增加阀切换操作，使洗脱后的api进入废液管，减少高浓度样品污染检测器系统。
[0114]
将结果示于图7，如图7所示，最终聚山梨醇酯20色谱峰峰形良好，高浓度api被完全洗脱且排进废液管。
[0115]
实施例4分析方法的最终确定
[0116]
通过实施例1-3中针对各个检测条件的筛选，最终确定本技术发明的分析方法。
[0117]
4-1、参数设置
[0118]
根据以下表4的记载，设置液相色谱仪的各项参数。
[0119]
表4：使用电雾式检测器(cad)进行检测的仪器参数
[0120]
[0121][0122]
4-2、溶液配制
[0123]
(1)稀释剂：二氯甲烷：异丙醇＝1:1(v/v)
[0124]
(2)对照溶液：精密称定116mg聚山梨醇酯20置于20ml量瓶中，加稀释剂溶解并定溶至刻度，摇匀；精密移取2ml溶液置于20ml量瓶中，用稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀(0.58mg/ml)。平行配制2份。
[0125]
(3)精密称取棕榈酸帕利哌酮注射液518mg，置于10ml棕色量瓶中，加稀释剂振摇溶解，稀释至刻度，摇匀即得，平行配置制2份，作为供试品溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液进样分析。
[0126]
4-3、进样程序
[0127]
按照表5进样，满足4项下系统适用性要求后进行供试品溶液分析。
[0128]
表5：各个样品溶液的进样方式
[0129]
序号样品溶液名称进样针数1稀释剂(空白溶液)至少2针2对照溶液-15针3对照溶液-21针4供试溶液每个样1针5程序控制溶液(同对照溶液-1)1针
[0130]
4-4、系统适用性
[0131]
(1)重复进样5针对照溶液-1，主峰峰面积的rsd≤5.0％；
[0132]
(2)记录对照溶液-2主峰峰面积，用下面的公式计算回收率，回收率应该在95％-105.0％之间。回收率的计算公式如以下所示。
[0133][0134]
其中，a
std-1
表示连续5针对照品溶液-1主峰峰面积的平均值；a
std-2
表示对照品溶液-2主峰峰面积；w
std-1
表示对照品溶液-1的称样量，其单位是mg；w
std-2
表示对照品溶液-2的称样量，其单位是mg。
[0135]
4-5、含量的计算
[0136]
通过以下计算公式计算聚山梨醇酯20的含量。
[0137][0138]
其中，a
spl
表示供试品溶液的主峰峰面积；a
std
表示连续5针对照品溶液-1的主峰峰面积的平均值；w
std
表示对照品溶液-1的称样量，其单位是mg；d
std
表示对照品溶液-1的稀释倍数；d
spl
表示供试品溶液的稀释倍数；w
spl
表示供试品的称样量，单位是mg；g表示棕榈酸帕利哌酮注射液密度，以1.037g/ml计。
[0139]
4-6、可接受标准
[0140]
本品包含聚山梨醇酯20的范围，按照质量体积比计，应为1.14％～1.26％。
[0141]
实施例5方法学验证
[0142]
根据上述确定的分析方法进行相关的验证试验，过程及结果如下：
[0143]
5-1、系统适应性
[0144]
精密称取聚山梨醇酯20对照120mg，置于20ml量瓶中用稀释液溶解并稀释定容，作为聚山梨醇酯20储备液，精密移取1ml至10ml量瓶中，稀释剂稀释定容成0.58mg/ml，混匀，作为对照溶液，另取聚山梨醇酯20平行配置两份，作为对照溶液。
[0145]
表6：各个样品的分析结果
[0146][0147]
如表6所示，连续5针对照-1的rsd为0.7％，std-02的回收率为100.7％，符合要求。
[0148]
5-2、专属性
[0149]
利用确立的方法对下文(4)重复性一栏中使用的空白溶液、对照溶液、供试溶液进行检测分析，将各自的检测结果示于图8-10，结果显示空白溶液在主峰出峰位置处无干扰。
[0150]
5-3、线性
[0151]
使用(1)系统适应性一栏中的对照储备液1，按照表7进行稀释，制成50％、80％、100％、120％、150％、200％、300％线性水平。
[0152]
表7：不同稀释浓度下的线性水平
[0153][0154]
如表7所示，得到一次方程为y＝3.8322x+0.374，相关系数r＝0.9971，不小于0.990，相关系数良好。
[0155]
5-4、重复性
[0156]
精密称取518mg供试品，置于10ml量瓶中，稀释剂溶解稀释至刻度，摇匀；平行制备6份。
[0157]
表8：溶液聚山梨醇酯20含量的重复性
[0158][0159][0160]
如表8所示，溶液聚山梨醇酯20平均含量为1.60％，rsd为2.7％，不大于3.0％，重复性良好。
[0161]
5-5、准确度
[0162]
空白溶液：二氯甲烷：异丙醇＝1:1。
[0163]
对照贮备溶液：称取约58mg聚山梨醇酯20对照品置于10ml量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度。
