一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法与流程

1.本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法。


背景技术：

2.十二烷基硫酸钠(sds)作为硫酸盐类阴离子表面活性剂，在药物制剂中广泛应用，可作为药品的增溶剂、乳化剂、皮肤穿透剂、片剂和胶囊剂的润滑剂、润湿剂等；同时，阴离子表面活性剂具有一定的毒性，sds的使用可能会影响到药品的质量、安全性和有效性。
3.辅料sds本身具有两面性，一方面，在体外能够非常有效地改善药品的溶出速率；另一方面，在体内能够改变细胞膜通透性引起毒性。因此，在药物制剂中，sds的用量尽可能减少，以最少用量达到最大效果即可。
4.对于非那雄胺片，sds能够有效增加原料药非那雄胺的溶解速率，为了改善产品的溶出速率，配方中必须加入sds作为增溶剂；在产品开发过程中，以溶出曲线为重点考察指标，对配方中sds用量进行严格筛选，确定单剂量片剂中sds用量；与此同时，建立了可靠的、经过验证的方法进行sds检测，以确保其在片剂中是均匀的，最终保证该产品的质量和临床疗效。
5.目前没有公开报道检验非那雄胺片剂中sds含量的方法。由于sds没有发色团，没有紫外吸收，现有技术中有关微量sds含量的检测方法并不多。
6.《中国现代应用药学》2018年11月第35卷第11期报道了采用气相技术测定非诺贝特药物中十二烷基硫酸钠含量的方法，该方法采用hp-5(30m
×
0.53m，2.65μm)毛细管柱，以氮气为载气，氢火焰离子化检测器，程序升温，直接进样，以十二烷醇为对照品外标法测定十二烷基硫酸钠的含量。结果：gc测定法需要对十二烷基硫酸钠进行酸化消解，操作繁琐，增加了影响实验结果的因素，并且加热过程中也容易出现安全问题。
7.《药物分析杂志》2001年05期354～357页报道了用过量的吖啶橙溶液与一系列倍比稀释的不同浓度的sds结合，产生有色的sds－吖啶橙复合物，再用spectra max 250多功能酶标仪进行比色测定，并用softmax分析软件分析结果。结果：此方法虽然灵敏度高，但操作费时，同时样品里的辅料和主药会影响结合而干扰测定。


技术实现要素：

8.有鉴于此，本发明提供一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，包括如下步骤：
9.s1：配制样品；配制对照溶液、样品溶液和空白溶液；其中样品溶液包括多组，同一组样品溶液均来自同批次非那雄胺片；
10.s2：进样分析；采用高效液相色谱-质谱联用仪器检测所有对照溶液、样品溶液和空白溶液，获得对照溶液、样品溶液和空白溶液的色谱图；
11.s3：数据处理；分析色谱图，判断色谱图是否符合标准，若色谱图符合标准则获取
色谱图上数据并进行步骤s4；否则重新进行步骤s2；
12.其中判断色谱图是否符合标准的过程为：
13.若空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，对照溶液显示目标峰，样品溶液中sds峰与相邻峰有效分离，则判断色谱图符合标准；否则不符合标准；
14.s4：计算结果；根据色谱图上数据计算每组样品溶液中roso
3-含量，然后每组样品溶液中sds含量，进而得到非那雄胺片样品中sds含量；计算同批次多组样品非那雄胺片sds含量的相对标准偏差，根据相对标准偏差判断该批次非那雄胺片的检测数据是否有效，若有效则保存所有检测数据；若无效则重复步骤s1-s4。
15.进一步地，步骤s1中，配置样品溶液的过程为：
16.s11:取非那雄胺片适量至容量瓶中，加入溶剂得到非那雄胺片混悬液，将非那雄胺片混悬液定容至预定刻度；
17.s12:对非那雄胺片混悬液进行超声混合处理，使混悬液混合均匀；
18.s13:对非那雄胺片混悬液进行离心处理，取上层清液至容量瓶，再次加入溶剂定容至预定刻度，混合均匀，得到样品溶液。
19.进一步地，步骤s1中，对照溶液为sds溶液，空白溶液及溶剂均为纯化水。
20.进一步地，步骤s2中采用高效液相色谱-质谱联用仪器检测的高效液相色谱条件为：
21.填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
22.流动相a：乙酸铵水溶液；
