一种肝靶向的柚皮素纳米制剂的制备方法及应用

1.本发明涉及保健食品技术领域，更具体的说是涉及一种肝靶向的柚皮素纳米制剂的制备方法及应用。


背景技术：

2.柚皮素(naringin)广泛存在于柚皮和西柚中，是主要的黄酮类化合物。近年来，众多研究表明柚皮素具有广泛的生物活性，如抗炎、抗肿瘤、抑菌、抗氧化、心血管疾病预防、干预骨质疏松等活性，在食品、医药以及化妆品等领域具有巨大的发展潜力。
3.但是，柚皮素的化学性质很不稳定，在加工处理过程中结构容易发生变化，甚至失去活性。柚皮素溶液在放置5h后吸光值发生显著的变化，柚皮素在不同的外界环境下(ph、温度、光照和氧气接触的时长)都会发生不同程度的变化。在45～90℃之间，降解速率会加快；在外界环境中暴露时间越久，生物活性越弱，甚至完全失活。因此，改变剂型提高其稳定性是本领域技术人员需要解决的关键问题之一。
4.此外，柚皮素是柚皮中最主要的苦味成分，其苦味阈值为20mg/l，本身口感和触觉也很辣，导致其很难被人们接受，限制了柚皮素在食品中的应用。因此，通过靶向递送，降低药物使用剂量，是扩大柚皮素在食品、保健品及药品中使用的重要途径。
5.纳米载药体系能够有效发挥材料对药物的保护作用，协助药物跨越黏膜屏障，通过高通透性和滞留(enhancedpermeabilityandretention,epr)效应增强药物在靶点部位的累积，改变药物在体内的分布，减少系统性毒性，目前已成为现代药物研究的重要方向。
6.综上，如何提供一种柚皮素的纳米载药体系是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

