一种核酸清洁剂及其应用的制作方法

1.本发明属于消毒清洁技术领域，具体涉及一种核酸清洁剂及其应用。


背景技术：

2.核酸实验室污染主要包括以下几种类型：样本污染、试剂污染、环境污染、设备污染和其他污染等。样本和试剂污染排除较为简单，可更换样本和试剂或送其他实验室进行验证，环境污染和设备污染则需要对设备和环境进行彻底的消毒清洁。传统的环境和设备污染的清除方法主要有采用异丙醇、酒精或depc(焦碳酸二乙酯)进行擦拭、采用紫外灯进行照射消毒。但异丙醇和酒精等有机溶剂对人体有害，depc属于强致癌物，采用紫外灯照射杀菌费时费力。为了实验人员的实验安全，节省实验人员的宝贵时间，有必要发明一种无毒无害、省时省力的试剂来帮助清除实验室的核酸污染，提高实验的准确性。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种核酸清洁剂及其应用，以解决以下技术问题：现有核酸清除方式或试剂对人体有害且费时费力。
4.本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
5.一种核酸清洁剂，包括溶液a和溶液b；
6.所述溶液a为cuso4溶液，所述cuso4溶液的浓度为0.14-14.08g/l；
7.所述溶液b为h2o2溶液，所述h2o2溶液的质量分数为0.03％-3％；
8.所述cuso4与h2o2的摩尔比为1:1。
9.双氧水通常是作为医用消毒液使用，医用双氧水可杀灭肠道致病菌、化脓性球菌，致病酵母菌，一般用于物体表面消毒。当它与皮肤、口腔和黏膜的伤口、脓液或污物相遇时，立即分解生成氧。这种尚未结合成氧分子的氧原子，具有很强的氧化能力，与细菌接触能破坏细菌的菌体，与病毒接触可使病毒灭活。根据这一原理，强氧化能力可以让带负电荷的核酸氧化分解，破坏核酸的结构，从而达到清除核酸的目的。双氧水在一般情况下会缓慢分解成水和氧气，但分解速度极其慢，加入cuso4催化，加快反应进行，更快速有效地清除核酸，反应方程式如下：
10.cuso4+h2o2→
cuo2↓
+h2so4；
11.cuo2+h2o
→
cuo2·
h2o
→
2cu(oh)2+o2↑
12.cu(oh)2+h2so4←→
cuso4+h2o
13.2h2o2→
h2o+o2↑
14.作为本发明的进一步方案，所述cuso4溶液的溶质为无水硫酸铜粉末、五水硫酸铜晶体中的任意一种。
15.作为本发明的进一步方案，所述一种核酸清洁剂的应用，应用于材料为金属仪器及器材表面的核酸清除、消毒及灭菌，包括如下步骤：向金属仪器及器材表面喷洒溶液a后立即喷洒溶液b,静置0.5-5mi n，用乙醇擦拭即可。
16.作为本发明的进一步方案，所述金属为碳钢、铜、铝、不锈钢中任意一种。
17.本发明的有益效果：
18.(1)本发明的核酸清洁剂，包括溶液a和溶液b；溶液a为cuso4溶液，所述cuso4溶液的浓度为0.14-14.08g/l；所述溶液b为h2o2溶液，所述h2o2溶液的质量分数为0.03％-3％；所述cuso4与h2o2的摩尔比为1:1。h2o2溶液在cuso4催化下加速分解成水和氧气，从而快速有效地清除核酸，当溶液a浓度最低达到0.14g/l，溶液b的质量分数最低为0.03％时，依然能有效清除核酸；同时由于《2015危险化学品名录》中规定＞8％的h2o2属于危险化学品，3％的h2o2作为医用消毒液浓度，因此本发明h2o2溶液的质量分数最高为3％。
19.(2)本发明的核酸清洁剂对人类冠状病毒229e的灭活对数值均＞4.00，且中和剂可有效中和其对人类冠状病毒229e的残留作用，中和剂和中和产物对人类冠状病毒229e及细胞的生长基本无影响；
