组织修复膜及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及生物医用材料技术领域，尤其是涉及一种组织修复膜及其制备方法和应用。


背景技术：

2.口腔修复膜是在口腔疾病治疗中用于修复组织缺损的植入型医疗器械。口腔修复膜是通过外科手术的方式将膜放置于口腔软组织与骨缺损之间建立生物屏障，以此创造一个相对封闭的骨再生环境，阻挡迁移速度较快的成纤维细胞和上皮细胞进入骨缺损区，同时又不妨碍伤口自然愈合。除此之外，理想的口腔修复膜还要能够促进骨细胞的黏附、增殖和骨组织的再生。
3.在口腔疾病修复时使用引导骨再生技术时，不同口腔修复膜材料的最终修复效果也不一样。根据是否能被吸收降解特性分类，口腔修复膜可分为不可吸收和可吸收膜。不可吸收膜主要有e-ptfe膜和钛网膜。不可吸收膜的优点在于具备高机械稳定性、足够的强度以及良好的可塑性，能有效维持骨缺损愈合所需要的空间和形状，同时抑制上皮细胞的迁移过程。缺点在于膜暴露率的增加、感染几率升高、组织亲和性差，需要二次手术取出的，增加了患者的二次伤害。可吸收膜主要有聚乳酸、聚乙烯脂膜、共聚物膜以及胶原膜等。胶原膜是可吸收膜的代表。胶原是骨的主要有机成分，也属于一种良好的生物医用材料，用胶原制备的口腔修复膜具有良好的组织相容性、低抗原性、良好的血凝作用、可生物降解性、骨组织诱导再生功能等。胶原可吸收生物膜具有较高的生物相容性和生物活性、膜暴露率减少、手术难度低、不需要二次手术、减少患者并发症的优点。缺点在于屏障功能持续时间难以控制，降解速度与成骨时间不匹配，机械强度较差，需要骨组织支撑防止塌陷。同时，胶原膜应用在口腔疾病的治疗过程中，为避免膜在缺损部位发生移位而不能发挥良好的作用，通常需要将口腔膜进行缝合或钛钉对膜进行固定，然而在缝合固定的过程中可能会造成组织或神经损伤而引发患者术后慢性疼痛。
4.为了解决手术过程中钛钉的使用给患者带来极大痛苦地问题，目前开发具有粘性地口腔膜补片成为亟待解决的问题。
5.cn 1234425c提供了一种可吸收纤维蛋白止血贴的制备方法，将核黄素、纤维蛋白原和凝血酶冻干粉按比例加入研钵中充分研细，加入无水乙醇搅拌成均匀地悬浮液，倒入平板中，使胶原蛋白海绵地一面与悬浮液接触，使悬浮液中地颗粒粘附在胶原膜上，再将胶原膜进行真空干燥和裁剪。制备地胶原膜具有撕开包装即可贴敷，无需溶解，使用方便快捷。
6.cn 1246047c是将胶原用作密封伤口地材料，与含有纤维蛋白胶水的涂料一起使用。第一，提供了一种改进涂覆胶原蛋白载体的方法；第二，提供一种干燥涂覆到载体上的所述悬浮液湿涂层的方法。除此之外证明了上述涂层胶原蛋白海绵，其涂层充分固定在胶原蛋白海绵上，即使在经受机械碰撞时仍具有满意的低涂层磨损。
7.上述专利提供的方法均可制备具有粘附性的胶原膜，可实现膜与体液、血液或生
理盐水混合后产生纤维蛋白胶，将膜与受损组织粘附在一起的作用。然而上述专利的共同点都是使用涂覆的方法将纤维蛋白胶与胶原膜的结合，这种方法可能造成纤维蛋白胶完全隔离了胶原膜与破损组织的接触，有可能会阻碍胶原膜对缺损组织再生的效果。在cn 107412869 a专利中就是采用纤维蛋白胶将两层膜进行贴合，并且控制两侧胶原膜的所含的生长因子等定向释放到靶组织，从而引导组织再生。
8.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

9.本发明的第一目的在于提供一种组织修复膜，以解决上述问题中的至少一种。
10.本发明的第二目的在于提供上述组织修复膜的制备方法。
11.本发明的第三目的在于提供上述组织修复膜在制备口腔修复产品中的应用。
12.第一方面，本发明提供了一种组织修复膜，包括胶原蛋白膜和网状基体膜；
13.所述网状基体膜固定在胶原蛋白膜上，构成双层膜结构；
14.所述胶原蛋白膜主要由胶原蛋白和丝素蛋白溶液共混后干燥，再经过交联制备得到；
15.所述网状基体膜主要由纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素组成。
16.作为进一步技术方案，所述胶原蛋白和丝素蛋白的质量比为3:7-7:3，优选为3:7。