7.有鉴于此，本发明提供了一种肝靶向的柚皮素纳米制剂的制备方法及应用。
8.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
9.一种肝靶向的柚皮素纳米制剂，包括如下质量份数的组分：柚皮素10～30份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物40～120份、聚乙烯醇2～5份和甘露糖10～30份。
10.进一步的，一种肝靶向的柚皮素纳米制剂，包括如下质量份数的组分：柚皮素20份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物60份、聚乙烯醇2份和甘露糖20份。
11.进一步的，所述聚乙烯醇的脱乙酰度为85～95％。
12.所取得的有益效果：脱乙酰度越高，生物活性也越高。高脱乙酰度的pva对人体细胞有良好的亲合性，能激活和修复细胞，从细胞的深层次对人体进行整体调节。
13.上述的一种肝靶向的柚皮素纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
14.(1)将柚皮素及聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中，冰浴中高压匀质，形成乳液1；
15.(2)溶解1％的聚乙烯醇溶液，加入甘露糖，充分溶解，作为水相；
16.(3)将部分水相加入乳液1，继续高压匀质，形成乳液2；
17.(4)向乳液2中加入水和剩余水相，于通风橱中磁力搅拌，充分挥发掉二氯甲烷；(此步骤的作用是为了纳米颗粒的形成和硬化，pva溶液作为表面活性剂，是为了使其在硬化过程中分散的更为均匀。)
18.(5)离心洗涤，去除聚乙烯醇溶液；
19.(6)离心收集沉淀，冷冻干燥即可。
20.进一步的，所述步骤(2)中聚乙烯醇溶液与甘露糖的体积质量比为1:2ml/mg。
21.进一步的，步骤(4)中所述磁力搅拌的参数为：转速》500rpm，搅拌时间4～6小时。
22.进一步的，所述步骤(5)的具体操作为：8000rpm离心洗涤3次。
23.上述的肝靶向的柚皮素纳米制剂在制备减肥减脂保健食品中的应用。
24.进一步的，所述保健食品为压片制剂、胶囊剂、粉剂、注射剂或口服液。
25.进一步的，所述口服液的制备方法为：将柚皮素纳米制剂悬浮在质量浓度2％的壳聚糖溶液中(壳聚糖的分子量为40kda～60kda，且壳聚糖溶液中含0.5％的冰醋酸)，并加入阿拉伯糖或糖醇类调味。
26.进一步的，所述注射剂的制备方法为：将柚皮素纳米制剂分散到生理盐水中。
27.上述的肝靶向的柚皮素纳米制剂在制备缓解非酒精性脂肪肝药物中的应用。
28.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：(1)柚皮素在体内代谢速度快，血药浓度不易控制，存在肝肠循环，口服生物利用度较低，严重制约了其在生物领域的应用。经纳米乳化后，显著提高了柚皮素的水溶性、细胞吸收效率及生物利用度。(2)柚皮素极不稳定，空气中常温下易氧化，而本发明制备的柚皮素纳米制剂稳定性良好，4℃可以保存1年。(3)柚皮素本身苦涩味和辣味显著，且呈粉末状，很难下咽，将其制备成柚皮素纳米制剂后，以原药10％的剂量就可以达到相应的效果，苦味降低，并且。在推广应用时，可以加阿拉伯糖或糖醇调味。
附图说明
29.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
30.图1为本发明实验1中柚皮素纳米制剂的表征结果，其中，a为粒径结果；b为扫描电镜(sem)结果；c为紫外扫描结果；
31.图2为本发明实验2中口服柚皮素纳米制剂的胃肠道靶向性结果；
32.图3为本发明实验3中口服柚皮素纳米制剂对肥胖小鼠的肠-肝轴靶向性检测结果；
33.图4为本发明实验4中静脉注射柚皮素纳米制剂的肝脏靶向性检测；
34.图5为本发明实验5中口服柚皮素纳米制剂对肥胖小鼠降脂的影响结果，其中，a为小鼠体型；b为体重增加结果；c为小鼠肝脏和脂肪的表型差异；d为小鼠下腹部脂肪重量。
具体实施方式
35.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完
整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
36.本发明所需药剂为常规实验药剂，采购自市售渠道；未提及的实验方法为常规实验方法，在此不再一一赘述。
37.实施例1
38.(1)称取20mg柚皮素及60mg聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于5ml二氯甲烷中，冰浴中高压匀质三分钟，形成乳液1；
39.(2)溶解1％的聚乙烯醇溶液，取10ml，加入20mg甘露糖，充分溶解，作为水相；
40.(3)将部分水相加入乳液1，继续高压匀质3分钟，形成乳液2；
41.(4)乳液2中，加入30mlpva溶液(内含60mg甘露糖)，再加入30ml水，于通风橱中磁力搅拌(转速》500rpm)4～6小时，充分挥发掉二氯甲烷；
42.(5)8000rpm离心洗涤3次，去除分散剂(聚乙烯醇溶液)；
43.(6)最后一次离心，去掉上清，收集沉淀，放在4度冰箱避光保存，长期保存，可以冷冻干燥成粉末可以常温避光长期保存。
44.实验1
45.对实施例1制备的柚皮素纳米制剂进行表征。
46.结果如图1所示。
47.结果表明，柚皮素纳米制剂的粒径在400nm左右(图1a)。扫描电镜(sem)图显示，柚皮素纳米制剂呈现规则的球形，分散均匀(图1b)。紫外可见吸收光谱显示，柚皮素在210nm波长处有强吸收峰，柚皮素纳米制剂跟柚皮素原药有相近的吸收峰，表明，柚皮素被成功负载到纳米颗粒(图1c)。
48.实验2
49.口服药物被体内吸收的关键是药物在胃肠道的吸收和滞留。由于柚皮素本身荧光比较弱，因此，我们采用吲哚箐绿(icg)作为荧光标志物检测实施例1制备的柚皮素纳米制剂的胃肠道靶向性。
50.高脂饮食诱导4周的小鼠灌胃给药(给药剂量：10mg/kg体重)4小时后，安乐死，收集肠道组织，采用ivis成像系统进行组织器官成像，结果如图2所示。
51.结果显示，实施例1制备的柚皮素纳米制剂可以富集到肠道组织。
52.实验3
53.口服柚皮素纳米制剂对肥胖小鼠的肠-肝轴靶向性检测。
54.方法：由于纳米颗粒及所负载的药物柚皮素自身没有荧光或者荧光很弱，因此，柚皮素纳米制剂内同时负载了荧光染料—吲哚箐绿(icg)作为纳米粒的荧光标记物。选取14周高脂饮食喂养诱导的肥胖小鼠，口服给药12小时和24小时后(给药剂量：10mg/kg)，安乐死小鼠，收集各组织，进行组织成像。结果如图3所示。
55.结果显示：口服给药12小时，柚皮素纳米制剂在肠道中仍有滞留，但是进入肝脏的很少；口服给药24小时后，肠道内几乎看不到柚皮素纳米制剂，但是，肝脏内可以看到大量的柚皮素纳米制剂滞留。说明，柚皮素纳米制剂可以通过肠-肝轴靶向肝脏。
56.实验4
57.静脉注射柚皮素纳米制剂的肝脏靶向性检测。
58.方法：由于纳米颗粒及所负载的药物柚皮素自身没有荧光或者荧光很弱，因此，柚皮素纳米制剂内同时负载了荧光染料—吲哚箐绿(icg)作为纳米粒的荧光标记物。选取14周高脂饮食喂养诱导的肥胖小鼠，静脉注射1小时和24小时后(给药剂量：10mg/kg)，安乐死小鼠，收集各组织，进行组织成像。结果如图4所示。
59.结果显示：静脉给药1小时，柚皮素纳米制剂可以大量富集在肝脏和肾脏；静脉给药24小时后，肝脏和肾脏内仍然可以看到大量的柚皮素纳米制剂滞留。说明，柚皮素纳米制剂可以靶向肝脏。
60.实验5
61.实施例1制备的柚皮素纳米制剂对肥胖小鼠降脂的影响。
62.6周龄c57雄鼠，经高脂饲料喂食两周诱导肥胖模型，第三周开始，给予实施例1制备的柚皮素纳米制剂(10mg/kg,灌胃)干预，每周给药两次，总共给药六周，给药过程中，小鼠全部高脂饮食。并设置灌胃生理盐水的对照。
63.结果如图5所示。
64.结果表明，柚皮素纳米制剂组的小鼠体型明显比生理盐水对照组的小鼠小(图5a)。柚皮素纳米制剂组小鼠体重增加显著低于生理盐水对照组(p《0.001)，有显著统计学差异(图5b)。生理盐水对照组小鼠肝脏偏黄，有明显脂肪肝倾向，而柚皮素纳米制剂组肝脏是鲜红色，且生理盐水对照组单侧下腹部脂肪的体积明显大于柚皮素纳米制剂组的脂肪体积(图5c)。生理盐水对照组小鼠下腹部脂肪重量明显高于柚皮素纳米制剂组的脂肪重量(图5d)。
65.本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
66.对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

