一种靶向CD47蛋白的纳米焦亡药物及其制备和应用

一种靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物及其制备和应用
技术领域
1.本发明涉及药物技术领域，具体涉及具有cd47蛋白靶向和氧化还原响应的纳米焦亡药物及其制备方法和抗肿瘤应用。


背景技术：

2.肿瘤，尤其是恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的第二大疾病。免疫治疗，这一新兴的肿瘤治疗手段，为肿瘤的治疗甚至是治愈提供新的方向。细胞焦亡作为免疫治疗的一个重要分支，越来越受到科研人员的关注。与细胞凋亡不同，细胞焦亡是一种免疫原性细胞死亡方式，它主要依赖gasdermin(gsdm)家族蛋白执行焦亡功能，该家族蛋白被某些激活的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶caspase(如caspase1/3)切割。gsdm蛋白被caspase切割后产生的gsdm-n端片段随之驱动细胞膜上的孔形成，随后细胞吸水涨破，从而触发肿瘤细胞焦亡。细胞焦亡发生的同时释放损伤相关分子模式(damp)分子如高迁移率族蛋白b1(hmgb1)和白细胞介素-1β(il-1β)作为肿瘤相关抗原，从而重新恢复肿瘤免疫原性，并激活机体自身的抗肿瘤免疫响应，最终有效的抑制肿瘤的生长、复发以及转移。
3.当前已报道的焦亡诱导剂只有少数的一些化疗药物(如紫杉醇，阿霉素)，表观遗传药物(cd73抑制剂methadp)以及光敏剂(如紫红素18)。但是这些焦亡诱导剂通常缺乏选择性，在以细胞焦亡的方式杀伤肿瘤细胞的同时也会引起正常细胞的焦亡，进而引发正常组织的焦亡相关损伤与毒副作用。另外，由于在体内渗透压较高，这些小分子焦亡试剂易经肾脏代谢后迅速排除体外，在体内存留时间很短，同时由于缺乏肿瘤特异的靶向性，它们还容易无差别的渗进正常组织与肿瘤组织部位。当焦亡药物被正常细胞更多的摄取后，要达到更好的疗效，需要进一步增加药物的给药浓度，这样反过来又大大增加了机体的系统毒副作用。
4.因此，构建具有特异性靶向肿瘤组织与选择性引起肿瘤细胞焦亡的纳米药物是解决焦亡药物的肿瘤选择性差与肿瘤靶向性低的有效途径。
5.cd47是一种在大多数恶性肿瘤细胞表面过度表达的跨膜糖蛋白，也称为整联蛋白相关蛋白(iap)，分子量为52kda。肿瘤细胞高表达的cd47蛋白能够通过与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(sirpα)结合，释放“别吃我”信号，从而阻止肿瘤细胞被巨噬细胞吞噬。因此，当前基于cd47蛋白的抗肿瘤研究主要集中在阻断cd47/sirpα相互作用的anti-cd47抗体，cd47融合蛋白以及cd47小分子抑制等方面。然而，基于靶向cd47的主动靶向纳米递药体系的研究未见报道。
6.因此，开发一种既能够靶向肿瘤cd47信号又可以引起高效肿瘤焦亡的新型纳米材料，即满足上述的肿瘤特异性靶向与选择性治疗的目的，这是本领域技术人员需要解决的问题。


技术实现要素：

7.本发明的目的在于提供一种新的靶向肿瘤引发焦亡的纳米药物，该纳米药物可利
用肿瘤表面高表达的cd47蛋白和高含量的还原介质，特异性靶向肿瘤组织并且在肿瘤微环境响应下释放药物，诱导产生肿瘤特异性焦亡。
8.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
9.本发明提供了一种靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，所述药物为两亲性载体材料和焦亡前药通过自组装形成的胶束型纳米颗粒，所述两亲性载体材料由亲水端修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物以及未作修饰的两亲性聚合物组成，所述焦亡前药为氯尼达明或3-溴丙酮酸经还原响应化学键连接形成的前药。
10.本发明利用两亲性的聚合物载体包裹氯尼达明前药或3-溴丙酮酸前药，两亲性聚合物在水性环境自组装形成胶束的过程中，其疏水端与疏水性前药通过疏水作用以及分子间的π-π堆叠和氢键作用，使得氯尼达明前药或3-溴丙酮酸前药包裹在聚合物胶束内部，从而制得所述的纳米药物。
11.作为优选，所述两亲性聚合物的疏水段为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，亲水段为聚乙二醇。更为优选，所述两亲性聚合物为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000。
