透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物及其制备方法和用途与流程

1.本技术属于化妆品技术领域，具体地，涉及一种透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.在护肤品配方中，透明质酸或其盐经常与其他活性物质混合使用，然而，在混合情况下，会存在无法充分发挥活性物质功效的情况。


技术实现要素：

3.本技术的发明人发现，具有一定结构的透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物可以有效抑制il-6的表达，从而完成了本发明。
4.本技术技术方案如下：
5.1.一种透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物，其中，所述透明质酸或其盐的至少一部分羧基以酰胺键形式与谷氨酸或其盐的氨基连接。
6.2.根据项1所述的接枝化合物，其通式如式(i)所示：
[0007][0008]
其中，式(i)中r为金属离子或h，0≤x＜1，0＜y≤1，x+y＝1，n为1至2000的正整数。
[0009]
3.根据项1所述的接枝化合物，其中，
[0010]
所述接枝化合物的接枝率为20％～100％。
[0011]
4.根据项1所述的接枝化合物，其中，
[0012]
所述接枝化合物的分子量为3k-500kda。
[0013]
5.根据项1所述的接枝化合物，其中，
[0014]
所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位
移δ为4.00-4.15ppm处有特征峰；
[0015]
优选地，
[0016]
所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为2.10-2.25ppm和1.71-2.10ppm处有特征峰。
[0017]
6.一种项1-5中任一项所述的透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物的制备方法，其中，
[0018]
透明质酸或其盐的季铵碱盐的制备：将透明质酸或其盐和季铵碱混合，反应得到透明质酸或其盐的季铵碱盐；
[0019]
接枝化合物的制备：将透明质酸或其盐的季铵碱盐溶解，再加入谷氨酸或其盐、活化剂、催化剂反应，在碱性环境下水解，调节ph，得透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物。
[0020]
7.一种化妆品组合物，所述组合物包括项1-5中任一项所述的接枝化合物或项6所述方法制备的接枝化合物。
[0021]
8.项1-5中任一项所述的接枝化合物或项6所述方法制备的接枝化合物用于化妆品中的用途。
[0022]
9.项1-5中任一项所述的接枝化合物或项6所述方法制备的接枝化合物或项所述的化妆品组合物在预防和/或缓解由炎症引起的皮肤不适中的用途。
[0023]
10.项1-5中任一项所述的接枝化合物或项6所述方法制备的接枝化合物或项7所述的化妆品组合物在抗炎中的用途。
[0024]
与现有技术相比，本技术的有益效果为：
[0025]
本技术提供的透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物，能够有效发挥抗炎护肤的效果，拓展了接枝物的应用范围。
[0026]
进一步地，本发明获得了该新原料在用于抑制il-6表达时的优选结构。
附图说明
[0027]
图1示出了实施例6的1h nmr谱图。
具体实施方式
[0028]
下面结合实施例进一步说明本技术，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本技术，并非用于限制本技术。
[0029]
除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本技术作进一步的说明，但不用来限制本技术的范围。
[0030]
本技术提供了一种透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物，其中，所述透明质酸或其盐的至少一部分羧基以酰胺键形式与谷氨酸或其盐的氨基连接。
[0031]
本技术所述的透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物，可以使透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐同步作用于皮肤细胞，相较于两者的物理混合物，可以达到更优的功
效。
[0032]
所述取代度指的是在透明质酸或其盐双糖结构上通过酰胺键连接的谷氨酸或其盐与透明质酸或其盐双糖结构的摩尔数比值。
[0033]
其中，透明质酸盐涵盖未修饰的透明质酸盐，或修饰的透明质酸盐(例如乙酰化透明质酸盐)。例如可以是透明质酸的钠盐、锌盐、钙盐、镁盐等，或者这些盐的的任意组合。
[0034]
谷氨酸盐涵盖未修饰的谷氨酸盐，或修饰的谷氨酸盐。例如可以是谷氨酸的盐酸盐、醋酸盐、磺酸盐等，或者这些盐的任意组合。
[0035]
在一些实施方式中，接枝化合物的通式如式(i)所示：
[0036][0037]
其中，式(i)中r为金属离子或h，0≤x＜1，0＜y≤1，x+y＝1，n为1至2000的正整数。
[0038]
例如，x可以为0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、0.99或其之间的任意数值；
[0039]
y可以为0.01、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1或其之间的任意数值；
