基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器及其制备方法

1.本发明涉及冷鲜肉新鲜度检测技术领域。更具体地说，本发明涉及一种基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器及其制备方法。


背景技术：

2.冷鲜肉在加工、运输、贮存和销售过程中极易受到外界和自身体内微生物的影响，滋生大量细菌进而分解蛋白质产生挥发性胺，导致食品产生异味、变质或腐败。挥发性胺不仅能直接反映肉品的腐败劣变情况，而且还会对人体健康造成危害。建立实时、高效挥发性胺的检测方法已成为确保食品质量和安全的必要措施，其中，包括气相色谱法、气相质谱联用法和高效液相色谱法等传统检测方法均存在一定缺陷，如需专业人员操作、成本高等，无法满足当前快速、便携的检测需求。
3.单原子纳米酶作为一类新型的高催化性能纳米材料，构建比色、荧光、电化学等信号输出方式在食品安全检测领域得到了广泛应用。为进一步提高其检测灵敏度，协同具有发光、电化学催化等优异性能的碳量子点纳米材料，构建便携、快速、高效的比色-荧光双模式检测技术用于挥发性胺实时监测具有研究意义。


技术实现要素：

4.本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
5.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的制备方法，包括以下步骤：步骤一、合成单原子铁纳米酶，配制单原子铁纳米酶-乙醇溶液；步骤二、配制碳量子点-乙醇溶液；步骤三、将滤纸先置于单原子铁纳米酶-乙醇溶液中浸泡一定时间，干燥，然后再置于碳量子点-乙醇溶液浸泡一定时间，干燥，即得所述基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器。
6.优选的是，合成单原子铁纳米酶的方法具体为：将zn(no3)2•
6h2o和乙酰丙酮铁溶解于甲醇中，得到溶液a；将2-甲基咪唑溶解于甲醇中，得到溶液b；将溶液b与溶液a混合搅拌一定时间，然后转移到聚四氟乙烯反应器中，于120~130℃条件下加热4~6 h，离心收集橙色沉淀物，再采用n,n-二甲基甲酰胺洗涤多次，甲醇洗涤多次，直至上清液无色透明，烘干；将橙色沉淀物在氮气流动条件下，以5℃ min-1
的升温速率，在950℃下煅烧3 h，即得所述单原子铁纳米酶。
7.优选的是，单原子铁纳米酶-乙醇溶液中单原子铁纳米酶的浓度为4.0~4.5 μm，碳量子点-乙醇溶液中碳量子点的浓度为0.1~0.2 mg/ml。
8.提供一种基于所述制备方法制备得到的基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器。
9.提供一种基于所述基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的冷鲜肉新鲜度检测方法，包括以下步骤：s1、向基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器上依次滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和h2o2水溶液，得到生物纸基检测传感器，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的溶剂为二甲基亚砜dmso；s2、将生物纸基检测传感器置于密封贮藏有待检测冷鲜肉样品的容器中；s3、监测记录基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器一定时间内的可视化颜色变化和荧光强度变化；s4、当基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器由蓝色变为无色或黄绿色时，或者荧光强度增强时，则说明待测冷鲜肉样品变质。
10.优选的是，还包括以下步骤：s5、计算s4中基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的灰度值变化，代入tvb-n定量评价模型ⅰ，计算得到tvb-n值。
11.优选的是，和/或包括以下步骤：s6、检测步骤s4中基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的荧光强度值变化，代入tvb-n定量评价模型ⅱ，计算得到tvb-n值。
12.优选的是，tvb-n定量评价模型ⅰ具体为：y=6391.96x
3-2185.13x2+353.96x-1.34其中，y表示tvb-n值，单位为mg/100g，x=δg/g0，δg=g
0-g，g0表示空白对照组的灰度值，g表示冷鲜肉样品组的灰度值。
13.优选的是，tvb-n定量评价模型ⅱ具体为：y=22.24x-29.35其中，y表示tvb-n值，单位为mg/100g，x=a-a0，a0表示空白对照组的475 nm激发后的荧光强度值，a表示冷鲜肉样品组的475nm激发后的荧光强度值。
14.优选的是，3,3',5,5'-四甲基联苯胺添加量为15~20 μl，h2o2的添加量为8~10 μl，浓度均为15~20 mm。
15.本发明至少包括以下有益效果：第一、建立得到了灰度值变化和荧光强度值变化与新鲜度的关联性，可以进行无损定性检测冷鲜肉的检测，当由蓝色变为无色或黄绿色时，或者荧光强度增强时，则说明待测冷鲜肉样品变质，具有检测快捷方便，检测精度高的有益效果。
16.第二、建立得到了tvb-n定量评价模型ⅰ和tvb-n定量评价模型ⅱ。可用于冷鲜肉的无损检测。精准检测冷鲜肉的tvb-n含量。
17.第三、制备得到了一种基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器，具有稳定性强、有效期长以及可多次重复利用。