17.作为进一步技术方案，所述交联反应为采用交联剂进行交联；
18.优选地，所述交联剂为edc(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)和nhs(n-羟基琥珀酰亚胺)。
19.作为进一步技术方案，所述纤维蛋白原和羟丙基甲基纤维素的质量比为(1-3):(7-9)，每1-6毫克的纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶；
20.优选地，所述纤维蛋白原和羟丙基甲基纤维素的质量比为1:9，每4毫克纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶。
21.作为进一步技术方案，所述胶原蛋白膜负载药物，所述药物包括蛋白质15、骨形态发生蛋白-2、重组人成纤维细胞生长因子、成骨蛋白质-1。
22.第二方面，本发明提供了上述组织修复膜的制备方法，包括如下步骤：
23.a.将胶原蛋白和丝素蛋白的混合溶液在模具中成膜，然后将膜浸泡在交联剂的溶液中进行交联反应，再将交联反应后的膜依次经过清洗、干燥后，制备得到胶原蛋白膜；
24.b.以含有纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素的溶液为电纺液，采用静电纺丝的方式将电纺液纺到所述胶原蛋白膜上，经干燥后制备得到组织修复膜；或者以纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素作为打印材料，采用3d打印的方式在所述胶原蛋白膜上制备网状基体膜，获得组织修复膜。
25.作为进一步技术方案，所述成膜的条件为：温度为30-40℃，湿度为55％-65％。
26.作为进一步技术方案，所述交联剂的溶液为含有edc和nhs的无水乙醇溶液；
27.优选地，所述edc和nhs的摩尔比为2:1-4:1；
28.优选地，所述交联反应的时间为2-8h。
29.作为进一步技术方案，所述电纺液为含有纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素的乙醇溶液；
30.优选地，所述静电纺丝的条件包括：喷丝针头内径为0.4-0.8mm，电纺液流速为0.2～0.7ml/h，纺丝电压为15-30kv，平板接收器接收距离为3-20cm。
31.第三方面，本发明提供了上述组织修复膜在制备口腔修复产品中的应用。
32.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
33.本发明提供的组织修复膜，包括胶原蛋白膜和网状基体膜，其中，胶原蛋白膜主要由胶原蛋白和丝素蛋白经交联反应得到，机械强度高，降解时间长，在修复骨缺损中可提供充分的空间维持的时间供骨组织生长；网状基体膜主要由纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素组成，当与血液、生理盐水或体液接触时，网状基体上的纤维蛋白原和凝血酶发生交联，产生纤维蛋白胶将膜粘附在伤口上。纤维蛋白胶以网状形式存在，网孔内没有胶或形成薄层胶，可以很快的被吸收，从而露出孔隙结构，使胶原蛋白膜对缺损部位发生作用，进而促进缺损处的生长和愈合，避免影响胶原蛋白膜的引导组织再生的性能。
具体实施方式
34.下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
35.第一方面，本发明提供了一种组织修复膜，包括胶原蛋白膜和网状基体膜；
36.所述网状基体膜固定在胶原蛋白膜上，构成双层膜结构；
37.所述胶原蛋白膜主要由胶原蛋白和丝素蛋白溶液共混后干燥，再经过交联制备得到；
38.所述网状基体膜主要由纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素组成。
39.丝素蛋白是一种高分子可溶性结构蛋白，兼具功效蛋白与结构蛋白属性。丝素蛋白具有优良的生物相容性和非免疫原性，以氨基酸滋养修复组织创面，促进细胞增殖。本发明中，丝素蛋白的加入，同样也可以减少吸水性胶原蛋白的溶失性。