[0164]
对照溶液：精密量取1.0ml对照贮备液置于10ml量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释至
刻度，摇匀即得。
[0165]
空白辅料溶液：称取氢氧化钠0.2850g，按处方配置不含聚山梨醇酯20、棕榈酸帕利哌酮、氢氧化钠的辅料混粉4.25g，混合均匀，加入36.77g水，混匀后作为空白辅料液。
[0166]
80％浓度加标混合溶液：称取棕榈酸帕利哌酮1.25g，精密称定，置于10ml离心管中，加77.2mg聚山梨醇酯20，加水至5g，混合均匀即得。
[0167]
100％浓度加标混合溶液：称取棕榈酸帕利哌酮1.25g，精密称定，置于10ml离心管中，加96.5mg聚山梨醇酯20，加水至5g，混合均匀即得。
[0168]
80％浓度加标混合溶液：称取棕榈酸帕利哌酮1.25g，精密称定，置于10ml离心管中，加115.8mg聚山梨醇酯20，加水至5g，混合均匀即得。
[0169]
80％浓度加标供试品：称取空白辅料液约1.0g，精密称定，加约1.5g 80％浓度加标混合液，混合均匀作为80％浓度加标供试品。平行配置3份。
[0170]
100％浓度加标供试品：称取空白辅料液约1.0g，精密称定，加约1.5g 100％浓度加标混合液，混合均匀作为100％浓度加标供试品。平行配置3份。
[0171]
120％浓度加标供试品：称取空白辅料液约1.0g，精密称定，加约1.5g 120％浓度加标混合液，混合均匀作为100％浓度加标供试品。平行配置3份。
[0172]
80％浓度加标供试品溶液：称取3份80％浓度加标供试各0.5g，精密称定，置于10ml量瓶中加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀即得。
[0173]
100％浓度加标供试品溶液：称取3份100％浓度加标供试各0.5g，精密称定，置于10ml量瓶中加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀即得。
[0174]
120％浓度加标供试品溶液：称取3份120％浓度加标供试各0.5g，精密称定，置于10ml量瓶中加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀即得。
[0175]
将具体称量情况示于以下表9。
[0176]
表9：用于测定准确度的溶液的组成
[0177][0178]
利用确立的分析方法对表9中样品进行分析，将检测得到的结果示于表10。
[0179]
表10：本技术涉及的分析方法的准确度
[0180][0181]
如表10所示，聚山梨醇酯20的80％、100％、120％三个水平加标供试品回收率在95.6％～104.1％，在90％～108％范围内，9份溶液回收率rsd为2.6％，不大于6％，准确度良好。
[0182]
通过上述实验，结果表明：验证各项结果符合要求，该色谱条件满足棕榈酸帕利哌酮注射液中聚山梨醇酯20含量测定要求。

技术特征：
1.一种棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：使用溶剂稀释棕榈酸帕利哌酮注射液，得到样品溶液；步骤2：将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，检测聚山梨醇酯，所述高效液相色谱仪的检测器为cad检测器。2.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：步骤3：记录色谱图，根据外标法计算棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的含量。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述聚山梨醇酯为选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80和聚山梨醇酯85中的1种以上，优选地，所述聚山梨醇酯为选自聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80中的1种以上，更优选地，所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤1中，用于稀释棕榈酸帕利哌酮注射液的溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙醚、二甲基乙二醚、甲基叔丁基醚、1,4-二氧六烷、1,3-二氧六烷、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、碳原子数4-12的饱和烷烃、碳原子数3-12的氟代或者氯代烷烃、苯、甲苯、二甲苯、三甲苯、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、丙酮、n-甲基吡咯烷酮、乙腈和碳原子数3-12的饱和烷基腈中的一种以上，优选地，所述溶剂为选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿和四氯化碳中的一种以上；更优选地，所述溶剂为二氯甲烷和异丙醇的混合溶剂；更优选地，所述二氯甲烷和异丙醇的体积比为(0.1-10):1，优选为(0.3-8):1，更优选为(0.5-5):1，进一步优选为(0.5-3):1进一步优选为0.5:1或1:1或2:1或3:1，最优选为1:1。