12.本发明基于肿瘤细胞表面cd47蛋白高表达的特点，通过在药物递送系统表面修饰cd47靶向肽，赋予其靶向肿瘤的能力，在纳米药物进入肿瘤组织后，细胞表面较高的cd47蛋白水平，提升了纳米颗粒选择性靶向肿瘤的能力，从而大为改善纳米颗粒在肿瘤中的蓄积与摄取。
13.所述cd47靶向肽为与cd47蛋白特异性结合的多肽分子。作为优选，所述cd47靶向肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。
14.本发明在构建具有cd47靶向肽的两亲性聚合物时，采用巯基与马来酸酐的双键加成反应将聚合物亲水段与cd47靶向肽相连接，该聚合物成分在纳米颗粒对选择性靶向肿瘤方面起到决定性作用。
15.作为优选，所述亲水端修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物的结构式如式(ⅰ)所示，
[0016][0017]
本发明以亲水端修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物和未作修饰的两亲性聚合物混合物作为载药载体，作为优选，所述两亲性载体材料中修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物与未作修饰的两亲性聚合物的质量比为9～15：16～25。
[0018]
本发明在构建纳米递药系统时，采用经过结构修饰后的化疗药物前体作为被包载的药物，该类前药本身活性较低，经过体内代谢后变为有活性的原药，可降低药物的系统毒副作用。
[0019]
在本发明中，采用氯尼达明或3-溴丙酮酸作为诱导肿瘤细胞焦亡的药物。现有技术中氯尼达明和3-溴丙酮酸作为糖酵解抑制剂用于抗肿瘤作用。本发明研究发现，氯尼达明和3-溴丙酮酸可以通过诱导肿瘤细胞焦亡的方式实现抗肿瘤作用。
[0020]
本发明采用还原响应化学键对氯尼达明或3-溴丙酮酸进行结构修饰，两分子的氯尼达明或3-溴丙酮酸经还原响应化学键连接形成前药。研究表明，前药的还原响应化学键
在高浓度的还原介质下发生断裂，导致胶束纳米颗粒崩解，在此过程中，药物迅速高效释放和激活，进而诱导肿瘤细胞焦亡。
[0021]
还原响应化学键可采用并不限于二硫键(-s s-)、二硒键(-se se-)、单硫键(-s-)、单硒键(-se-)等。
[0022]
作为优选，所述氯尼达明前药的结构式如式(ⅱ)所示，3-溴丙酮酸前药的结构式如式(ⅲ)所示，
[0023][0024]
作为优选，两亲性载体材料与焦亡前药的质量比为25～40：1～6。
[0025]
本发明还提供了一种所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物的制备方法，所述方法包括利用聚合物胶束制备方法如溶剂置换法、透析法、超声法或液膜法将两亲性载体材料与焦亡前药在水中自组装形成胶束型纳米颗粒，制得所述纳米焦亡药物。
[0026]
其中，液膜法包括：首先将两亲性载体材料与焦亡前药溶解于良溶剂中，再经旋转蒸发仪旋蒸除去溶剂形成液膜，然后在超声条件下将水中加入液膜中，随后产物自组装形成所述纳米药物。
[0027]
作为优选，未作修饰的两亲性聚合物、修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物与焦亡前药的质量比为16:9:5。两亲性聚合物的包药效率随着聚合物用量的增大而提高，但是聚合物用量过多，造成聚合物的浪费。在此质量比范围内，能保证较高的包药率和聚合物利用率。
[0028]
本发明还提供了所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述药物引发肿瘤细胞焦亡实现抗肿瘤的治疗目的。
[0029]
与正常组织相比，肿瘤细胞具有高表达cd47蛋白和还原介质。本发明提供的纳米焦亡药物一方面通过cd47靶向肽，增加药物在肿瘤组织中的靶向与蓄积，另一方面，纳米药物中的二硫键，在肿瘤细胞中高表达的还原介质作用下，促进肿瘤组织焦亡前药的释放与激活。
[0030]
进一步的，所述肿瘤包括但不限于结肠癌、乳腺癌。
[0031]
本发明具备的有益效果：
[0032]
