一种产土曲霉酮的菌株及土曲霉酮的生产方法

1.本发明涉及一种产土曲霉酮的菌株及土曲霉酮的生产方法。


背景技术：

2.土曲霉酮具有黑色素生物合成抑制作用。土曲霉酮对乳腺癌、卵巢癌、肝癌等多种肿瘤细胞有抑制增殖的作用。土曲霉酮结构如下所示
[0003][0004]
目前已报道的产土曲霉酮的报道有：
[0005]
hani z.asfour等人
[1]
应用aspergillus terreus s020在21l发酵培养40d后，应用色谱分离手段最终获得537.26
±
23.42g/kg粗提物。该方案培养时间达到40d之久。
[0006]
中国海洋大学的chengying zhao等人
[2]
以耐盐菌aspergillus terreus pt06-2，经过培养基优化后，最终在500ml锥形瓶的反应条件下经过18d达到8.20
±
0.072g/l。该方案培养时间18d。
[0007]
ying yin等人
[3]
用来源于海绵内生真菌aspergillus terreus pf26来生产土曲霉酮，通过补加策略，在摇瓶规模中取得5.38g/l(+)-terrein产量。如果以7.5l发酵罐中培养，采用补加策略，其产量为2.58g/l土曲霉酮。
[0008]
梁廷梅等人
[4]
将来自中国南沙群岛柳珊瑚来源真菌aspergillus terreus(ns02—09)也产生土曲霉酮。未说明产量。
[0009]
2004年韩国s.-h.parka等人
[5]
发现penicillium species 20135土曲霉酮是一种新的黑色素抑制剂，并研究了其抑制机制。
[0010]
韩国俞益东等人
[6]
于2007年申请了相关专利，作者团队发现了青霉菌spkctc26245能产生土曲霉酮化合物，并发现该化合物能通过活化黑色素嗜铬细胞中的erk来抑制mitf表达以产生增白作用。未讲明产量。
[0011]
joseph auerbach等人
[7]
于1974年利用环氧化物经过9个合成步骤合成土曲霉酮。该步骤工艺步骤多，未说明得率。


