Y盒结合蛋白质1抑制剂

y盒结合蛋白质1抑制剂
技术领域
1.本发明涉及新颖化合物、药物组合物以及其作为y盒蛋白质1(yb1或ybx1)的抑制剂用于治疗病况的用途，所述病况包括妇科癌症、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、神经元癌和前列腺癌、淋巴瘤和白血病。


背景技术：

2.y盒结合蛋白质1(yb-1)为与肿瘤进展和出现治疗抗性(tr)相关的多功能蛋白质。此处，我们报告经由yb-1抑制强烈地抑制肿瘤生长和进展的氮杂鬼臼毒素(azopodophyllotoxin)小分子，su056。这种同类首个yb-1抑制剂抑制细胞增殖、对卵巢癌(oc)细胞中细胞凋亡的抗性和在g1期中的遏制。抑制剂处理引起与细胞凋亡和rna降解路径相关的蛋白质的富集，同时下调剪接体路径。su056体内独立地抑制oc进展，且与太平洋紫杉醇一起发挥协同作用以进一步降低疾病进展而无可观测的肝脏毒性。此外，体外机械性研究显示经由抑制药物排出和多重耐药性1(mdr1)的延迟的疾病进展，且相比于依托泊苷(etoposide)，神经毒性显著更低。这些数据表明，yb-1抑制可以是降低oc进展、拮抗tr和降低患者死亡率的有效策略。
3.y盒结合蛋白质1(yb-1，ybx1)为结合到dna和rna的多功能冷休克蛋白质。其调节dna和rna相关细胞事件，包括mrna转录、剪接、包装、稳定性和翻译(利亚宾(lyabin)等人.,2014)。mrna稳定为用于任何基因的持续性表达的重要事件，且yb-1通过阻断mrna降解的5'端而使mrna稳固地稳定(叶夫多基莫(evdokimova)等人，2001)。其首先由迪埃(didier)等人描述为ii类mhc分子的负调控因子(迪埃等人，1988)。yb-1的致癌作用在许多癌症中很好地表征，且在大量癌症病例中已发现其扩增水平(古达尔齐(goodarzi)等人，2015)。它增加了包括c-myc(莱尔德-奥弗林加(laird-offringa)等人.,1990)、c-fos(布拉特纳(blattner)等人.,2000)、细胞周期蛋白b1(梅蒂(maity)等人.,1995)、hif1α(古达尔齐(goodarzi)等人.,2015)、snail(叶夫多基莫(evdokimova)等人.,2009)和mdr1(巴尔古(bargou)等人.,1997)的多种致癌蛋白质的短时间存活mrna的稳定性，其与疾病进展和治疗抗性相关。遗传敲低研究已证实，yb-1的抑制在许多癌症模型中显著地阻止增殖并且诱导细胞凋亡，在疾病进展中展现出重要作用(叶夫多基莫(evdokimova)等人，2009,埃尔纳格尔(el-naggar)等人，2015)。yb-1通过其在激活增殖、促进癌细胞干性、响应生长因子、细胞因子、细胞应激反应，且通过膜p-糖蛋白atp依赖性排出泵abcb1(mdr1)促进药物排出中的作用与治疗抗性(tr)的发展相关(巴尔古(bargou)等人，1997,萨柏(saupe)等人，2015,莫(mo)等人，2016)。其还经由结合到a/c富集区与cd44外显子的替代性剪接相关(施蒂克勒(stickeler)等人，2001)。yb-1基因高度保守，并且仅约1％的癌症患者展现出突变，但其仍经由替代性基因调节网络在广泛范围的癌症中过度表达。
4.卵巢癌(oc)仅占女性所有癌症病例的3％，但仍会导致不成比例的死亡率(迪特尔(dietl),2014,杰森(jayson)等人，2014,阿加瓦尔(agarwal)和凯伊(kaye),2003)。手术切除随后化学疗法为oc患者的主要治疗策略。基于铂和紫杉醇的药物和其组合为大部分oc患
者的一线治疗(塞夫特(seifter),1997)。大部分女性被诊断患有iii期+的oc并且频繁地出现tr和疾病复发。brca1/2突变、myc的扩增和上调mdr1(abcb1/p-gp)是在oc中tr的最常见的已知起因(曾(zeng)等人，2018,克里斯蒂(christie)和鲍特尔(bowtell),2017,孙(sun)等人，2015)。基于患者的研究已显示myc扩增与许多高级别上皮oc病变中的疾病进展和tr相关(荣格(jung)等人，2017,荣格等人，2018)。yb-1的细胞核定位在myc、mdr1和cd44的调节中起重要作用(康(kang)等人，2013,索博肯(sobocan)等人，2020)。对高级别浆液性卵巢癌样品的分析表明，yb-1表达较高的患者(中位生存期48.5个月)与yb-1表达较低的患者(中位生存期65个月)相比，生存期较短(康(kang)等人，2013)。对于oc的主要手术和化学疗法治疗可以接着维持疗法，其包括长期药物使用，如太平洋紫杉醇和parp抑制剂(奥拉帕尼(olaparib)、帕唑帕尼(pazopanib)和尼拉帕尼(niraparib))，但令人遗憾地仍具有有限结果(法兰杰斯(franzese)等人，2019)。过去三十年的文献强烈表明，yb-1可能为治疗卵巢和其它癌症的潜在目标，包括那些已产生治疗抗性的癌症。即使在大量研究之后，也未作出大量努力来开发可直接抑制yb-1的小分子抑制剂。由ybx1基因编码的y盒结合蛋白质1(yb-1)已经被标注为调节细胞传讯路径并且可以被视为癌症进展的分子标记物并且作为癌症疗法的目标。
5.莱瑟姆(lasham)等人在其审查论文yb-1：致癌蛋白、预后标志物和治疗目标？,《生物化学杂志》(2013)449,11-13中描述“yb-1如何调节多种增殖途径，覆盖细胞周期检查点，促进复制永生和基因组不稳定性，可能调节血管生成，在侵袭和转移中起作用，且促进炎症。”其进一步描述其中yb-1减少诱导的细胞凋亡或抑制的细胞增殖的细胞系，包括黑色素瘤、纤维肉瘤、肝癌、肺癌、膀胱癌、多发性骨髓瘤、儿科神经胶母细胞瘤、乳腺癌(er阴性)、乳腺癌(er阳性)、前列腺癌和结肠癌细胞系。
6.索博钱等人(《癌症》,2020,12,205)描述y盒蛋白质1(yb-1)和mtor的双靶向，以提高对妇科癌症(包括卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌和宫颈癌)的致癌活性的抑制。
7.文章《致癌y盒结合蛋白质1作为抗药性癌症的有效治疗目标》,桑野(kuwano)等人.,《癌症科学》,2019,110:1536-1543描述ybx2在促进abcb1转运体基因的转录活化中的功能，其已与在人类恶性肿瘤(包括乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌和胃癌)中的化学治疗性治疗期间如何获取肿瘤多重耐药性的转录机制相关。
8.ybx1表达增加与黑色素瘤之间的关系论述于以下文章中：《黑色素瘤中y盒结合蛋白质1的表达增加刺激增殖和肿瘤侵袭，拮抗细胞凋亡且增强化学抗性》,席泰克(schittek)等人.,《国际癌症期刊》:120,2110-2118(2007)。yb1过度表达还与结肠直肠癌细胞的辐射抗性有关，如通过金(kim)等人.,《分子癌症治疗学》,2019年10月30日,19(2),479-89所论述。
9.wo 2019/178091 a1(马尔霍尔特拉(malholtra)等人.,利兰斯坦福初级大学董事会)教授作为gbp1抑制剂的新颖n-羟基乙基二脱氢氮杂鬼臼毒素和其用于克服癌症治疗抗性的方法。包括于本公开中的特定化合物为9-(3-氟苯基)-5-(2-羟基乙基)-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮(su056)；5-(2-羟基乙基)-9-(3-(三氟甲基)苯基)-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮；3-(5-(2-羟基乙基)-8-氧代-5,6,8,9-四氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,
4-b]喹啉-9-基)苯甲腈；和5-(2-羟基乙基)-9-(吡啶-4-基)-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮。
[0010]
仍需要yb-1的小分子抑制剂用于药物用途。


技术实现要素：

[0011]
生物电子等排现象(bioisosterism)被视为合理药物设计的关键工具，因为药物化学家可快速操控导线结构以优化效能和选择性、吸收、分布、代谢和排泄(adme)特性。本文中，我们使用生物电子等排体替代来使用结构引导方法优化主导化合物的抗oc作用，接着经由细胞热漂移分析(cetsa)进行目标识别(萨维斯基(savitski)等人，2014)。通过体外和体内研究，我们显示氮杂鬼臼毒素(azp)小分子su056强力抑制yb-1并且降低oc进展，同时对化学疗法介导的细胞毒性敏感化。
[0012]
一个实施例提供式(i)化合物，
[0013][0014]
其中：
[0015]
x选自以下的群组：
[0016][0017]
r1、r2、r3、r4和r5在每一种情况下各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0018]
n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0019]
r6选自以下的群组：h、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基；其中所述c
1-c6烷基被0、1、2、3或4个选自f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的取代基取代；且所述c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基被0、1、2、3或4个选自c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的群组的取代基取代；
[0020]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少一个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；和
[0021]
其条件是，当x为且r2为f或cf3时，r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h；或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、药学上可接受的酯、药学上可接受的溶剂合物、水合物、异构体(包括其光学异构体、外消旋体或其它混合物)、互变异构体、同位素、多晶型物和药学上可接受的前药。
附图说明
[0022]
图1a描绘su093到su056的转换。
[0023]
图1b示出了各种卵巢癌细胞上的su093和su056的ic
50
值。
[0024]
图1c呈现来自相应孔的集落形成的照片。
[0025]
图1d绘制在su093和su056处理之后形成的集落的数目。
[0026]
图1e提供表示神经元(sh-sy5y，n27)和hek293细胞中的依托泊苷、su093和su056处理的抑制％的表。
[0027]
图1f呈现碘化丙锭(pi)-染色的ovcar8、skov3和id8细胞的细胞周期分布表。
[0028]
图1g绘制su093和su056对凋亡细胞死亡的影响。
[0029]
图1h绘制细胞迁移分析的结果。
[0030]
图2a呈现与在42天药物处理之后小鼠中的对照相比肿瘤消退的代表性图像。
[0031]
图2b绘制随时间而变的肿瘤体积/小鼠。
[0032]
图2c绘制研究结束时的肿瘤重量/小鼠。
[0033]
图2d提供42天结束时的肝毒性参数的图，其展示对照、su093与su056之间无显著差异。
[0034]
图2e显示了来自肺癌转移分析的h&e染色图像。
[0035]
图2f提供肺转移性结节数目的图。
[0036]
图3a提供用媒剂dmso(左)和su056(右)处理的卵巢癌细胞中的804种可溶性蛋白质的热稳定性的热图表示。
[0037]
图3b绘制在经su056处理的细胞和媒剂细胞中计算的蛋白质tm值的密度分布。
[0038]
图3c呈现su056与媒剂处理之间的tm漂移的密度分布的图。
[0039]
图3d提供在su056和媒剂处理中计算的tm的散布图。
[0040]
图3e呈现具有和不具有su056处理的六种蛋白质的熔融曲线。
[0041]
图3f提供在su056处理后前六种蛋白质的熔融温度(tm)变化的图。
[0042]
图4a描绘对于通过cetsa识别的前三种目标执行蛋白质印迹分析。
[0043]
图4b提供来自id8肿瘤异种移植研究的肿瘤样品的免疫组织化学的子集图像。
[0044]
图4c展示用su056和yb-1处理的相应oc细胞中的抑制％的图。
[0045]
图4d呈现su056对于oc细胞的yb-1(ic50)的图。
[0046]
图4e呈现描绘su056对oc细胞系的影响的yb-1抑制时间动力学研究的图。
[0047]
图5a呈现生物素标记的su056的结构。
[0048]
图5b描绘使用生物素标记的su056的下拉分析。
[0049]
图5c提供su093的代表性传感图。
[0050]
图5d提供s su056的代表性传感图。
[0051]
图5e呈现在转导细胞中符合yb-1表达的蛋白质印迹分析。
[0052]
图5f呈现展示su056的细胞效应取决于yb-1表达的图像。
[0053]
图5g提供表达sc、ybx1 shrna1、ybx1 shrna2的不同转导ovcar8细胞上的su056的ic
50
值的图。
[0054]
图6a描绘环己酰亚胺追踪分析以确定su056对yb-1蛋白质稳定性的影响和随时间推移的变化倍数的图。
[0055]
图6b描绘针对yb-1、细胞周期和细胞凋亡相关标记物进行的sds-page和蛋白质印迹分析。
[0056]
图6c和图6d表示在用su056处理之后丰度增加的蛋白质中的细胞凋亡和rna降解路径的观测到的富集。
[0057]
图6e提供在用su056处理后丰度降低的蛋白质中观测到的剪接路径中的富集的图。
[0058]
图7a提供表示su056对ovcar8和skov3细胞的活力以及太平洋紫杉醇处理的敏感化作用的图。
[0059]
图7b绘制alexa fluor-488标记的太平洋紫杉醇排出分析，展示su056共处理抑制太平洋紫杉醇排出。
[0060]
图7c呈现用于yb-1与mdr1的免疫印迹的sds-page凝胶。ovcar8细胞用媒剂(c)、太平洋紫杉醇、su056和太平洋紫杉醇+su056处理。
[0061]
图7d提供在10x放大率下球状体的显微图像。
[0062]
图7e提供在7天培育之后定量的球状体形成的图。
[0063]
图7f)呈现在28天药物处理之后小鼠的代表性图像，与对照相比展现出肿瘤消退。
[0064]
图7g绘制随时间而变的肿瘤体积/小鼠。
[0065]
图7h研究结束时的肿瘤重量/小鼠。i)免疫组织化学染色。肿瘤切片用ki67染色，且对切片进行评分以用于ki67染色。数据展示每组中的5只小鼠的平均值
±
标准差。与对应对照相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0066]
图8a描绘了来自在37和53℃温度下暴露且针对yb-1、tmsb10和psmb2的表达进行分析的对照和su056处理的细胞的细胞裂解物的蛋白质印迹分析。
[0067]
图8b描绘在10x放大率下在3h处理su056(2.5及5μm)之后，使用用于mcherry-yb1的共焦显微镜成像的细胞的显微照片。
[0068]
图8c呈现表示用su056处理的2500个细胞的图。
[0069]
图9呈现表示su056对ovcar8和skov3细胞的活力以及太平洋紫杉醇处理的敏感化作用的图。
[0070]
图10呈现表示su056的药物动力学的图。
[0071]
图11a提供表示使用mtt分析评估的su056的生长抑制性作用的图。
[0072]
图11b提供表示来自用su056处理的细胞的集落形成且进一步培育到7-10天的图
像。
[0073]
图11c描绘表示在su056处理之后形成的集落的数目的图。
[0074]
图11d提供表示su056对tnbc细胞中的细胞周期分布的影响的图。
[0075]
图12a呈现sds-page和蛋白质印迹分析，用于mda-mb-231b细胞当中的蛋白质翻译相关分子的su056处理抑制。
[0076]
图12b呈现sds-page和西方印迹分析，用于mda-mb-468细胞之中的蛋白质翻译相关分子的su056处理抑制
[0077]
图12c呈现sds-page和蛋白质印迹分析，用于sum 159细胞当中的蛋白质翻译相关分子的su056处理抑制。
[0078]
图13a呈现随时间而变的肿瘤体积(mda-mb-231)的图。
[0079]
图13b呈现研究结束时肿瘤重量(mda-mb-231)的图。
[0080]
图13c呈现随时间而变的体重(mda-mb-231)的图。
[0081]
图13d呈现随时间而变的肿瘤体积(mda-mb-468)的图。
[0082]
图13e呈现研究结束时肿瘤重量(mda-mb-468)的图。
[0083]
图13f呈现随时间而变的体重(mda-mb-468)的图。
[0084]
图13g提供研究结束时肿瘤(mda-mb-231)的代表性图像。
[0085]
图13h提供研究结束时肿瘤(mda-mb-468)的代表性图像。
[0086]
图13i呈现表示随时间而变的肿瘤体积(suti151-pdx)的图。
[0087]
图13j呈现表示研究结束时的肿瘤重量(suti151-pdx)的图。
[0088]
图13k呈现表示随时间而变的体重(suti151-pdx)的图。
[0089]
图14a呈现balb/c中的4t1肿瘤异种移植中的su056抑制随时间而变的肿瘤体积(4t1)的图。
[0090]
图14b呈现研究结束时肿瘤重量(4t1)的图。
[0091]
图14c呈现随时间而变的体重(4t1)的图。
[0092]
图14d提供研究结束时肿瘤(4t1)的代表性图像。
[0093]
图14e呈现随时间而变的肿瘤体积(4t1)的图。
[0094]
图14f呈现研究结束时肿瘤重量(4t1)的图。
[0095]
图14g呈现随时间而变的体重(4t1)的图。
[0096]
图15a呈现描绘如小鼠体重变化所反映的小鼠和大鼠中su056处理的图。
[0097]
图15b呈现描绘如大鼠体重变化所反映的小鼠和大鼠中的su056处理的图。
[0098]
图15c呈现指示不同浓度的su056处理未引起小鼠之间死亡的数据表。
[0099]
图15d呈现指示不同浓度的su056处理未引起大鼠中的死亡的数据表。
[0100]
图15e呈现展示su056具有40分钟的平均半衰期的图。
[0101]
图16呈现所描绘的细胞系中ybx1的归一化表达测量结果。
[0102]
图17、18和19表示表明su056处理抑制tnbc细胞中的翻译起始因素的sds-page和蛋白质印迹。
具体实施方式
[0103]
应理解，在以上条件下，苯基环的旋转性质使得其中r2为f或cf3且r1、r3、r4和r5各
自为h的化合物指示与r4为f或cf3时相同的取代模式，且r1、r2、r3和r5各自为h。观察在r4处具有f或cf3基团的化合物将指示r1、r2、r3和r5中的至少一个不为h的条件。
[0104]
还应理解，在以上式(i)的范围内，存在四个额外且单独的实施例，其各自分别包含式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)的化合物。在每个实施例中，当存在时所有变量(包括n、r1、r2、r3、r4、r5和r6)如对于以上式(i)所定义，其中式(ia)化合物的条件是当r2为f或cf3时，r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h。
[0105][0106]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(i)化合物，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n为在每一情况下独立地为来自1、2、3、4和5的群组的整数。
[0107]
再一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(i)化合物，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n为在每一情况下独立地为来自1、2、3和4的群组的整数。
[0108]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(i)化合物，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n为在每一情况下独立地为来自1、2和3的群组的整数。
[0109]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(i)化合物，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n为在每一情况下独立地为来自2和3的群组的整数。
[0110]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(i)化合物，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义并且受制于条件，且n为2。
[0111]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(i)化合物，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义并且受制于条件，且n为3。
[0112]
在包含式(i)化合物的以上实施例中的每一者内，存在另一实施例，其中x、r1、r2、r3、r4、r5和n如针对特定实施例所定义，其中r6是h。
[0113]
一个实施例提供式(ii)化合物：
[0114][0115]
其中：
[0116]
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0117]
n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0118]
r6选自以下的群组：h、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基；其中所述c
1-c6烷基被0、1、2、3或4个选自f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的取代基取代；且所述c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基被0、1、2、3或4个选自c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的群组的取代基取代；
[0119]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少一个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；和
[0120]
其条件是当r2为f或cf3时，那么r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h；或其药学上可接受的盐。
[0121]
另一实施例包含式(ii)化合物，其中r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n在每一种情况下独立地为来自1、2、3、4和5的群组的整数。
[0122]
再另一实施例包含式(ii)化合物，其中r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n在每一种情况下独立地为来自1、2、3和4的群组的整数。
[0123]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(ii)化合物，其中r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n在每一种情况下独立地为来自1、2和3的群组的整数。
[0124]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(ii)化合物，其中r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n在每一种情况下独立地为来自2和3的群组的整数。
[0125]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(ii)化合物，其中r1、r2、r3、r4、r5和