本发明提供的纳米焦亡药物能够实现肿瘤精准治疗，肿瘤细胞中高表达的cd47蛋白与纳米药物中的cd47靶向肽相互作用，能够实现药物在肿瘤的高效靶向递送与蓄积。当药物到达肿瘤组织后，较高的还原介质水平触发对焦亡前药的释放和激活，诱导肿瘤细胞发生焦亡。而在正常组织中纳米药物不会引发正常细胞焦亡，因此显著增强了纳米药物的肿瘤选择性，实现了肿瘤的精准治疗。
附图说明
[0033]
图1为实施例1中dspe-peg2000-4n1k的核磁共振氢谱图，其中a为4n1k的核磁共振氢谱图，b为dspe-peg2000-mal的核磁共振氢谱图，c为合成产物的核磁共振氢谱图。
[0034]
图2为实施例1中氯尼达明前药的核磁共振氢谱图。
[0035]
图3为实施例1中纳米焦亡药物clndn在水中的动态光散射测得的粒径分布图。
[0036]
图4为实施例1中纳米焦亡药物clndn的透射电镜图(tem)。
[0037]
图5为实施例1中纳米焦亡药物clndn的药物释放曲线图。
[0038]
图6为ct26肿瘤细胞在不同时间点对纳米焦亡药物clndn的摄取情况，其中free ce6组为阳性对照，
ce6
lndn组为ce6标记的无cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒处加药组，
ce6
clndn组为ce6标记的有cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒加药组，
ce6
clndn+anti-cd4组为预孵育anti-cd47抗体后再加ce6标记的有cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒的加药组。
[0039]
图7为纳米焦亡药物clndn的在肿瘤组织的蓄积情况。
[0040]
图8为共聚焦显微镜观察纳米焦亡药物clndn诱导细胞焦亡图，其中pbs为对照组，free lnd为氯尼达明单药，lndn为无cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒，clndn组为有cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒。
[0041]
图9为蛋白免疫印迹法检测clndn处理后焦亡相关蛋白的表达情况。其中pbs为对照组，lndn为无cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒，clndn组为有cd47靶向作用的氯尼达明前药纳米颗粒。
[0042]
图10为纳米焦亡药物clndn对ct26结肠癌细胞荷瘤balb/c小鼠肿瘤的抑制实验中肿瘤生长曲线图。
[0043]
图11为实施例1中纳米焦亡药物clndn对ct26结肠癌细胞荷瘤balb/c小鼠肿瘤的抑制实验过程中balb/c小鼠体重变化曲线图。
[0044]
图12为实施例2中纳米焦亡药物clndn在水中的动态光散射测得的粒径分布图。
[0045]
图13为实施例3中蛋白免疫印迹法检测cbpn处理后焦亡相关蛋白的表达情况。其中pbs为对照组，bpn为无cd47靶向作用的3-溴丙酮酸前药纳米颗粒，cbpn组为有cd47靶向作用的3-溴丙酮酸前药纳米颗粒。
具体实施方式
[0046]
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。以下实施例仅用于说明本发明，不用来限制本发明的适用范围。在不背离本发明精神和本质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0047]
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
[0048]
dspe-peg2000，分子式：c
45h87
nnao
37
p，分子量：2765.12，cas号：147867-65-0，结构式如下：
[0049][0050]
cd47靶向肽(4n1k多肽)的氨基酸序列如seq id no.1所示，具体为：lys-arg-phe-tyr-val-val-met-try-lys-lys。
[0051]
dspe-peg2000-mal和巯基封端的4n1k多肽购自上海艾伟拓公司；氯尼达明和3-溴丙酮酸购自上海安耐吉化学试剂公司；cd47抗体购自bioxcell；ct26结肠癌细胞购自中国科学院细胞库。
[0052]
实施例1
[0053]
1、含cd47靶向肽的两亲性聚合物(dspe-peg2000-4n1k)的制备
[0054]
将dspe-peg2000-mal(288mg,0.1mmol)溶于1ml的dmf溶液里，然后加入到2ml巯基封端的4n1k多肽(147mg,0.12mmol)的pbs溶液(1