40.需要说明的是，本发明中的“溶液共混”是指将胶原蛋白溶液和丝素蛋白溶液进行混合。胶原蛋白溶液优选为酸溶液，丝素蛋白溶液优选为水溶液。
41.本发明提供的组织修复膜中，胶原蛋白膜机械强度高，降解时间长，在修复骨缺损中可提供充分的空间维持的时间供骨组织生长；网状基体膜当与血液、生理盐水或体液接触时，网状基体上的纤维蛋白原和凝血酶发生交联，产生纤维蛋白胶将膜粘附在伤口上。纤维蛋白胶以网状形式存在，网孔内没有胶或形成薄层胶，可以很快的被吸收，从而露出孔隙结构，使胶原蛋白膜对缺损部位发生作用，进而促进缺损处的生长和愈合，避免纤维蛋白胶的存在屏障了胶原蛋白膜对缺损处的作用。
42.在一些优选的实施方式中，所述胶原蛋白和丝素蛋白的质量比例如可以为，但不限于3:7、5:5或7:3，优选为3:7。
43.通过对胶原蛋白和丝素蛋白比例的进一步优化和调整，使得胶原蛋白膜的机械强度良好，降解时间适宜。
44.在一些优选的实施方式中，所述交联反应为采用交联剂进行交联；
45.优选地，所述交联剂为edc和nhs。
46.本发明中以edc和nhs作为交联剂，交联后可以采用0.1m na2hpo4溶液洗涤胶原膜2～4小时停止交联，再用去离子水清洗后(4次，30分钟)，充分洗去edc-nhs，避免交联剂残留。
47.在一些优选的实施方式中，所述纤维蛋白原和羟丙基甲基纤维素的质量比为(1-3)：(7-9)，每1-6毫克的纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶；
48.优选地，所述纤维蛋白原和羟丙基甲基纤维素的质量比为1:9，每4毫克纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶。
49.在一些优选的实施方式中，所述胶原蛋白膜负载药物，所述药物包括蛋白质15(p-15，能够提高细胞黏附)、骨形态发生蛋白-2(bmp-2，促进成骨分化)、重组人成纤维细胞生长因子(rhfgf2，促进成纤维细胞和内皮细胞增殖)、成骨蛋白质-1(op-1，增加成骨细胞的有丝分裂和分化)。
50.第二方面，本发明提供了上述组织修复膜的制备方法，包括如下步骤：
51.a.将胶原蛋白和丝素蛋白的混合溶液在模具中成膜，然后将膜浸泡在交联剂的溶液中进行交联反应，再将交联反应后的膜依次经过清洗、干燥后，制备得到胶原蛋白膜；
52.b.以含有纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素的溶液为电纺液，采用静电纺丝的方式将电纺液纺到所述胶原蛋白膜上，经干燥后制备得到组织修复膜；或者以纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素作为打印材料，采用3d打印的方式在所述胶原蛋白膜上制备网状基体膜，获得组织修复膜。
53.本发明提供的制备方法简单方便，制备得到的组织修复膜能够用于口腔等组织骨缺损的修复。
54.在一些优选的实施方式中，所述成膜的条件为：温度例如可以为，但不限于30℃、32℃、34℃、36℃、38℃或40℃，优选为35℃；
55.湿度例如可以为，但不限于55％、57％、59％、61％、63％或65％，优选为60％。
56.在一些优选的实施方式中，所述交联剂的溶液为含有edc和nhs的无水乙醇溶液；
57.优选地，所述edc和nhs的摩尔比例如可以为，但不限于2:1、3:1或4:1，优选为3:1；
58.优选地，所述交联反应的时间例如可以为，但不限于2h、4h、6h或8h。
59.在一些优选的实施方式中，所述电纺液为含有纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素的乙醇溶液；
60.优选地，所述静电纺丝的条件包括：喷丝针头内径为0.4-0.8mm；
61.电纺液流速为0.2～0.7ml/h；
62.纺丝电压为15-30kv；
63.平板接收器接收距离为3-20cm。
64.在一些优选的实施方式中，将含有纤维蛋白原溶液和凝血酶的溶液混合后进行微粉化处理，再与羟丙基甲基纤维在无水乙醇溶液中进行混合制备得到电纺液。
