一种促进毛孔恢复提亮肤色的mRNA活性细胞液配置方法与流程

95％的经预培养的干细胞；
10.步骤s5，在免疫调节因子存在下，对步骤s4经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞；
11.步骤s6，从步骤s5获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与步骤s3的提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，一段时间后进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，即可得到所需活性细胞液。
12.作为优选的，所述人体干细胞含有胶原蛋白编码基因，其中胶原蛋白基因编码包括col1a1、col1a2、col2a1、col3a1、col5a1、col5a2、col5a3、col11a1、col11a2、col11a3、col24a1。
13.作为优选的，所述步骤s3无菌膜为400nm或100nm的无菌铝膜。
14.作为优选的，所述活性细胞液的溶质为水。
15.作为优选的，所述步骤s4细胞培养参数为温度36-38℃，二氧化碳浓度为5％，通气量0.2lpm，且悬浮系细胞为239f、hek293的一种。
16.作为优选的，所述步骤s5免疫调节因子包括干扰素。
17.本发明所述方案相比于现有技术的有益效果如下：
18.本发明mrna活性细胞液配置方法通过将dspc，dotap，dope按照摩尔比1:30:30的比例制得的脂质体载体与载胶原蛋白基因编码的mrna细胞转录后进行培养，既可以通过药物治疗螨虫病害，又可以提高人体胶原蛋白合成效率，细化毛孔提亮肤色。
具体实施方式
19.下面通过具体实施例对发明做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的本发明的保护范围。
20.实施例1
21.一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，包括如下步骤：
22.步骤s1，将dspc，dotap，dope按照摩尔比1:30:30的比例混合后，在冷冻干燥机上抽干过夜，得到混合物；
23.步骤s2，将混合物加入无菌磷酸缓冲液，具体浓度为10mg/ml，然后在室温下乳化过夜，得到混合液；
24.步骤s3，将混合液透过无菌滤膜过滤，备用；
25.步骤s4，在一定培养条件下，对人体干细胞进行预培养，从而获得融合度为60-95％的经预培养的干细胞；
26.步骤s5，在免疫调节因子存在下，对步骤s4经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞；
27.步骤s6，从步骤s5获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与步骤s3的提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，一段时间后进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，即可得到所需活性细胞液。
28.本实施例中，人体干细胞含有胶原蛋白编码基因，其中胶原蛋白基因编码包括col1a1、col1a2、col2a1、col3a1、col5a1、col5a2、col5a3、col11a1、col11a2、col11a3、col24a1，步骤s3无菌膜为400nm的无菌铝膜，活性细胞液的溶质为水，步骤s4细胞培养参数
为温度36-38℃，二氧化碳浓度为5％，通气量0.2lpm，且悬浮系细胞为239f，步骤s5免疫调节因子包括干扰素。
29.实施例2
30.一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，包括如下步骤：
31.步骤s1，将dspc，dotap，dope按照摩尔比1:30:30的比例混合后，在冷冻干燥机上抽干过夜，得到混合物；
32.步骤s2，将混合物加入无菌磷酸缓冲液，具体浓度为10mg/ml，然后在室温下乳化过夜，得到混合液；
33.步骤s3，将混合液透过无菌滤膜过滤，备用；
34.步骤s4，在一定培养条件下，对人体干细胞进行预培养，从而获得融合度为60-95％的经预培养的干细胞；
35.步骤s5，在免疫调节因子存在下，对步骤s4经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞；
36.步骤s6，从步骤s5获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与步骤s3的提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，一段时间后进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，即可得到所需活性细胞液。
37.本实施例中，人体干细胞含有胶原蛋白编码基因，其中胶原蛋白基因编码包括col1a1、col1a2、col2a1、col3a1、col5a1、col5a2、col5a3、col11a1、col11a2、col11a3、col24a1，步骤s3无菌膜为400nm的无菌铝膜，活性细胞液的溶质为水，步骤s4细胞培养参数为温度36-38℃，二氧化碳浓度为5％，通气量0.2lpm，且悬浮系细胞为hek293，步骤s5免疫调节因子包括干扰素。
38.实施例3
39.一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，包括如下步骤：
40.步骤s1，将dspc，dotap，dope按照摩尔比1:30:30的比例混合后，在冷冻干燥机上抽干过夜，得到混合物；
41.步骤s2，将混合物加入无菌磷酸缓冲液，具体浓度为10mg/ml，然后在室温下乳化过夜，得到混合液；
42.步骤s3，将混合液透过无菌滤膜过滤，备用；
43.步骤s4，在一定培养条件下，对人体干细胞进行预培养，从而获得融合度为60-95％的经预培养的干细胞；
44.步骤s5，在免疫调节因子存在下，对步骤s4经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞；
45.步骤s6，从步骤s5获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与步骤s3的提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，一段时间后进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，即可得到所需活性细胞液。
46.本实施例中，人体干细胞含有胶原蛋白编码基因，其中胶原蛋白基因编码包括col1a1、col1a2、col2a1、col3a1、col5a1、col5a2、col5a3、col11a1、col11a2、col11a3、col24a1，步骤s3无菌膜为100nm的无菌铝膜，活性细胞液的溶质为水，步骤s4细胞培养参数为温度36-38℃，二氧化碳浓度为5％，通气量0.2lpm，且悬浮系细胞为239f，步骤s5免疫调
节因子包括干扰素。
47.实施例4
48.一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，包括如下步骤：
49.步骤s1，将dspc，dotap，dope按照摩尔比1:30:30的比例混合后，在冷冻干燥机上抽干过夜，得到混合物；
50.步骤s2，将混合物加入无菌磷酸缓冲液，具体浓度为10mg/ml，然后在室温下乳化过夜，得到混合液；
51.步骤s3，将混合液透过无菌滤膜过滤，备用；
52.步骤s4，在一定培养条件下，对人体干细胞进行预培养，从而获得融合度为60-95％的经预培养的干细胞；
53.步骤s5，在免疫调节因子存在下，对步骤s4经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞；
54.步骤s6，从步骤s5获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与步骤s3的提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，一段时间后进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，即可得到所需活性细胞液。
55.本实施例中，人体干细胞含有胶原蛋白编码基因，其中胶原蛋白基因编码包括col1a1、col1a2、col2a1、col3a1、col5a1、col5a2、col5a3、col11a1、col11a2、col11a3、col24a1，步骤s3无菌膜为100nm的无菌铝膜，活性细胞液的溶质为水，步骤s4细胞培养参数为温度36-38℃，二氧化碳浓度为5％，通气量0.2lpm，且悬浮系细胞为hek293，步骤s5免疫调节因子包括干扰素。
56.本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施条例作出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