r6如上文所定义且受制于条件，且n为2。
[0126]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(ii)化合物，其中r1、r2、r3、r4、r5和r6如上文所定义且受制于条件，且n为3。
[0127]
在包含式(ii)化合物的以上实施例中的每一个内，存在另一实施例，其中r1、r2、r3、r4、r5和n如针对特定实施例所定义，其中r6是h。
[0128]
另一实施例提供式(iii)化合物，
[0129][0130]
其中：n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0131]
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0132]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少一个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；和
[0133]
其条件是当r2为f或cf3时，那么r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h；或其药学上可接受的盐。
[0134]
另一实施例提供式(iii)化合物或其药学上可接受的盐，其中n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；r1选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh。
[0135]
又一实施例提供式(iii)化合物或其药学上可接受的盐，其中n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；r3选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且r1、r2、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh。
[0136]
再另一实施例提供式(iii)化合物或其药学上可接受的盐，其中：
[0137]
n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0138]
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0139]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组。
[0140]
再一实施例提供式(iii)化合物或其药学上可接受的盐，其中：
[0141]
n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0142]
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c3氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0143]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个选自f、c
1-c3氟烷基的群组。
[0144]
再另一实施例提供式(iii)化合物或其药学上可接受的盐，其中：
[0145]
n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0146]
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、cf3、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0147]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个选自f和cf3的群组。
[0148]
再另一实施例提供式(iii)化合物或其药学上可接受的盐，其中：
[0149]
n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；
[0150]
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、cf3、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；
[0151]
其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个为f。
[0152]
另一实施例包含式(iii)化合物，其中r1、r2、r3、r4和r5如上文所定义且受制于所述条件，且n在每一种情况下独立地为来自1、2、3、4和5的群组的整数。
[0153]
再另一实施例包含式(iii)化合物，其中r1、r2、r3、r4和r5如上文所定义且受制于所述条件，且n在每一种情况下独立地为来自1、2、3和4的群组的整数。
[0154]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(iii)化合物，其中r1、r2、r3、r4和r5如上文所定义且受制于所述条件，且n在每一种情况下独立地为来自1、2和3的群组的整数。
[0155]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(iii)化合物，其中r1、r2、r3、r4和r5如上文所定义且受制于所述条件，且n在每一种情况下独立地为来自2和3的群组的整数。
[0156]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(iii)化合物，其中r1、r2、r3、r4和r5如上文所定义且受制于所述条件，且n为2。
[0157]
另一实施例包含以其它方式如上文所定义的式(iii)化合物，其中r1、r2、r3、r4和r5如上文所定义且受制于所述条件，且n为3。
[0158]
药物组合物
[0159]
还提供一种药物组合物，其包含药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药，和药学上可接受的载剂或赋形剂。
[0160]
治疗方法
[0161]
以下治疗方法中的每一种将参考式(i)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、药学上可接受的酯、药学上可接受的溶剂合物、水合物、异构体(包括其光学异构体、外消旋体或其它混合物)、互变异构体、同位素、多晶型物和药学上可接受的前药的用途。应理解，每一方法提供额外实施例，其中所使用的化合物具有式(ia)、式(ib)、式(ic)、式(id)、式(ii)、式(iii)、su056等，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。
[0162]
本发明提供一种抑制个体的yb1蛋白质活性的方法，所述方法包含向有需要的个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。
[0163]
本发明提供一种抑制经历癌症的个体的yb1蛋白质活性的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。在不同实
施例中，个体经历的癌症选自以下的群组：妇科癌症(包括卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌和子宫颈癌)、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌和胃癌。
[0164]
抑制yb1蛋白质活性的方法可用于治疗与ybx1表达相关的其他癌症中，包括急性骨髓白血病(周(zhou)等人.,《实验与临床癌症研究杂志》(2021)40:353)、肾细胞癌(阮(ruan)等人.,《致癌基因》(2020)39:6113-6128)、膀胱癌(徐(xu)等人.,《肿瘤目标》,2017,第8卷,第39号,第65946-65956页、骨肉瘤(藤原冈田(fujiwara-okada)等人.,《英国癌症杂志》(2013)108,第836-847页)、头颈癌(科尔克(kolk)等人.,《英国癌症杂志》(2011)105,第1864-1873页、鼻咽癌(周等人.,《实验细胞研究》361(2017)第126-134页和本(ban)等人.,《癌症杂志》2021,第12(11)卷,第3315-3324页)。
[0165]
还提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。应理解，本文中所包括的是用于使本文中所提及的癌症中的每一个对其相关抗癌剂敏感化的单独方法。
[0166]
还提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的癌细胞对用辐射治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。应理解，本文中所包括的是用于使本文中所提及的癌症中的每一者对辐射疗法敏感化的单独方法。
[0167]
还应理解，药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐可以与额外抗癌剂或辐射同时以方案投与。在其它实施例中，药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐可以在随后投与指定癌症药剂和/或辐射疗法之前的给药或方案向有需要的个体投与。
[0168]
在一些实施例中，式(i)化合物或其药学上可接受的盐可以初始时间段(如1到7天)投与，随后向有需要的个体依序投与指定的癌症药剂或药剂和/或辐射疗法。
[0169]
在其它实施例中，式(i)化合物或其药学上可接受的盐和一或多种指定的癌症药剂和/或辐射疗法可以在重复连续时间段(如每次1到14天)向有需要的个体投与，在每对给药之间具有或不具有不涉及任何处理的不应期。
[0170]
在其它实施例中，式(i)化合物可投与初始时间段，如1到7天，接着向有需要的个体共同投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，和药学上有效量的指定癌症药剂和/或辐射疗法两者第二时间段。
[0171]
在不同实施例中，对本文所描述的治疗敏感化的个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的癌细胞选自以下的群组：妇科癌症(包括卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌和子宫颈癌)、白血病、淋巴瘤、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、头颈癌、乳腺癌(包括三阴性、er阴性、er阳性乳腺癌和孕酮阳性)、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胃癌和神经元癌(包括神经胶质瘤)。
[0172]
妇科癌症
[0173]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的妇科癌症的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0174]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的妇科癌症的方法，所述方法包含
向有需要的个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，和药学上有效量的mtor抑制剂或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，mtor抑制剂选自西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)、依维莫司(deforolimus)和坦罗莫司(temsirolimus)的群组。
[0175]
还提供一种增强经历表达yb1(ybx1)蛋白质的妇科癌症的个体的抗癌剂的作用的方法，所述方法包含向有需要的个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，用式(i)化合物处理使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的妇科癌症细胞对用抗癌剂治疗敏感化。
[0176]
在一些实施例中，用于治疗妇科癌症的抗癌剂为磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/蛋白质激酶b(akt)的抑制剂或拮抗剂。
[0177]
在一些实施例中，待治疗的表达yb1(ybx1)蛋白质的妇科癌症为卵巢癌。在其它实施例中，待治疗的妇科癌症为子宫内膜癌。在又其它实施例中，待治疗的妇科癌症为子宫颈癌。
[0178]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的卵巢癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0179]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0180]
b)药学上有效量的顺铂或其药学上可接受的盐。
[0181]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的卵巢癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0182]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0183]
b)药学上有效量的紫杉烷化合物或其药学上可接受的盐。
[0184]
在一些实施例中，本文所论述的用于治疗表达yb1(ybx1)蛋白质的妇科癌症的方法的紫杉烷化合物选自太平洋紫杉醇、多西他赛(docetaxel)和卡巴他赛(cabazitaxel)的群组。
[0185]
对于使个体中表达yb1(ybx1)蛋白质的癌细胞对抗癌剂和/或辐射治疗敏感化或抑制正在经历癌症的个体中的yb1蛋白质活性的每一种方法，存在具有检测癌症样品细胞中所表达yb1(ybx1)蛋白质的存在或不存在的初始步骤的对应方法，并且当确定yb1(ybx1)蛋白质存在于样品细胞中时，用药学上有效量的式(i)化合物或药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药，以及由特定方法指示的任何其它药剂治疗经历如针对每一方法所描述的所讨论的癌症的个体。
[0186]
作为非限制性实例，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的卵巢癌的方法，所述方法包含以下步骤：
[0187]
a)确定从有需要的个体收集的卵巢癌肿瘤样品中所表达yb1蛋白质的存在或不存在；以及
[0188]
b)当确定所表达yb1蛋白质存在于卵巢癌肿瘤样品中时，向有需要的个体投与：
[0189]
i)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0190]
ii)药学上有效量的紫杉烷化合物或其药学上可接受的盐。
[0191]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的输卵管癌(fallopian tube cancer/fallopian tube carcinoma)的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0192]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0193]
b)药学上有效量的紫杉烷化合物或其药学上可接受的盐。
[0194]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的输卵管癌(fallopian tube cancer/fallopian tube carcinoma)的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0195]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；
[0196]
b)药学上有效量的紫杉烷化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0197]
c)药学上有效量的卡铂或其药学上可接受的盐。
[0198]
在一些实施例中，治疗输卵管癌的方法中的紫杉烷化合物选自太平洋紫杉醇、白蛋白结合型太平洋紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛的群组。
[0199]
前列腺癌
[0200]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0201]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0202]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0203]
在一些实施例中，投与式(i)化合物使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌对用紫杉烷抗癌剂治疗敏感化。在一些实施例中，紫杉烷抗癌剂选自太平洋紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛的群组或其药学上可接受的盐。
[0204]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0205]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0206]
b)药学上有效量的选自太平洋紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛的群组的紫杉烷化合物或其药学上可接受的盐。
[0207]
在一些实施例中，投与式(i)化合物使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌对用雄激素受体抑制剂抗癌剂治疗敏感化。在一些实施例中，雄激素受体抑制剂选自阿帕鲁胺(apalutamide)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、达洛鲁胺(darolutamide)和乙酸阿比特龙酯(abiraterone acetate)的群组。
[0208]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0209]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0210]
b)药学上有效量的选自阿帕鲁胺(apalutamide)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、达洛鲁胺(darolutamide)和乙酸阿比特龙酯(abiraterone acetate)的群组的雄激素受体抑制剂化合物或其药学上可接受的盐。
[0211]
在一些实施例中，以约100mg到约300mg的日剂量向有需要的个体投与阿帕鲁胺。在一些实施例中，以每天约240mg的剂量投与阿帕鲁胺。
[0212]
在一些实施例中，抗癌剂为促黄体激素释放激素(lhrh)促效剂。在一些实施例中，
lhrh促效剂选自亮丙立德/亮丙瑞林(leuprolide/leuprorelin)、戈舍瑞林(goserelin)、曲普瑞林(triptorelin)、布舍瑞林(buserelin)和组氨瑞林(histrelin)的群组。
[0213]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0214]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0215]
b)药学上有效量的选自亮丙立德/亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林和组氨瑞林的群组的促黄体激素释放激素(lhrh)促效剂化合物或其药学上可接受的盐。
[0216]
在其他实施例中，抗癌剂为促黄体激素释放激素(lhrh)拮抗剂。在一些实施例中，lhrh促效剂为地加瑞克(degarelix)。
[0217]
因而，还提供一种治疗个体的前列腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0218]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0219]
b)药学上有效量的地加瑞克或其药学上可接受的盐。
[0220]
在其它实施例中，抗癌剂为抗雄激素药剂。在一些实施例中，抗雄激素药剂选自氟他胺(flutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)和尼鲁米特(nilutamide)的群组。
[0221]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0222]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0223]
b)药学上有效量的选自氟他胺(flutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)和尼鲁米特(nilutamide)的群组的抗雄激素化合物或其药学上可接受的盐。
[0224]
在涉及本文用于治疗前列腺癌和/或抑制前列腺癌转移的方法的一些实施例中，所讨论的前列腺癌为雄激素非依赖性前列腺癌。在其它实施例中，所讨论的前列腺癌为去势敏感性前列腺癌。在其它实施例中，所讨论的前列腺癌为转移性去势敏感性前列腺癌。在额外实施例中，待治疗的表达yb1(ybx1)蛋白质的前列腺癌为非转移性去势抗性前列腺癌。在其他实施例中，前列腺癌为激素难治性前列腺癌(hrpc)。
[0225]
黑色素瘤
[0226]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0227]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0228]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0229]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0230]
c)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0231]
d)药学上有效量的选自帕博利珠单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab)的群组的pd-1抑制剂药剂或其药学上可接受的盐。
[0232]
再提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0233]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0234]
b)药学上有效量的阿特珠单抗或其药学上可接受的盐。
[0235]
再提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0236]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；
[0237]
b)药学上有效量的阿特珠单抗或其药学上可接受的盐；以及
[0238]
c)药学上有效量的选自考比替尼(cobimetinib)和维罗非尼(vemurafenib)的群组的第三药剂或其药学上可接受的盐。
[0239]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0240]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0241]
b)药学上有效量的ctla-4抑制剂(诸如伊匹单抗)。
