一种填充色谱柱的制作方法与流程

1.本发明涉及色谱柱制备技术领域，特别涉及一种填充色谱柱的制作方法。


背景技术：

2.液相色谱是一种重要的定性和定量分析手段，具有样品适用范围广、分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、样品回收方便等特点，适用于分离蛋白质、核酸等不易气化或稳定性低的大分子物质，在制药、食品、环境、石化、农林、医疗卫生等领域有广泛的应用。色谱分离的原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
3.液相色谱分离的“心脏”是色谱柱。色谱柱是由色谱柱管、筛板、柱头和色谱填料构成。液相色谱柱的关键技术环节包含色谱填料技术和色谱柱装柱技术。色谱填料根据色谱分离机理可分为反相、正相、亲水作用、离子交换、体积排阻、亲和作用等等，它决定了液相色谱分离模式、分离选择性、色谱峰对称性以及色谱柱化学稳定性。另一方面，色谱柱装柱技术决定了色谱柱的柱床稳定性、柱效(理论塔板数)和使用寿命色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。
4.目前，公认的氨基液相色谱柱填装常用方法为高密度匀浆法，在固定液的涂渍时，担体和溶剂液没有做具体的描述，且担体和溶剂液溶解的过程中是不断需要搅拌的，这样会影响担体的破损，会导致色谱柱性能稳定性易受操作人员的经验水平的影响。故此，我们提出了一种填充色谱柱的制作方法。