技术特征：
1.一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤s1，将dspc，dotap，dope按照摩尔比1:30:30的比例混合后，在冷冻干燥机上抽干过夜，得到混合物；步骤s2，将混合物加入无菌磷酸缓冲液，具体浓度为10mg/ml，然后在室温下乳化过夜，得到混合液；步骤s3，将混合液透过无菌滤膜过滤，备用；步骤s4，在一定培养条件下，对人体干细胞进行预培养，从而获得融合度为60-95％的经预培养的干细胞；步骤s5，在免疫调节因子存在下，对步骤s4经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞；步骤s6，从步骤s5获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与步骤s3的提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，一段时间后进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，即可得到所需活性细胞液。2.根据权利要求1所述的一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，其特征在于，所述人体干细胞含有胶原蛋白编码基因，其中胶原蛋白基因编码包括col1a1、col1a2、col2a1、col3a1、col5a1、col5a2、col5a3、col11a1、col11a2、col11a3、col24a1。3.根据权利要求1所述的一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，其特征在于，所述步骤s3无菌膜为400nm或100nm的无菌铝膜。4.根据权利要求1所述的一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，其特征在于，所述活性细胞液的溶质为水。5.根据权利要求1所述的一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，其特征在于，所述步骤s4细胞培养参数为温度36-38℃，二氧化碳浓度为5％，通气量0.2lpm，且悬浮系细胞为239f、hek293的一种。6.根据权利要求1所述的一种促进毛孔恢复提亮肤色的mrna活性细胞液配置方法，其特征在于，所述步骤s5免疫调节因子包括干扰素。

技术总结
本发明涉及生物工程技术领域，并公开了一种促进毛孔恢复提亮肤色的mRNA活性细胞液配置方法，包括如下步骤，将DSPC，DOTAP，DOPE按照摩尔比1:30:30的比例混合后，在冷冻干燥机上抽干过夜，得到混合物，将混合物加入无菌磷酸缓冲液，然后在室温下乳化过夜，得到混合液，将混合液透过无菌滤膜过滤，对人体干细胞进行预培养，对经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得发酵培养液，发酵培养液含经诱导培养的干细胞，获得的发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡，并将滤液与提取物进行混合后，移至细胞袋中进行细胞培养，再进行灌注培养，使用新鲜培养基逐步稀释培养袋中的培养液，本发明提出的活性细胞液配置方法可以提高人体胶原蛋白合成效率，细化毛孔提亮肤色。细化毛孔提亮肤色。


技术研发人员：杜爱林
受保护的技术使用者：超弦波生命科学应用技术（上海）有限公司
技术研发日：2023.06.19
技术公布日：2023/9/12