[0242]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的黑色素瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0243]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0244]
b)药学上有效量的白介素-2(il-2)。
[0245]
顺铂抗性
[0246]
yb-1表达或过度表达还与对一些癌症(包括乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌)中的顺铂治疗的抗性有关。
[0247]
在一些实施例中，待治疗的乳腺癌对内分泌治疗剂是难治性的，如选择性雌激素受体调节剂(serm)，包括他莫昔芬和托瑞米芬。在一些实施例中，乳腺癌对选择性雌激素受体降解剂(serd)是难治性的，如氟维司群(fulvestrant)和艾拉司群(elacestrant)。在其它实施例中，待治疗的乳腺癌对芳香酶治疗剂是难治性的，如来曲唑(letrozole)、阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)和睾内酯(testolactone)。
[0248]
本文提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的癌症对用顺铂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0249]
本文提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的癌症对用紫杉烷化合物治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0250]
乳腺癌
[0251]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的乳腺癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0252]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的乳腺癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0253]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的乳腺癌细胞对用抗癌剂治疗敏感
化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述方法使有需要的所述个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的乳腺癌细胞对用一或多种选自以下的群组的药剂治疗敏感化：蒽环霉素(诸如多柔比星、聚乙二醇化脂质体多柔比星和表柔比星)、紫杉烷化合物(诸如太平洋紫杉醇、白蛋白结合型太平洋紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛)、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、环磷酰胺、长春瑞滨、吉西他滨、伊沙匹隆、艾日布林和铂药剂(诸如卡铂和顺铂)。在其它实施例中，所述方法使表达yb1(ybx1)的乳腺癌细胞对用辐射疗法治疗敏感化。
[0254]
一个实施例提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的乳腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0255]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0256]
b)药学上有效量的一或多种选自多柔比星、聚乙二醇化脂质体多柔比星、表柔比星、太平洋紫杉醇、多西他赛、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、环磷酰胺和卡铂的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0257]
另一实施例提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的乳腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0258]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0259]
b)药学上有效量的一或多种选自太平洋紫杉醇、白蛋白结合型太平洋紫杉醇、多西他赛、多柔比星、聚乙二醇化脂质体多柔比星、表柔比星、顺铂、卡铂、长春瑞滨、卡培他滨、吉西他滨、伊沙匹隆(ixabepilone)和艾日布林(eribulin)的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0260]
结肠直肠癌
[0261]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的结肠直肠癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0262]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的结肠直肠癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0263]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的结肠直肠癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0264]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的结肠直肠癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0265]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0266]
b)药学上有效量的选自5-氟尿嘧啶、卡培他滨、伊立替康、奥沙利铂(oxaliplatin)和曲氟尿苷(trifluridine)和替普拉斯(tipiracil)的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0267]
膀胱癌
[0268]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的膀胱癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0269]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的膀胱癌癌转移的方法，所
述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0270]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的膀胱癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0271]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的膀胱癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0272]
d)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；
[0273]
e)药学上有效量的选自顺铂、顺铂加5-氟尿嘧啶和丝裂霉素以及5-氟尿嘧啶的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐；
[0274]
f)治疗有效剂量的辐射。
[0275]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的膀胱癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0276]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0277]
b)药学上有效量的选自以下的群组的抗癌剂：
[0278]
i)吉西他滨和顺铂；
[0279]
ii)剂量密集型甲氨蝶呤、长春碱、多柔比星(阿霉素)和顺铂(ddmvac)；
[0280]
iii)顺铂、甲氨蝶呤和长春碱(cmv)；以及
[0281]
iv)吉西他滨和太平洋紫杉醇
[0282]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的膀胱癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0283]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；
[0284]
b)药学上有效量的选自多西他赛、太平洋紫杉醇、多柔比星、甲氨蝶呤、异环磷酰胺和培美曲塞的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0285]
肝癌
[0286]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的肝癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0287]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的肝癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0288]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的肝癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0289]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的肝癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0290]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0291]
b)药学上有效量的选自吉西他滨、奥沙利铂、顺铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶、卡培他滨和米托蒽醌的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0292]
肺癌
[0293]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的小细胞肺癌的方法，所述方法包
含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0294]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的小细胞肺癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0295]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的小细胞肺癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0296]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的小细胞肺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0297]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0298]
b)药学上有效量的选自顺铂和依托泊苷、卡铂和依托泊苷、顺铂和伊立替康和卡铂和伊立替康的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0299]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的非小细胞肺癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0300]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的非小细胞肺癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0301]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的非小细胞肺癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0302]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的非小细胞肺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0303]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0304]
b)药学上有效量的一或多种选自顺铂、卡铂、太平洋紫杉醇、白蛋白结合型太平洋紫杉醇、多西他赛、吉西他滨、长春瑞滨、依托泊苷和培美曲塞的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0305]
多发性骨髓瘤
[0306]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的多发性骨髓瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0307]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的多发性骨髓瘤癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0308]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的多发性骨髓瘤细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0309]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的多发性骨髓瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0310]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0311]
b)药学上有效量的选自美法仑、长春新碱、环磷酰胺、依托泊苷、多柔比星、脂质体
多柔比星和苯达莫司汀的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0312]
软组织肉瘤
[0313]
本文还提供治疗表达yb1(ybx1)蛋白质的软组织肉瘤的方法，所述软组织肉瘤包括血管肉瘤、隆凸性皮肤纤维肉瘤、上皮样肉瘤、胃肠道基质瘤(gist)、卡波济氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、恶性周边神经鞘肿瘤、黏液纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、孤立性纤维肿瘤、滑膜肉瘤和未分化多形性肉瘤。
[0314]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的软组织肉瘤、如表达yb1(ybx1)蛋白质的纤维肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0315]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的软组织肉瘤、如表达yb1(ybx1)蛋白质的纤维肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0316]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的软组织肉瘤细胞、如表达yb1(ybx1)蛋白质的纤维肉瘤细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0317]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的软组织肉瘤、如表达yb1(ybx1)蛋白质的纤维肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0318]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0319]
b)药学上有效量的一或多种选自异环磷酰胺、多柔比星、达卡巴嗪(dtic)、表柔比星、替莫唑胺、多西他赛、吉西他滨、长春瑞滨、曲贝替定和艾日布林的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0320]
在一些实施例中，当使用抗癌剂异环磷酰胺时，药物美司钠也用于保护膀胱免受异环磷酰胺的毒性作用。在其它实施例中，抗癌剂为美司钠、阿霉素[多柔比星]、异环磷酰胺和达卡巴嗪的组合，有时由首字母缩写maid指代。在其它实施例中，抗癌剂为阿霉素[多柔比星]、异环磷酰胺和美司钠的组合，有时由首字母缩写aim指代。在治疗本文的软组织肉瘤的方法中的一些实施例中，使用经分离的肢体灌注向有需要的个体投与抗癌剂。
[0321]
骨肉瘤：还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的骨肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0322]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的骨肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0323]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的骨肉瘤细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0324]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的骨肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0325]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0326]
b)药学上有效量的一或多种选自甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂、卡铂、异环磷酰胺、环磷酰胺、依托泊苷和吉西他滨的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0327]
在以上治疗表达yb1(ybx1)蛋白质的骨肉瘤的方法中的一些实施例中，抗癌剂为
高剂量甲氨蝶呤、多柔比星和顺铂(map方案)的组合。在其它实施例中，投与多柔比星和顺铂的组合。在其它实施例中，投与异环磷酰胺和依托泊苷的组合。在又其它实施例中，将异环磷酰胺和表柔比星与顺铂或卡铂二者中的一者组合投与。
[0328]
尤文氏肉瘤
[0329]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的尤文氏肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0330]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的尤文氏肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0331]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的尤文氏肉瘤细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0332]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的尤文氏肉瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0333]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0334]
b)药学上有效量的一或多种选自环磷酰胺、多柔比星、依托泊苷、异环磷酰胺和长春新碱的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0335]
在以上治疗表达yb1(ybx1)蛋白质的尤文氏肉瘤的方法中的一些实施例中，抗癌剂为长春新碱、多柔比星和环磷酰胺的组合，与异环磷酰胺和依托泊苷交替，方案称为vdc/ie。
[0336]
胃癌
[0337]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胃(胃)癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0338]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胃癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0339]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胃癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0340]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胃癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0341]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0342]
b)药学上有效量的一或多种选自5-氟尿嘧啶、卡培他滨、卡铂、顺铂、多西他赛、表柔比星、伊立替康、奥沙利铂、太平洋紫杉醇和曲氟尿苷+替普西尔(tipracil)的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0343]
在以上治疗表达yb1(ybx1)蛋白质的胃癌的方法中的一些实施例中，抗癌剂为表柔比星、顺铂和5-氟尿嘧啶的组合，有时由vdc/ie指代。在其它实施例中，多西他赛或太平洋紫杉醇与5-fu或卡培他滨的组合有时与辐射组合。在另一实施例中，顺铂与5-fu或卡培他滨有时与辐射组合投与。在其它实施例中，太平洋紫杉醇与卡铂有时与辐射组合投与。在其它实施例中，投与多西他赛、顺铂和5-氟尿嘧啶(dcf)的组合。在其它情况下，伊立替康与顺铂、5-氟尿嘧啶或卡培他滨一起投与。在其它方面，奥沙利铂与5-氟尿嘧啶或卡培他滨一
起投与。在其它方面，投与曲氟尿苷+替普西尔
[0344]
神经胶母细胞瘤
[0345]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的多形性胶质母细胞瘤(gbm或神经胶母细胞瘤)的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0346]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的神经胶母细胞瘤的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0347]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的成胶质细胞瘤细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0348]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的神经胶母细胞瘤的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0349]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0350]