[0040]
n可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000或其之间的正整数。
[0041]
在本技术的一些实施方式中，接枝率可以用y/x+y表示。
[0042]
在本技术的一些实施方式中，所述接枝率是通过核磁共振波谱1h nmr测定的；其中，所述接枝率是通过核磁共振检测得到的1h nmr谱图中所述接枝化合物中谷氨酸或其盐的次甲基(-ch-质子)在偏移至4.05-4.12ppm处的峰面积积分来计算，或者是通过1h nmr谱图中所述接枝化合物中谷氨酸或其盐的2个亚甲基(-ch
2-)和透明质酸或其盐的甲基(-ch
3-)的质子峰面积积分来计算。
[0043]
在本技术的一些实施方式中，所述接枝化合物的接枝率为20％～100％，例如，可以为20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％或其之间的任意范围。
[0044]
在本技术的一些实施方式中，所述接枝化合物的分子量为3k-500kda；例如，接枝化合物的分子量可以为3kda、5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda、60kda、65kda、70kda、75kda、80kda、85kda、90kda、95kda、100kda、110kda、120kda、130kda、140kda、150kda、160kda、170kda、180kda、190kda、200kda、210kda、220kda、230kda、240kda、250kda、260kda、270kda、280kda、290kda、300kda、310kda、320kda、330kda、340kda、350kda、360kda、370kda、380kda、390kda、400kda、410kda、420kda、430kda、440kda、450kda、460kda、470kda、480kda、490kda、500kda或其之间的任意范围。
[0045]
在本技术的一些实施方式中，所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1hnmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为4.00-4.15ppm处有特征峰；优选地，所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为2.10-2.25ppm和1.71-2.10ppm处有特征峰。
[0046]
在本技术的一个具体实施方式中，接枝化合物中，所述透明质酸或其盐的至少一部分羧基以酰胺键形式与谷氨酸或其盐的氨基连接，所述接枝化合物的接枝率为20％～95％，接枝化合物的通式如式(i)所示：
[0047][0048]
其中，式(i)中r为金属离子或h，0≤x＜1，0＜y≤1，x+y＝1，n为1至2000的正整数。
[0049]
在本技术的一个具体实施方式中，接枝化合物中，所述透明质酸或其盐的至少一部分羧基以酰胺键形式与谷氨酸或其盐的氨基连接，所述接枝化合物的接枝率为20％～100％，接枝化合物的分子量为3k-500kda，所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为4.00-4.15ppm处有特征峰。
[0050]
在本技术的一个具体实施方式中，接枝化合物中，所述透明质酸或其盐的至少一部分羧基以酰胺键形式与谷氨酸或其盐的氨基连接，所述接枝化合物的接枝率为20％～100％，接枝化合物的分子量为3k-500kda，所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为4.00-4.15ppm、2.10-2.25ppm和1.71-2.10ppm处有
特征峰。
[0051]
制备本技术所述的透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物的方法没有特别的限制，其可以根据本领域常用的方法来制备，例如：将透明质酸或其盐和季铵碱混合，反应得到透明质酸或其盐的季铵碱盐；将透明质酸或其盐的季铵碱盐溶解，再加入谷氨酸或其盐、活化剂、催化剂反应，在碱性环境下水解，调节ph，得透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物(ha-glu)。
[0052]
在本技术的一个具体实施方式中，季铵碱包括四丁基氢氧化铵。
[0053]
在本技术的一个具体实施方式中，谷氨酸或其盐包括l-谷氨酸二乙酯盐酸盐。
[0054]
在本技术的一个具体实施方式中，活化剂包括2-氯-1-甲基吡啶碘盐。
[0055]
在本技术的一个具体实施方式中，催化剂包括三乙胺。
[0056]
在本技术的一个具体实施方式中，透明质酸或其盐的季铵碱盐用有机溶剂进行溶解，所述有机溶剂包括n,n-二甲基甲酰胺(dmf)。
[0057]
在本技术的一些实施方式中，透明质酸或其盐的季铵碱盐与谷氨酸或其盐的质量比为1：(0.01-1)；例如，可以为1:0.01、1:0.01、1:0.02、1:0.03、1:0.04、1:0.05、1:0.06、1:0.07、1:0.08、1:0.09、1:0.1、1:0.2、1:0.3、1:0.4、1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1或其之间的任意范围。
[0058]
