一株玫烟色虫草菌（Cordycepsfumosorosea）FJXH-02及其应用

一株玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02及其应用
技术领域
1.本发明涉及生物防治技术领域，更具体的说是涉及一株玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02及其应用。


背景技术：

2.蓟马是缨翅目(thysanoptera)昆虫的统称，虫体微小，在嫩叶、花和嫩果中取食为害。蓟马可危害600多种植物，是果蔬、花卉等多种经济农作物的重要害虫。有的蓟马还能传播植物病毒造成间接为害，使得植物病毒在作物间传播扩散，最终对作物造成毁灭性的为害。
3.由于蓟马太过微小，遍布于果实、花卉嫩叶之中，防治起来极其困难，化学药剂的过度使用使得蓟马产生严重抗药性，特别是蓟马具有入土化蛹的习性，使本来就不容易防治的蓟马难上加难，而且也不彻底。现阶段针对蓟马成虫不管是色板诱集还是植物诱集，虽然有一定的诱集效果，但是对天敌的损伤也是比较大，以上防治措施均存在一定的弊端。
4.虫生真菌是一类寄生真菌，通过侵染进入昆虫体内，并吸收昆虫营养最终导致寄主死亡。不同于化学杀虫剂，它具有种类多、安全高效、应用期长、对天敌有利、不易产生抗性及能快速大量生产等特点，常用于害虫的生物防治。现阶段绿僵菌和白僵菌商业化推广和应用最为广泛，但其防治的害虫包括蟑螂、土天牛、蛴螬、森林革蜱和长角血蜱等等，针对蓟马类害虫的寄生真菌种类很少，且不存在针对蓟马类害虫不同生育期和不同空间的有效消杀方法。
5.因此，提供一种防治蓟马类害虫的虫生真菌，以及针对蓟马类害虫不同生育期和不同空间的有效消杀方法，是本领域技术人员亟需解决的技术问题。