b)药学上有效量的一或多种选自替莫唑胺、贝伐单抗、洛莫司汀、卡莫司汀、氟唑帕利、帕博利珠单抗、纳武单抗、伊匹单抗、安罗替尼、格拉吉布和巴维妥昔单抗的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0351]
在一些实施例中，以上方法中的神经胶母细胞瘤为表达yb1(ybx1)蛋白质的儿科神经胶母细胞瘤。在一些实施例中，神经胶母细胞瘤为表达yb1(ybx1)蛋白质的初级神经胶母细胞瘤。在其它情况下，其为表达yb1(ybx1)蛋白质的次级神经胶母细胞瘤。
[0352]
头颈癌
[0353]
本文提及“头颈癌”是指口腔、喉部(咽部，包括鼻咽、口咽和喉咽)、喉部、鼻咽窦、鼻腔和唾液腺的癌症中的任一者。头颈癌包括下咽癌、喉癌、唇和口腔癌、转移性鳞状颈部癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌以及唾液腺癌。应理解，对于本文所描述的头颈癌的治疗方法中的每一者，所公开的头颈癌中的每一者的相应方法也是此段落中列出的头颈癌中的每一者的相应方法。
[0354]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0355]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0356]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0357]
在关于治疗表达yb1(ybx1)的头颈癌的一些实施例中，用于治疗个体的抗癌剂为辐射疗法。在一些实施例中，所利用的辐射为外束辐射疗法。在一些实施例中，所述治疗包含向有需要的个体投与药学上有效量的一或多种egfr抑制剂。其它实施例涉及向有需要的个体分别投与药学上有效量的拉罗替尼(维特拉克维(vitrakvi))和/或拉罗替尼。
[0358]
治疗头颈癌的其它方法包含免疫疗法的用途，如向有需要的个体投与药学上有效
量的帕博利珠单抗和/或纳武单抗。
[0359]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0360]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0361]
b)药学上有效量的选自太平洋紫杉醇、多西他赛、顺铂、卡铂、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤和卡培他滨的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0362]
因此，还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0363]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0364]
b)药学上有效量的选自太平洋紫杉醇和多西他赛的群组的紫杉烷化合物或其药学上可接受的盐。
[0365]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0366]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0367]
b)药学上有效量的顺铂或其药学上可接受的盐。
[0368]
在一些实施例中，顺铂以每3周
×
3递送约20mg/m2到约100mg/m2的剂量投与有需要的个体。
[0369]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0370]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0371]
b)药学上有效量的卡铂或其药学上可接受的盐；以及
[0372]
c)药学上有效量的药物，其选自5-氟尿嘧啶(5fu)和西妥昔单抗的群组。
[0373]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0374]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0375]
b)药学上有效量的顺铂或其药学上可接受的盐；以及
[0376]
c)药学上有效量的药物，其选自5-氟尿嘧啶(5fu)和西妥昔单抗的群组。
[0377]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0378]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0379]
b)药学上有效量的顺铂或其药学上可接受的盐；以及
[0380]
c)药学上有效量的太平洋紫杉醇或其药学上可接受的盐。
[0381]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0382]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0383]
b)药学上有效量的卡铂或其药学上可接受的盐；以及
[0384]
c)药学上有效量的太平洋紫杉醇或其药学上可接受的盐。
[0385]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的头颈癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0386]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0387]
b)药学上有效量的羟基脲或其药学上可接受的盐；以及
[0388]
c)药学上有效量的药物，其选自5-氟尿嘧啶(5fu)和西妥昔单抗的群组。
[0389]
再提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的鼻咽癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0390]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0391]
b)药学上有效量的羟基脲或其药学上可接受的盐；以及
[0392]
c)药学上有效量的选自卡铂、多柔比星、表柔比星、太平洋紫杉醇、多西他赛、吉西他滨、博莱霉素和甲氨蝶呤的群组的药物。
[0393]
胰腺癌
[0394]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胰腺癌的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0395]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胰腺癌癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0396]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胰腺癌对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0397]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的胰腺癌的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0398]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0399]
b)药学上有效量的一或多种选自吉西他滨、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、太平洋紫杉醇、白蛋白结合型太平洋紫杉醇、多西他赛、卡培他滨、顺铂和伊立替康的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0400]
神经元癌
[0401]
式(i)化合物还可以用于治疗和/或敏感化神经元癌症(脑部和脊髓癌症)，包括神经管胚细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(gbm)、星形细胞瘤(间变性星形细胞瘤和毛细胞星形细胞瘤)、室管膜瘤和寡突神经胶质细胞瘤。应理解，对于治疗神经元癌症或敏感化神经元癌症以治疗本文所描述的方法中的以下方法中的每一种，包括此段落中列出的神经元癌症中的每一种的每种类型的单独方法。
[0402]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的神经元癌症的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0403]
本发明还提供一种抑制个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的神经元癌转移的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0404]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的神经元癌症对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。
[0405]
本发明提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的神经元癌症的方法，所述方
法包含向有需要的个体投与：
[0406]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0407]
b)药学上有效量的一或多种选自卡铂、卡莫司汀(bcnu)、顺铂、伊立替康、环磷酰胺、依托泊苷、洛莫司汀、甲氨蝶呤、丙卡巴肼、替莫唑胺和长春新碱的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0408]
在一些实施例中，向有需要的个体投与的药学上有效量的卡莫司汀呈卡莫司汀晶片或植入物的形式，例如在可购自arbor pharmaceuticals，llc的晶片(卡莫司汀植入物)产品中。
[0409]
白血病
[0410]
本发明的方法还包括用于治疗白血病的方法，其中所讨论的白血病细胞表达yb-1蛋白质，包括急性骨髓白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、急性淋巴母细胞(或淋巴细胞性)白血病(all)和慢性淋巴细胞性白血病(cll)。应理解，对于本文所描述的用于治疗白血病或使白血病对治疗敏感化的每一方法，对于所参考的白血病(aml、cml、all和cll)中的每一者理解单独的相应方法。
[0411]
另外提供一种使个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的白血病细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，用于治疗个体的抗癌剂为辐射疗法。
[0412]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的急性骨髓白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0413]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0414]
b)药学上有效量的选自道诺霉素和伊达比星的群组的蒽环霉素药物或其药学上可接受的盐；以及
[0415]
c)药学上有效量的阿糖胞苷或其药学上可接受的盐。
[0416]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的急性骨髓白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0417]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0418]
b)药学上有效量的一或多种选自克拉屈滨(2-cda)、氟达拉宾、米托蒽醌、依托泊苷、6-硫鸟嘌呤、羟基脲、普赖松、地塞米松、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、氮胞苷和地西他滨的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0419]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的慢性骨髓白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0420]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0421]
b)药学上有效量的一或多种选自羟基脲、阿糖胞苷(ara-c)、白消安、环磷酰胺和长春新碱的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0422]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的慢性骨髓白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0423]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0424]
b)药学上有效量的一或多种选自伊马替尼达沙替尼尼罗替尼伯舒替尼普纳替尼和
阿西米尼的群组的酪氨酸激酶抑制剂抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0425]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的慢性骨髓白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0426]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0427]
b)药学上有效量的干扰素-α或其药学上可接受的盐。
[0428]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的急性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0429]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0430]
b)药学上有效量的一或多种选自长春新碱、地塞米松、伊马替尼、普赖松、多柔比星和道诺霉素的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0431]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的急性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0432]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0433]
b)药学上有效量的一或多种选自甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、长春新碱、普赖松和伊马替尼的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0434]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的急性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0435]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0436]
b)药学上有效量的一或多种选自长春新碱、地塞米松、普赖松、多柔比星和道诺霉素的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0437]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的急性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0438]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0439]
b)药学上有效量的一或多种选自甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤(6-mp)、长春新碱、普赖松和伊马替尼的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0440]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的慢性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0441]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0442]
b)药学上有效量的一或多种选自依鲁替尼、阿卡替尼、艾德昔布和杜维昔布的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0443]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的慢性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0444]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0445]
b)药学上有效量的维奈妥拉或其药学上可接受的盐。
[0446]
还提供一种治疗个体的表达yb1(ybx1)蛋白质的慢性淋巴细胞性白血病的方法，所述方法包含向有需要的个体投与：
[0447]
a)药学上有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐；以及
[0448]
c)药学上有效量的一或多种选自利妥昔单抗、奥法木单抗和阿托珠单抗的群组的抗癌剂或其药学上可接受的盐。
[0449]
定义
[0450]
术语“yb1”和“ybx1”指代y盒结合蛋白质1，也称为y盒转录因子或核酸酶敏感性元件结合蛋白质1，一种在人类中由ybx1基因编码的蛋白质。
[0451]
化学结构中的波浪线指示所展示的结构通过其结合到另一化学部分或基团的键。
[0452]
本文中“杂环”或“杂环基”是指含有碳原子和至少一个选自o、s和n的环原子的化学环。术语“杂环”和“杂环”包括具有饱和环、部分不饱和环和芳香族环(即，杂芳环)的基团。5元和6元杂环的实例包括举例来说而非限制吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氢噻吩基、硫氧化四氢苯硫基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、4-哌啶基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氢呋喃基、三嗪基、6h-1,2,5-噻二嗪基、2h,6h-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻嗯基、吡喃基、2h-吡咯基、异噻唑基、异恶唑基、吡嗪基、哒嗪基、四氢咪唑基、二氢咪唑基、吡唑啶基、吡唑啉基、哌嗪基、吗啉基以及四氢恶唑基。
[0453]
术语“烷基”是指直链或分支链烃。举例来说，烷基可包括具有1到6个碳原子(即，c
1-c6烷基)、1到4个碳原子(即，c
1-c4烷基)或1到3个碳原子(即，c
1-c3烷基)的烷基。适合的烷基的实例包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基(-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu、正丁基、
‑‑
ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu、异丁基、
‑‑
ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu、仲丁基、
‑‑
ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu、叔丁基、
‑‑
c(ch3)3)、1-戊基(正戊基、
‑‑
ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(
‑‑
ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(
‑‑
ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(
‑‑
ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(
‑‑
ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(
‑‑
ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(
‑‑
ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(
‑‑
c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(
‑‑
c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3及其类似基团。
[0454]
术语“烷氧基”是指具有式-o-烷基的基团，其中如上文所定义的烷基经由氧原子连接到母体分子。烷氧基的烷基部分可具有1到6个碳原子(即，c
1-c6烷氧基)、1到4个碳原子(即，c
1-c4烷氧基)或1到3个碳原子(即，c
1-c3烷氧基)。适合的烷氧基的实例包括(但不限于)甲氧基(-o-ch3或-ome)、乙氧基(-och2ch3或-oet)、正丙氧基(-ch
2-ch
2-ch3)、异丙氧基(-ch(ch3)2)、正丁基(-ch
2-ch
2-ch
2-ch3)、异丁氧基(-ch
2-ch(ch3)2)、仲丁氧基(-ch(ch3)ch
2-ch3)、叔丁氧基(-o-c(ch3)3或-otbu)及其类似基团。
[0455]
术语“环烷基”是指具有3到6个碳原子作为单环的饱和环，包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
[0456]
术语“个体”是指作为或将成为治疗、观察或实验的对象的动物，如哺乳动物。本文中所描述的方法可以适用于人类疗法和兽医应用两者。在一些实施例中，个体为哺乳动物；在一些实施例中，个体为人类；且在一些实施例中，个体选自猫和犬。“有需要的个体”或“有需要的人类”是指可能患有或疑似患有将受益于某些治疗的疾病或病况的个体，如人类；例如用如本文所描述的式(i)、式(ii)或式(iii)的化合物或其药学上可接受的盐或共晶治疗。这包括可以确定处于此类疾病或病况的风险或容易发生此类疾病或病况的个体，使得
治疗将预防疾病或病况发生。
[0457]
在一些实施例中，关于本文中的治疗方法的有需要的个体为患者，从其获取肿瘤样品(例如来自肿瘤活检)，且在所取样的材料中识别所表达ybx1蛋白质的存在，例如经由此项技术中已知的免疫组织化学或蛋白质印迹法技术。
[0458]