在本技术的一些实施方式中，谷氨酸或其盐、活化剂、催化剂的质量比为1：(0.1-10)：(0.1-5)；例如，可以为1:0.1:0.1、1:0.1:0.2、1:0.1:0.3、1:0.1:0.4、1:0.1:0.5、1:0.1:0.6、1:0.1:0.7、1:0.1:0.8、1:0.1:0.9、1:0.1:1.0、1:0.1:2.0、1:0.1:3.0、1:0.1:4.0、1:0.1:5.0、1:0.2:0.1、1:0.2:0.2、1:0.2:0.3、1:0.2:0.4、1:0.2:0.5、1:0.2:0.6、1:0.2:0.7、1:0.2:0.8、1:0.2:0.9、1:0.2:1.0、1:0.2:2.0、1:0.2:3.0、1:0.2:4.0、1:0.2:5.0、1:0.5:0.1、1:0.5:0.2、1:0.5:0.3、1:0.5:0.4、1:0.5:0.5、1:0.5:0.6、1:0.5:0.7、1:0.5:0.8、1:0.5:0.9、1:0.5:1.0、1:0.5:2.0、1:0.5:3.0、1:0.5:4.0、1:0.5:5.0、1:1.0:0.1、1:1.0:0.2、1:1.0:0.3、1:1.0:0.4、1:1.0:0.5、1:1.0:0.6、1:1.0:0.7、1:1.0:0.8、1:1.0:0.9、1:1.0:1.0、1:1.0:2.0、1:1.0:3.0、1:1.0:4.0、1:1.0:5.0、1:2.0:0.1、1:2.0:0.2、1:2.0:0.3、1:2.0:0.4、1:2.0:0.5、1:2.0:0.6、1:2.0:0.7、1:2.0:0.8、1:2.0:0.9、1:2.0:1.0、1:2.0:2.0、1:2.0:3.0、1:2.0:4.0、1:2.0:5.0、1:5.0:0.1、1:5.0:0.2、1:5.0:0.3、1:5.0:0.4、1:5.0:0.5、1:5.0:0.6、1:5.0:0.7、1:5.0:0.8、1:5.0:0.9、1:5.0:1.0、1:5.0:2.0、1:5.0:3.0、1:5.0:4.0、1:5.0:5.0、1:10:0.1、1:10:0.2、1:10:0.3、1:10:0.4、1:10:0.5、1:10:0.6、1:10:0.7、1:10:0.8、1:10:0.9、1:10:1.0、1:10:2.0、1:10:3.0、1:10:4.0、1:10:5.0或其之间的任意范围。
[0059]
在本技术的一个具体实施方式中，将透明质酸或其盐和四丁基氢氧化铵混合，反应得到透明质酸或其盐的tba盐(ha-tba)；将透明质酸或其盐的tba盐溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，再加入2-氯-1-甲基吡啶碘盐、l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、三乙胺反应，在碱性环境下水解，调节ph，得透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝共聚物(ha-glu)。
[0060]
在本技术的一个具体实施方式中，将透明质酸或其盐和四丁基氢氧化铵混合，反应得到透明质酸或其盐的tba盐(ha-tba)；将透明质酸或其盐的tba盐溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，再加入2-氯-1-甲基吡啶碘盐、l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、三乙胺反应，在碱性环境下水解，调节ph，得透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝共聚物(ha-glu)。透明质酸或
其盐的季铵碱盐与谷氨酸或其盐的质量比为1：(0.01-1)，l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、2-氯-1-甲基吡啶碘盐、三乙胺的摩尔比为1：(0.1-10)：(0.1-5)。
[0061]
本技术还提供一种化妆品组合物，所述化妆品组合物例如可以是预防和/或缓解皮肤不适的组合物、预防和/或缓解由炎症引起的皮肤不适的组合物、抗炎组合物等中的一种。所述组合物包括本技术所述的接枝化合物。
[0062]
本技术提供了上述接枝化合物用于化妆品中的用途。
[0063]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物在预防和/或缓解由炎症引起的皮肤不适中的用途。
[0064]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物在抗炎中的用途。
[0065]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物在制备预防和/或缓解由炎症引起的皮肤不适的制品中的用途。
[0066]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物在制备抗炎的制品中的用途。
[0067]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物以非治疗目的在预防和/或缓解由炎症引起的皮肤不适中的用途。
[0068]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物以非治疗目的在抗炎中的用途。
[0069]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物在抑制il-6表达中的用途。
[0070]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物在制备抑制il-6表达的制品中的用途。