×
,ph 7.4)，涡旋混合均匀后在4℃反应24小时。反应结束后，用1l甲醇透析三次，透析袋截留分子量为1kda。其反应过程为：
[0055][0056]
通过核磁共振表征聚合物，如图1所示，得到的聚合物的氢谱不同于两种原料的任何一种，具体的，8.4-6.0之间的h峰为多肽上芳香环的h峰以及dspe-peg2000上的-nh-峰，5.0-0之间的峰为多肽与dspe-peg2000上脂肪链的h峰。由此可知成功制备了含cd47靶向肽的两亲性聚合物。
[0057]
2、纳米焦亡药物clndn的制备
[0058]
(1)含二硫键的氯尼达明前药的制备：
[0059]
称取氯尼达明(64.88mg,0.2mmol)、4-二甲氨基吡啶(dmap，0.23mg，0.01mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edc，57.5mg，0.3mmol)溶于5ml的无水n,n-二甲基甲酰胺(dmf)溶液中，室温搅拌1h后，再将1ml 2,2'-二硫二乙醇的dmf溶液加入到上述体系中，然后接着反应12小时。反应完后，经二氯甲烷/水溶液萃取，旋干有机溶剂后过柱纯化得到氯尼达明前药，产率为67％。其反应过程为：
[0060][0061]
通过核磁共振表征上述产物，如图2所示，具体的，1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.25-8.23(d,j＝8hz,2h),7.42-7.31(m,8h),7.08-7.06(d,j＝8hz,2h),6.69-6.67(d,j＝8hz,2h),5.76(s,4h),4.77-4.74(t,j＝12hz,4h),3.22-3.19(d,j＝12hz,4h)。证明氯尼达明前药成功制备。
[0062]
(2)纳米焦亡药物clndn通过薄膜-水化法制备：
[0063]
将dspe-peg2000-4n1k(9mg)，dspe-peg2000(16mg)，氯尼达明前药(5mg)溶于3ml的二氯甲烷和甲醇的混合物溶液里(体积比为2:1)，并置于25ml的烧瓶里，旋干溶剂使得烧瓶底部形成一层薄膜，然后加入10ml的水，水浴超声5-10分钟，超滤浓缩后，最终得到纳米焦亡药物胶束(clndn)溶液。
[0064]
通过动态光散射测定上述产物的粒径，如图3所示，通过薄膜-水化法制备得到的纳米颗粒粒径大约为100nm。多分散性指数(pdi)为0.15。同时，利用透射电镜观察到纳米颗粒为粒径为100nm左右的球状颗粒(图4)。
[0065]
在体内应用时，合适的粒径能够促进纳米颗粒在血液内较长的循环时间，同时利于纳米颗粒在肿瘤内蓄积。本实施例制备的纳米颗粒粒径为100nm左右，既能防止过早的肾脏清除，又能防止肝脏中细胞清除系统对大颗粒的清除，适用于体内的应用。
[0066]
3、clndn纳米药物的体外释放
[0067]
还原响应释放能力是评价clndn在体内应用中非常重要的一部分，良好的响应释放能力，能保证焦亡药物的充分激活，并随后产生细胞焦亡毒性。
[0068]
clndn纳米颗粒(2ml，氯尼达明含量为1mg/ml)密封在截留分子量为3500da的透析袋中，分别在不同ph下以及含有和不含有5mm二硫苏糖醇(dtt)的50ml含有1％tween 80的pbs中孵育。每隔一定时间收集透析袋外的500μl透析液，然后用hplc测定氯尼达明的浓度。
[0069]
如图5所示，在5mm的dtt(ph 6.5)中，48小时后，纳米颗粒中包裹的氯尼达明前药约有83.9％被还原成氯尼达明，并释放出来。而在不含有dtt(ph 7.4)的环境下，只有14.2％的释放。
[0070]
4、clndn在体外和体内的靶向递送作用
[0071]
(1)clndn在体外靶向作用：通过检测肿瘤细胞内吞含量，用于评估含cd47靶向基团的clndn、不含cd47靶向基团的lndn(由dspe-peg2000与氯尼达明前药通过薄膜-水化法制备制备得到)，clndn+cd47抗体的靶向递送作用。
[0072]
将ct26结肠癌细胞以每孔50000个细胞的密度接种在12孔板中并孵育过夜。将细胞暴露于各种卟吩(ce6)标记的药物中孵育不同时间，然后利用流式细胞仪检测ct26结肠癌细胞对不同药物处理组的内吞情况。
[0073]
如图6所示，肿瘤细胞对clndn的摄取明显多于lndn，且clndn中的cd47靶向导致的