术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学上有效量”是指当向需要此类治疗的个体(例如哺乳动物，如人类)投与时足以实现如下定义的治疗的量。治疗或药学上有效量将取决于所治疗的个体和疾病病况、个体的体重和年龄、疾病病况的严重程度、投与方式等而变化，这可由所属领域的技术人员容易地确定。举例来说，有效量、治疗有效量或药学上有效量的式(i)、式(ii)或式(iii)的化合物或其药学上可接受的盐或共晶为足以调节yxb1表达或活性的量，且进而治疗罹患适应症或改善所述适应症的现有症状的个体(例如人类)。举例来说，治疗有效量或药学上有效量可为足以响应于yxb1活性的抑制而减少疾病或病况的症状的量。
[0459]
在一些实施例中，“有效量”为在一或多种给药、单疗法或组合疗法中投与个体时相比于在不存在用所述化合物处理的情况下的个体中的yb-1活性，或相比于在用所述化合物处理之前或之后的个体中的yb-1活性，有效抑制yb-1约20％(20％抑制)、至少约30％(30％抑制)、至少约40％(40％抑制)、至少约50％(50％抑制)、至少约60％(60％抑制)、至少约70％(70％抑制)、至少约80％(80％抑制)或至少约90％(90％抑制)的个体化合物的量。
[0460]
在一些实施例中，“有效量”为个体化合物的量，当在单疗法或组合疗法中向个体投与时，其有效地使个体中的肿瘤负荷相比于在不存在用所述化合物处理的情况下个体中的肿瘤负荷，或替代地与在用所述化合物处理之前或之后的个体中的肿瘤负荷降低约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％。如本文所用，术语“肿瘤负荷”是指由患有癌症的个体携带的肿瘤组织的总质量。在一些实施例中，有效量为个体化合物的量，当在单疗法或组合疗法中向个体投与时，有效地将观察到个体中的肿瘤收缩所需的辐射治疗的量相比于在不存在用所述化合物治疗的情况下观察个体的肿瘤收缩所需的辐射治疗剂量减少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％。
[0461]
在一些实施例中，化合物的有效量为当以一或多种剂量向患有癌症的个体投与时有效实现肿瘤大小的1.5-log、2-log、2.5-log、3-log、3.5-log、4-log、4.5-log或5-log减小的量。
[0462]
在一些实施例中，式(i)化合物或其药学上可接受的盐可以约0.2mg/kg到约10mg/kg的每日剂量投与。在其它实施例中，其可以约0.2mg/kg到约5mg/kg的每日剂量投与。
[0463]
在一些实施例中，化合物的有效量为在约50ng/kg体重到约50pg/kg体重范围内的量(例如，约50ng/kg体重到约40pg/kg体重、约30ng/kg体重到约20pg/kg体重、约50ng/kg体重到约10pg/kg体重、约50ng/kg体重到约1pg/kg体重、约50ng/kg体重到约800ng/kg体重、约50ng/kg体重到约700ng/kg体重、约50ng/kg体重到约600ng/kg体重、约50ng/kg体重到约500ng/kg体重、约50ng/kg体重到约400ng/kg体重、约60ng/kg体重到约400ng/kg体重、约70ng/kg体重到约300ng/kg体重、约60ng/kg体重到约100ng/kg体重、约65ng/kg体重到约85ng/kg体重、约70ng/kg体重到约90ng/kg体重、约200ng/kg体重到约900ng/kg体重、约
200ng/kg体重到约800ng/kg体重、约200ng/kg体重到约700ng/kg体重、约200ng/kg体重到约600ng/kg体重、约200ng/kg体重到约500ng/kg体重、约200ng/kg体重到约400ng/kg体重或约200ng/kg体重到约300ng/kg体重)。
[0464]
在一些实施例中，化合物的有效量为约10pg到约100mg范围内的量，例如约10pg到约50pg、约50pg到约150pg、约150pg到约250pg、约250pg到约500pg、约500pg到约750pg、约750pg到约1ng、约1ng到约10ng、约10ng到约50ng、约50ng到约150ng、约150ng到约250ng、约250ng到约500ng、约500ng到约750ng、约750ng到约1pg、约1pg到约10pg、约10pg到约50pg、约50mg到约150gg、约150gg到约250gg、约250gg到约500gg、约500gg到约750gg、约750g到约1g、约1mg到约50mg、约1mg到约100mg或约50mg到约100mg。所述量可为单剂量或可为总日量。总日量可在10pg到100mg范围内，或可在100mg到约500mg范围内，或可在500mg到约1000mg范围内。
[0465]
在一些实施例中，投与单一剂量的化合物。在其它实施例中，投与多个剂量。在一段时间内投与多个剂量的情况下，化合物可在一段时间内每天两次(qid)、每天一次(qd)、每隔一天一次(qod)、每隔两天一次、每周三次(tiw)或每周两次(biw)投与。举例来说，在一天到约2年或更长的时间内，qid、qd、qod、tiw或biw施用化合物。举例来说，以前述频率中的任一个施用化合物一周、两周、一个月、两个月、六个月、一年或两年或更长时间，视各种因素而定。
[0466]
向患有癌症的个体投与有效量的个体化合物可产生以下各者中的一或多者：1)肿瘤负荷的降低；2)实现肿瘤收缩(例如由对辐射治疗敏感化产生)所需的辐射治疗剂量的降低；3)从个体的一个细胞到另一个细胞的癌症扩散减少；4)临床结果的发病或死亡率减少；5)当与其它抗癌剂组合(例如由对其它抗癌剂的敏感化产生)时缩短治疗的总时长；以及6)疾病反应指示(例如癌症的一或多种症状减少)的改善。可以使用多种方法中的任一种来确定治疗方法是否有效。举例来说，可以分析获自已经用本发明方法处理的个体的生物样品。
[0467]
术语“抑制”或“抑制”指示生物活性或过程的基线活性降低，例如显著降低。“yb-1活性的抑制”是指yb-1活性作为对式i化合物或其药学上可接受的盐或共晶的存在的直接或间接反应相对于yb-1在不存在此类化合物或其药学上可接受的盐或共晶的情况下活性的降低。活性的降低可归因于化合物与yb-1的直接相互作用，或归因于本文所描述的化合物与一或多种其它因素的相互作用，所述其它因素又影响yb-1活性。举例来说，化合物的存在可通过直接结合到yb-1而降低yb-1活性，通过引起(直接或间接)另一因素降低yb-1活性，或通过(直接或间接)降低细胞或生物体中存在的yb-1的量。在一些实施例中，可比较同一个体在治疗之前或未接受所述治疗的其它个体中yb-1活性的抑制。术语“抑制剂”应理解为指在以药学上或治疗上有效的剂量向有需要的人类投与时提供所需抑制活性的化合物或药剂。
[0468]
术语“药物组合物”是指含有药学上有效量的本文所描述的同位素化合物或其药学上可接受的盐的组合物，其与药学上可接受的载剂调配，药学上可接受的载剂还可包括其它添加剂，并且以政府监管机构批准作为治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分而制造或出售。可以将药物组合物调配成例如以单位剂型(例如，片剂、胶囊、囊片、软胶囊或糖浆)口服施用；用于局部施用(例如，作为乳膏、凝胶、洗剂或软膏)；用于静脉施用(例如，作为无颗粒栓子的无菌溶液和适于静脉内使用的溶剂系统)；或在本文所描述的任何其它调配物
中。用于选择和制备适合的调配物的常规程序和成分描述于例如《雷明顿：药学的科学与实践(remington:the science and practice of pharmacy)》,第21版,gennaro编辑,科特威廉姆斯和威尔金斯出版社(lippencott williams&wilkins)(2005)以及《美国药典：国家处方集(the united states pharmacopeia:the national formulary)》(usp 36nf31)中，发表于2013年。
[0469]
如本文所使用，“药学上可接受的赋形剂”为药学上可接受的媒剂，包括(但不限于)任何和所有载剂、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。将这种介质和药剂用于药物活性物质是本领域中熟知的。除了任何常规培养基或药剂与活性成分不相容的情况之外，考虑了其在药物组合物中的用途。还可以将补充性活性成分并入到组合物中。
[0470]
术语“药学上可接受的载剂”是指除所公开的药学上活性或治疗性化合物以外的药物组合物中的任何成分，或其药学上可接受的盐(例如能够悬浮或溶解活性同位素化合物的载剂)，并且在患者中具有无毒和非发炎性质。赋形剂可以包含例如：抗粘剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料(着色剂)、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、香料、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂或水合水。例示性赋形剂包括(但不限于)：丁基化羟基甲苯(bht)、碳酸钙、磷酸钙(二元)、硬脂酸钙、交联羧甲基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羧基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石粉、二氧化钛、维生素a、维生素e、维生素c和木糖醇。
[0471]
术语“药学上可接受的盐”包括例如与无机酸的盐和与有机酸的盐。盐的实例可以包括盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、丁二酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苯磺酸酯(苯磺酸酯)、对甲苯磺酸酯(甲苯磺酸酯)、2-羟乙磺酸酯、苯甲酸酯、水杨酸酯、硬脂酸酯和烷酸盐(如乙酸酯、hooc-(ch2)
n-cooh，其中n为0到4)。另外，如果本文所描述的化合物以酸加成盐形式获得，那么可通过使酸盐溶液碱化获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以根据用于从碱性化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并用酸对所述溶液进行处理来制造加成盐，具体地药学上可接受的加成盐。本领域的技术人员将认识到可以用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。
[0472]
还描述式i化合物的药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、药学上可接受的酯、药学上可接受的溶剂合物、水合物、异构体(包括其光学异构体、外消旋体或其它混合物)、互变异构体、同位素、多晶型物和此类化合物的药学上可接受的前药。为简洁起见，先前语句中的形式列表可不在对本文中的化合物的所有参考中列出，所述参考包括式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)、式(id)、式(ii)、式(iii)、su056等，但是每个应理解为公开并且包括在本文中的任何地方所施用的描述中，即使仅药学上可接受的盐包括在本文中的任何地方所施用的描述中，包括与化合物、药物组合物、使用/治疗的方法或其它参考文献的描述相关联。
[0473]
本文中术语“晶体形式”和“相关术语”是指给定物质的各种结晶改性，包括(但不限于)多晶型物、溶剂合物、水合物、共晶和其它分子络合物，以及盐、盐的溶剂合物、盐的水合物、盐的其它分子络合物和多晶型物。物质的晶体形式可通过多种方法获得，如本领域中已知。此类方法包括(但不限于)熔融再结晶、熔融冷却、溶剂再结晶、例如纳米孔或毛细管中的有限空间中的再结晶、表面或模板上的再结晶，例如聚合物上的再结晶、在添加剂存在下的再结晶，例如共晶反分子、去溶剂化、脱水、快速蒸发、快速冷却、缓慢冷却、蒸气扩散、升华、研磨和溶剂滴研磨。
[0474]
本文中关于癌症所用的术语“难治性”是指不对一或多种治疗起反应的癌症。在一些实施例中，癌症不对一或多种化学治疗剂起反应。在其它实施例中，癌症不对辐射疗法起反应。在其它实施例中，难治性癌症不对一或多种化学治疗剂和辐射疗法起反应。在此类治疗开始时，难治性癌症可能具有抗性，或可能在一或多种治疗的过程中变得具有抗性。在化学疗法的情况下，难治性癌症也可被称作耐化学疗法癌症或耐化学癌症。
[0475]
雄激素非依赖性前列腺癌或激素难治性前列腺癌(aipc)为在主要雄激素切除疗法之后进行的前列腺癌，所述主要雄激素切除疗法来自睾丸切除术或促性腺激素释放激素(lhrh)促效剂，接着添加且随后停止抗雄激素。在一些实施例中，激素难治性前列腺癌定义为以大于2周的间隔获得的前列腺特异性抗原(psa)水平中的2-3个连续上升和/或基于ct扫描和/或骨扫描、骨痛或阻塞性排泄症状的发现的所记录疾病进展。在一些实施例中，psa水平不在诊断时或在疾病的整个过程中上升。在一些实施例中，前列腺癌为晚期前列腺癌。在一些实施例中，前列腺癌或转移性前列腺癌对用激素阻断疗法治疗具有抗性，诸如阿比特龙恩杂鲁胺比卡鲁胺氟他胺或乙酸环丙孕酮
[0476]
不论本质上还是随时间推移获取的对辐射治疗有抗性的癌细胞被称为“抗辐射癌症”或“抗辐射癌症”。所描述术语旨在描述对辐射治疗的反应性比非耐药性癌细胞小的癌细胞。
[0477]
本文所公开和/或阐述的所有范围都包含列举的端点并且可独立地组合。例如，从“2到10”和从“2到10”的范围包括端点2和10，并且在所考虑的章节的上下文中的所有中间值都包括。举例来说，参考“权利要求2到10”或“c
2-c
10
烷基”包括单元2、3、4、5、6、7、8、9和10，根据权利要求和原子以不含分数或十进制点的序列号编号，除非在平均数的上下文中描述。另一方面，“ph为5到9”或温度为“5℃到9℃”的情形包括整数5、6、7、8和9，以及介于其间的所有分数或十进制单元，如6.5与8.24。
[0478]“显著”意指在统计显著性的标准参数测试中统计显著的任何可检测变化，例如学生t测试，其中p《0.05。
[0479]
与数量结合使用的修饰词“约”包括陈述值且具有由语境指定的含义(例如，包括与特定数量的测量相关联的误差的程度)。在一些实施例中，术语“约”是指所指示的量加上或减去10％。在一些实施例中，术语“约”是指所指示的量加上或减去5％。
[0480]
本文中的描述阐述了示范性方法、参数及类似者。然而，应认识到，此类描述并不意图作为对本公开的范围的限制，而是作为对示范性实施例的描述而提供。
[0481]
结果
[0482]
药物设计和合成
[0483]
我们之前发现了一种有效的基于氮杂鬼臼毒素的小分子，9-(3-氟苯基)-4-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-4,9-二氢呋喃并[3,4-b]喹啉-1(3h)-酮，所述小分子在体外可阻断gbp1:pim1活性，因此被命名为su093(安德烈奥利(andreoli)等人.,《药物化学杂志(jmed chem)》,57,7916-32,2014)。本研究揭露su093对微管靶向剂(如太平洋紫杉醇)更具抗性的细胞系中的活性更高。通过此工作的动机，我们现在已经设计了并入氟(f)生物电子等排体基团的su093类似物以开发具有改进的抑制特性的优化的主导化合物su056，所述抑制特性能够减少oc疾病进展且对oc化学疗法敏感化。
[0484]
生物电子等排体基团的引入和操控在药物设计和开发过程中提供若干优点，例如提高所要生物或物理特性，降低毒性，并且甚至改变给定药物化合物的代谢。自1955年首次批准含氟药物(9α-氟皮质醇)以来，氟被认为是氢的经典生物等排体基团，已被广泛研究(弗里德和萨博,1954)。近年来，已经开发了若干策略以在药物设计中引入氟。由于引入了与羰基紧密排列的强偶极矩，且与氢相比，氟的加入会影响药物的亲脂性，增加活性位点的范德华半径(吉利斯(gillis)等人.,2015)。已知药物中的氢或甚至甲基(ch3)基团的直接置换可归因于底物对胞内氧化代谢的敏感性的改变而产生改进的效力。这已在太平洋紫杉醇的情况下发现，其中紫杉醇衍生物(3'-二氟乙烯基类紫杉醇)中的两个甲基取代氟的取代使效力提高至少1,000倍(库兹涅佐娃(kuznetsova)等人.,2012)。另外，此二氟紫杉醇衍生物对cyp 450酶的代谢改性具有抗性。基于这些观察，我们通过在环e中引入氟作为生物等排基团来修改我们之前报告的化合物su093，以获得新的azp衍生物su056(图1a)，如补充信息中所描述，使用类似于su093的多组分反应合成(安德烈奥利(andreoli)等人.,2014)。
[0485]
azp治疗抑制卵巢癌细胞增殖
[0486]
在对hek293、sh-sy5y和n27细胞系进行额外筛选的情况下，针对卵巢癌细胞系组(ovcar-3、ovcar-4、ovcar-5、ovcar-8和skov-3)筛选azp类似物。我们测试azp剂量与人类卵巢癌细胞系和id8鼠类卵巢癌细胞系的活力之间的关系。如图1b中所示，su056与su093相比显示48h处理之后的ic
50
值降低(在ovcar4、ovcar5和id8细胞中，此降低至多2倍)，也在图1c和1d中所示的细胞集落分析中反映的倾向，其中抑制剂都以剂量依赖性和显著方式在ovcar-8和id8细胞中降低oc集落形成。另一方面，su093在0.5&1μm浓度下适度地影响skov-3。
[0487]
依托泊苷为天然鬼臼毒素和用于治疗许多癌症的经过批准的化学疗法药物。依托泊苷的主要限制是长期治疗中的神经病和神经毒性的潜力。我们在10μm给药的sh-sysy和n27神经元细胞系上测试依托泊苷、su093和su056的细胞毒性作用48小时以比较神经毒性分布。通过mtt分析的细胞存活率发现su056在49.54％(n27)和28.51％(sh-sy5y)下的细胞毒性显著小于依托泊苷(图1e)。这些结果表明生物等排体修饰改进了在降低的神经毒性副作用的情况下抑制oc增殖的总体功效。
[0488]
azp处理抑制细胞循环抑制、细胞凋亡和细胞迁移抑制
[0489]
为了确定增殖抑制是否为驱动在azp处理下可见的oc活力降低的主要因素，我们使用碘化丙锭和非fitc染色与流式细胞测量术来测量处理后细胞周期阶段的分布。数据展示亚g1和g1期中的oc线的显著的剂量依赖性停滞，且同时在细胞周期的s或g2/m期中的细胞的比例中减小(图1f)。su056展示比su093更大的细胞周期停滞。此趋势再次以每一经处理的培养物中的细胞凋亡细胞的比例反映，其中azp处理在所有给药和所研究的每一oc管
线中显著增加细胞凋亡(图1g)。此外，在boyden腔室分析中，对于细胞迁移，su093在不同oc细胞系中抑制细胞迁移40-46％(1μm，p《0.05)。然而，su056处理最有效，因为其在相同细胞系中引起78-87％(1μm，p《0.05)抑制(图1h)。这些数据显示su056处理介导的细胞周期停滞，显著降低增殖和迁移。
[0490]
azp体内抑制肿瘤恶化&癌转移
[0491]
这些有前景的结果使得我们体内测试su093和su056。将c57bl/6小鼠皮下植入有2x106萤火虫荧光素酶(luc+)表达id-8同基因型卵巢癌细胞。一旦肿瘤达到大小100mm3，我们开始用20mg/kg的su093和su056进行每日腹膜内处理(媒剂对照物含30％peg-300的盐水)。通过生物发光成像(ivis)监测肿瘤生长。su093和su056处理与通过处理时段的媒剂控制相比显著延迟肿瘤进展(图2a和2b)。在42天，肿瘤重量的最终评估显示su056处理引起肿瘤重量减少2倍，而su093使肿瘤收缩1.5倍(图2c)。这伴有对血液化学物质指示(例如天冬氨酸转氨酶(ast)、丙氨酸转氨酶(alt)或碱性磷酸酶(图2d))的显著影响，显示每日su056和su093为良好耐受的处理方案。
[0492]
由于先前观察到用两种药物处理的oc细胞的迁移性显著降低(图1h)，我们还测量药物处理对卵巢癌转移的影响。在以上实验结束时，将肺固定并且在解剖显微镜下对转移性病灶计数，接着将h&e染色。如经由组织学评分所评估，在经su056处理的小鼠中的癌转移的测量显示出肺转移减少3倍(图2e和图2f)。基于这些数据和所有分析中的优良性能，我们选择su056用于进一步研究。
[0493]
目标识别：su056与和瘤形成相关的蛋白质相互作用
[0494]
细胞热漂移分析(cetsa)是基于引起蛋白质热稳定性漂移的蛋白质-配位体相互作用的原理(萨维斯基(savitski)等人，2014)。当蛋白质与配位体相互作用时，其热稳定性增加，且此原理允许识别由小分子或药物候选物接合的哪些蛋白质目标。我们使用此分析来识别su056的蛋白质目标。ovcar8细胞用su056(2.5μm)处理1.5h，并且分析蛋白质裂解物的热漂移。热图表示在存在和不存在su056的情况下与37℃相比较的804种可溶性蛋白质的热稳定性(图3a)。在媒剂对照和su056处理的细胞中鉴别出77％的蛋白质，并且97％的这些蛋白质通过将调节到熔点曲线的标准。dmso和su056处理的蛋白质组之间热稳定性的压缩表明su056处理增加了细胞蛋白质组的整体稳定性(图3a、3b和3c)。在804种可溶性蛋白质中，su056处理显著增加p值《0.01和rsq》0.7的六种蛋白质的热稳定性(图3d)。这六种蛋白质为ybx1(yb-1)、tmsb10、sumo2、psmb2、tmsb4x和calm3(图3d)。具有和不具有su056的这些蛋白质的熔解曲线表明su056将yb-1、tmsb10、sumo2、psmb2、tmsb4x和calm3的热稳定性分别提高了5.92
±
0.86、5.89
±
1.18、5.4
±
1.08、5.36
±
0.76、4.43
±
1.31和4.03
±
1.07℃(图3e和3f)。此结果使用蛋白质印迹(wb)进一步验证(图8a)。这些蛋白质中的所有六个先前已经报告促成癌发生。
[0495]
su056处理抑制yb-1
[0496]
在所识别的六个目标中，我们选择其热漂移在su056存在下高于5的蛋白质用于在处理之后进一步研究蛋白质表达。用dmso和su056(1、2.5和5μm)处理12小时的ovcar8细胞的蛋白质印迹分析表明su056处理以剂量依赖性方式抑制yb-1、tmsb10、sumo2和pmsb2蛋白质(图4a)。su056强烈地抑制yb-1表达，并且此外考虑yb-1与许多致癌蛋白质处理抗性因子的相互作用的功能使得我们选择yb-1以用于进一步验证。为了研究su056处理的体内作用，
我们经由免疫组织化学(ihc)分析id8肿瘤异种移植样品。对于媒剂和su056(20mg/kg)处理的肿瘤中的yb-1和mdr1表达，ihc表明su056强烈抑制yb-1表达，接着下调下游mdr1(图4b)。为了识别su056对yb-1的较广泛影响和其在不同卵巢癌细胞系中的下游蛋白质/活性，我们选择六种不同细胞系并且用su056(2.5μm)处理其12h。分析细胞的yb-1和cd44表达和多重耐药性1(mdr1，abc泵介导的排出)。结果表明此处理将yb-1表达抑制28-56％并且伴随cd44表达降低36-70％并且mdr表达降低41-63％(图4c)。此结果表明su056广泛地抑制跨越不同oc细胞系的yb-1，而无关于其遗传背景和癌症阶段。为了计算su056的50％yb-1抑制浓度(ic
50
)，我们使用su056(0.01、0.1、1、10μm)处理ovcar4、ovcar8和skov3细胞系12h并且使用yb-1elisa分析yb-1表达。ovcar4、ovcar8和skov3的ic
50
值分别为5.6
±
0.36μm、3.2
±
0.19μm和3.7
±
0.21μm(图4d)。最后，我们测试su056对yb-1表达的时间动力学和剂量依赖性影响。用su056(1、2.5和5μm)处理ovcar4、ovcar8和skov3细胞处理3、6、12和24h并且使用yb-1elisa测量yb-1表达。结果表明su056处理以时间和剂量依赖性方式抑制yb-1(图4e)。持续24h的5μm处理在所有三种oc细胞中完全抑制yb-1(100％)(图4e)。此结果进一步符合使用稳定地表达mcherry标记的yb-1的ovcar8细胞。yb-1ovcar8细胞的焦点成像和荧光强度测量还表明su056处理抑制yb-1表达时间和剂量依赖性方式(图8b和8c)。总的来说，yb-1表达和其下游因素的结果(图4)表明su056是yb-1蛋白质的强抑制剂和其活性。
[0497]
su056生物分子性地结合到yb-1且其细胞活性是yb-1依赖性的
[0498]