[0071]
本技术提供了上述接枝化合物或上述组合物以非治疗目的在抑制il-6表达中的用途。
[0072]
在一个具体的实施方式中，所述由炎症(例如il-6)引起的皮肤不适包括皮炎、湿疹、痤疮、白斑、皮脂分泌、瘢痕、皮肤衰老等。
[0073]
实施例实验原料来源
[0074]
表1
[0075]
[0076][0077]
实施例1制备graft-1样品
[0078]
将低分子量的透明质酸(记为lmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，低分子量的透明质酸分子量为4.7wda；
[0079]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.15g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、032g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-1。
[0080]
实施例2制备graft-2样品
[0081]
将低分子量的透明质酸(记为lmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，低分子量的透明质酸分子量为4.7wda；
[0082]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.23g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.48g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-2。
[0083]
实施例3制备graft-3样品
[0084]
将低分子量的透明质酸(记为lmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗
涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，低分子量的透明质酸分子量为4.7wda；
[0085]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.38g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.56g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-3。
[0086]
实施例4制备graft-4样品
[0087]
将低分子量的透明质酸(记为lmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，低分子量的透明质酸分子量为4.7wda；
[0088]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.46g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.56g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-4。
[0089]
实施例5制备graft-5样品
[0090]
将低分子量的透明质酸(记为lmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，低分子量的透明质酸分子量为4.7wda；
[0091]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.54g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.62g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-5。
[0092]
实施例6制备graft-6样品
[0093]
将低分子量的透明质酸(记为lmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，低分子量的透明质酸分子量为4.7wda；
[0094]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、1g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.81g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-6。
[0095]
实施例7制备graft-7样品
[0096]
将小分子量的透明质酸(记为umw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，小分子量的透明质酸分子量为3kda；
[0097]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.46g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.56g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-7。
[0098]
实施例8制备graft-8样品
[0099]
将中分子量的透明质酸(记为mmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，中分子量的透明质酸分子量为36.8wda；