23.流动相b：选择甲醇或乙腈；
24.流动相a与b的体积比为90：10～40：60；
25.柱温：20～50℃；
26.流速：0.1～2ml/min；
27.进样量：5～50μl；
28.自动进样器温度：5～30℃。
29.进一步地，步骤s2中采用高效液相色谱-质谱联用仪器检测的质谱条件为：
30.离子源：电喷雾离子源；
31.干燥器温度：300～400℃；
32.干燥器流速：9～15l/min；
33.扫描类型：单一离子监测。
34.进一步地，步骤s4中，计算每组样品溶液sds含量的方法为：
35.按下列公式计算sds含量：
[0036][0037]
式中：
[0038]aspl
指样品色谱图中待测物的峰面积；
[0039]wspl
指样品的称样量(mg)
[0040]vspl
指样品的稀释体积(ml)
[0041]
rf指待测物的响应因子
[0042]
其中待测物的响应因子按照下列公式计算：
[0043][0044]
式中：
[0045]astd
指初始6针对照溶液中待测物的平均峰面积；
[0046]cstd
指对照溶液中待测物的浓度，上述过程中待测物为roso
3-。
[0047]
进一步地，步骤s4中判断该批次非那雄胺片检测数据是否有效的方法为：
[0048]
若计算出的相对标准偏差大于5％，则该批次非那雄胺片检测数据无效；
[0049]
若计算出的相对标准偏差小于或等于5％，则该批次非那雄胺片检测数据有效。
[0050]
本发明基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法的有益效果为：非那雄胺片剂中除主药非那雄胺外，辅料成分比较复杂，含有6种不同的辅料和1种包衣预混剂，其中包衣预混剂中含有6种不同的成分；要在多种复杂成分中准确检测sds，需要建立专属性很强的方法；本发明的方法根据sds的结构式推断，其溶液中含有na
+
、roso
3-两种离子，由于片剂中某些辅料也含有na
+
，因此不能采用原子吸收的方法监测na
+
的含量确定sds的含量，而是选择液相色谱-质谱联用的方法监测roso
3-含量，进而计算sds含量，该方法具有准确、可靠、重现性高的优点，以快速简便的检测出非那雄胺片中sds的含量，实用性强。
附图说明
[0051]
图1为本发明实施例基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法的流程图；
[0052]
图2为空白溶液色谱图；
[0053]
图3为对照溶液色谱图；
[0054]
图4为样品溶液色谱图。
具体实施方式
[0055]
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地描述。
[0056]
下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明方法的前提下对本发明的简单改进均属于本发明要求保护的范围。
[0057]
请参考图1，本发明的一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，包括如下步骤：
[0058]
s1：配制样品；配制对照溶液、样品溶液和空白溶液；其中样品溶液包括多组，样品溶液来自非那雄胺片；
[0059]
其中，对照溶液为sds溶液，空白溶液及溶剂均为纯化水。
[0060]
步骤s1中，配置样品溶液的过程为：
[0061]
s11:取非那雄胺片适量至容量瓶中，加入溶剂得到非那雄胺片混悬液，将非那雄胺片混悬液定容至预定刻度；
[0062]
s12:对非那雄胺片混悬液进行超声混合处理，使混悬液混合均匀；
[0063]
s13:对非那雄胺片混悬液进行离心处理，取上层清液至容量瓶，再次加入溶剂定
容至预定刻度，混合均匀，得到样品溶液。
[0064]
s2：进样分析；采用高效液相色谱-质谱联用仪器，检测所有对照溶液、样品溶液和空白溶液，获得对照溶液、样品溶液和空白溶液的色谱图；
[0065]
步骤s2中进行高效液相色谱-质谱联用实验的高效液相色谱条件为：
[0066]
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
[0067]
流动相a：乙酸铵水溶液；
[0068]
流动相b：选择甲醇或乙腈；
[0069]