先前，我们的小组报告su093与gbp1相互作用且抑制gbp1:pim1相互作用(安德烈奥利等人，2014)。su056为su093的第二代小分子衍生物，且为确认其是否具有与su093相同的分子目标，我们使用生物素标记的su056执行下拉分析(图5a)。从用生物素化su056处理的细胞和来自蛋白质裂解物的细胞中下调指示su056与yb-1物理地相互作用但不与gbp1物理地相互作用(图5b)。此结果表明，尽管su093和su056具有结构相似性，但其目标非常不同。在进一步支持此情况下，我们执行表面等离子体共振(spr)筛选以测量yb-1与su093或su056之间的正交生物物理结合。将his标记的yb-1蛋白质固定在ge nta芯片上，且测试su093和su056的不同浓度(1-100μm)结合(图5cd)。spr结果还支持su056:yb-1与su093(图5c)相比具有较强生物物理学相互作用(图5d)。为了检查su056活性对yb-1表达的依赖性，我们还使用慢病毒shrna载体的转导用yb-1敲低来测试ovcar8细胞。使用两种不同shrna序列(ybx1-shrna1和ybx1-shrna2)，且这两者在yb-1表达中产生与加扰对照(sc)转导的细胞(图5e)相比80-90％的抑制。使用具有和不具有su056(1μm)的这三种细胞系进行细胞集落分析。结果表明yb-1敲低细胞与sc细胞相比对su056处理更具有抗性(图5f)。此外，我们还使用敲低细胞进行细胞存活分析以计算ic
50
值。sc细胞的su056的ic
50
为3.54μm(
±
0.21)且对于ybx1-shrna1和ybx1-shrna2分别为15.84(
±
0.13)和19.15(
±
0.34)(图5g)。yb-1敲低使ic
50
值与sc相比增加约5倍。这些结果显示su056的作用取决于yb-1的细胞表达。
[0499]
su056调节yb-1相关蛋白质和轨迹
[0500]
cetsa结果展示su056与yb-1物理地相互作用且抑制其和其活性。为了研究su056对yb-1蛋白质稳定性的影响，我们使用环己酰亚胺追踪(chx)分析。环己酰亚胺为蛋白质翻译抑制剂且用作分子生物学工具以确定蛋白质的半衰期。ovcar8细胞用chx和dmso或su056(2.5μm)处理，且在不同时间点(0、30、60、120、180min)收集蛋白质裂解物，接着进行yb-1免疫印迹。结果表明su056处理引起蛋白酶体降解且将yb-1的半衰期降低到约130分钟到约40
分钟(图6a)。yb-1与许多致癌蛋白质的转录和翻译相关，包括cd44、abcb1/mdr1、c-myc和bcl-2。来自dmso-或su056-(2.5μm，12h)处理的skov3和ovcar8细胞的总体细胞裂解物的免疫墨点分析表明su056处理抑制yb-1蛋白质(图6b)。这之后是cdk2、cdc25a、mdr1、cd44、c-myc和bcl-2的表达降低并且促细胞凋亡蛋白质bax的表达增加(图6b)。为了评估由su056引起的蛋白质组变化，我们进行由ovcar8细胞处理的dmso-和su056-(2.5μm，12h)的蛋白质组分析。gsea kegg对所得蛋白质体学数据的分析表明，su056处理显著诱导细胞凋亡(es＝0.792，p值-0.01)、rna降解(es＝0.783，p值-0.03)、丙氨酸、天冬氨酸酯和谷氨酸酯代谢(p值-0.02)、精氨酸和脯氨酸代谢(p值-0.04)、fcεri传讯路径(p值-0.01)、t细胞受体传讯路径(p值-0.02)、自然杀伤细胞介导的细胞毒性(p值-0.03)、t细胞受体传讯路径(p值-0.04)和fcγr介导的吞噬作用轨迹(p值-0.05)(图6c-d，表1)。另一方面，su056处理还抑制剪接体路径(es＝-0.413，p值-0.02)(图6ce，表1)。yb-1通过5'封端保护且稳定mrna(叶夫多基莫娃(evdokimova)等人,2001)且增强外显子剪接(例如，cd44的替代性拼接)(施蒂克勒(stickeler)等人.,2001)。经由su056处理的yb-1抑制来抑制剪接体路径，且诱导rna降解和细胞凋亡。这些结果表明su056主要靶向yb-1，继而抑制涉及癌症进展和tr的各种yb-1相关蛋白质和路径。
[0501]
经由su056处理的yb-1抑制使oc对太平洋紫杉醇敏感
[0502]
yb-1涉及顺铂和紫杉烷耐药性的出现(康等人，2013,莫等人，2016)。因此，我们测试su056是否与化学疗法(如太平洋紫杉醇)协同以调节yb-1。为了测量这一点，我们进行su056和太平洋紫杉醇的剂量依赖性组合研究。使用mtt分析，我们发现su056处理在0.1、0.5和1nm剂量下显著增强太平洋紫杉醇的细胞毒性作用(图s2、图7a)。用0.5或1.0μm su056处理显著降低ovcar8和skov-3oc细胞系中的细胞活力。我们使用周-塔拉莱(chou-talalay)方法计算联合指数(ci)，且发现su056和太平洋紫杉醇组合的ci值《1。ci《1表明su056与太平洋紫杉醇的生长抑制性作用的显著协同作用(图7a)。还已知abcb1/mdr1药物外排泵与yb-1在增加的紫杉醇外排和随后的癌症tr中发挥重要的下游作用。为了评估su056是否影响药物排出，我们使用alexa fluor-488标记的太平洋紫杉醇来测量体外紫杉醇排出。结果表明，su056共处理显著抑制太平洋紫杉醇的排出，相比于仅经太平洋紫杉醇处理的细胞(图7b)。排出物主要由细胞表面上存在的atp结合盒转运蛋白(abc泵)驱动(吉诺维斯(genovese)等人.,2017)。我们检查经由蛋白质印迹用媒剂、su056和太平洋紫杉醇组合处理的ovcar8细胞中mdr1和yb-1的表达。免疫结果展示单独太平洋紫杉醇处理足以上调yb-1和mdr1的表达，其接着通过组合处理su056和太平洋紫杉醇逆转(图7c)。这些结果强烈表明su056与太平洋紫杉醇的功效协同作用。
[0503]
3d球状体为经由增加的药物排出紧密地模拟tr表型的替代性肿瘤模型。我们在存在或不存在太平洋紫杉醇和su056的情况下，在具有生长因子定义的培养基的超低连接板中培养ovcar8和skov3细胞。结果展示su056与太平洋紫杉醇的组合显著地抑制由oc细胞球状体形成(图7d和7e)。经组合处理的细胞与经媒剂处理的细胞相比形成78％(ovacr8)和83％(skov3)的球状体(图7e)。
[0504]
在体内药物动力学研究中，注射20mg/kg su056引起28.19μg/ml的最大血清浓度，其中t
1/2
为约45min。然后我们测试太平洋紫杉醇和su056在植入有如上文所描述的ovcar8 oc肿瘤的nod-scid小鼠体内共处理的协同作用。给小鼠每日处理su056(10mg/kg)并且每周
处理太平洋紫杉醇(5mg/kg)腹膜内投与。太平洋紫杉醇和su056处理两者独立地展现出肿瘤生长的显著降低。然而，太平洋紫杉醇和su056的组合展现出oc肿瘤生长的更大程度的降低，有效地稳定了处理期间的疾病进展(图7f和7g)。药物组合显示对肿瘤生长的持续抑制作用，直至实验终止(图7h)。我们还使用ki-67染色(图7i)测量所切除肿瘤内的增殖指数，其展示su056和太平洋紫杉醇施加非依赖的抗增殖性作用，其协同作用以在组合时产生更大的治疗效果。这可能由在su056存在下从ovcar8细胞减少太平洋紫杉醇排出产生。
[0505]
讨论
[0506]
卵巢癌(oc)是女性中第五大最常见癌症，在美利坚合众国(usa)的总体5年生存率仅为47.6％。手术切除和化学疗法为用于oc的主要治疗，但由于转移oc的腹部扩散和紫杉烷或铂化学疗法治疗后80-90％的较高2年复发率而受到外科手术困难的限制(杰森(jayson)等人.,2014,阿加瓦尔(agarwal)和凯伊(kaye),2003)。尽管太平洋紫杉醇发挥一些作用，但复发疾病经常是tr，其中肿瘤细胞绕过或克服细胞毒性的分子机制，尽管正在进行治疗(辛格(singh)和定居者(settleman),2010,布拉戈斯隆尼(blagosklonny)和福若(fojo),1999,霍维茨(horwitz)等人，1986)。苏德(sood)组对紫杉烷耐受性oc中的tr机制的研究揭露，在经处理oc患者中显著上调yb-1，其中具有较高yb-1表达的患者具有显著较短的整体存活期(康等人，2013)。此处，我们报告足叶草毒素(podophyllotoxins)的基于氟的衍生物作为能够抑制疾病进展且与化学疗法协同作用的新颖有效且高效的yb-1抑制剂。
[0507]
βiii-微管蛋白的过度表达为太平洋紫杉醇-tr的显著特征且gbp1:pim1相互作用可以帮助活化其功能(德多纳托(de donato)等人，2012,玛莉安妮(mariani)等人，2011)。我们小组之前报道了一种小分子足叶草毒素(su093)作为gbp1:pim1相互作用的抑制剂，能够在体外克服紫杉烷耐药性(安德烈奥利等人，2014)。为了改进su093的效力，我们经由结构引导和生物电子等排体替代策略构造第二代化合物库。对此库的筛选发现基于氟的衍生物su056在不同作用机制下具有显著改进的效力和安全性。我们针对其细胞毒性作用筛选su056并且发现相比于su093改进的功效。su093和su056都引起g1细胞周期阶段停滞、细胞凋亡增加和细胞迁移抑制。两种化合物还抑制id8异种移植模型中的肿瘤进展和癌转移。在治疗期间，化合物都不引起任何肝脏毒性。在每个分析中，su056证明比su093或其它azp衍生物更有效，并且因此被选择用于进一步研究。
[0508]
我们使用细胞热漂移分析(cetsa)来识别su056的靶标且发现此化合物与yb-1、tmsb10、sumo2、psmb2、tmsb4x和calm3相互作用。靶标识别表明，su056抑制在卵巢和/或其它癌症中具有致癌作用的蛋白质。发现su056处理以剂量和时间依赖性方式在不同的oc细胞系中降低yb-1的表达。我们的实验证实，su056处理与yb-1强烈相互作用，且抑制其相关下游蛋白质和路径。su056使oc细胞停滞于g1期并且还抑制g1/s期的关键驱动因素(cdk2和cdc25a)。另一方面，yb-1在cdc25a的磷酸化和激活中发挥作用以驱动g1/s期进程(赵等人,2016)且yb-1的敲低引起g0/g1期停滞(哈拉达(harada)等人,2014)。cd44、c-myc和mdr1是由yb-1调节的最显著的致癌下游蛋白质，且su056处理显著抑制其表达。yb-1为参与细胞质中的核蛋白细丝形成的mrna结合蛋白质(克列托夫(kretov)等人，2019)。连同yb-2和yb-3一起，yb-1结合单链rna/dna的冷休克域(格罗曼(graumann)和马拉赫尔(marahiel),1998)。其涉及细胞质和细胞核中的穿梭核酸(松本(matsumoto)和沃尔夫(wolffe),1998)。在细胞质中，其调节rna稳定性、翻译活性和替代性剪接。(长凯(chansky)等人，2001)。在细
胞核中，其结合特定启动子序列以调节致癌蛋白质的转录，包括mdr1(巴尔古(bargou)等人，1997)。su056介导的yb-1抑制显著上调rna降解路径，同时抑制剪接体路径；结果与关于yb-1功能的文献一致。共同地，su056:yb-1相互作用经由蛋白酶体降解抑制不同oc细胞系中的yb-1活性，且抑制肿瘤进展和tr中涉及的各种下游因子。这些结果确认，su056的yb-1抑制特异性活性为新药物候选物。
[0509]
此外，我们还研究su056与太平洋紫杉醇组合的作用，并且我们发现10mg/kg的较低剂量的su056增强太平洋紫杉醇治疗的细胞毒性效应。此效应可能是因为用su056的共处理降低太平洋紫杉醇在oc细胞中的排出速率。癌细胞的药物排出是tr发展的重要机制之一(李和二阶堂(nikaido),2009,哥特斯曼(gottesman)和帕斯坦(pastan),2015)。排出主要由细胞表面上存在的atp结合盒(abc)转运蛋白驱动。此超家族包括abcb1(也称为多重耐药性1(mdr1)p-糖蛋白)、abcc1(mrp1)和abcg2(bcrp/mxr)(弗莱彻(fletcher)等人，2010)。太平洋紫杉醇为abcb1的底物，且太平洋紫杉醇处理上调其在不同癌症类型中的表达(哥特斯曼和帕斯坦,1993)。abc转运蛋白是癌症进展和tr两者的标志，且已被视为潜在治疗靶标。已开发abcb1化学抑制剂，但迄今为止，第一、第二和第三代化合物在临床试验中失败。第一代化合物具有毒性问题，而第二代化合物(如伐司扑达(valspodar))与太平洋紫杉醇或卡铂的组合在卵巢癌或腹膜癌患者中未展现出治疗益处(洛姆(lhomme)等人，2008)。第三代抑制剂唑喹达(zosuquidar)也未能展现出任何益处(鲁夫(ruff)等人,2009)，此使得mdr1和tr表型的抑制成为未满足的临床目标。在测试太平洋紫杉醇、su056和其组合对mdr1和yb-1的表达的效应中，我们发现太平洋紫杉醇处理上调yb-1和mdr1两者的表达，而su056单独或与太平洋紫杉醇的组合显著降低mdr1和yb-1。这由太平洋紫杉醇排出数据支持，所述数据显示su056处理抑制mdr1并且产生太平洋紫杉醇的较高细胞内浓度和活性。
[0510]
肿瘤球状体(共同3d细胞培养模型)已用于检查治疗后的狭窄、排出和mdr1表达变化(瓦滕贝格(wartenberg)等人，2005,瓦滕贝格等人，1998,陈等人，2017)。在我们的研究中，用太平洋紫杉醇与su056的组合治疗oc细胞显著抑制其球状体形成能力，这表明肿瘤产生潜力降低。耐紫杉烷性卵巢癌细胞系的前述转录组分析已揭露yb-1和mdr1两者的水平升高(孙(sun)等人，2015,桑野(kuwano)等人，2004,施塔(shiota)等人，2014,吴等人，2007)。yb-1与疾病进展和tr中所涉及的abc转运蛋白和上皮细胞向间叶细胞转化相关蛋白质的转录调节有关(林(lim)等人，2018,吴等人，2014,叶夫多基莫(evdokimova)等人，2009)。用太平洋紫杉醇进行的su056共处理足以在ovcar8异种移植模型中暂停肿瘤进展。这进一步表明本文所描述的su056和其类似物提供用于oc、调理治疗功效和延长患者存活期的有前景的策略。
[0511]
综上所述，生物电子等排体替换为使su093优化改进的功效和降低的毒性的高效化学策略，产生su056和本文中所论述的对应类似物的开发。这些azp衍生物为针对yb-1报告的第一抑制剂，最终减少细胞增殖和迁移，同时使oc细胞对体外和体外太平洋紫杉醇的细胞毒性影响敏感化。表征su056治疗对不同动物模型、其它癌症类型和免疫微环境的影响的额外工作将进一步理解su056和其类似物在临床中对抗治疗抗性的可能性。
[0512]
材料和方法
[0513]
合成化合物：合成azp衍生物su093，并且如先前所报告来表征(安德烈奥利等人，2014)。遵循下文描述的方案合成su056和生物素标记su056。
[0514]
合成su056
[0515][0516]
将芳基氨基醇si(库马尔(kumar)等人.,2010)(1mmol)、3-氟苯甲醛(siii)(1.2mmol)、l-脯氨酸(0.1mmol，10mol％)和季酮酸(sii)(1.2mmol)中的溶液制备于无水乙醇(4ml)中且将反应混合物回流3-4h。在经由tlc(9:1的50％etoac/hex:mecn)消耗氨基醇组分和出现荧光点后，制备硅胶浆料，且通过快速色谱纯化，得到呈固体状的su056(0.203gm 50％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.27(td,j＝7.9,6.1hz,2h),7.10-6.98(m,4h),7.01-6.91(m,1h),6.96(s,2h),6.67-6.62(m,2h),5.97(d,j＝1.1hz,2h),5.91(d,j＝1.1hz,2h),5.15-5.00(m,4h),5.04-4.96(m,2h),4.94(s,2h),3.81(d,j＝10.5hz,1h),3.71-3.58(m,3h)。
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ172.59,161.11,150.24,147.52,143.76,131.50,130.66,130.58,124.02,118.94,114.77,114.56,113.69,110.48,101.88,96.83,94.82,66.31,58.38,48.64。c
20h16
fno5[m+h]
+
的ms-esi m/z计算值：370.1，实验值370.1。
[0517]
合成生物素标记的su056
[0518][0519]
2-(9-(3-氟苯基)-8-氧代-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-5(8h)-基)乙基3-((2-(5-((3as,4s,6ar)-2-氧代六氢-1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氨基)乙基)二硫基)丙酸酯：在氮气气氛下，将9-(3-氟苯基)-5-(2-羟基乙基)-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮(40.0mg，0.108mmol)于无水dmf(10.0ml)中的溶液用3-[2-n-(生物素基)氨基乙基二硫]丙酸(44.0mg，0.108mmol)、edc.hcl(31.1mg，0.162mmol)和dmap(19.8mg，0.162mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用水(约10ml)稀释。混合物随后用乙酸乙酯(2x 25ml)萃取。将经合并的有机相用水接着盐水溶液洗涤。有机相经na2so4干燥，过滤，且蒸发到干燥。将粗
物质使用色谱在硅胶上使用0-10％的含甲醇的二氯甲烷作为洗脱剂纯化。将经合并的纯洗脱份蒸发到干燥，得到呈灰白色固体状的所需产物(15.0mg，19％)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.28-7.21(m,1h),7.14-6.98(m,1h),6.97-6.78(m,2h),6.65-6.50(m,2h),6.42-6.21(m,1h),5.98(dt,j＝10.5,1.3hz,2h),5.38-5.23(m,1h),5.15-4.88(m,3h),4.71-4.30(m,3h),4.14-3.91(m,1h),3.90-3.79(m,1h),3.75(q,j＝7.0hz,1h),3.61-3.32(m,2h),3.19(td,j＝7.4,4.6hz,1h),2.95(ddd,j＝12.8,5.0,1.3hz,1h),2.85(dd,j＝8.3,6.2hz,2h),2.80-2.65(m,2h),2.34-2.13(m,4h),1.70(dq,j＝14.7,8.1,7.4hz,3h),1.49(q,j＝7.8hz,3h),1.36-1.13(m,2h)。lc-ms(esi-qqq)：m/z 759.2([c35h39fn4o8s3+h]+计算值759.2)。纯度》98％(rt 4.64min)。
[0520]
通用合成：本文中所描述的化合物还可以通过本领域中已知的方法制备，包括在以下文章中所描述的那些方法：具有潜在抗肿瘤活性的新颖功能化4-氮杂-2,3-二脱氢鬼臼毒素衍生物的合成,库马尔等人.,《杂环化学杂志》,47(6),1275-1282,2010年11月。
[0521][0522]
2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氨基)乙-1-醇可通过在干燥二氯甲烷和吡啶中向苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-胺中缓慢添加2-氯乙基氯甲酸酯制备。在室温下搅拌混合物2.5小时，用水洗涤，且经无水硫酸镁干燥，且在额外洗涤、浓缩和干燥之前在真空中浓缩。
[0523][0524]
所需取代的苯甲醛化合物可与季酮酸在乙醇中反应且回流30到90分钟以形成可比较地取代的(z)-3-亚苄基呋喃-2,4(3h,5h)-二酮，其随后可与2-(苯并[d][1,3]二氧杂
环戊烯-5-基氨基)乙-1-醇反应，得到所关注的最终经取代的5-(2-羟基乙基)-9-苯基-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮。合成相应氯类似物9-(3-氯苯基)-5-(2-羟基乙基)-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮亦可见于美国专利申请公开案第2017/0342086号(库马尔)中。
[0525]
方法：
[0526]
药物动力学研究：通过使用配备有agilent 1290infinity ii uhplc的agilent 6490ifunnel三重四极管(qqq)质谱仪的质量定量分析来确定su056血浆浓度。使用分析型c18柱，zorbax c18(eclipse plus，2.1x 50mm，1.8μm粒度)。流动相由60％水(用0.1％甲酸和4mm甲酸铵缓冲)和40％乙腈(用0.1％甲酸缓冲)组成。流动相的流动速率设置在0.4ml/min下并且在30℃下调节柱温度。电喷雾电离源在正离子模式下操作。质谱仪参数优化为：源温度550℃、雾化器气体(氮气)20psi、离子喷雾(is)电压5000v、碰撞能量21v。多反应监测(mrm)方法用于检测su056和内标(is)，4-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-9-苯基-4,9-二氢呋喃并[3,4-b]喹啉-1(3h)-酮，su056的类似模拟物。前体离子[m+h]+和su056的产物离子分别在m/z 370.0和m/z 274.2下监测。并且前体离子[m+h]+和is的产物离子分别在m/z 338.1和m/z 260下监测。使用su056和is的已知浓度产生校准曲线，且此曲线用于计算不同时间点处的等离子体中的su056的未知浓度。su056在时间为零时以20mg/kg的剂量腹膜内注射到每只小鼠。在注射后5分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟、240分钟和360分钟后，眼眶后收集血液。经由在7,000rpm下离心10分钟来分离血浆。从每一样品获取5μl血浆且与10μl的is溶液和990μl的ms级乙腈混合，随后涡旋30秒，接着在室温下培育5分钟。将混合物在11,000rpm下在4℃下离心15分钟，且收集上清液且通过再离心进一步清洁。每一无蛋白质血浆分数(n＝3)用于使用如上文所描述的hplc/ms mrm方法确定su056的浓度。
[0527]
表1.在使用kegg路径数据库用su056处理12小时之后，发现最显著(平均p《0.05)过程富集。以粗体展示的蛋白质在每一路径中富集。
[0528][0529][0530]
细胞系：获自nci细胞系库(dtp)的人类卵巢癌(oc)ovcar3、ovcar4、ovcar5、ovcar8和skov-3细胞系。sh-sy5y和n27细胞系自马尼什查莫利博士(美国加利福尼亚州巴克研究所)中获得。id8和萤光素酶标记的id8细胞自艾琳
·
兰金博士(美国加利福尼亚州斯坦福大学)中获得。加扰对照(sc)、ybx1敲低(1&2)和mcherry-ybx1ovcar8细胞系使用基于慢病毒的转导产生且使用嘌呤霉素抗性接着细胞短路来选择。将所有ovcar细胞维持于补充有10％fbs(美国康宁；编号35-015-cv)和1％抗生素-抗霉菌素溶液(美国吉本；编号15240062)的rpmi-1640(美国康宁；编号10-040-cv)中。将skov3和id8细胞维持于补充有10％fbs和1％抗生素-抗霉菌素溶液的dmem培养基(美国康宁；编号10-013-cv)中。将所有细胞维持在37℃和5％co2下。将sh-sy5y和n27细胞维持于补充有10％fbs和1％抗生素-抗霉菌素溶液的dmem/f12培养基(海克隆，#sh30525.01)中。将所有细胞维持在37℃和5％co2下。使用基于慢病毒载体的质粒plenti pgk blast v5-luc(w528-1)(由埃里克坎波&保罗
考夫曼赠予，出品公司，#19166)用荧光素酶标记ovcar8细胞如上文所描述维持经萤光素酶标记的细胞。
[0531]
细胞存活率分析：使用标准mtt分析方案评估细胞存活率。简单来说，将5,000个细胞接种于96孔板的每个孔中(康宁科斯达，#3598)并且使其连接24小时。在相应时间点，用相应浓度的化合物处理细胞。在dmso中制备每种化合物的储备溶液。dmso浓度保持恒定且维持低于0.1％。在每次培育之后，将在1
×
pbs中制备的50μl 0.5mg/ml mtt溶液添加到各孔中，接着在37℃和5％co2下培育1h。接着去除mtt溶液和培养基，并且将mtt甲腊晶体溶解于每孔100μl dmso中。使用多模板读取器记录每个孔的吸光度570nm以定量mtt结晶。将每个吸光度值归一化以控制并且转换成细胞存活率百分比。
[0532]
细胞集落分析：将300个悬浮的oc细胞接种于12孔板的每个孔中(康宁科斯达，#3598)并且使其连接24小时。培养基在24h之后用含有相应浓度的测试化合物的培养基替换，且培育5到8天，直至可见集落呈现于媒剂处理孔中。然后洗涤细胞并且用2％多聚甲醛固定，接着用0.5％晶体紫色洗涤和染色1h。使用去离子水对细胞进行去染色并且使其干燥。在显微镜下在100x放大率下对集落进行计数。