技术实现要素：

5.本发明的主要目的在于提供一种填充色谱柱的制作方法，可以有效解决背景技术中的问题。
6.为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
7.一种填充色谱柱的制作方法，包括以下步骤：
8.s1、新填充色谱柱的清洗，选用无破损，裂开的柱管，然后用纯水、丙酮冲洗，烘干备用；
9.s2、采用静态涂渍法进行固定液的涂渍；
10.s3、采用真空泵抽气法对色谱柱进行填充；
11.s4、填充色谱柱的老化；
12.s5、密封色谱柱的两端，并做好标记，对色谱柱进行保存。
13.优选的，所述s1中，所述柱管规格为内径2～5mm，长度0.5～10m，材质为不锈钢材料。
14.优选的，所述s1中，在用纯水、丙酮冲洗前还包括采用10％naoh进行清洗，然后用自来水冲洗干净。
15.优选的，所述s2中，在涂渍前还需要计算所需要填充固定相的体积用量，所需要填充固定相的体积用量(担体用量)计算公式为：v(ml)＝(id/2)*(id/2)*π*l*1.05；
16.其中，v
‑‑‑‑
担体体积或填充量(ml)，id
‑‑‑‑
柱内径(cm)，id/2
‑‑‑‑
半径，π
‑‑‑‑
圆周率，l
‑‑‑‑‑
柱长(cm),1.05
‑‑‑‑
增加5％的保险担体余量。
17.优选的，在所述s2中，所述静态涂渍法涂渍具体包括：
18.s201、用量筒量取预先干燥好的chromosorb w担体，在天平上面称量
19.s202、在100ml烧杯中，称取dnp，加入体积大于所用担体的丙酮溶解，将gchromosorb w hp载体慢慢倾入，使载体完全浸没；
20.s203、将烧杯置于通风柜中进行干燥，并不断晃动至溶剂挥发干，然后移至烘箱中干燥,备用。
21.优选的，在所述s203中，所述在通风柜中干燥可采用自然干燥或在红外灯下干燥，且在干燥过程中不要对溶剂进行搅拌，避免担体破损。
22.优选的，在所述s3中，所述采用真空泵抽气法对色谱柱进行填充具体包括：
23.s301、填充柱的出口(接检测器一端)塞一些玻璃棉，用合适内径的软管(套紧柱子出口和真空泵)接到真空泵上；
24.s302、用一小漏斗接色谱柱的(进)口(接汽化室一端)，开启真空泵，分次把制备好的色谱固定相填充物从漏斗填入柱内，直至填料无法进入，头上留一点空隙塞上玻璃棉即可，同时标记好柱子的进口和出口。
25.优选的，在所述s302中，在填料过程中不断轻敲柱壁，使其填充得均匀紧密。
26.优选的，在所述s4中，所述填充色谱柱的老化具体包括：
27.s401、将色谱柱进口与进样口相连，出口端先不接检测器，以10～15ml/min流量通入载气(n2)；在高于柱子实际使用的最高温度10～20度，但必须低于柱子固定相的最高使用温度10～20度的条件下老化12～24小时；
28.s402、连接检测器观察基线是否平直。
29.在所述s5中，所述对色谱柱进行标记信息包括：固定液信息，载体，固定相配比，日期，用途等。
30.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
31.1、本发明通过先计算所需要填充固定相的体积用量，在固定液的涂渍时，保证溶解液要大于担体的体积，并使溶剂液需要慢慢倾入，使担体体完全浸没，增大柱容量，减少填充床以外的死体积，使得柱结构更加合理，提高了定量分析的准确度。
32.2、本发明在固定液的涂渍时，不断晃动至溶剂挥发干，避免搅拌，有效避免担体的破损，提高柱效，加快分析速度，使色谱柱达到最佳效率。
33.3、本发明填充色谱柱的制备方法简单，使用方便，降低了操作人员的经验水平对其造成的影响，成本低。
附图说明
34.图1为本发明一种填充色谱柱的制作方法的流程图。
具体实施方式
35.为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
36.在本发明的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“内”、“外”“前端”、“后端”、“两端”、“一端”、“另一端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
37.在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“设置有”、“连接”等，应做广义理解，例如“连接”，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
38.实施例
39.一种填充色谱柱的制作方法，包括以下步骤：
40.s1、新填充色谱柱的清洗，选用无破损，裂开的柱管，所述柱管规格为内径2～5mm，长度0.5～10m，材质为不锈钢材料，采用10％naoh进行清洗，然后用自来水冲洗干净，然后用纯水、丙酮冲洗，烘干备用；
41.s2、在涂渍前还需要计算所需要填充固定相的体积用量，所需要填充固定相的体积用量(担体用量)计算公式为：v(ml)＝(id/2)*(id/2)*π*l*1.05；
42.其中，v
‑‑‑‑
担体体积或填充量(ml)，id
‑‑‑‑
柱内径(cm)，id/2
‑‑‑‑
半径，π
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圆周率，l
‑‑‑‑‑
柱长(cm),1.05
‑‑‑‑
增加5％的保险担体余量，采用静态涂渍法进行固定液的涂渍，具体包括：
43.s201、用量筒量取预先干燥好的chromosorb w担体，在天平上面称量
44.s202、在100ml烧杯中，称取dnp，加入体积大于所用担体的丙酮溶解，将gchromosorb w hp载体慢慢倾入，使载体完全浸没；
45.s203、将烧杯置于通风柜中进行自然干燥或在红外灯下干燥，并不断晃动至溶剂挥发干，不要对溶剂进行搅拌，避免担体破损，然后移至烘箱中干燥,备用；
46.s3、采用真空泵抽气法对色谱柱进行填充，具体包括：
47.s301、填充柱的出口(接检测器一端)塞一些玻璃棉，用合适内径的软管(套紧柱子出口和真空泵)接到真空泵上；
48.s302、用一小漏斗接色谱柱的(进)口(接汽化室一端)，开启真空泵，分次把制备好的色谱固定相填充物从漏斗填入柱内，在填料过程中不断轻敲柱壁，使其填充得均匀紧密，直至填料无法进入，头上留一点空隙塞上玻璃棉即可，同时标记好柱子的进口和出口；
49.s4、填充色谱柱的老化，具体包括：
50.s401、将色谱柱进口与进样口相连，出口端先不接检测器，以10～15ml/min流量通入载气(n2)；在高于柱子实际使用的最高温度10～20度，但必须低于柱子固定相的最高使用温度10～20度的条件下老化12～24小时；
51.s402、连接检测器观察基线是否平直；
52.s5、密封色谱柱的两端，并做好标记，标记信息包括：固定液信息，载体，固定相配比，日期，用途等，对色谱柱进行保存。
53.通过本发明通过先计算所需要填充固定相的体积用量，在固定液的涂渍时，保证溶解液要大于担体的体积，并使溶剂液需要慢慢倾入，使担体体完全浸没，增大柱容量，减少填充床以外的死体积，使得柱结构更加合理，提高了定量分析的准确度；在固定液的涂渍时，不断晃动至溶剂挥发干，避免搅拌，有效避免担体的破损，提高柱效，加快分析速度，使色谱柱达到最佳效率；本发明填充色谱柱的制备方法简单，使用方便，降低了操作人员的经验水平对其造成的影响，成本低。
54.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