流动相a与b的体积比为90：10～40：60；梯度洗脱；
[0070]
柱温：20～50℃；
[0071]
流速：0.1～2ml/min；
[0072]
进样量：5～50μl；
[0073]
自动进样器温度：5～30℃。
[0074]
步骤s2中进行高效液相色谱-质谱联用实验的质谱条件为：
[0075]
离子源：电喷雾离子源；
[0076]
干燥器温度：300～400℃；
[0077]
干燥器流速：9～15l/min；
[0078]
扫描类型：单一离子监测。
[0079]
s3：数据处理；分析色谱图，判断色谱图是否符合标准，若色谱图符合标准则获取色谱图上数据并进行步骤s4；否则重新进行步骤s2；
[0080]
其中判断色谱图是否符合标准的过程为：
[0081]
若空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，对照溶液显示目标峰，样品溶液中sds峰与相邻峰有效分离，则判断色谱图符合标准；否则不符合标准；
[0082]
s4：计算结果；根据色谱图上数据计算每组样品非那雄胺片中sds含量；
[0083]
步骤s4中，计算每组样品溶液sds的含量的方法为：
[0084]
按下列公式计算sds含量：
[0085][0086]
式中：
[0087]aspl
指样品色谱图中待测物的峰面积；
[0088]wspl
指样品的称样量(mg)；
[0089]vspl
指样品的稀释体积(ml)；
[0090]
rf指待测物的响应因子；
[0091]
其中待测物的响应因子按照下列公式计算：
[0092][0093]
式中：
[0094]astd
指初始6针对照溶液中待测物的平均峰面积；
[0095]cstd
指对照溶液中待测物的浓度，上述过程中待测物为roso
3-。
[0096]
上述过程中，c
std
为高效液相色谱-质谱联用仪器检测出的对照溶液中的roso
3-离
子浓度，roso
3-由对照溶液中sds(十二烷基硫酸钠)产生，因此上述过程可通过c
std
计算出对照溶液中的sds浓度，进而计算出样品非那雄胺片中sds含量值。
[0097]
计算每组样品非那雄胺片sds含量的相对标准偏差，根据相对标准偏差判断该批次非那雄胺片的检测数据是否有效，若有效则保存所有检测数据；若无效则重复步骤s1-s4。
[0098]
步骤s4中判断该批次非那雄胺片检测数据是否有效的方法为：
[0099]
若计算出的同批次的非那雄胺片样品sds含量值的相对标准偏差大于5％，则该批次非那雄胺片检测数据无效；
[0100]
若计算出的同批次的非那雄胺片样品sds含量值的相对标准偏差小于或等于5％，则该批次非那雄胺片检测数据有效。
[0101]
实施例1：
[0102]
(1)配制样品
[0103]
取10mg十二烷基硫酸钠定容至10ml，后进一步稀释成浓度为3500ng/ml的溶液作为对照品储备液。
[0104]
移取1.0ml对照品储备液至10ml容量瓶中，用溶剂定容至刻度并混匀，作为对照溶液。
[0105]
取非那雄胺片140mg(约含十二烷基硫酸钠0.35mg)至100ml容量瓶中加入溶剂定容至刻度，超声处理3min，溶液混匀，然后在10000r/min条件下离心处理5min，移取上清液1.0ml至10ml容量瓶，用溶剂定容至刻度，混匀，作为样品溶液。本实施例中，样品溶液数量为10组；
[0106]
取纯化水定容至刻度，作为空白溶液。
[0107]
(2)进样分析
[0108]
采用高效液相色谱-质谱联用仪器，检测所有对照溶液、样品溶液和空白溶液，获得对照溶液、样品溶液和空白溶液的色谱图；
[0109]
其中色谱条件如下：
[0110]
仪器：安捷伦1260高效液相色谱配备lc/msd xt型单四级杆质谱检测器色谱柱：agilent zorbax sb-c18，3.5μm，2.1*100nm
[0111]
流动相a：5mm乙酸铵
[0112]
流动相b：乙腈
[0113][0114]
柱温：40℃
[0115]
流速：0.3ml/min
[0116]
进样量：10μl
[0117]
进样器温度：10℃
[0118]
质谱条件如下：
[0119]
离子源：esi(电喷雾离子源)
[0120]
干燥器温度：350℃
[0121]
干燥器流速：12l/min
[0122]
扫描类型：sim(单一离子监测)
[0123]
(3)数据处理
[0124]