[0533]
细胞周期分析：将30,000个细胞接种于12孔板的每个孔中并且培育24h。用相应浓度的测试化合物处理细胞6小时。经由胰蛋白酶化收集活细胞和死细胞两者，且细胞球粒用70％乙醇固定。使用碘化丙锭(pi)混合物(80μg/ml rna酶a和50μg/ml pi于皂苷-edta溶液中)染色固定细胞，且在4℃下培育过夜。使用guava easycyte流式细胞仪(马萨诸塞州伯灵顿密理博)分析每一样品。flowjo软件计算每个细胞周期阶段的细胞％。
[0534]
凋亡细胞死亡分析：细胞经接种并且如以上细胞周期分析检定中所描述进行处理。将经处理的细胞培育24h并且收集活细胞和死细胞两者。通过遵循制造商的方案使用fitc annexin膜联蛋白v细胞凋亡检测试剂盒(bd pharmingen，加利福尼亚州圣何塞)用annexin v和pi染色细胞。guava easycyte流式细胞仪用于分析经染色细胞。
[0535]
细胞迁移分析：将1x 105个细胞接种于60mm细胞培养盘(康宁法尔孔，#353002)中并且培育24h。用相应浓度的每种化合物处理细胞12小时。以胰蛋白酶处理细胞并且收集于每个板的锥形试管中。使细胞的球粒再悬浮，且使用血细胞计数器和锥虫蓝染色计数活细胞。接着将40,000个活细胞接种于具有0.2％fbs培养基的8微米传斯维尔(康宁法尔孔，#353097)的上部腔室中。下部腔室含有10％fbs完全培养基。在37℃和5％co2下培育细胞16h。洗涤各经转移孔，轻扫非迁移性细胞，且使用75％乙醇固定。用0.5％结晶紫染色固定的传斯维尔持续1h。将去染色的传斯维尔膜切割，且使用dpx安装介质安装在载片上。在显微镜下在100x放大率下对迁移细胞进行计数。
[0536]
细胞热漂移分析(cetsa)：如先前所描述进行所述分析(萨维斯基(savitski)等人.,2014)。简单来说，ovcar8细胞用呈70％到80％汇合度的媒剂(dmso)或su056(2.5μm)处理1.5h。收集细胞且用1
×
pbs洗涤两次。将细胞粒化并且再悬浮于pbs中。对于两个组制备具有1x 106个细胞/管(在100μl pbs中)的10种不同pcr管。使用热循环仪(美国加利福尼亚州伯拉德)使试管暴露于相应温度(37℃、41℃、44℃、47℃、50℃、53℃、56℃、59℃、63℃、67℃)3分钟，接着在室温下培育2分钟。各管在液氮中快速冷冻。细胞使用冷冻/解冻循环裂解，并且通过在4℃下在14000rpm下离心30分钟来分离可溶性和不溶性洗脱份。使用制造商协议用串联质量标签(tmt)标记两组的每个温度的相等量的可溶洗脱份(马萨诸塞州，沃尔
瑟姆，赛默飞世尔科技，tmt10plextm等压标记试剂组90110)。使用lc-ms/ms一式三份地分析tmt标记的样品，如本组先前所描述(戈因(going)等人.,2018)。
[0537]
cetsa蛋白质定量、标准化、曲线拟合、斜率的估计和熔点和统计分析：在使用maxquant(考克斯和曼，2008)对媒剂和su056处理的样品中的同位素杂质进行校正后，通过基于总和的自举算法使用每个相应的tmt报告离子强度从单个肽光谱中量化蛋白质。在每一样品中，将最低温度用作参考以计算每一温度中可溶洗脱份的讯号的log2比率，且将每一讯号与最高温度进行比较以估计可溶洗脱份中的讯号损失百分比。使用波耳兹曼方程将曲线拟合到s曲线的模型用于描述不处于平衡状态的热力学系统中的统计行为，如变性曲线，使用与先前描述的相同的原理(萨维斯基(savitski)等人，2014)。为此，使用带r的强力算法最小化原始曲线和bolztmann调整曲线之间的平方和差，求解bolztmann方程以计算熔解曲线的斜率和半值以及其中一半蛋白质已经变性的温度。拟合曲线与高于0.75的相关性和小于0.01的值之间的熔点差被视为药物的特定交互物。
[0538]
免疫印迹：一旦获得接种在100mm细胞培养物中的70％一致的oc细胞，就用su056的相应浓度处理培养皿相应时间。在处理结束时，收集细胞且使用补充有停止蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(赛默科技，#78440)的m-per
tm
裂解溶液(赛默科技，#78503)裂解。使用8％/10％/12％sds-page凝胶电泳解析相等量(40-60μg)的蛋白质。蛋白质随后转移到pvdf膜(biorad，#162-01277)上。将封闭的膜与在5％脱脂牛奶tpbs中制备的相应一级抗体溶液在4℃下培养过夜，同时轻轻摇动。用相应的hrp-结合二级抗体洗涤和探测一级抗体-探测膜。蛋白质使用crescendo western hrp底物(德国密理博)检测且在ivis管腔成像系统(马萨诸塞州，沃尔瑟姆，珀金埃尔默)上观测。使用以下一级和二级抗体：yb-1(赛信通技术公司(cst)，#8475；1:2000)、tmsb10(r&d系统，#af6429；1:2000)、sumo2/3(cst，#4971；1:1000)、psmb2(贝斯实验室，#a303817at；1:1000)、mdr1(cst，#13978；1:2000)、cd44(cst，#37259；1:1000)、c-myc(novusbio，#nb600-302ss；1:2000)、cdk2(cst，#2546；1:2000)、cdc25a(cst，#3652；1:1000)、细胞周期蛋白e(cst，#4132；1:2000)、bax(cst，#5023；1:1000)、bcl-2(cst，#2876；1:1000)、gbp1(阿诺瓦，#h00002633-pw1，1:2000)、β-肌动蛋白(novusbio，#nb600-501ss；1:10000)、抗小鼠igg hrp-连接抗体(cst，#7076，1:5000)和抗兔igg hrp-连接抗体(cst，#7074，1:5000)。
[0539]
总yb-1夹层elisa：总yb-1蛋白质水平通过遵循制造商方案使用总yb1夹层elisa试剂盒(赛信通，#12543)分析。
[0540]
多重耐药性分析：su056对不同oc细胞的多重耐药性的影响遵循制造商方案通过使用多重耐药性分析试剂盒(荧光测定mdr分析)(西格玛奥德里奇，#mak161)来分析。
[0541]
cd44 elisa：su056对不同oc细胞的cd44表达的作用遵循制造商方案通过使用人类cd44 elisa试剂盒(colorimetric)(novusbio，#nbp1-86819)来分析。
[0542]
使用生物素标记的su056的下拉分析：使用生物素标记的su056进行蛋白质下拉分析。1.从细胞下拉：用2.5μm生物素标记的su056处理ovcar8细胞1.5h。收集处理的细胞且使用补充有停止蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(赛默科技，#78440)的m-per
tm
裂解溶液(赛默科技，#78503)裂解。300μg蛋白质在4℃下在摇臂上与磁性链霉抗生物素蛋白珠粒(cst，#5947)一起培育过夜。2.从细胞裂解物中下拉：收集ovcar8细胞且使用补充有停止蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(赛默科技，#78440)的m-per
tm
裂解溶液(赛默科技，#78503)裂解。将
1000μg蛋白质与10μm生物素标记的su056一起在4℃下在摇臂上培育过夜，接着在4℃下用磁性共轭链霉抗生物素蛋白珠粒(cst，#5947)培育过夜。在下拉之后，将生物素-链霉抗生物素蛋白结合物下拉且使用磁力架洗涤。在三次洗涤之后，将珠粒再悬浮于2
×
sds样品缓冲液中，接着在90℃到100℃下加热5分钟。如以上在免疫印迹中所描述，对样品进行分辨且用gbp1(阿诺瓦，#h00002633-pw1，1:2000)和yb-1(cst，#8475；1:2000)探测。来自ovcar8的具有和不具有生物素标记的su056(2.5μm)处理(输入)的蛋白质裂解物的样品，来自仅使用生物素和仅使用链霉抗生物素蛋白珠粒的下拉的样品也恢复为实验对照。
[0543]
表面等离子体共振(spr)：在25℃下使用biacore t200(通用电气医疗集团(ge healthcare))仪器进行实验。经his标记的(n端)yb-1蛋白质(novusbio，#nbp2-30101)经由his-标签捕获在nta芯片(通用电气医疗集团)上，且使用n-羟基丁二酰亚胺(nhs)和n
′‑
(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(edc)(通用电气医疗集团)经由胺耦合化学物质固定。所有小分子(su093和su056)分析实验在pbs(10mm磷酸缓冲液、2.7mm kcl、0.137nacl)运行缓冲液中进行，在补充有5％dmso时调节ph，得到ph 7.4。为了研究化合物的结合或在由10mm储备溶液制备的6种不同(1-100μm)浓度下，在75或120秒内在600秒的再生时间下以30μl/min的流动速率注射最终浓度的5％dmso。在每次注射之后，用50％dmso洗涤流动传递系统。通过注射具有4.5到5.8％范围内的连续dmso浓度的运行缓冲液产生dmso溶剂校正曲线。通过减去缺乏固定配位体的对照细胞中所测量的讯号来校正所有数据的非特异性结合。
[0544]
整体蛋白质组分析：ovcar8细胞用媒剂或su056(2.5μm)处理12小时。洗涤细胞且裂解(100mm三乙铵碳酸氢盐(teab，赛默飞世尔科技)，具有1％十二烷基硫酸钠(sds))。处理样品且用tmt标记使用制造商方案(tmtsixplex
tm
等压标记试剂组，#90061，赛默飞世尔科技，马萨诸塞州沃尔瑟姆)。使用lc-ms/ms一式三份地分析样品，如本组先前所描述(戈因等人，2018)。
[0545]
联合指数计算：使用周-塔拉莱方法计算太平洋紫杉醇和su093或su056的联合指数(ci)(周,2010)。ci值经由campusyn软件计算。ci《1，ci＝1，且ci》1指示组合的协同作用、添加作用和拮抗作用。
[0546]
太平洋紫杉醇排出分析：用5nm oregon green
tm
488结合的太平洋紫杉醇(分子探针，#p22310)处理oc细胞1小时。洗涤细胞，且在补充有10％fbs的不含酚红的dmem培养基中培育。在每个相应时间点(30、60、120、180分钟)之后，收集培养基，且离心以去除漂浮细胞。使用多模板读取器，在ex 496和em 524处读取在培养基中的排出太平洋紫杉醇的荧光强度。
[0547]
在补充有hegf、胰岛素、氢化可的松bpe和2-巯基乙醇的megm培养基(龙沙，#cc-3150)中，将密度为100/孔的oc细胞接种于超低连接24孔板(康宁，#3473)中。用各相应化合物处理细胞并且培育6到8天。在40
×
放大率下在显微镜下计数球状体的数目。在100x放大率下对每个孔的5种不同的场成像。
[0548]
体内异种移植模型和药物功效研究：所有动物实验均经美国加利福尼亚州斯坦福大学动物护理和使用委员会审查批准。将荧光素酶标记的id8(2x106)或ovcar8(5x106)细胞分别植入到6-7周龄雌性c57bl/6小鼠和nod/scid小鼠的右侧腹中。相应处理在肿瘤生长到100-200mm3直径之后开始。id8同基因型小鼠模型用媒剂(30％peg-300在盐水中)、20mg/kg su093和20mg/kg su056每日腹膜内(ip)处理42天。在处理结束时，从每个小鼠收集血液并
且分析肝脏毒性参数，包括丙氨酸转氨酶(alt)、天冬氨酸转氨酶(ast)和碱性磷酸酶(alkp)。ovcar8异种移植小鼠模型用媒剂(30％peg-300在盐水中)、5mg/kg太平洋紫杉醇(一周一次)、10mg/kg su056(每日)、太平洋紫杉醇(5mg/kg，一周一次)和su056(10mg/kg，每日)的组合处理4周。将来自两种研究的小鼠安乐死，收集肿瘤和不同器官，且将其固定在中性缓冲福尔马林中，并且进一步处理用于免疫组织化学分析。
[0549]
免疫组织化学：固定肿瘤和器官包埋于石蜡中。将每个块在5μm区段中切割，并且固定在涂有poly-l赖氨酸的载片上。使石蜡切片去石蜡化和再水合。使用immpact
tm dab试剂盒(加利福尼亚州矢量实验室)将抗体检索切片与一级抗体接着hrp结合的二级抗体和dab染色一起培育。将对比染色切片脱水，且使用vectamount
tm
(载体实验室)安装。生物素化马抗小鼠igg(加利福尼亚州载体实验室)和马抗兔igg(加利福尼亚州载体实验室)用作二级抗体。使用以下一级抗体：yb-1(赛信通，#8475；1:100)和抗mdr1(赛信通，#13978；1:500)和ki67(百进生技，#350502；1:500)。
[0550]
统计分析：使用graphpad prism 6软件分析数据的每一集合的统计显著性。每个结果以平均
±
sd表示。使用如下*指示p值：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001。
[0551]
本文提及的癌细胞中表达的ybx1蛋白质的存在可以通过本领域中已知的方法鉴别。非限制性实例包括可购自宾夕法尼亚州，利默里克，琼斯大道321，抗体在线公司，19464(目录号abin6975583)的ybx1 elisa试剂盒。
[0552]
在用于人体测试的免疫组织化学方法中，yb1(d2b12)兔mab#8475(可从以下的细胞讯号技术(cell signal technology)在线获得：https://www.cellsignal.com/products/primary-antibodies/yb1-d2b12-rabbit-mab/8475？site-search-type＝products&n＝4294956287&ntt＝ybx1&frompage＝plp。
[0553]
显著性
[0554]
迫切需要新的化学治疗策略来改进癌症的处理，其中伴随处理抗性(tr)的晚期诊断和高复发风险引起高死亡率，尽管进行了密集化学治疗处理方案。y盒结合蛋白1(yb1或ybx1)是结合到dna和rna并且与肿瘤进展和tr的出现相关联的多功能蛋白质。yb-1在各种致癌蛋白质的转录、翻译和rna稳定中起重要作用。yb-1的角色在各种癌症中极良好确立，但迄今为止不存在可用/报告的小分子抑制剂。本文中，我们报告经由yb1抑制来抑制疾病进展的新颖氮杂鬼臼毒素(azp)衍生物su056。这种一流的yb-1抑制剂可有效抑制卵巢癌(oc)细胞增殖和抗凋亡，并将细胞阻滞在g1期。此处理引起与细胞凋亡和rna降解路径相关的蛋白质的富集并且下调剪接体路径。su056体内独立地抑制卵巢癌进展，且与太平洋紫杉醇一起发挥协同作用以进一步降低疾病进展而无肝脏毒性。此外，体外机械性研究显示经由抑制药物排出和多重耐药性1(mdr1)的延迟的疾病进展，且相比于依托泊苷(etoposide)，神经毒性显著较低。这些数据表明yb-1抑制剂可以是降低oc进展、tr和降低患者死亡率的有效策略。
[0555]
数据可用性
[0556]
质谱分析蛋白质体学数据已通过pride合作伙伴存储库存放到pride档案库(http://www.ebi.ac.uk/pride/archive/)，数据集标识符为pxd022332。
[0557]
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[0616]
图1：a)引导优化su093获得su056。b)各种卵巢癌细胞上的su093和su056的ic
50
值。用su093或su056处理的oc细胞的克隆存活。将300到500个卵巢癌细胞接种/孔的12孔板并且允许连接24小时。用su093和su056处理细胞并且进一步培育7天。各孔用结晶紫染色，且在10
×
显微镜下计数集落。c)来自相应孔的代表性集落形成。d)在su093和su056处理之后形成的集落的数目。e)对于神经元(sh-sy5y，n27)和hek293细胞，在10μm浓度下的依托泊苷、su093和su056处理48h的抑制％值。f)碘化丙锭(pi)染色的ovcar8、skov3和id8细胞的细胞周期分布。su093和su056对在12h处理之后展现出g1期停滞的细胞周期分布的作用。g)su093和su056对通过annexin-fitc染色分析的细胞凋亡细胞死亡的作用。两种化合物在24h处理之后诱导卵巢癌细胞中的细胞凋亡细胞死亡。h)细胞迁移分析.在16h通过boyden室之后对细胞成像显示通过su093和su056的处理显著减少卵巢癌细胞的细胞迁移特性。数据展示为一式三份样品的平均值
±
sd。*p《0.05，相比于单向anova的相应控制，其显著不同，接着是邓尼特测试。
[0617]
图2.su093和su056抑制在c57bl/6小鼠中卵巢id-8肿瘤异种移植物生长的小鼠。小鼠皮下注射1:1比率的id-8细胞与matrigel混合，并且当肿瘤达到100mm3时开始药物处理。小鼠每日用媒剂(含30％peg300的盐水)或20mg/kg su093或su056腹膜内(ip)注射42天。a)在42天药物处理之后小鼠的代表性图像显示与对照相比肿瘤消退。b)随时间而变的肿瘤体积/小鼠。数据展示每组中的5只小鼠的平均值
±
标准差。*p《0.05，与相应对照相比。c)研究结束时的肿瘤重量/小鼠。数据展示每组中的5只小鼠的平均值
±
标准差。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，与相应对照相比。d)42天结束时的肝脏毒性参数显示对照、su093与su056之间无显著差异。e-f)肺癌转移分析。e)肺的h&e染色(红色箭头指示来自id8异种移植的癌转移)。比例尺，250μm。f)肺转移性结节的编号。数据展示每组中的5只小鼠的平均值
±
标准差。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，与相应对照相比。
[0618]
图3：使用细胞热漂移分析(cetsa)的目标识别。su056对ovcar8细胞的热蛋白质组分布的差异性分析。ovcar8细胞用dmso或su056(2.5μm)处理1.5h。收集细胞并且在各pcr管中在不同温度(37℃、41℃、44℃、47℃、50℃、53℃、56℃、59℃、63℃、67℃)下培育106个细胞。裂解细胞并且用tmt，接着lc-ms/ms分析标记相等量的可溶性蛋白质。a)用媒剂dmso(左)和su056(右)处理的卵巢癌细胞中的804种可溶性蛋白质的热稳定性的热图表示。b)在经su056处理的细胞(红色)和媒剂细胞(蓝色)中计算的蛋白质tm值的密度分布。c)tm的密度分布在su056与媒剂处理之间漂移。d)在su056和媒剂处理中计算的tm的散布图。使显著
值(p值《0.01，rsq》0.7)和识别准则的蛋白质以红色突出显示。e)在具有和不具有su056处理的情况下，所识别的前六种蛋白质(yb-1、tmsb10、sumo-2、psmb2、tmsb4x和calm3)的融合曲线。f)在su056处理后，前六种蛋白质的熔融温度(tm)的变化。
[0619]
图4：su056抑制yb-1。a)ovcar8细胞用su056(1、2.5和5μm)处理12小时，且如“方法”部分中所描述制备总细胞裂解物。对于通过cetsa(yb-1、tmsb10、sumo-2和psmb2)识别的前三个目标执行sds-page和蛋白质印迹分析。剥离膜并且用抗β-肌动蛋白抗体再探测以确保相等的蛋白质负载。b)来自对照和su056的id8肿瘤异种移植研究的肿瘤样本的免疫组织化学-yb-1和mdr1表达的相关组。子集图像在20
×
放大倍数下：比例尺，50μm。c-e)su056对yb-1和其相关蛋白质在不同卵巢癌细胞系中的影响。c)相应oc细胞用2.5μm su056处理12h并且yb-1和cd44表达，并且如“方法”部分中所描述测量多重耐药性活性。计算抑制％并且将其与相应细胞系的对照物比较。d)在12h使用总yb1夹层elisa试剂盒处理之后，确定对于oc细胞系的su056的yb-1 50％抑制浓度(ic50)。e)对于su056对oc细胞系的影响的yb-1抑制时间动力学研究。用su056(1、2.5和5μm)处理细胞3、6、12和24h。使用总yb1夹层elisa试剂盒分析yb-1。
[0620]
图5：su056与yb-1物理地相互作用。a)生物素标记的su056的结构。b)使用生物素标记的su056的下拉分析。如在“方法”章节中所描述，从ovcar8细胞和ovcar8细胞裂解物进行下拉。将两个下拉操作一式两份地运行。c-d)c)su093和d)su056的代表性资历。将经标记的yb-1蛋白质固定在nta芯片上，并且测试不同浓度的su093和su056(1-100μm)的物理相互作用，如“方法”章节中所描述。e-g)su056的细胞效应取决于yb-1表达。ovcar8细胞使用慢病毒载体用加扰对照(sc)、ybx1 shrna1和ybx1 shrna2稳定地表达。e)进行蛋白质印迹分析以符合转导细胞中的yb-1表达。f)将500个细胞(sc、shrna1、shrna2)接种/12孔板的孔并且允许连接24小时。用su056处理已转导细胞并且进一步培育7天。各孔用结晶紫染色，且在10
×
显微镜下计数集落。来自相应孔的代表性集落形成。g)su056对表达sc、ybx1 shrna1、ybx1shrna2的不同转导ovcar8细胞的ic
50
值。
[0621]
图6：su056调节yb-1相关蛋白质和路径。a)环己酰亚胺追踪分析(chx)确定su056对yb-1蛋白质稳定性的影响。数据展示为一式三份样品的平均值
±
sd。*p《0.05，相比于单向anova的相应控制，其显著不同，接着是邓尼特测试。b)如“方法”部分中所描述制备总细胞裂解物。针对yb-1、细胞周期和细胞凋亡相关标记物进行的sds-page和蛋白质印迹分析。剥离膜并且用抗β-肌动蛋白抗体再探测以确保相等的蛋白质负载。c-f)对蛋白质体学结果进行gsea以确定在ovcar8细胞系上用su056处理后kegg路径的富集。c)通过su056处理调节的路径的富集曲线图。d-e)在用su056处理之后，在丰度增加的蛋白质中观察到细胞凋亡和rna降解路径中的富集。f)在用su056处理之后，在丰度降低的蛋白质中观察到在剪接路径中的捕获。
[0622]
图7：su056处理使卵巢癌细胞敏感化以用于紫杉烷处理。a)su056对ovcar8和skov3细胞的可行性的感测作用与太平洋紫杉醇处理组合。用0.1、0.5和1μmsu056，接着0.1、0.5和1nm太平洋紫杉醇处理48h处理的细胞展现出协同细胞毒性作用。太平洋紫杉醇和su056的联合指数值。b)alexa fluor-488标记的太平洋紫杉醇排出分析显示，su056共处理抑制太平洋紫杉醇排出。c)yb-1与mdr1的免疫印迹。ovcar8细胞用媒剂(c)、太平洋紫杉醇(0.5nm，p)、su056(0.5μm，56)和太平洋紫杉醇+su056(p+56)处理12小时且制备细胞裂解
物。蛋白质在sds-page凝胶上消退且针对相应抗体进行印迹，如方法部分中所描述。剥离膜并且重新探测内参考物肌动蛋白。球体形成测定。将500个细胞在超低连接板中培养，且用各药物和其组合处理。细胞培育7天以形成球状体。d)在10x放大率下的球状体的显微图像。比例尺，250μm。e)在培育7天之后对球形体形成进行定量。数据展示为一式三份样品的平均值
±
sd。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，相比于单向anova的相应控制，其显著不同，接着是邓尼特测试。f-i)su056和太平洋紫杉醇在ovcar8异种移植模型上的组合研究。将nod-scid雌性小鼠皮下注射与以1:1比率与基质胶混合的ovcar8细胞。当肿瘤生长到200mm3时，药物处理开始。小鼠腹膜内(ip)注射有媒剂(含30％peg300的盐水)或每天10mg/kg su056每日和/或5mg/kg太平洋紫杉醇持续28天(4周)。f)在28天药物处理之后小鼠的代表性图像展示与对照相比的肿瘤消退。g)随时间而变的肿瘤体积/小鼠。h)研究结束时的肿瘤重量/小鼠。i)免疫组织化学染色。肿瘤切片用ki67染色，且对切片进行评分以用于ki67染色。数据展示每组中的5只小鼠的平均值
±
标准差。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001与相应对照相比。
[0623]
图8：a)使用蛋白质印迹分析对cetsa结果的验证。分析来自在37℃和53℃温度下暴露的对照和su056处理的细胞的细胞裂解物的表达yb-1、tmsb10和psmb2。b-c)su056处理抑制yb-1在ovcar8细胞中的表达。用mcheery标记的yb-1稳定地表达的ovcar8细胞用于这些分析。b)在10x放大率下3h处理su056(2.5和5μm)之后，使用共焦显微镜使细胞成像于mcherry-yb1。c)将2500个细胞接种于96孔板(黑色孔澄清底部)中且用su056(1-5μm)处理3h和6h。如使用多模板读取器测量相对荧光强度。数据用％存活细胞标准化且与未处理的细胞相比以百分比呈现。展示的数据为每组中5个重复的平均值