20.(3)本发明的核酸清洁剂对金黄色葡萄球菌(atcc 6538)、大肠杆菌(8099)分别作用0.5min、1.0min、1.5min的杀灭对数值均＞5.00；且对染金黄色葡萄球菌(atcc 6538)及染大肠杆菌(8099)样本作用时间为1min的杀灭对数值均＞3.00；
21.(4)本发明的核酸清洁剂对碳钢片、铜片、铝片、不锈钢片四种金属基本无腐蚀；
22.综上所述，本发明的核酸清洁剂可应用于材料为碳钢、铜、铝、不锈钢的仪器及器材表面的核酸清除、消毒及灭菌。
附图说明
23.下面结合附图对本发明作进一步的说明。
24.图1是本发明实施例1-4核酸清除能力验证图；
25.图2是本发明实施例3-4及对比例1-2核酸清除能力验证图。
具体实施方式
26.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
27.本发明实施例及对比例使用的试剂如表1所示：
28.表1
29.试剂规格厂家30％双氧水500ml国药集团化学试剂有限公司无水硫酸铜500g国药集团化学试剂有限公司
30.实施例1
31.一种核酸清洁剂包括如下制备步骤：
32.步骤一、溶液a配制：将140.8g无水硫酸铜粉末，加去离子水溶解定容至1000ml，混合摇匀，得浓度为14.08g/l的溶液a；
33.步骤二、溶液b配制：取100ml的30％双氧水，加去离子水定容至1000ml，混合摇匀，得3％双氧水。
34.实施例2
35.一种核酸清洁剂包括如下制备步骤：
36.步骤一、溶液a配制：取100ml实施例1步骤一制得的浓度为14.08g/l的溶液a加去离子水定容到1000ml，混合摇匀之后，得浓度为1.408g/l的溶液a；
37.步骤二、溶液b配制：取100ml实施例1步骤二制得的3％双氧水，加去离子水定容至1000ml，混合摇匀，得0.3％双氧水。
38.实施例3
39.一种核酸清洁剂包括如下制备步骤：
40.步骤一、溶液a配制：取20m l实施例1步骤一制得的浓度为14.08g/l的溶液a加去离子水定容到1000ml，混合摇匀之后，得浓度为0.28g/l的溶液a；
41.步骤二、溶液b配制：取20m l实施例1步骤二制得的3％双氧水，加去离子水定容至1000ml，混合摇匀，得0.06％双氧水。
42.实施例4
43.一种核酸清洁剂包括如下制备步骤：
44.步骤一、溶液a配制：取10m l实施例1步骤一制得的浓度为14.08g/l的溶液a加去离子水定容到1000ml，混合摇匀之后，得浓度为0.14g/l的溶液a；
45.步骤二、溶液b配制：取10m l实施例1步骤二制得的3％双氧水，加去离子水定容至1000ml，混合摇匀，得0.03％双氧水。
46.对比例1
47.一种核酸清洁剂包括如下制备步骤：
48.步骤一、溶液a配制：取6.7ml实施例1步骤一制得的浓度为14.08g/l的溶液a加去离子水定容到1000ml，混合摇匀之后，得浓度为0.09g/l的溶液a；
49.步骤二、溶液b配制：取6.7ml实施例1步骤二制得的3％双氧水，加去离子水定容至1000ml，混合摇匀，得0.02％双氧水。
50.对比例2
51.一种核酸清洁剂包括如下制备步骤：
52.步骤一、溶液a配制：取5ml实施例1步骤一制得的浓度为14.08g/l的溶液a加去离子水定容到1000ml，混合摇匀之后，得浓度为0.07g/l的溶液a；
53.步骤二、溶液b配制：取5m l实施例1步骤二制得的3％双氧水，加去离子水定容至1000m l，混合摇匀，得0.015％双氧水。
54.对实施例1-4和对比例1-2制得的一种核酸清洁剂进行如下性能测试：
55.(1)核酸清除能力验证：