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，高效液相色谱仪中的固定相为亲水型填料，优选地，高效液相色谱仪中的色谱柱为hilic色谱柱或hrp色谱柱；更优选地，高效液相色谱仪中的色谱柱为dionex solex hrp；进一步优选地，所述dionex solex hrp的型号为12-14μm，(2.1
±
0.2)mm
×
(20
±
2)mm。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，高效液相色谱仪中的色谱柱柱温为20℃-80℃，例如为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，优选为30℃-40℃，例如为30℃、35℃、40℃，更优选为30℃。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，高效液相色谱仪中的流动相由流动相a和流动相b组成，所述流动相a包含水，任选地包含或不包含酸性剂1；所述流动相b包含有机溶剂1，任选地包含或不包含酸性剂2；有机溶剂1选自醇类溶剂或乙腈，所述醇类溶剂为具有1-5个碳原子的醇的溶剂，其选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇和正戊醇中的1种以上，优选地，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的1种以上，特别优选为甲醇；所述酸性剂1和酸性剂2独立地是无机酸或有机酸，优选地，无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、碳酸、磷酸、二硫化氢中的一种以上，有机酸选自对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、重酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡糖酸、葡糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、
乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸中的一种以上。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述流动相a为水，所述流动相b为甲醇。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述流动相采用梯度洗脱；所述梯度洗脱包括：0-2min：流动相b的体积百分比为5
±
2％；2-3min：流动相b的体积百分比从5
±
2％上升到60
±
2％；3-5min：流动相b的体积百分比为60
±
2％；5-8min：流动相b的体积百分比从60
±
2％上升到95
±
2％；8-17min：流动相b的体积百分比为95
±
2％；17-17.1min：流动相b的体积百分比从95
±
2％降低到5
±
2％；17.1-20min：流动相b的体积百分比为5
±
2％。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述cad检测器的参数包括：氮气压力：35
±
5psi；采集频率：10
±
2hz；蒸发管温度：35
±
5℃；和/或，还可选地包括阀切换程序，所述阀切换程序包括：0-6min：连接cad检测器；6-16min：收集废液；16min以后：连接cad检测器。

技术总结
本申请涉及棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的检测方法，其包括以下步骤：步骤1：使用溶剂稀释棕榈酸帕利哌酮注射液，得到样品溶液；步骤2：将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，检测聚山梨醇酯，所述高效液相色谱仪的检测器为CAD检测器。本申请涉及的棕榈酸帕利哌酮注射液中的聚山梨醇酯的检测方法具有稳定性高、准确性高、抗干扰强、简单易用、耐用性好、成本低的优点。成本低的优点。


技术研发人员：丁辉 徐坚 付龙 林霞 陈洁珺 许安安 林辉焕 于盼盼 杨丽香 黄滔
受保护的技术使用者：丽珠医药集团股份有限公司
技术研发日：2023.05.31
技术公布日：2023/9/12