±
标准差。*p《0.05，与相应对照相比。
[0624]
图9：su056对ovcar8和skov3细胞的可行性的感测作用与太平洋紫杉醇处理组合。用0.1、0.5和1μm su056，接着0.1、0.5和1nm太平洋紫杉醇处理48h处理的细胞展现出协同细胞毒性作用。
[0625]
图10：su056的药物动力学。在以20mg/kg(n＝3)的剂量腹膜内投与药物之后，确定随时间而变(min)的su056血浆浓度。在相应时间点收集注射后等离子体并且使用如方法中所描述的lc ms/ms分析。
[0626]
图11：a)使用mtt分析评估su056的生长抑制性作用。tnbc细胞系(mda-mb-231、mda-mb-468、sum159、4t1、e0771和emt6)接种于96孔板中。第二天，用单独的媒剂(dmso)或0.005-50μm的su056在新鲜培养基中处理。在48小时处理之后，使用mtt分析测量细胞存活率。b).将总共300到600个细胞接种在12孔板的孔中，并且使其连接24小时。第二天，用su056处理细胞并且进一步培育到7到10天。各孔用结晶紫染色，且在10
×
显微镜下计数集落。来自细胞的相应孔的代表性集落形成。c)在su056处理之后形成的集落数目。d)su056对tnbc细胞中的细胞周期分布的影响。用媒剂或su056处理mda-mb-231、mda-mb-468和sum 159细胞12和24小时。在处理结束时，收集细胞并且使用流式细胞测量术分析细胞。展示g2/m期停滞的su056处理。su056在12和24hr下诱导细胞中磷-组蛋白h3的含量。
[0627]
图12.将tnbc细胞处理12和24小时并且制备总细胞裂解物。对翻译相关分子进行sds-page和蛋白质印迹分析。提供β-肌动蛋白以确保相等的蛋白质负载。su056处理抑制所有tnbc细胞a)mda-mb-231、b)mda-mb-468和c)sum 159之间的蛋白质翻译相关分子。
[0628]
图13.su056抑制tnbc模型的肿瘤异种移植。小鼠用mda-mb-231(2x 106个细胞)、mda-mb-468(5x 106个细胞)和患者延伸的异种移植suti151-pdx(2x 106个细胞)皮下注射，且当肿瘤达到100mm3时开始药物处理。小鼠通过经口途径使用经口管饲给药媒剂(含40％peg的盐水)或su056(50mg/kg)。a)随时间而变的肿瘤体积(mda-mb-231)。b)研究结束时的肿瘤重量(mda-mb-231)。c)随时间而变的体重(mda-mb-231)。d)随时间而变的肿瘤体积(mda-mb-468)。e)研究结束时的肿瘤重量(mda-mb-468)。f)随时间而变的体重(mda-mb-468)。g)研究结束时肿瘤(mda-mb-231)的代表性图像。h)研究结束时肿瘤(mda-mb-468)的代表性图像。i)随时间而变的肿瘤体积(suti151-pdx)。b)研究结束时的肿瘤重量(suti151-pdx)。c)随时间而变的体重(suti151-pdx)。
[0629]
图14.su056在balb/c中抑制4t1肿瘤异种移植。小鼠用4t1细胞皮下注射并且药物处理在植入三天之后开始。小鼠通过经口途径使用经口管饲给药媒剂(含40％peg的盐水)或su056(50mg/kg)。a)随时间而变的肿瘤体积(4t1)。b)研究结束时的肿瘤重量(4t1)。c)随时间而变的体重(4t1)。d)研究结束时肿瘤(4t1)的代表性图像。太平洋紫杉醇和su056在4t1异种移植模型中的组合。e)随时间而变的肿瘤体积(4t1)。f)研究结束时的肿瘤重量(4t1)。g)随时间而变的体重(4t1)。
[0630]
图15.su056处理在小鼠和大鼠中充分耐受。在增加的浓度剂量下的su056处理不会因为体重a)小鼠和b)大鼠改变而引起的饮食行为。不同浓度的su056处理在c)小鼠和d)大鼠之间不引起死亡。肝脏微粒体用于代谢剖析的目的。e)su056具有40分钟的平均半衰期。
[0631]
图16描绘针对以下癌细胞系的ybx1的参考标准化表达量：a)肺-imr90、a549、mrc5、h1299、nhbe、ncih460和beas2；b)淋巴细胞-jurkat、mt4、bjab、hel cells、hl60和raji；c)乳房/乳房-mcf7、mcf10、mdamb231、skbr3、mdamb468和mdamb453；d)成纤维细胞-bj、kb、ht1080、nhdf和tig；e)前列腺-lncap、pc3、du145和c42；f)其他-nalm6、daoy、jeg3和bewo；g)肾脏-293t、hek293、293f和flpin trex 293；h)血液-thp1、plb985、cem和helat4；i)卵巢-skov3、2008和ovcar3；j)皮肤-hnscc和a431；k)肉瘤-lhcnm2和u2os；l)淋巴-reh和rpmi8226；m)结肠-hct116和ht29；n)子宫颈-hela和hela s3；o)脑-shsy5y和sknmc；p)骨-k562和u2os；q)子宫-bewo；r)胰-panc1；s)神经母细胞瘤-imr32；t)巨噬细胞u937；u)肝脏-hepg2；v)角质细胞-hacat；w)胶质-h4；x)结缔组织-g401；y)骨髓-kg1细胞；和a)膀胱-t24。此信息由西奈山生物信息学中心的maayan实验室数据协调和集成中心在线提供，可访问
[0632]
https://maayanlab.cloud/archs4/gene/ybx1#correlation。
[0633]
图17：nci-60细胞系组中的su056的分析。以五个剂量(100到0.01μm)针对nci-60细胞系组分析su056持续48小时，在下表中提供ic50值。测量生长抑制并且显示为来自无抑制(黑色)到生长抑制(白色)的热图，如图17中所见。
[0634]
nci60-ic50值
[0635]
[0636]
[0637][0638]
在图18、19和20中的每一者中：tnbc细胞处理12和24小时并且制备总细胞裂解物。对翻译相关分子进行sds-page和蛋白质印迹分析。提供β-肌动蛋白以确保相等的蛋白质负载。su056处理抑制tnbc细胞中的翻译起始因素。
[0639]
star方法
[0640]
关键资源表
[0641]
[0642][0643][0644]
人类yb-1蛋白质(his标签)(诺伍斯生物目录号nbp2-30101)为具有n端his-标记
且对应于人类yb1的氨基酸1到324的重组蛋白质。来源：大肠杆菌。基因：ybx1。氨基酸序列：mgsshhhhhh ssglvprgsh mgsmsseaet qqppaappaa paslsaadtkp gttgsgagsg gpggletsaap aggdkkviat kvlgtvkwfnvrngygfinr ndtkedvfvh qtaikknnpr kylrsvgdge tvefdvvegekgaeaanvtg pggvpvqgsk yaadrnhyrr yprrrgpprn yqqnyqnsesgeknegsesa pegqaqqrrp yrrrfppyy mrrpygrrpq ysnppvqgev megadnqgag eqgrpvrqnm yrgyrprfrr gpprqrqpre dgneedkenq gdetqgqqpp qrryrrnfny rrrrpenpkp qdgketkaad ppaenssape aeqggae。

技术特征：
1.一种抑制经历表达yb1蛋白质的癌症的个体的yb1蛋白质活性的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的式(i)化合物，其中：x选自以下的群组：r1、r2、r3、r4和r5在每一种情况下各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；r6选自以下的群组：h、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基；其中所述c
1-c6烷基被0、1、2、3或4个选自f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的取代基取代；且所述c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基被0、1、2、3或4个选自c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的群组的取代基取代；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少一个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且其条件是，当x为且r2为f或cf3时，那么r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(i)化合物为式(ia)化合物：
其中n、r1、r2、r3、r4、r5和r6如权利要求1中所定义；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(i)化合物为式(ib)化合物：其中n、r2、r3、r4、r5和r6如权利要求1中所定义；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(i)化合物为式(ic)化合物：
其中n、r1、r3、r4、r5和r6如权利要求1中所定义；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(i)化合物为式(id)化合物：其中n、r1、r2、r4、r5和r6如权利要求1中所定义；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(i)化合物为式(ii)化合物：其中：
r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；r6选自以下的群组：h、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基；其中所述c
1-c6烷基被0、1、2、3或4个选自f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh的取代基取代；且所述c
3-c6环烷基、-(ch2)
n-c
3-c6环烷基、3-6元杂环、-(ch2)
n-3-6元杂环、苯基和-(ch2)
n-苯基被0、1、2、3或4个取代基c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh取代；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少一个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且其条件是当r2为f或cf3时，那么r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(i)化合物为式(iii)化合物：其中：n为在每一种情况下独立地选自1、2、3、4、5和6的群组的整数；r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少一个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且其条件是当r2为f或cf3时，那么r1、r3、r4和r5中的至少一个不为h；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。8.根据权利要求7所述的方法，其中r1选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。9.根据权利要求7和8中任一权利要求所述的方法，其中r3选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；且r1、r2、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。10.根据权利要求7、8和9中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c4氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多
晶型物或前药。11.根据权利要求7、8、9和10中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、c
1-c3氟烷基、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个选自f、c
1-c3氟烷基的群组；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。12.根据权利要求7、8、9、10和11中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、cf3、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个选自f和cf3的群组；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。13.根据权利要求7、8、9、10、11和12中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自以下的群组：h、f、cf3、sf5、cl、br、i、oh、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、cn、no2和oh；其条件是r1、r2、r3、r4和r5中的至少两个为f；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。14.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n在每一种情况下独立地为来自1、2、3、4和5的群组的整数；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。15.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n在每一种情况下独立地为来自1、2、3和4的群组的整数；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。16.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n在每一种情况下独立地为来自1、2和3的群组的整数；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。17.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n在每一种情况下独立地为来自2和3的群组的整数；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。18.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n为1；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。19.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n为2；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。20.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n为3；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。21.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n为4；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。22.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n为5；或其药学上可接受的
盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。23.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其中n为6；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。24.根据权利要求1至23中任一权利要求所述的方法，其中r6是h；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。25.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6是经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代的c
1-c6烷基：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。26.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6为c
3-c6环烷基，其中所述c
3-c6环烷基经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。27.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6为-(ch2)
n-c
3-c6环烷基，其中所述c
3-c6环烷基环经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。28.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6为3-6元杂环，其中所述杂环环经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。29.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6为-(ch2)
n-3-6元杂环，其中所述杂环环经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。30.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6为苯基，其中所述苯基环经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。31.根据权利要求1至25中任一权利要求所述的方法，其中r6为-(ch2)
n-苯基，其中所述苯基环经0、1、2、3或4个选自以下的群组的取代基取代：c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、i、oh、cn、no2和oh；或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。32.根据权利要求1至31中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的两个当存在时选自f、c
1-c4氟烷基和sf5的群组。33.根据权利要求1至32中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的两个当存在时选自f、c
1-c3氟烷基的群组。34.根据权利要求1至33中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的两个当存在时选自f和cf3的群组。
35.根据权利要求1至31中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的三个当存在时选自f和cf3的群组。36.根据权利要求1至31中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的四个当存在时选自f和cf3的群组。37.根据权利要求1至36中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的两个当存在时是f。38.根据权利要求1至36中任一权利要求所述的方法，其中r1、r2、r3、r4和r5中的三个当存在时是f。39.一种药物组合物，其包含药学上有效量的根据权利要求1至38中任一权利要求所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药，和药学上可接受的载剂或赋形剂。40.一种根据权利要求1至38中任一权利要求所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐、共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药的用途，其用于制备用以治疗表达yb1蛋白质的癌症的药剂。41.一种抑制经历表达yb1蛋白质的癌症的个体的所述yb1蛋白质的活性的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的根据权利要求1至38中任一权利要求所述的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。41.一种抑制经历表达yb1蛋白质的癌症的个体的yb1蛋白质活性的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的根据权利要求1至38中任一权利要求所述的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。42.一种使个体的表达yb1蛋白质的癌细胞对用抗癌剂治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的根据权利要求1至38中任一权利要求所述的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。43.一种使个体的表达yb1蛋白质的癌细胞对用辐射治疗敏感化的方法，所述方法包含向有需要的所述个体投与药学上有效量的根据权利要求1至38中任一权利要求所述的式(i)化合物，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。44.根据权利要求41、42和43中任一权利要求所述的方法，其中所述表达yb1蛋白质的癌症选自以下的群组：妇科癌症(包括卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌和子宫颈癌)、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤、肝癌、多发性骨髓瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、神经胶母细胞瘤、急性骨髓白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、肾癌、肾细胞癌、骨肉瘤、胰腺癌、头颈癌、鼻咽癌和胃癌。45.根据权利要求1至44中任一权利要求所述的方法，其中所述式(i)化合物为9-(3-氟苯基)-5-(2-羟基乙基)-6,9-二氢-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]呋喃并[3,4-b]喹啉-8(5h)-酮(su056)，或其药学上可接受的盐、药学上可接受的共晶、酯、溶剂合物、水合物、异
构体、互变异构体、同位素、多晶型物或前药。

技术总结
本文提供新颖氮杂鬼臼毒素类似化合物、包含其的药物组合物以及其作为Y盒蛋白质1(YB1或YBX1)的抑制剂用于治疗病况的用途，所述病况包括妇科癌症、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、神经元癌和前列腺癌、淋巴瘤和白血病。还提供了其用于使耐药性癌症对用抗癌剂和辐射治疗敏感化的方法。敏感化的方法。敏感化的方法。


技术研发人员：S
受保护的技术使用者：小利兰斯坦福大学理事会
技术研发日：2021.12.03
技术公布日：2023/9/16