技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明提供了一株玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02及其应用，该玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02可寄生于蓟马类害虫体内，有效杀灭蓟马类害虫。且本发明提供的蓟马类害虫的联合防控方法中应用玫烟色虫草菌、可降解粘虫胶、新型套袋三位一体的防控措施，对蓟马类害虫不同生育期和不同空间进行消杀，从土壤虫源地(虫生真菌)、出土后(可降解粘虫胶)、作物上(缓释杀虫剂套袋)全面彻底的消灭害虫。
7.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
8.一株玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02，保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，100101，保藏日期2023年02月20日，保藏编号cgmccno.40503，分类学命名为：玫烟色虫草cordyceps fumosorosea。
9.本发明的另一目的是：提供上述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02
在防治蓟马类害虫中的应用。
10.优选地，所述蓟马类害虫为棕榈蓟马、西花蓟马、豆大蓟马、黄胸蓟马和茶黄蓟马中的一种或几种。
11.本发明的再一目的是：提供一种蓟马类害虫的联合防控方法，包括如下步骤：
12.(1)将田地翻整，再把上述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙拌匀撒于地面；
13.(2)作物茎部涂抹一圈可降解粘虫胶，防止羽化的蓟马顺着根茎部爬到作物上部；
14.(3)在挂果初期将外表带有缓释杀虫剂的纸袋对果实进行封口，防止害虫取食。
15.优选地，步骤(1)具体操作如下：
16.对于裸露田块，将田块翻整，再把上述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙拌匀撒于地面；
17.对于已有作物田地，将作物周围翻整，再把上述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙拌匀撒于地面；
18.优选地，步骤(1)所述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙的质量比为1-5：5-18。
19.优选地，步骤(1)所述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物由质量比为：2-4：40-80：2-4：7-12的玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02孢子粉、麦麸、滑石粉和大豆油组成。
20.优选地，所述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02孢子粉：含孢量为1.90
×
108个/g，活孢率为90％-100％。
21.优选地，步骤(2)所述可降解粘虫胶涂抹高度为：作物根部由下往上5-20cm。
22.优选地，步骤(1)所述田地翻整的深度为3-5cm。
23.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
24.(1)本发明提供了一株玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02及其应用，该玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02可寄生于蓟马类害虫体内，校正死亡率达95.39％，可有效杀灭蓟马类害虫。
25.(2)本发明提供的蓟马类害虫的联合防控方法中应用玫烟色虫草菌、可降解粘虫胶、新型套袋三位一体的防控措施，对蓟马类害虫不同生育期和不同空间进行消杀，从土壤虫源地(虫生真菌)、出土后(可降解粘虫胶)、作物上(缓释杀虫剂套袋)全面彻底的消灭害虫。
附图说明
26.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
27.图1附图为：玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02形态特征及培养性状；
28.注：a-b：fjxh-02菌落正面观，背面观；c-d：fjxh-02菌丝分生孢子梗和分生孢子。
具体实施方式
29.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
30.下述实施例中所涉及的玫烟色虫草菌菌株(cordyceps fumosorosea)fjxh-02保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，100101，保藏日期2023年02月20日，保藏编号cgmcc no.40503。
31.实施例1
32.本发明玫烟色虫草菌菌株(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的分离和鉴定如下：
33.1.菌株分离
34.样品来源：2022年6月中旬，收集福建省农业科学研究院植物保护研究所生物安全研究室饲养的蓟马各个虫态自然染病僵死虫尸。
35.分离步骤如下：
36.(1)在超净工作台中将收集所得蓟马僵虫浸泡在75％酒精3s；
37.(2)随后使用灭菌蒸馏水冲洗样品3次，放置在干净载玻片上，使用解剖针将虫尸分为3小块；
38.(3)使用接种针将样品接种至pda固体培养基上，其他样品重复以上操作；
39.培养条件：培养皿置于恒温培养箱中培养，培养温度27
±
1℃，湿度70％
±
5％rh，光周期14l-10d，培养7d；
40.(4)挑取菌丝进行2次转板划线分离，获得纯培养菌落。
41.自西花蓟马僵虫分离得到的菌株命名为fjxh-02，记录样品名称和分离日期，保存在4℃冰箱备用。
42.pda培养基成分：订购于北京酷来搏科技有限公司的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(pda),包含马铃薯浸粉，葡萄糖，琼脂。称取46g培养基，加入1l蒸馏水溶解，分装到三角瓶备用，121℃灭菌30min。
43.恒温培养箱：型号：pgx-250b；宁波赛福实验仪器有限公司。
44.2.菌株鉴定
45.2.1菌株培养性状和形态学特征
46.菌株fjxh-02接种在pda培养基，27℃条件下培养7d后，呈现点状放射性分布，菌落正面初期呈现白色丝绒状后颜色逐渐变为灰褐色，中间突起边缘平，菌落背面有不规则分布的褐色色素沉积团(分别如图1a和图1b附图所示)。分生孢子梗长短不一，大约6.0～13.2μm
×
1.0～2.6μm，轮状分支，分生孢子短棒状，大约1.0～2.2μm
×
3.0～4.1μm(分别如图1c和图1d附图所示)。
47.2.2分子鉴定
48.以真菌通用引物its1/its4扩增菌株fjxh-02的rdna-its序列，pcr产物纯化送测，结果表明，菌株fjxh-02的rdna-its序列长度为560bp，genbank登录号为oq581577。dna序列在ncbi进行blast比对，菌株fjxh-02与玫烟色虫草cordyceps fumosorosea(genbank登录号为mh483750.1)相似性高达99％。
49.实施例2
50.室内致病力测定
51.将分离所得菌株fjxh-02培养7d，用5ml经过灭菌处理的01％tween-80冲洗菌落，收集分生孢子液，利用血球计数板计算孢子悬液浓度，后制成浓度为1
×
104、1
×
105、1
×
106、1
×
107、1
×
108个孢子/ml孢子悬浮液。每组试验的西花蓟马成虫总数30只，设三个重复，待接菌3d后，统计死亡率，实验结果如表1所示。
52.表1 fjxh-02菌株对蓟马成虫的致病力测定
[0053] 1
×
10
41×
10
51×
10
61×
10
71×
108死亡数量(头)10/11/1012/11/1316/17/1621/21/2228/30/29校正死亡率(％)27.5630.7850.1279.9895.39
[0054]
结果分析：当fjxh-02菌株浓度达到1
×
108孢子/ml时，校正死亡率达95.39％。
[0055]
同样的，根据室内毒力测定初步试验表明，fjxh-02菌株浓度达到1
×
108孢子/ml时，花蓟马、棕榈蓟马、豆大蓟马、黄胸蓟马、茶黄蓟马和褐蓟马的校正死亡率均高于85％。
[0056]
实施例3-7中套袋表面缓释杀虫剂为：5％甲氨基阿维菌素，由深圳诺普信农化股份有限公司生产。
[0057]
实施例3-7中可降解粘虫胶：购自泉州市绿普森生物科技有限公司；
[0058]
实施例3-7选取福建省福清市东张镇濑底村芒果园作为试验地。
[0059]
实施例3(处理1)
[0060]
(1)称取玫烟色虫草菌孢子粉15g、麦麸300g、滑石粉15g、大豆油52.5g；先将少量麦麸与滑石粉混匀得到混合物，将该混合物与玫烟色虫草菌孢子粉、大豆油和余量的麦麸混匀，得到玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物。在撒施之前，将其与细沙1912.5g拌匀，深翻5cm后，均匀撒于地面。
[0061]
(2)从根部由上至下5cm的作物茎部涂抹一圈可降解粘虫胶，防止羽化的蓟马顺着根茎部爬到作物上部；
[0062]
(3)在挂果初期将外表带有5％甲氨基阿维菌素缓释杀虫剂的纸袋对果实进行封口，防止害虫取食。
[0063]
实施例4(处理2)
[0064]
(1)称取玫烟色虫草菌孢子粉15g、麦麸300g、滑石粉15g、大豆油52.5g。先将少量麦麸与滑石粉混匀得到混合物，将该混合物与玫烟色虫草菌孢子粉、大豆油和余量的麦麸混匀，得到玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物。在撒施之前，将其与1912.5g细沙拌匀，深翻5cm深后，均匀撒于地面。
[0065]
实施例5(处理3)
[0066]
将仅使用可降解粘虫胶防治蓟马类害虫。
[0067]
实施例6(处理4)
[0068]
将仅使用含5％甲氨基阿维菌素的套袋防治蓟马类害虫。
[0069]
实施例7(处理5)
[0070]
以无任何处理的芒果园作为对照组。
[0071]
每个处理共4个重复，每个重复2棵树(5个处理，共40棵树)，每棵树调查5点。调查处理前以及处理后3d、7d、15d、30d的田间蓟马发生量。田间防效结果如表2所示。
[0072]
表2不同处理防治芒果蓟马类害虫的效果
[0073][0074]
结果分析：处理1(玫烟色虫草菌+可降解粘虫胶+含缓释杀虫剂套袋)＞处理4(含5％甲氨基阿维菌素的套袋)＞处理2(玫烟色虫草菌)＞处理3(可降解粘虫胶)＞处理5(无任何处理的对照)。在各个时间段，处理1防效显著高于处理2、处理3、处理4的防效，特别是在处理后3天防效处理1是处理2、处理3、处理4的1.28-3.69倍。
[0075]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0076]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