肿瘤细胞摄取增多能够被cd47抗体阻断，说明clndn在ct26结肠癌细胞上具有依赖cd47靶向的药物递送作用。
[0074]
(2)clndn在体内靶向递送作用：通过检测小动物肿瘤组织中的clndn的含量，用于评估含cd47靶向基团的clndn、不含cd47靶向基团的lndn的靶向递送作用。
[0075]
将50万ct26结肠癌细胞接种到balb/c小鼠皮下，待肿瘤达到60mm3左右，再将ce6标记的clndn和lndn纳米颗粒经尾静脉注射后(ce6浓度为0.5mg/ml)，然后通过小动物活体荧光仪检测各组小鼠肿瘤内的荧光含量来评估纳米颗粒在肿瘤组织中的蓄积。
[0076]
如图7所示，clndn在肿瘤组织的荧光要明显强于lndn，说明clndn在ct26结肠癌肿瘤组织中也具有依赖cd47靶向的药物递送作用。
[0077]
5、clndn诱导肿瘤细胞的焦亡
[0078]
(1)观察细胞的形态：将细胞以每孔50000个细胞的密度接种共聚焦培养皿并孵育过夜。将细胞暴露于各种药物处理组中孵育2小时，然后利用荧光共聚焦显微镜观察ct26结肠癌细胞的形态变化并拍照。
[0079]
如图8所示，孵育clndn和lndn的肿瘤细胞都出现“吐泡泡”的现象，且clndn组比lndn更为明显，初步说明clndn能够诱导ct26结肠癌细胞发生焦亡。
[0080]
(2)clndn对gsdme蛋白的n端切割作用：
[0081]
将细胞以每孔50000个细胞的密度接种在12孔板中并孵育过夜。在孔板中加入不同组别的药物。孵育2小时后用裂解液裂解细胞，之后用蛋白免疫印迹法检测gsdme蛋白的n端切割情况，以及其他焦亡相关蛋白(caspase3)的激活情况。
[0082]
如图9所示，clndn和lndn处理的肿瘤细胞中gsdme蛋白发生明显的n端切割，且caspase3有明显的激活，其中clndn组比lndn组的现象更为明显，进一步说明clndn能够诱导ct26结肠癌细胞发生细胞焦亡。
[0083]
6、clndn在balb/c小鼠的ct26肿瘤模型中的抑瘤效果
[0084]
balb/c小鼠皮下注射50
×
104个ct26细胞。肿瘤体积达到60mm3左右时，小鼠被随机分配到三个治疗组(n＝5)：pbs、lndn和clndn。氯尼达明等效剂量为10mg/kg。药物通过尾静脉注射，每两天注射一次，共给药4次。使用公式计算肿瘤体积(mm3)：肿瘤体积＝(最短直径)2×
(最长直径)
×
0.5。
[0085]
通过在balb/c小鼠的ct26皮下瘤模型中的抑瘤评估。如图10所示，相比于pbs和lndn组，clndn表现出更为显著的肿瘤抑制效果。同时clndn组小鼠的体重无明显变化(图11)。
[0086]
实施例2
[0087]
通过共沉淀法制备纳米焦亡药物clndn：
[0088]
将实施例1制备的dspe-peg2000-4n1k(9mg)，dspe-peg2000(16mg)溶于200μl的甲醇溶液作为a液，将实施例1制备的氯尼达明前药(5mg)溶于50μl的dmso溶液中作为b液，然后将a液和b液同时滴加到剧烈搅拌的10ml水溶液中，滴加完成之后继续搅拌半小时，然后超滤离心得到纳米焦亡药物胶束溶液。
[0089]
通过动态光散射测定上述产物的粒径，如图12所示，通过共沉淀法制备得到的纳米颗粒粒径大约为102nm。多分散性指数(pdi)为0.16。该粒径大小适合于体内应用。
[0090]
实施例3
[0091]
一、纳米焦亡药物cbpn的制备
[0092]
(1)含二硫键的3-溴丙酮酸前药的制备：
[0093]
称取3-溴丙酮酸(33.39mg,0.2mmol)、4-二甲氨基吡啶(dmap，0.23mg，0.01mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edc，57.5mg，0.3mmol)溶于5ml的无水n,n-二甲基甲酰胺(dmf)溶液中，室温搅拌1h后，再将1ml 2,2'-二硫二乙醇的dmf溶液加入到上述体系中，然后接着反应12小时。反应完后，经二氯甲烷/水溶液萃取，旋干有机溶剂后过柱纯化得到氯尼达明前药，产率为60％。其反应过程为：
[0094][0095]
(2)纳米焦亡药物cbpn通过薄膜-水化法制备：
[0096]
将dspe-peg2000-4n1k(9mg)，dspe-peg2000(16mg)，3-溴丙酮酸前药(5mg)溶于3ml的二氯甲烷和甲醇的混合物溶液里(体积比为2:1)，并置于25ml的烧瓶里，旋干溶剂使得烧瓶底部形成一层薄膜，然后加入10ml的水，水浴超声5-10分钟，超滤浓缩后，最终得到纳米焦亡药物胶束溶液(cbpn)。