18.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
19.图1为单原子铁纳米酶酶解tmb的原理示意图；图2为不同体系在300~800 nm处的紫外可见吸收光谱；图3为电子自旋共振
•
oh信号；图4为单原子铁纳米酶的米氏方程；图5为单原子铁纳米酶酶活性检测结果；图6为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在25℃下稳定性图；图7为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在25℃下有效期图；图8为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在25℃下重复性图；图9为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对不同浓度氨的可视化响应；图10为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器灰色值与氨浓度的相关性分析结果；图11为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对不同浓度氨的荧光响应；图12为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对不同浓度氨的荧光光谱响应；图13为475 nm荧光强度与氨浓度的相关性分析结果；图14是截取图13中线性范围内的荧光强度与氨浓度的相关性分析结果；图15为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器可视化比色法和荧光色法25
°
c监测猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉的新鲜度；图16为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的灰度值随时间的变化图；图17为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的荧光强度值随时间的变化图；图18为猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉中基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器灰度值与tvb-n值的相关性图；图19为猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉中基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器荧光强度值与tvb-n值的相关性图；图20为各种组合在400~800 nm范围内的紫外-可见光谱扫描；图21为在365 nm激发下，各种组合在475 nm处的荧光强度；图22为不同体系在400~800 nm范围内的紫外-可见吸收峰扫描图；图23为不同体系中
•
oh的检测图。
具体实施方式
20.下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
21.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得；在本发明的描述中，术语指示的方位
或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，并不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
22.1、实验材料准备：六水硝酸锌（zn(no3)2•6h2o）由北京通广精细化工公司提供；乙酰丙酮铁(iii)（fe(acac)3）由中国医药集团有限公司提供；2-甲基咪唑由阿法埃莎alfa aesar公司提供；n,n-二甲基甲酰胺、甲醇由国药集团化学试剂有限公司提供；三乙胺由acros organics公司提供；3,3',5,5'-四甲基联苯胺（tmb）由上海麦克林生化科技有限公司提供；碳量子点（cd）由北京金瑞林科技有限责任公司提供；沃特曼1号滤纸由上海金盘生物科技有限公司提供；乙酸钠（nahac）和无水乙醇（c2h5oh）由上海源叶生物科技有限公司提供；冰醋酸（hac）、辣根过氧化物酶由北京海德科技有限公司提供；猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉由市场超市提供。
23.2、合成单原子铁纳米酶：将1.190 g zn(no3)2•
6h2o和141 mg乙酰丙酮铁（iii）溶解于20 ml甲醇中，超声处理制备得到溶液a。
24.将1.314 g 2-甲基咪唑溶解于15 ml甲醇中得到溶液b。
25.将溶液b与溶液a混合，搅拌10 min。
26.将混合溶液转移到50 ml聚四氟乙烯反应器中，在恒温烘箱中120℃加热4 h。离心收集橙色沉淀物，用n,n-二甲基甲酰胺洗涤6次，甲醇洗涤2次，直至上清无色透明，80℃下烘干。
27.将上述橙色沉淀物在氮气流动条件下，以5℃ min-1
的升温速率，在950℃下煅烧3 h，制备得到单原子铁纳米酶。
28.3、类过氧化物酶活性测定：在96孔板上，加入ph值为4.0的醋酸缓冲液、tmb溶液和h2o2溶液混合均匀，然后加入单原子铁纳米酶溶液，反应5 min。
29.观察反应体系的颜色变化，以及检测反应溶液在652 nm处是否出现紫外可见吸收峰。如果反应溶液颜色变为蓝色，并且在652 nm处出现紫外可见吸收峰，则表明单原子铁纳米酶具有类过氧化物酶活性，反之则不具有。
30.在上述同样的体系环境下，计算单原子铁纳米酶的酶活力（sa）以及酶动力学参数最大反应速率（v
max
）、米氏常数（km）。以评价单原子铁纳米酶类过氧化物酶活性的大小。