65.第三方面，本发明提供了上述组织修复膜在制备口腔修复产品中的应用。
66.本发明提供的组织修复膜对骨组织缺损区的修复具有促进作用，能够用于口腔修复产品中，例如口腔修复膜等。
67.下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
68.实施例1
69.一种组织修复膜，制备方法如下：
70.(1)取牛跟腱为原料，制备ⅰ型胶原蛋白溶液。
71.a.将动物跟腱除杂、粉碎后进行盐溶液处理。其中除杂为去除多余的组织、脂肪等杂质；动物跟腱为牛跟腱，盐溶液为nacl溶液，浓度为5wt％-25wt％，动物跟腱与盐溶液的质量比为1:(50-100)。
72.b.将经过a步骤处理的动物跟腱进行酶处理，去除不溶物质，包括大颗粒的跟腱组织和其他杂质蛋白。可将大尺寸的跟腱组织重新粉碎再次进行酶处理以提高原料的利用率；酶处理为采用含有胃蛋白酶的醋酸溶液对动物跟腱进行处理，醋酸浓度为0.25-0.8mol/l。
73.c.调节b步骤得到的溶液的ph至12-14，添加碱溶液至溶液中盐浓度为2.5-7.5mol/l，得到沉淀。采用等电点沉淀法和盐析法以分离得到ⅰ型胶原沉淀，另外，碱性条件能够很好地对病毒进行灭活，能够提高胶原的生物相容性和安全性。其中，碱溶液为naoh。
74.d.将c步骤得到的沉淀依次进行酸性溶液处理，分离和干燥得到ⅰ型胶原。将沉淀再次进行溶解，去除不溶性杂质，进一步提高ⅰ型胶原的纯度。其中，酸性溶液为盐酸溶液，浓度为0.1-10mol/l。
75.(2)将蚕丝用1％nahco3水溶液煮沸3次，每次30min。然后用去离子水进行清洗、干燥后得到丝素纤维。用氯化钙、乙醇和水按照一定比例配(氯化钙：乙醇：水＝0.8～1.5:3～5.8:7～12)置成溶剂在70℃下溶解丝素纤维。得到的溶液经过纤维素透析膜，在流水中透析3天，得到丝素蛋白水溶液。
76.(3)将胶原蛋白溶液与丝素蛋白溶液按照一定比例混合，将两种溶液按照一定比例进行混合(混合溶液中，溶质包括：30％胶原蛋白含量和70％丝素蛋白)，得到的混合体系倒入模具，在35℃，湿度保持在60％的条件下成膜。
77.(4)将(3)中得到的胶原膜浸泡在含有edc和nhs的无水乙醇溶液中，轻轻振摇，样品在n
edc
/n
nhs
＝3:1的室温条件下交联2～8h后，用0.1mna2hpo4溶液洗涤胶原膜2～4小时停止交联，再用去离子水清洗后(4次，30分钟)，胶原蛋白在干燥器中干燥并经压合处理，待用。
78.(5)将纤维蛋白原冻干粉在搅拌的状态下溶于无水乙醇中，得到纤维蛋白原悬浮液。
79.(6)将凝血酶冻干粉在搅拌的状态下溶于无水乙醇中，得到凝血酶悬浮液。
80.(7)将纤维蛋白原悬浮液和凝血酶悬浮液混合后进行预微粉化处理，再与羟丙基甲基纤维在无水乙醇溶液中进行混合，其中，纤维蛋白原与羟丙基甲基纤维素的质量比为1:9，每4毫克的纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶，制备溶质质量为12％的共混乙醇溶液作为电纺液。
81.(8)采用静电纺丝的方式，将混有纤维蛋白原和凝血酶的悬浮液纺到胶原膜上。纺丝所用喷丝针头内径为0.6mm，电纺液流速为0.2～0.7ml/h，纺丝电压为15-30kv，平板接收器接收距离为3-20cm。
82.(9)将两层膜结构样品进行干燥，得到内层含有纤维蛋白原和凝血酶的网状基体薄膜，外层为胶原蛋白膜的双层膜结构。
83.实施例2
84.一种组织修复膜，与实施例1的区别在于步骤(3)中将胶原蛋白溶液与丝素蛋白溶液混合，获得的混合溶液中，溶质包括：50％胶原蛋白含量和50％丝素蛋白)。
85.实施例3
86.一种组织修复膜，与实施例1的区别在于步骤(3)中将胶原蛋白溶液与丝素蛋白溶液混合，获得的混合溶液中，溶质包括：70％胶原蛋白含量和30％丝素蛋白)。
87.对比例1
88.一种组织修复膜，与实施例1的区别在于以涂覆法制备的粘性胶原膜，制备方法大致如下：