技术特征：
1.一株玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02，其特征在于，保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2023年02月20日，保藏编号为cgmccno.40503。2.如权利要求1所述的玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02在防治蓟马类害虫中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蓟马类害虫为棕榈蓟马、西花蓟马、豆大蓟马、黄胸蓟马和茶黄蓟马中的一种或几种。4.一种蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将田地翻整，再把权利要求1所述玫烟色虫草菌(cordyceps fumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙拌匀撒于地面；(2)作物茎部涂抹一圈可降解粘虫胶，防止羽化的蓟马顺着根茎部爬到作物上部；(3)在挂果初期将外表带有缓释杀虫剂的纸袋对果实进行封口，防止害虫取食。5.根据权利要求4所述的蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，步骤(1)具体操作如下：对于裸露田块，将田块翻整，再把权利要求1所述玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙拌匀撒于地面；对于已有作物田地，将作物周围翻整，再把权利要求1所述玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙拌匀撒于地面。6.根据权利要求4所述的蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，步骤(1)所述玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02的混合物与细沙的质量比为1-5：5-18。7.根据权利要求4所述的蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，步骤(1)所述玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02的混合物由质量比为：2-4：40-80：2-4：7-12的玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02孢子粉、麦麸、滑石粉和大豆油组成。8.根据权利要求7所述的蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，所述玫烟色虫草菌(cordycepsfumosorosea)fjxh-02孢子粉的含孢子量为1.90
×
108个/g，活孢率为90％-100％。9.根据权利要求4所述的蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，步骤(2)所述可降解粘虫胶涂抹高度为：作物根部由下往上5-20cm。10.根据权利要求4所述的蓟马类害虫的联合防控方法，其特征在于，步骤(1)所述田地翻整的深度为3-5cm。

技术总结
本发明公开了一株玫烟色虫草菌(Cordycepsfumosorosea)FJXH-02及其应用。属于生物防治技术领域。本发明玫烟色虫草菌(Cordycepsfumosorosea)FJXH-02可寄生于蓟马类害虫体内，有效杀灭蓟马类害虫。且本发明提供的蓟马类害虫的联合防控方法中应用玫烟色虫草菌、可降解粘虫胶、新型套袋三位一体的防控措施，对蓟马类害虫不同生育期和不同空间进行消杀，从土壤虫源地(虫生真菌)、出土后(可降解粘虫胶)、作物上(缓释杀虫剂套袋)全面彻底的消灭害虫，为蓟马类害虫的防治提供了技术支持。持。持。


技术研发人员：陈勇 田厚军 林硕 陈艺欣 魏辉
受保护的技术使用者：福建省农业科学院植物保护研究所
技术研发日：2023.07.03
技术公布日：2023/10/6