31.图1为单原子铁纳米酶酶解tmb的原理示意图。利用tmb作为单原子铁纳米酶模拟过氧化物酶的有效底物，验证其类过氧化物酶的活性。图2为不同体系在300~800 nm处的紫外可见吸收光谱，结果显示，只有单原子铁纳米酶、tmb和h2o2的混合体系才表现出明显的显色反应，且在652 nm处有明显的紫外可见吸收峰，这是因为单原子铁纳米酶可以催化h2o2生成
•
oh，进而将无色的tmb氧化为蓝色的tmb
ox
。
32.此外，为了揭示单原子铁纳米酶的催化机理，采用电子自旋共振对催化过程进行
了分析。在图3中可以观察到清晰的
•
oh信号，表明在反应过程中形成了
•
oh。
33.在最佳催化反应条件下，进一步探究了单原子铁纳米酶的催化性能，图4为对应的米氏方程，单原子铁纳米酶对底物tmb的米氏常数km值为0.30 mm，低于天然酶和其他单原子纳米酶，说明单原子铁纳米酶对tmb具有很强的亲和力。图5为单原子铁纳米酶酶活性检测结果，酶活力sa值为40.22 u/mg。
34.4、制备基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器：步骤一、将合成的单原子铁纳米酶溶解于95%乙醇溶液中，进行超声溶解，得到单原子铁纳米酶溶液。
35.步骤二、在黑暗环境下将碳量子点溶解在无水乙醇中，溶解均匀，置于暗处，备用。
36.步骤三、将沃特曼1号滤纸切成2
×
2 cm的形状大小。在单原子铁纳米酶溶液和碳量子点溶液中分别浸泡10~30 min，于室温干燥，得到基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器。
37.5、基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的重复性测试和有效性测试：将基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器，依次滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和h2o2水溶液，得到生物纸基检测传感器，用于氨蒸汽响应反应后，再置于盐酸溶液蒸汽响应中约20min，然后进行循环操作，检测双模态生物纸基传感器的相对活性，以确定基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器可重复利用次数。
38.分别在40℃、45℃、50℃、55℃和60℃环境温度下进行加速实验，以4℃的储存环境为对照，根据阿伦尼乌斯方程计算得到基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在25℃下的有效性。
39.结果如图6、7、8所示，基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在25℃下保存时具有良好的稳定性，有效期为三年，可以重复使用四次及以上。
40.灵敏度：响应时间（t
90
）和检出限（lod）是传感器的两个重要参数，反映了传感器在实际应用中的有效性。因此，研究基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在0.5~50.0 ppm氨体系中的响应时间和灵敏度。
41.结果显示，图9为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对不同浓度氨的可视化响应，双模态生物纸基传感器的颜色由蓝色变为无色，响应时间为6 min。图10为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器灰色值与氨浓度的相关性分析结果，在1.5~5 ppm的线性范围内，lod为0.9840ppm。
42.图11为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对不同浓度氨的荧光响应，在365 nm激发后，基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器由蓝色变为黄绿色，响应时间为15min。图12为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对不同浓度氨的荧光光谱响应。图13为475 nm荧光强度与氨浓度的相关性分析结果，图14是截取图13中线性范围内的荧光强度与氨浓度的相关性分析结果，荧光强度随浓度的增加而增加。在0.5~50.0 ppm的线性范围内，lod为0.0838ppm。
43.6、采用基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器检测猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉实际样品的新鲜度：
s1、向基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器上依次滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和h2o2水溶液，得到生物纸基检测传感器；3,3',5,5'-四甲基联苯胺的溶剂为二甲基亚砜dmso，浓度均为15~20 mm。
44.s2、选择新鲜的家畜肉（猪肉、牛肉和羊肉）和禽肉（鸡肉）进行实际样品监测。将生物纸基检测传感器置于密封贮藏样品的容器中。
45.s3、于25℃下进行监测，监测期间采用智能手机记录生物纸基检测传感器的可视化颜色变化和荧光颜色变化。
46.通过image j软件实现灰度值计算，利用荧光分光光度仪实现荧光值检测，从而实现基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的定量检测。
47.通过image j软件用灰度值来计算比色变化程度：
△
g/g0，（
△
g=g