89.将纤维蛋白原经过预微粉化使其直径在50-125μm，在2-8℃下，将纤维蛋白原与无水乙醇混合，制备纤维蛋白原混合物；同样，将凝血酶与无水乙醇混合，制备凝血酶混合物。混合纤维蛋白原混合物和凝血酶混合物得到含有纤维蛋白原和凝血酶的悬浮液，将此悬浮液按照0.1-0.2ml体积的悬浮液涂覆在每平方厘米的载体(实施例1提供的胶原蛋白膜)表面上。
90.对比例2
91.一种组织修复膜，制备方法与实施例1的区别在于步骤(3)中不添加胶原蛋白。
92.对比例3
93.一种组织修复膜，与实施例1的区别在于步骤(3)中将胶原蛋白溶液与丝素蛋白溶液混合，获得的混合溶液中，溶质包括：10％胶原蛋白含量和90％丝素蛋白)。
94.对比例4
95.一种组织修复膜，与实施例1的区别在于步骤(3)中将胶原蛋白溶液与丝素蛋白溶液混合，获得的混合溶液中，溶质包括：90％胶原蛋白含量和10％丝素蛋白)。
96.对比例5
97.一种组织修复膜，与实施例1的区别在于步骤(3)中不添加丝素蛋白。
98.试验例1抗拉测试
99.将实施例1-3和对比例2-5提供的组织修复膜用万能试验机进行抗拉测试，其结果如下：
100.表1混合膜拉伸断裂力
[0101][0102]
当混合膜中胶原蛋白含量占0％和10％时，干燥状态下很难得到完整的膜，因此未能进行力学性能测试。
[0103]
由表中数据可知，随着丝素蛋白含量的增加，可有效提高共混膜的力学性能，但纯丝素蛋白膜很难形成完整的膜。
[0104]
试验例2溶失率测试
[0105]
以实施例1-3和对比例2-5提供的组织修复膜作为待测样品，将干燥状态下的组织
修复膜剪成1
×
4cm的样条，恒重后(记为w1)置于20ml 37℃pbs溶液中恒温2d，取出后在105℃烘箱中烘干至恒重(记为w2)，溶失率为：
[0106]
溶失率μ＝[(w1－w2)/w1]
×
100％。
[0107]
结果如下：
[0108]
表2混合膜溶失率
[0109][0110][0111]
当混合膜中胶原蛋白含量占90％和100％时，混合膜在2d之内已经全部溶解，因此混合膜中胶原蛋白含量为90％和100％时未有溶失率实验数据。
[0112]
由以上数据可说明，丝素蛋白的添加，有利于降低膜的溶失率。
[0113]
试验例3持粘性测定
[0114]
试验板为厚1.5mm～2.0mm、宽为200mm、长200mm的不锈钢板，试验板表面粗糙度应不大于0.4μm。试验板表面有永久性污迹或伤痕时，应及时更换，试验前应将试验板擦拭干净。在温度约37℃下，湿度为50％，将尺寸为25mm
×
60mm的产品浸润后，贴在垂直放置的试验板上中心位置(产品长边方向保持水平)，用手按压确保产品可靠粘附，37℃下，静置4h，测定不同产品的下滑位移。实验最终结果显示，涂覆型膜(对比例1)和本发明中的粘性膜产品(实施例1)具有相同粘附能力。实验结果如下：
[0115]
表3粘附性膜持粘性数据
[0116][0117]
根据标准db61/t 1204—2018对粘附性口腔膜进行持粘性测定，测定结果显示，本发明中口腔膜的持粘性与涂覆型粘性膜具有相同的持粘性。
[0118]
试验例4孔隙率测定
[0119]
用万分之一天平称量样品质量m，再用游标卡尺测量样品的尺寸并计算其视体积v，然后将样品放入样品杯中，利用真密度仪测量样品的真密度ρ
真
与样品的真实体积v
真
，再利用如下公式计算样品的孔隙率ε。测试组为30％胶原蛋白制备的膜。
[0120]
ε＝[(1/ρ
真
)-(1/ρ
视
)]/(1/ρ
视
)
[0121]
其中，ρ
视
为视密度，ρ
视
＝m/v；
[0122]
ρ
真
为真密度，即仪器的测量值。
[0123]
涂覆法制备的粘性胶原膜样品(对比例1)和本发明中制备的双层膜结构(实施例1)的孔隙率结果如下表：
[0124]
表4粘附性膜孔隙率
[0125]
项目m视/mgv视/mm3ρ视/g
·
cm-3
ρ真/g
·
cm-3
ε/％涂覆法559.71399.30.400.879354.5静电纺639.22061.960.310.879364.7
[0126]
根据结果可知，本发明中的双层膜的孔密度要比涂覆法双层膜孔密度大，更利于胶原膜对组织缺陷部位的引导组织再生的作用。