分析色谱图，参考图2-图4，分别为空白溶液色谱图、对照溶液色谱图及其中一组样品溶液色谱图，由图可知，空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，对照溶液显示目标峰，样品溶液中sds峰值与相邻峰能有效分离，样品溶液与对照溶液中目标峰的相对保留时间一致。上述结果说明色谱图是否符合标准。
[0125]
(4)计算结果
[0126]
根据色谱图上数据计算每组样品非那雄胺片中sds含量；计算每组样品非那雄胺片sds含量的相对标准偏差；根据相对标准偏差判断该批次非那雄胺片的检测数据是否有效，若有效则保存所有检测数据；若无效则重复步骤s1-s4。
[0127]
计算每组样品溶液sds的含量的过程如下：
[0128]
按下列公式计算sds含量：
[0129][0130]
式中：
[0131]aspl
指样品色谱图中待测物的峰面积
[0132]wspl
指样品的称样量(mg)
[0133]vspl
指样品的稀释体积(ml)
[0134]
rf指待测物的响应因子
[0135]
其中待测物的响应因子按照下列公式计算：
[0136][0137]
式中：
[0138]astd
指初始6针对照溶液中待测物的平均峰面积
[0139]cstd
指对照溶液中待测物的浓度
[0140]
上述过程中待测物为roso
3-。
[0141]
按下列公式计算相对标准偏差(rsd)：
[0142][0143]
式中：
[0144]
n为试样总数或测量次数
[0145]
xi为各次测量值
[0146]
为各次测量值的平均值。
[0147]
若计算出的相对标准偏差大于5％，则该批次非那雄胺片检测数据无效；
[0148]
若计算出的相对标准偏差小于或等于5％，则该批次非那雄胺片检测数据有效。
[0149]
实施例2：
[0150]
实施2和实施例3与实施例1区别在于进行高效液相色谱-质谱联用实验的具体实验参数以及样片批次不同，其具体参数如下：
[0151]
色谱条件为：
[0152]
仪器：安捷伦1260高效液相色谱配备lc/msd xt型单四级杆质谱检测器色谱柱：agilent zorbax sb-c18，3.5μm，2.1*100nm
[0153]
流动相a：5mm乙酸铵
[0154]
流动相b：乙腈
[0155][0156]
柱温：42℃
[0157]
流速：0.32ml/min
[0158]
进样量：10μl
[0159]
进样器温度：10℃
[0160]
质谱条件：
[0161]
离子源：esi
[0162]
干燥器温度：350℃
[0163]
干燥器流速：12l/min
[0164]
扫描类型：sim
[0165]
实施例3：
[0166]
(1)色谱条件：
[0167]
仪器：安捷伦1260高效液相色谱配备lc/msd xt型单四级杆质谱检测器色谱柱：agilent zorbax sb-c18，3.5μm，2.1*100nm
[0168]
流动相a：5mm乙酸铵
[0169]
流动相b：乙腈
[0170][0171]
柱温：38℃
[0172]
流速：0.28ml/min
[0173]
进样量：10μl
[0174]
进样器温度：10℃
[0175]
(2)质谱条件
[0176]
离子源：esi
[0177]
干燥器温度：350℃
[0178]
干燥器流速：12l/min
[0179]
扫描类型：sim。
[0180]
实施例1～实施例3检测结果见表1，表1包含三种实施例中各10个取样点数据结果及每种实施例的rsd值。
[0181]
三种实施例，每种各10个取样点的rsd值均小于5.0％，这表明三批次的非那雄胺片的sds的检测结果有效。该方法可以快速简便的检测出非那雄胺片中sds的含量，实用性强。
[0182]
表1非那雄胺片中sds含量的检验结果
[0183][0184]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：包括如下步骤：s1：配制样品；配制对照溶液、样品溶液和空白溶液；其中样品溶液包括多组，同一组样品溶液均来自同批次非那雄胺片；s2：进样分析；采用高效液相色谱-质谱联用仪器检测所有对照溶液、样品溶液和空白溶液，获得对照溶液、样品溶液和空白溶液的色谱图；s3：数据处理；分析色谱图，判断色谱图是否符合标准，若色谱图符合标准则获取色谱图上数据并进行步骤s4；否则重新进行步骤s2；其中判断色谱图是否符合标准的过程为：若空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，对照溶液显示目标峰，样品溶液中sds峰与相邻峰有效分离，则判断色谱图符合标准；否则不符合标准；s4：计算结果；根据色谱图上数据计算每组样品溶液中roso