[0100]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.46g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.56g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-8。
[0101]
参考例9制备graft-9样品
[0102]
将高分子量的透明质酸(记为hmw-ha)在乙醇中溶胀后进行酸化，加入无水乙醇洗涤后抽滤，将滤饼用水溶解后使用四丁基氢氧化铵调整ph至中性，抽滤并干燥得固体透明质酸的tba盐(记为ha-tba)，高分子量的透明质酸分子量为85wda；
[0103]
将2g ha-tba溶解于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，溶解完毕，向体系中加入0.79g 2-氯-1-甲基吡啶碘盐(cmpi)、0.46g l-谷氨酸二乙酯盐酸盐、0.56g三乙胺，室温搅拌过夜；反应结束，向反应体系中加入纯化水和碱进行水解，随后用酸调节ph至弱酸性，用有机溶剂沉淀和纯化，抽滤得滤饼，干燥后得样品，记为graft-9。
[0104]
表2实施例和参考例的参数
[0105][0106][0107]
注：ha-glu表示透明质酸-谷氨酸的接枝化合物。
[0108]
实验例
[0109]
实验例1
[0110]
称取实施例1-8、参考例9的样品10mg，以及分子量为4.7wda的透明质酸样品10mg，谷氨酸样品10mg，将上述样品溶于氘代水(d2o)形成澄清透明溶液。吸取适量透明溶液转入核磁管中，使用核磁共振波谱仪扫描氢谱，设定扫描次数为16次，选择溶剂为d2o，点击开始测试。获得不同接枝率的ha-glu核磁共振氢谱1h nmr。
[0111]
其中，实施例6的1h nmr谱图如图1所示。
[0112]
其中，实施例1-8、参考例9和透明质酸和谷氨酸所示的特征峰的具体分析结果见表3所示。
[0113]
表3 1
h nmr谱图中各谱峰的归属
[0114]
[0115][0116]
chemical shift：表示化学位移；coupling splitting表示耦合裂分重峰数；relative proton ratio表示相对质子数
[0117]
由表3和图1所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，相对于谷氨
酸，所述接枝化合物的来源于谷氨酸的次甲基和亚甲基的化学位移均向低位场偏移。
[0118]
在化学位移δ＝1.71-2.10ppm、δ＝2.10-2.25ppm处分别出现谷氨酸或其盐的亚甲基的特征峰；优选地，在δ＝4.00-4.15ppm处出现谷氨酸或其盐的次甲基-ch-的特征峰，δ＝4.30-4.40ppm、δ＝4.40-4.48ppm处分别出现透明质酸或其盐的-ch-的特征峰。
[0119]
ha-glu接枝化合物的接枝率计算：
[0120]
通过核磁共振波谱1h nmr，通过测定接枝物中谷氨酸氢谱积分面积来确定接枝物中的接枝摩尔比，从而确定ha-glu分子接枝率。
[0121]
具体的，测定接枝物中谷氨酸带来的次甲基-ch-质子(偏移至4.05-4.12ppm处)峰面积积分∫来判断(100％接枝率则该处的积分面积为1)；
[0122]
表4
[0123]
no.接枝率 ％∫(f1＝4.05-4.12)∫(f2.15-2.25)∫(f1.76-2.07)graft-1120.120.253.27graft-2270.270.533.52graft-3340.340.663.66graft-4470.470.973.98graft-5650.651.254.28graft-6870.871.734.74graft-7470.470.953.96graft-8470.470.963.96graft-9470.470.973.99
[0124]
实验例2
[0125]
先配置完全培养基溶液：将dmem基础培养液、fbs胎牛血清、ps双抗溶液以89:10:1的质量比混合。
[0126]
分别称取0.009g umw-ha、lmw-ha、mmw-ha、hmw-ha、glu、物理混合物、graft-1～graft-9粉末，溶解于完全培养基溶液，形成测试混合物，含量均为150μg/ml。
[0127]
其中，1号表示培养基溶液中添加为umw-ha，其中umw-ha的含量为150μg/ml；
[0128]
2号表示培养基溶液中添加为lmw-ha，其中lmw-ha的含量为150μg/ml；
[0129]
3号表示培养基溶液中添加为mmw-ha，其中mmw-ha的含量为150μg/ml；
[0130]
4号表示培养基溶液中添加为hmw-ha，其中hmw-ha的含量为150μg/ml；
[0131]
5号表示培养基溶液中添加为glu，其中glu的含量为150μg/ml；
[0132]
6号表示培养基溶液中添加为lmw-ha和glu，其中lmw-ha的含量为136μg/ml，glu的含量为14μg/ml；
[0133]
7号表示培养基溶液中添加为graft-1，其中graft-1的含量为150μg/ml；
[0134]
8号表示培养基溶液中添加为graft-2，其中graft-2的含量为150μg/ml；
[0135]
9号表示培养基溶液中添加为graft-3，其中graft-3的含量为150μg/ml；
[0136]
10号表示培养基溶液中添加为graft-4，其中graft-4的含量为150μg/ml；
[0137]
11号表示培养基溶液中添加为graft-5，其中graft-5的含量为150μg/ml；
[0138]
12号表示培养基溶液中添加为graft-6，其中graft-6的含量为150μg/ml；