[0127]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

技术特征：
1.一种组织修复膜，其特征在于，包括胶原蛋白膜和网状基体膜；所述网状基体膜固定在胶原蛋白膜上，构成双层膜结构；所述胶原蛋白膜主要由胶原蛋白和丝素蛋白溶液共混后干燥，再经过交联制备得到；所述网状基体膜主要由纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素组成。2.根据权利要求1所述的组织修复膜，其特征在于，所述胶原蛋白和丝素蛋白的质量比为3:7-7:3，优选为3:7。3.根据权利要求1所述的组织修复膜，其特征在于，所述交联反应为采用交联剂进行交联；优选地，所述交联剂为edc和nhs。4.根据权利要求1所述的组织修复膜，其特征在于，所述纤维蛋白原和羟丙基甲基纤维素的质量比为(1-3)：(7-9)，每1-6毫克的纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶；优选地，所述纤维蛋白原和羟丙基甲基纤维素的质量比为1:9，每4毫克纤维蛋白原加入1个活性单位的凝血酶。5.根据权利要求1所述的组织修复膜，其特征在于，所述胶原蛋白膜负载药物，所述药物包括蛋白质15、骨形态发生蛋白-2、重组人成纤维细胞生长因子、成骨蛋白质-1。6.权利要求1-5任一项所述组织修复膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a.将胶原蛋白和丝素蛋白的混合溶液在模具中成膜，然后将膜浸泡在交联剂的溶液中进行交联反应，再将交联反应后的膜依次经过清洗、干燥后，制备得到胶原蛋白膜；b.以含有纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素的溶液为电纺液，采用静电纺丝的方式将电纺液纺到所述胶原蛋白膜上，经干燥后制备得到组织修复膜；或者以纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素作为打印材料，采用3d打印的方式在所述胶原蛋白膜上制备网状基体膜，获得组织修复膜。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述成膜的条件为：温度为30-40℃，湿度为55％-65％。8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述交联剂的溶液为含有edc和nhs的无水乙醇溶液；优选地，所述edc和nhs的摩尔比为2:1-4:1；优选地，所述交联反应的时间为2-8h。9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述电纺液为含有纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素的乙醇溶液；优选地，所述静电纺丝的条件包括：喷丝针头内径为0.4-0.8mm，电纺液流速为0.2～0.7ml/h，纺丝电压为15-30kv，平板接收器接收距离为3-20cm。10.权利要求1-5任一项所述的组织修复膜在制备口腔修复产品中的应用。

技术总结
本发明提供了一种组织修复膜及其制备方法和应用，涉及生物医用材料技术领域。本发明提供的组织修复膜，包括胶原蛋白膜和网状基体膜；网状基体膜固定在胶原蛋白膜上，构成双层膜结构；胶原蛋白膜主要由胶原蛋白和丝素蛋白溶液共混、干燥，再经过交联制备得到；网状基体膜主要由纤维蛋白原、凝血酶和羟丙基甲基纤维素组成。本发明提供的组织修复膜，其胶原蛋白膜机械强度高，降解时间长，在修复骨缺损中可提供充分的空间维持的时间供骨组织生长；网状基体膜与血液、生理盐水或体液接触时，产生纤维蛋白胶将膜粘附在伤口上，纤维蛋白胶以网状形式存在，不会阻挡胶原蛋白膜对细胞的粘附作用，从而不会影响胶原膜的引导组织再生的性能。能。


技术研发人员：聂洪涛 张凯 杨孔艳 王璇
受保护的技术使用者：北京邦塞科技有限公司
技术研发日：2023.06.19
技术公布日：2023/9/12