0-g；g0表示对照组灰度值；g表示实验组灰度值），荧光分光光度仪来计算荧光变化程度，通过两种独立模式以此来定量挥发性胺的含量。
48.按照国家标准方法（gb 5009.228-2016，gb 2707-2016）对猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉样品在不同储存时间下的挥发性盐基氮（tvb-n）值进行检测。
49.结果表明，tvb-n在猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉中的含量分别从0.92 mg/100 g、2.23 mg/100 g、0.031 mg/100 g和4.37mg/100 g增加到52.8 mg/100 g、65.9 mg/100 g、48.7 mg/100 g和72.6 mg/100 g。
50.s4、对检测得到的tvb-n值与灰度值和荧光强度值进行相关性分析，分别建立得到相互独立的tvb-n定量评价模型ⅰ和tvb-n定量评价模型ⅱ；tvb-n定量评价模型ⅰ具体为：y=6391.96x
3-2185.13x2+353.96x-1.34其中，y表示tvb-n值，单位为mg/100g，x=δg/g0，δg=g
0-g，g0表示空白对照组的灰度值，g表示冷鲜肉样品组的灰度值。相关系数r2=0.9196。
51.tvb-n定量评价模型ⅱ具体为：y=22.24x-29.35其中，y表示tvb-n值，单位为mg/100g，x=a-a0，a0表示空白对照组的475 nm激发后的荧光强度值，a表示冷鲜肉样品组的475nm激发后的荧光强度值。相关系数r2=0.9360。
52.基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在不损坏样品的情况下可以实时监测家畜（猪肉、牛肉、羊肉）和家禽（鸡肉）在25℃下的新鲜度变化。
53.图15为基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器可视化比色法和荧光色法25
°
c监测猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉的新鲜度。显示了基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器在不同贮藏时间对不同冷鲜肉的监测过程。结果发现，猪肉在贮藏30 h后开始变质，牛肉在贮藏24 h后开始变质，羊肉在贮藏36 h后开始变质，鸡肉在贮藏12 h后开始变质。
54.分析基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器灰度值（δg/g0）与猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉中储存时间的相关性及分析基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器荧光强度值与猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉中储存时间的相关性，如图16和图17所示，显示了各组对应的基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的灰度值和荧光强度值随时间的变化。
55.同时，依据国标方法（gb 5009.228-2016、gb 2707-2016），检测监测过程中对应的tvb-n值，生肉限量≤15 mg/100 g。分析基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器灰度值（δg/g0）与猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉贮藏期间产生的tvb-n值的相关性，分析基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器荧光值与猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉贮藏期间产生的tvb-n值的相关性。如图图18和图19所示，得到tvb-n定量评价模型ⅰ和tvb-n定量评价模型ⅱ。可用于冷鲜肉的无损检测。
56.7、检测机理验证：为验证双模态传感机制，首先，在比色和荧光两个独立的系统中进行实验，探究组分之间的干扰性。图20为各种组合在400~800 nm范围内的紫外-可见光谱扫描。图21为在365 nm激发下，各种组合在475 nm处的荧光强度。结果发现，只有当单原子铁纳米酶、tmb和h2o2同时存在时，才会在652 nm处出现紫外-可见吸收峰，并且cds（碳量子点）的混合不会影响tmb
ox
的产生。只有当单原子铁纳米酶、tmb、h2o2和cds同时存在时，cds的荧光才会被猝灭。
57.其次，基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器对氨的响应机理。图22为不同体系在400~800 nm范围内的紫外-可见吸收峰扫描图。图23为不同体系中
•
oh的检测图。
58.结果发现，检测中间产物
•
oh在反应过程中的稳定性，与对照相比，添加10.0 ppm和50.0 ppm氨的体系在652nm处的紫外可见吸收峰依次下降至消失，对应体系中
•
oh的稳定性也明显降低。
59.结果表明，挥发性胺的存在降低了中间体
•
oh的稳定性，从而减少了tmb
ox
的形成，减轻了内过滤效应，恢复了cds的荧光。
60.说明书附图中各英语字母释义如下：redtmb：还原态3,3',5,5'-四甲基联苯胺；oxtmb：氧化态3,3',5,5'-四甲基联苯胺；pod-like：类过氧化物酶活性；safe-n-c nanozyme：单原子铁纳米酶；
•
oh：羟基自由基。