技术实现要素：

[0012]
本发明的主要目的，在于提供一种产土曲霉酮的菌株。
[0013]
本发明解决其技术问题的所采用的技术方案是：
[0014]
一种产土曲霉酮的菌株，为真菌aspergillus terreus ky02，在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为gdmcc no：62936。
[0015]
本发明的另一目的，在于提供所述的一种产土曲霉酮的菌株在土曲霉酮生产中的应用。
[0016]
本发明的再一目的，在于提供土曲霉酮的生产方法，其采用所述的产土曲霉酮的菌株进行生产。
[0017]
优选地，采用如下的培养基进行发酵：氯化钠10％-15％,可溶性淀粉2％-5％,谷氨酸钠1％-5％,氯化钾0.01％-0.05％，ph 4.5-5.5，溶剂为海水。
[0018]
优选地，所述的海水为自然海水或人工海水。
[0019]
优选地，所述的海水为人工海水，每升人工海水中含：nacl 20g-30g,氯化镁1g-4g，硫酸镁2g-5g，氯化钙1g-2g，氯化钾0.5g-1.5g，碳酸氢钠0.1g-0.5g，溴化钠0.01g-0.05g。
[0020]
优选地，接种量为发酵培养基1～4％(v/v)。
[0021]
优选地，发酵温度为25℃-35℃。
[0022]
优选地，转速为0r/min-500r/min。
[0023]
优选地，培养时间为10d-20d。
[0024]
本技术方案与背景技术相比，具有如下优点：
[0025]
1、本发明的提供的菌株，培养15d，产量可达到13.31
±
2.56g/l，远高于现有公开报道的菌株的产量。
[0026]
2、本发明的发酵培养基主要成分为海水，发酵成本低。
附图说明
[0027]
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
[0028]
图1为土曲霉酮核磁共振碳谱
13
c-nmr(500mhz，cd3od)。
[0029]
图2为土曲霉酮核磁共振氢谱1h-nmr(500mhz，cd3od)。
[0030]
图3为菌株发酵15d后过高效液相色谱的色谱图。
[0031]
图4为当土曲霉酮浓度1.31g/l时高效液相色谱的色谱图。
[0032]
图5为菌株发酵液与纯土曲霉酮过薄层层析图。
具体实施方式
[0033]
菌种：申请人从厦门海域分离得到一株菌株，菌株形态为土黄色，经18s rdna测序，将测序结果进行比对，结果与土曲霉菌完全匹配，故该菌命名为aspergillus terreus ky02。该菌株于2022年10月31日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：62936。
[0034]
发酵方法：
[0035]
1、菌种活化
[0036]
在无菌条件下从甘油管中划一满环菌液均匀涂布固体斜面培养基上，在生化培养箱中于30℃培养3-5d。固体斜面培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基即pda培养基。
[0037]
2、种子培养
[0038]
在无菌条件下用接种针在固体培养基上划一满环长势良好的菌株接入无菌种子培养基中，该种子培养基初始ph值为6.0，在培养温度30℃，转速150rpm的条件下培养菌体
至对数生长期。种子培养基配方4-6％葡萄糖、1-3％蛋白胨，ph4.0～6.0。
[0039]
3、发酵
[0040]
将培养至对数生长期的种子液在无菌条件下接入发酵培养基。接种量为发酵培养基4％(v/v)。
[0041]
发酵培养基为人工海水配制的500ml培养基，培养基配方(％)：氯化钠13.1,可溶性淀粉3.6,谷氨酸钠2,氯化钾0.05，ph 5。
[0042]
人工海水配方(g/l)：nacl 26.52,氯化镁2.45，硫酸镁3.31，氯化钙1.14，氯化钾0.73，碳酸氢钠0.22，溴化钠0.08，蒸馏水1l)。
[0043]
在500ml锥形瓶中接种200ml该发酵培养基后，28℃、150r/min，培养15d，其产量为13.31
±
2.56g/l。
[0044]
将发酵液用whatman 3#滤纸过滤，用1:1(v/v)乙酸乙酯萃取2次，真空浓缩有机相，获得土曲霉酮粗提物。
[0045]
将土曲霉酮粗提物用干法上硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯＝100:0～0:100进行洗脱，合并收集主要成分，结晶，将该组分做hplc和碳谱氢谱检测，并将碳谱氢谱结果与文献比对，结果显示为土曲霉酮。
[0046]
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

技术特征：
1.一种产土曲霉酮的菌株，为真菌aspergillus terreus ky02，在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为gdmcc no：62936。2.根据权利要求1所述的一种产土曲霉酮的菌株在土曲霉酮生产中的应用。3.土曲霉酮的生产方法，其特征在于：采用权利要求1所述的产土曲霉酮的菌株进行生产。4.根据权利要求3所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：采用如下的培养基进行发酵：氯化钠10％-15％,可溶性淀粉2％-5％,谷氨酸钠1％-5％,氯化钾0.01％-0.05％，ph4.5-5.5，溶剂为海水。5.根据权利要求4所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：所述的海水为自然海水或人工海水。6.根据权利要求5所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：所述的海水为人工海水，每升人工海水中含：nacl 20g-30g,氯化镁1g-4g，硫酸镁2g-5g，氯化钙1g-2g，氯化钾0.5g-1.5g，碳酸氢钠0.1g-0.5g，溴化钠0.01g-0.05g。7.根据权利要求3-6任一项所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：接种量为按体积比，发酵培养基的1-4％。8.根据权利要求3-6任一项所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：发酵温度为25℃-35℃。9.根据权利要求8所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：转速为0r/min-500r/min。10.根据权利要求3-6任一项所述的土曲霉酮的生产方法，其特征在于：培养时间为10d-20d。

技术总结
本发明公开了一种产土曲霉酮的菌株及土曲霉酮的生产方法，所述的产土曲霉酮的菌株，为真菌Aspergillus terreus KY02，在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：62936。本发明的生产方法为采用该产土曲霉酮的菌株进行发酵生产。本发明菌株的土曲霉酮产量高达土曲霉酮13.31


技术研发人员：杨道茂
受保护的技术使用者：华侨大学
技术研发日：2023.03.23
技术公布日：2023/9/14