56.分别向四份200ngdna中加入实施例1-4制得的核酸清洁剂[溶液a(2μl)+溶液b(2μl)]，静置5mi n后，通过琼脂糖凝胶电泳进行实验结果的验证，结果如图1所示，图1中上方的序号1-8为孔位，其中1-4号孔位内未加入核酸清洁剂，为dna原样上样电泳效果，有较亮的条带，表明核酸未被清除；5-8号孔位分别加入了实施例1-4制得的核酸清洁剂，结果显示5-8号孔位均未能观察到条带，表明核酸被降解，因此实施例1-4制得的核酸清洁剂能够有效清除核酸。
[0057]
(2)最大稀释浓度验证：
[0058]
分别向四份200ngdna中加入实施例3-4及对比例1-2制得的核酸清洁剂[溶液a(2μl)+溶液b(2μl)]，静置5min后，通过琼脂糖凝胶电泳进行实验结果的验证，结果如图2所示，图2中上方的序号1-6为孔位，其中1-2号孔位内未加入核酸清洁剂，为dna原样上样电泳效果，有较亮的条带，表明核酸未被清除；3-4号孔位分别加入了对比例2、对比例1制得的核酸清洁剂，依然存在条带，表明核酸未被完全清除；5-6号孔位分别加入了实施例4、实施例3制得的核酸清洁剂，结果显示5-6号孔位均未能观察到条带，表明核酸被降解，因此核酸清洁剂最大稀释到实施例4制得的核酸清洁剂的浓度，仍可有效清除核酸。
[0059]
(3)人类冠状病毒229e灭活实验：
[0060]
参考《消毒技术规范》2002年版第2.1.1.10项对实施例1制得的核酸清洁剂进行病毒灭活实验：采用人类冠状病毒229e(hcov-229e)为试验用病毒株，采用mrc-5细胞(人胚肺成纤维细胞)为宿主细胞，采用含5g/l硫代硫酸钠、0.1g/l过氧化氢酶的pbs(磷酸缓冲盐溶液)为中和剂，采用3％的牛血清白蛋白为有机干扰物质，环境温度为23.0-23.5℃；相对湿度为50％-53％，进行如下试验：
[0061]
步骤1、病毒悬液制备：试验选用滴度为106tcid50/0.1ml-107tcid50/0.1ml的hcov-229e悬液与3％牛血清白蛋白有机干扰物质对倍稀释，置20℃恒温，备用；
[0062]
步骤2、中和剂鉴定试验：试验用实施例1制得的溶液a与溶液b按体积比1:1混合)，作用时间为5.0min，试验温度为20℃恒温。试验重复3次；
[0063]
步骤3、病毒灭活试验：实施例1制得的溶液a与溶液b按体积比1:1混合)，作用时间为5.0min,20℃恒温。试验重复3次；
[0064]
结果如下：
[0065]
①
中和剂鉴定试验：经3次重复试验，在20℃恒温试验条件下，第1组病毒平均滴度值为1.50，第2组病毒平均滴度值为2.35，第3组、第4组和第5组病毒平均滴度值分别为6.35、6.35和6.47，第6组为阴性对照组，如表2所示，可知经3次重复试验，在20℃恒温试验条件下，所用含5g/l硫代硫酸钠、0.1g/l过氧化氢酶的pbs的中和剂溶液可有效中和实施例1制得的核酸清洁剂对人类冠状病毒229e的残留作用，且中和剂和中和产物对人类冠状病毒229e及细胞的生长基本无影响。
[0066]
表2
[0067][0068]
②
对hcov-229e的灭活效果：经3次重复试验，在20℃恒温试验条件下，应用实施例1制得的核酸清洁剂，作用5.0min，对hcov-229e的灭活对数值均＞4.00，如表3所示，其中阴性对照细胞生长良好，无细胞病变，灭活率＝[10[对照组]-10[试验组]/10[对照组]]
×
100％。
[0069]
表3
[0070]
试验序号作用5.0min的平均灭活对数值阴性对照病毒滴度值(tcid
50
)14.006.3324.006.2334.006.59
[0071]
(4)微生物杀灭试验：
[0072]