技术特征：
1.一种肝靶向的柚皮素纳米制剂，其特征在于，包括如下质量份数的组分：柚皮素10～30份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物40～120份、聚乙烯醇2～5份和甘露糖10～30份。2.如权利要求1所述的一种肝靶向的柚皮素纳米制剂，其特征在于，包括如下质量份数的组分：柚皮素20份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物60份、聚乙烯醇2份和甘露糖20份。3.如权利要求1或2任一所述的一种肝靶向的柚皮素纳米制剂，其特征在于，所述聚乙烯醇的脱乙酰度为85～95％。4.权利要求1或2任一所述的一种肝靶向的柚皮素纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将柚皮素及聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中，冰浴中高压匀质，形成乳液1；(2)溶解1％的聚乙烯醇溶液，加入甘露糖，充分溶解，作为水相；(3)将部分水相加入乳液1，继续高压匀质，形成乳液2；(4)向乳液2中加入水和剩余水相，于通风橱中磁力搅拌，充分挥发掉二氯甲烷；(5)离心洗涤，去除聚乙烯醇溶液；(6)离心收集沉淀，冷冻干燥即可。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中聚乙烯醇溶液与甘露糖的体积质量比为1:2ml/mg。6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述磁力搅拌的参数为：转速>500rpm，搅拌时间4～6小时。7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)的具体操作为：8000rpm离心洗涤3次。8.权利要求1～2任一所述的肝靶向的柚皮素纳米制剂在制备减肥减脂保健食品中的应用。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述保健食品为压片制剂、胶囊剂、粉剂、注射剂或口服液。10.权利要求1～2任一所述的肝靶向的柚皮素纳米制剂在制备缓解非酒精性脂肪肝药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种肝靶向的柚皮素纳米制剂的制备方法及应用。属于保健食品技术领域。本发明利用纳米球或微球递送系统通过缓释和控释来克服柚皮素的自身缺陷，通过药物的肠道和肝脏的递送，靶向肠-肝轴的调控，实现缓解非酒精性脂肪肝的效果。酒精性脂肪肝的效果。酒精性脂肪肝的效果。


技术研发人员：金花 赵月 姚银恋 范世龙 柴星星 皮江
受保护的技术使用者：广东医科大学
技术研发日：2023.06.30
技术公布日：2023/9/14