[0097]
二、cbpn诱导肿瘤细胞的焦亡
[0098]
cbpn对gsdme蛋白的n端切割作用：将ct26结肠癌细胞以每孔50000个细胞的密度接种在12孔板中并孵育过夜。在孔板中加入不同组别的药物。孵育2小时后用裂解液裂解细胞，之后用蛋白免疫印迹法检测gsdme蛋白的n端切割情况，以及其他焦亡相关蛋白(caspase3)的激活情况。
[0099]
结果如图13所示，cbpn组处理的肿瘤细胞中gsdme蛋白发生明显的n端切割，且caspase3有明显的激活，说明cbpn能够诱导ct26结肠癌细胞发生细胞焦亡。

技术特征：
1.一种靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，所述药物为两亲性载体材料和焦亡前药通过自组装形成的胶束型纳米颗粒，所述两亲性载体材料由亲水端修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物以及未作修饰的两亲性聚合物组成，所述焦亡前药为氯尼达明或3-溴丙酮酸经还原响应化学键连接形成的前药。2.如权利要求1所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，所述两亲性聚合物的疏水段为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，亲水段为聚乙二醇。3.如权利要求1所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，所述cd47靶向肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。4.如权利要求1所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，所述亲水端修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物的结构式如式(ⅰ)所示，5.如权利要求1-4任一项所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，所述两亲性载体材料中修饰有cd47靶向肽的两亲性聚合物与未作修饰的两亲性聚合物的质量比为9～15：16～25。6.如权利要求1所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，氯尼达明前药的结构式如式(ⅱ)所示，3-溴丙酮酸前药的结构式如式(ⅲ)所示，)所示，7.如权利要求1或6所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物，其特征在于，两亲性载体材料与焦亡前药的质量比为25～40：1～6。8.如权利要求1-7任一项所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物的制备方法，其特征在于，包括利用溶剂置换法、透析法、超声法或液膜法将两亲性载体材料与焦亡前药在水中自组装形成胶束型纳米颗粒，制得所述纳米焦亡药物。9.如权利要求1-7任一项所述的靶向cd47蛋白的纳米焦亡药物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述药物引发肿瘤细胞焦亡。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为结肠癌、乳腺癌。

技术总结
本发明公开了一种靶向CD47蛋白的纳米焦亡药物及其制备和应用，属于药物技术领域。所述为两亲性载体材料和焦亡前药通过自组装形成的胶束型纳米颗粒，所述两亲性载体材料由亲水端修饰有CD47靶向肽的两亲性聚合物以及未作修饰的两亲性聚合物组成，所述焦亡前药为氯尼达明或3-溴丙酮酸经还原响应化学键连接形成的前药。本发明提供的纳米焦亡药物能够实现肿瘤精准治疗，CD47靶向肽实现药物在肿瘤的高效靶向递送与蓄积，肿瘤组织中较高的还原介质水平触发对焦亡前药的释放，诱导肿瘤细胞发生焦亡。在正常组织中纳米药物不会引发正常细胞焦亡，因此显著增强了纳米药物的肿瘤选择性。因此显著增强了纳米药物的肿瘤选择性。因此显著增强了纳米药物的肿瘤选择性。


技术研发人员：唐建斌 肖冰 史雪莹 徐晓丹 刘济玮
受保护的技术使用者：浙江大学杭州国际科创中心
技术研发日：2022.11.29
技术公布日：2023/9/11