[0139]
13号表示培养基溶液中添加为graft-7，其中graft-7的含量为150μg/ml；
[0140]
14号表示培养基溶液中添加为graft-8，其中graft-8的含量为150μg/ml；
[0141]
15号表示培养基溶液中添加为graft-9，其中graft-9的含量为150μg/ml。
[0142]
细胞学测试方法如下：
[0143]
1)细胞接种：按1
×
105个/孔的接种密度接种成纤维细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育24h。
[0144]
2)造模：根据试验分组，将样品组与模型对照组暴露于紫外灯光疗仪下(波长280-320nm，80mj/cm2)进行uvb辐照。
[0145]
3)给药：根据表5测试方案进行分组给药，样品组孔中加入含有受试物工作液的完全培养基，每孔加样1ml，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％ co2)中培养24h。
[0146]
4)收集细胞：培养24h后，收集细胞上清后，1ml/孔d’hanks缓冲液清洗两次，吹打裂解细胞后，收样。
[0147]
5)基因表达检测：对细胞进行rna-quick purification kit处理后收样，依据试剂盒说明书，开展rna提取、反转录及荧光定量pcr操作，采用2
‑△△
ct
方法进行结果计算，获得检测结果。
[0148]
检测结果如表5所示，实验测试的标准差为0.01。il-6相对表达量越低则表示试验样品的抑制il-6表达的功效越强。与单一的透明质酸或谷氨酸相比，如果同等量的接枝物的il-6的相对表达量更低，则表示接枝物具有协同增效的作用。本技术的接枝物与同等量的透明质酸或谷氨酸单一成分相比，il-6相对表达量均降低，与同等量的两者的物理混合物相比，il-6相对表达量也降低，表明接枝物具有协同增效的作用。
[0149]
表5
[0150]
no细胞测试的配方il-6相对表达量ncna1.0001150μg/ml umw-ha0.5182150μg/ml lmw-ha0.5383150μg/ml mmw-ha0.7174150μg/ml hmw-ha0.5625150μg/ml glu0.7536136μg/ml lmw-ha+14μg/ml glu0.7757150μg/ml graft-10.5828150μg/ml graft-20.3959150μg/ml graft-30.35710150μg/ml graft-40.13211150μg/ml graft-50.16512150μg/ml graft-60.52213150μg/ml graft-70.15214150μg/ml graft-80.30215150μg/ml graft-90.880
[0151]
虽然本案已以实施例揭露如上然其并非用以限定本案，任何所属技术领域中具有
通常知识者，在不脱离本案的精神和范围内，当可作些许的更动与润饰，故本案的保护范围当视后附的专利申请范围所界定者为准。

技术特征：
1.一种透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物，其中，所述透明质酸或其盐的至少一部分羧基以酰胺键形式与谷氨酸或其盐的氨基连接。2.根据权利要求1所述的接枝化合物，其通式如式(i)所示：其中，式(i)中r为金属离子或h，0≤x＜1，0＜y≤1，x+y＝1，n为1至2000的正整数。3.根据权利要求1所述的接枝化合物，其中，所述接枝化合物的接枝率为20％～100％。4.根据权利要求1所述的接枝化合物，其中，所述接枝化合物的分子量为3k-500kda。5.根据权利要求1所述的接枝化合物，其中，所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为4.00-4.15ppm处有特征峰；优选地，所述接枝化合物经核磁共振检测得到的1h nmr谱图中，所述接枝化合物在化学位移δ为2.10-2.25ppm和1.71-2.10ppm处有特征峰。6.一种权利要求1-5中任一项所述的透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物的制备方法，其中，透明质酸或其盐的季铵碱盐的制备：将透明质酸或其盐和季铵碱混合，反应得到透明质酸或其盐的季铵碱盐；接枝化合物的制备：将透明质酸或其盐的季铵碱盐溶解，再加入谷氨酸或其盐、活化剂、催化剂反应，在碱性环境下水解，调节ph，得透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物。7.一种化妆品组合物，所述组合物包括权利要求1-5中任一项所述的接枝化合物或权利要求6所述方法制备的接枝化合物。8.权利要求1-5中任一项所述的接枝化合物或权利要求6所述方法制备的接枝化合物用于化妆品中的用途。
9.权利要求1-5中任一项所述的接枝化合物或权利要求6所述方法制备的接枝化合物或权利要求7所述的化妆品组合物在预防和/或缓解由炎症引起的皮肤不适中的用途。10.权利要求1-5中任一项所述的接枝化合物或权利要求6所述方法制备的接枝化合物或权利要求7所述的化妆品组合物在抗炎中的用途。

技术总结
本申请提供了一种透明质酸或其盐和谷氨酸或其盐的接枝化合物及其制备方法，并且发现该接枝物在抑制IL-6表达方面具有协同增效作用，可以预防或缓解由炎症引起的皮肤不适。可以预防或缓解由炎症引起的皮肤不适。


技术研发人员：韩冬 魏健 刘喆 姜方茹
受保护的技术使用者：华熙生物科技股份有限公司
技术研发日：2023.06.25
技术公布日：2023/9/20