3-含量，然后每组样品溶液中sds含量，进而得到非那雄胺片样品中sds含量；计算同批次多组样品非那雄胺片sds含量的相对标准偏差，根据相对标准偏差判断该批次非那雄胺片的检测数据是否有效，若有效则保存所有检测数据；若无效则重复步骤s1-s4。2.根据权利要求1一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：步骤s1中，配置样品溶液的过程为：s11:取非那雄胺片适量至容量瓶中，加入溶剂得到非那雄胺片混悬液，将非那雄胺片混悬液定容至预定刻度；s12:对非那雄胺片混悬液进行超声混合处理，使混悬液混合均匀；s13:对非那雄胺片混悬液进行离心处理，取上层清液至容量瓶，再次加入溶剂定容至预定刻度，混合均匀，得到样品溶液。3.根据权利要求2一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：步骤s1中，对照溶液为sds溶液，空白溶液及溶剂均为纯化水。4.根据权利要求1一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：步骤s2中采用高效液相色谱-质谱联用仪器检测的高效液相色谱条件为：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相a：乙酸铵水溶液；流动相b：选择甲醇或乙腈；流动相a与b的体积比为90：10～40：60；柱温：20～50℃；流速：0.1～2ml/min；进样量：5～50μl；自动进样器温度：5～30℃。5.根据权利要求1一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：步骤s2中采用高效液相色谱-质谱联用仪器检测的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；干燥器温度：300～400℃；干燥器流速：9～15l/min；扫描类型：单一离子监测。
6.根据权利要求1一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：步骤s4中，计算每组样品溶液sds含量的方法为：按下列公式计算sds含量：式中：a
spl
指样品色谱图中待测物的峰面积；w
spl
指样品的称样量(mg)v
spl
指样品的稀释体积(ml)rf指待测物的响应因子其中待测物的响应因子按照下列公式计算：式中：a
std
指初始6针对照溶液中待测物的平均峰面积；c
std
指对照溶液中待测物的浓度，上述过程中待测物为roso
3-。7.根据权利要求1一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，其特征在于：步骤s4中判断该批次非那雄胺片检测数据是否有效的方法为：若计算出的相对标准偏差大于5％，则该批次非那雄胺片检测数据无效；若计算出的相对标准偏差小于或等于5％，则该批次非那雄胺片检测数据有效。

技术总结
本发明提供一种基于十二烷基硫酸钠含量的非那雄胺片检测方法，包括如下步骤：S1：配置对照溶液、样品溶液和空白溶液；S2：进样分析对照溶液、样品溶液和空白溶液，获得相应溶液的色谱图；S3：分析色谱图，保证空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，对照溶液显示目标峰，样品溶液中SDS峰与相邻峰有效分离；S4：计算每组样品非那雄胺片中SDS含量；计算每组样品非那雄胺片SDS含量的相对标准偏差，根据相对标准偏差判断该批次非那雄胺片检测数据是否有效。本发明的有益效果为：该方法选择液相色谱-质谱联用仪器检测ROSO


技术研发人员：刘艳红 刘澍秾 焦心月 邓霞飞 唐维 熊心磊 卢子龙 丁晶 倪萌 李乐枫
受保护的技术使用者：武汉人福药业有限责任公司
技术研发日：2023.05.25
技术公布日：2023/9/14