61.尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

技术特征：
1.基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、合成单原子铁纳米酶，配制单原子铁纳米酶-乙醇溶液；步骤二、配制碳量子点-乙醇溶液；步骤三、将滤纸先置于单原子铁纳米酶-乙醇溶液中浸泡一定时间，干燥，然后再置于碳量子点-乙醇溶液浸泡一定时间，干燥，即得所述基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器。2.如权利要求1所述的基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的制备方法，其特征在于，合成单原子铁纳米酶的方法具体为：将zn(no3)2•
6h2o和乙酰丙酮铁溶解于甲醇中，得到溶液a；将2-甲基咪唑溶解于甲醇中，得到溶液b；将溶液b与溶液a混合搅拌一定时间，然后转移到聚四氟乙烯反应器中，于120~130℃条件下加热4~6 h，离心收集橙色沉淀物，再采用n,n-二甲基甲酰胺洗涤多次，甲醇洗涤多次，直至上清液无色透明，烘干；将橙色沉淀物在氮气流动条件下，以5℃ min-1
的升温速率，在950℃下煅烧3 h，即得所述单原子铁纳米酶。3.如权利要求1所述的基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的制备方法，其特征在于，单原子铁纳米酶-乙醇溶液中单原子铁纳米酶的浓度为4.0~4.5 μm，碳量子点-乙醇溶液中碳量子点的浓度为0.1~0.2 mg/ml。4.基于权利要求1~3任一项所述的制备方法制备得到的基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器。5.基于权利要求4所述的基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的冷鲜肉新鲜度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、向基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器上依次滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和h2o2水溶液，得到生物纸基检测传感器，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的溶剂为二甲基亚砜dmso；s2、将生物纸基检测传感器置于密封贮藏有待检测冷鲜肉样品的容器中；s3、监测记录基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器一定时间内的可视化颜色变化和荧光强度变化；s4、当基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器由蓝色变为无色或黄绿色时，或者荧光强度增强时，则说明待测冷鲜肉样品变质。6.如权利要求5所述的冷鲜肉新鲜度检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：s5、计算s4中基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的灰度值变化，代入tvb-n定量评价模型ⅰ，计算得到tvb-n值。7.如权利要求6所述的冷鲜肉新鲜度检测方法，其特征在于，和/或包括以下步骤：s6、检测步骤s4中基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的荧光强度值变化，代入tvb-n定量评价模型ⅱ，计算得到tvb-n值。8.如权利要求6所述的冷鲜肉新鲜度检测方法，其特征在于，tvb-n定量评价模型ⅰ具体为：
y=6391.96x
3-2185.13x2+353.96x-1.34其中，y表示tvb-n值，单位为mg/100g，x=δg/g0，δg=g
0-g，g0表示空白对照组的灰度值，g表示冷鲜肉样品组的灰度值。9.如权利要求7所述的冷鲜肉新鲜度检测方法，其特征在于，tvb-n定量评价模型ⅱ具体为：y=22.24x-29.35其中，y表示tvb-n值，单位为mg/100g，x=a-a0，a0表示空白对照组的475 nm激发后的荧光强度值，a表示冷鲜肉样品组的475 nm激发后的荧光强度值。10.如权利要求5所述的冷鲜肉新鲜度检测方法，其特征在于，3,3',5,5'-四甲基联苯胺添加量为15~20 μl，h2o2的添加量为8~10 μl，浓度均为15~20 mm。

技术总结
本发明公开了一种基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器的制备方法，包括：配制单原子铁纳米酶-乙醇溶液和碳量子点-乙醇溶液；滤纸分别浸泡单原子铁纳米酶-乙醇溶液和碳量子点-乙醇溶液，干燥。制备方法简单。本发明公开了一种基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器，灵敏度高，检出限低，稳定性优。公开了一种冷鲜肉新鲜度检测方法，包括：S1、向传感器上滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液和H2O2溶液；S2、置于冷鲜肉样品的容器中；S3、监测记录颜色变化和荧光强度变化；S4、当由蓝色变为无色或黄绿色时，或者荧光强度增强时，则说明待测冷鲜肉样品变质。具有检测快捷方便，检测精度高的有益效果。检测精度高的有益效果。检测精度高的有益效果。


技术研发人员：张德权 宋光春 郑晓春 陈丽 李程 李少博 王振宇
受保护的技术使用者：中国农业科学院农产品加工研究所
技术研发日：2023.08.15
技术公布日：2023/9/13