技术特征：
1.一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：包括以下步骤：s1、新填充色谱柱的清洗，选用无破损，裂开的柱管，然后用纯水、丙酮冲洗，烘干备用；s2、采用静态涂渍法进行固定液的涂渍；s3、采用真空泵抽气法对色谱柱进行填充；s4、填充色谱柱的老化；s5、密封色谱柱的两端，并做好标记，对色谱柱进行保存。2.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s1中，所述柱管规格为内径2～5mm，长度0.5～10m，材质为不锈钢材料。3.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s1中，在用纯水、丙酮冲洗前还包括采用10％naoh进行清洗，然后用自来水冲洗干净。4.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s2中，在涂渍前还需要计算所需要填充固定相的体积用量，所需要填充固定相的体积用量(担体用量)计算公式为：v(ml)＝(id/2)*(id/2)*π*l*1.05；其中，v
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担体体积或填充量(ml)，id
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柱内径(cm)，id/2
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半径，π
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圆周率，l
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柱长(cm),1.05
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增加5％的保险担体余量。5.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s2中，所述静态涂渍法涂渍具体包括：s201、用量筒量取预先干燥好的chromosorb w担体，在天平上面称量s202、在100ml烧杯中，称取dnp，加入体积大于所用担体的丙酮溶解，将gchromosorb w hp载体慢慢倾入，使载体完全浸没；s203、将烧杯置于通风柜中进行干燥，并不断晃动至溶剂挥发干，然后移至烘箱中干燥,备用。6.根据权利要求5所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s203中，所述在通风柜中干燥可采用自然干燥或在红外灯下干燥，且在干燥过程中不要对溶剂进行搅拌，避免担体破损。7.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s3中，所述采用真空泵抽气法对色谱柱进行填充具体包括：s301、填充柱的出口(接检测器一端)塞一些玻璃棉，用合适内径的软管(套紧柱子出口和真空泵)接到真空泵上；s302、用一小漏斗接色谱柱的(进)口(接汽化室一端)，开启真空泵，分次把制备好的色谱固定相填充物从漏斗填入柱内，直至填料无法进入，头上留一点空隙塞上玻璃棉即可，同时标记好柱子的进口和出口。8.根据权利要求7所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s302中，在填料过程中不断轻敲柱壁，使其填充得均匀紧密。9.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s4中，所述填充色谱柱的老化具体包括：s401、将色谱柱进口与进样口相连，出口端先不接检测器，以10～15ml/min流量通入载气(n2)；在高于柱子实际使用的最高温度10～20度，但必须低于柱子固定相的最高使用温度10～20度的条件下老化12～24小时；
s402、连接检测器观察基线是否平直。10.根据权利要求1所述的一种填充色谱柱的制作方法，其特征在于：在所述s5中，所述对色谱柱进行标记信息包括：固定液信息，载体，固定相配比，日期，用途等。

技术总结
本发明公开了一种填充色谱柱的制作方法，新填充色谱柱的清洗，选用无破损，裂开的柱管，然后用纯水、丙酮冲洗，烘干备用；采用静态涂渍法进行固定液的涂渍；采用真空泵抽气法对色谱柱进行填充；填充色谱柱的老化；密封色谱柱的两端，并做好标记，对色谱柱进行保存。本发明所述的一种填充色谱柱的制作方法，通过先计算所需要填充固定相的体积用量，在固定液的涂渍时，保证溶解液要大于担体的体积，增大柱容量，减少填充床以外的死体积，使得柱结构更加合理，提高了定量分析的准确度，在固定液的涂渍时，不断晃动至溶剂挥发干，避免搅拌，有效避免担体的破损，使色谱柱达到最佳效率，制备方法简单，操作人员的经验水平影响低，成本低。成本低。成本低。


技术研发人员：马荔
受保护的技术使用者：南京远昌检测有限公司
技术研发日：2023.05.16
技术公布日：2023/9/20