对实施例1制得的核酸清洁剂按《消毒技术规范》卫生部2002年版第二部分2.1.1.5.5检验，用含2％硫代硫酸钠的0.03mol/lpbs溶液作为中和剂，能有效中和浓度为原液的样品对试验菌的杀灭作用，且该中和剂及中和产物对试验菌的生长繁殖及培养基均无影响，按《消毒技术规范》卫生部2002年版第二部分2.1.1.7.4、2.1.1.9.5检验，采用悬液定量杀灭法进行试验，浓度为原液的样品对金黄色葡萄球菌(atcc 6538)、大肠杆菌(8099)分别作用0.5mi n、1.0mi n、1.5mi n的杀灭对数值均＞5.00，符合规定。
[0073]
(5)对其它表面消毒模拟现场鉴定试验：
[0074]
对实施例1制得的核酸清洁剂按《消毒技术规范》卫生部2002年版第二部分2.1.2.9进行检验，用浓度为原液的该样品对30份染大肠杆菌(8099)样本进行3次消毒模拟现场鉴定试验，作用时间为1mi n，结果对30份样品的杀灭对数值均＞3.00；用浓度为原液的该样品对30份染金黄色葡萄球菌(atcc 6538)样本进行3次消毒模拟现场鉴定试验，作用时间为1mi n，结果对30份样品的杀灭对数值均＞3.00，符合标准规定。
[0075]
(6)金属腐蚀性测试：对实施例1制得的核酸清洁剂按《消毒技术规范》卫生部2002年版第二部分2.2.4检验，对四种金属的平均腐蚀速率r及腐蚀性为：碳钢片r-0.0022mm/a，基本无腐蚀；铜片r＝0.0035mm/a，基本无腐蚀；铝片r＝0.0020mm/a，基本无腐蚀；不锈钢片r＝0.0042mm/a，基本无腐蚀。
[0076]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0077]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

技术特征：
1.一种核酸清洁剂，其特征在于，包括溶液a和溶液b；所述溶液a为cuso4溶液，所述cuso4溶液的浓度为0.14-14.08g/l；所述溶液b为h2o2溶液，所述h2o2溶液的质量分数为0.03％-3％；所述cuso4与h2o2的摩尔比为1:1。2.根据权利要求1所述的一种核酸清洁剂，其特征在于，所述cuso4溶液的溶质为无水硫酸铜粉末、五水硫酸铜晶体中的任意一种。3.根据权利要求1-2任一项所述的一种核酸清洁剂的应用，其特征在于，应用于材料为金属仪器及器材表面的核酸清除、消毒及灭菌，包括如下步骤：向金属仪器及器材表面喷洒溶液a后立即喷洒溶液b,静置0.5-5min，用乙醇擦拭即可。4.根据权利要求3所述的一种核酸清洁剂的应用，其特征在于，所述金属为碳钢、铜、铝、不锈钢中任意一种。

技术总结
本发明公开了一种核酸清洁剂及其应用，属于消毒清洁技术领域，包括溶液A和溶液B；所述溶液A为CuSO4溶液，所述CuSO4溶液的浓度为0.14-16.43g/L；所述溶液B为H2O2溶液，所述H2O2溶液的质量分数为0.03％-3％；所述CuSO4与H2O2的摩尔比为1:1。本发明的核酸清洁剂可应用于材料为碳钢、铜、铝、不锈钢的仪器及器材表面的核酸清除、消毒及灭菌。本发明的核酸清洁剂对人类冠状病毒229E的灭活对数值均＞4.00；对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的杀灭对数值均＞5.00；且对染金黄色葡萄球菌及染大肠杆菌样本的杀灭对数值均＞3.00；对碳钢片、铜片、铝片、不锈钢片基本无腐蚀。不锈钢片基本无腐蚀。不锈钢片基本无腐蚀。


技术研发人员：雍金贵 彭建军 何青 周淮玉 方格格
受保护的技术使用者：通用生物（安徽）股份有限公司
技术研发日：2023.06.15
技术公布日：2023/9/20