一种脂肽及其组合物在抑制5α-还原酶活性中的应用的制作方法

一种脂肽及其组合物在抑制5
α-还原酶活性中的应用
技术领域
1.本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及脂肽及其组合物在抑制5α-还原酶活性中的应用，可用于具有抑制油脂分泌和/或收缩毛孔功效日化用品的制备。


背景技术：

2.脂肽(lipopeptide)类生物表面活性剂是一类由亲水的环状寡肽与疏水的脂肪酸链组成的两性物质，主要由芽孢杆菌属、链霉菌属等微生物产生，亲水基由多个氨基酸组成，脂肪烃链形成亲油基。根据肽环中氨基酸种类、数目以及成环基团不同，芽孢杆菌脂肽可分为表面活性素、芬芥素(也称作丰原素)、伊枯草菌素等。典型的，表面活性素由长度为12-17个碳原子的β-羟基脂肪酸与7个α-氨基酸组成。芬芥素由长度为14-17个碳原子的β-羟基脂肪酸与10个氨基酸组成。伊枯草菌素由长度为14-17个碳原子的β-氨基脂肪酸与七元肽的肽链组成。脂肽具有极低的cmc值，在100～300mg/l之间；最低可以将水的表面张力由72mn/m降低到28mn/m。在浓度(≤30mg/l)极低的情况下，依然具有较强的活性。
3.皮脂是由皮脂细胞分泌释放到毛囊的，具有保护和滋润皮肤的油脂，与汗液在人体表面形成保护人体的重要屏障。皮脂分泌过多不仅会影响个人美观和触感，还会沾染灰尘，影响正常的防护功能，更严重的堆积在毛孔中，引起毛囊堵塞导致一系列皮肤疾病。
4.现有的化妆品原料中，为了改善面部皮脂分泌过多出油的问题，主要是采用一些吸油粉末成分，例如二氧化硅、尼龙粉末、氮化硼粉末、二氧化钛、氧化锌、硅弹体等。这些成分主要来自合成成分或矿物成分，其原理是利用粉质颗粒吸收表皮皮脂，再通过柔焦、折射等光学效果或微小粉末将毛孔填补起来，使毛孔和出油看起来不那么明显，但其根本并没有改变皮脂出油的现实。另有采用化学成分或药物促使减少皮脂生成和缩小毛孔效果的做法(例如利用雄激素抑制剂等成分以控制油脂分泌量)，但在日益严格的法规和消费者天然健康的消费观念下，其应用市场是非常局限的。
5.皮脂分泌异常通常是雄性激素过多导致的，睾酮和二氢睾酮(dht)都属于雄性激素，且dht的活性是睾酮的5～10倍。5α-还原酶是定位于靶细胞微粒体上的膜蛋白，依赖还原型辅酶ⅱ(nadph)作为供氢体，5α-还原酶在nadph的催化作用下可使睾酮转变为二氢睾酮(dht)，而dht的过度表达会进一步影响皮脂腺细胞的增殖和分化，导致皮脂腺分泌过多的油脂。过高水平的二氢睾酮(dht)会引起雄激素依赖型疾病，例如痤疮、雄激素源性脱发、脂溢性皮炎、女性多毛症。
6.因此，找到一种安全高效的5α-还原酶活性抑制剂应于用日化产品中，从根本上控制皮脂异常分泌，是解决此类皮肤问题的重要解决途径。


技术实现要素：

7.本发明提供一种涉及脂肽及其组合物作为5α-还原酶抑制剂的应用，可用于具有抑制油脂分泌和/或收缩毛孔功效日化用品的制备。
8.本发明提供一种脂肽在抑制5α-还原酶活性中的应用。
9.优选实施方式中，其中所述脂肽为环状或线形脂肽，优选具有下式(i)-(iii)之一：
[0010][0011]
其中，r表示脂肪酸链的碳链，a1、a2、a3
…
am分别表示肽链上的第1、第2、第3
…
第m个氨基酸，脂肪酸的羧基与a1的n-端相连，am的c-端羧基又与脂肪酸或者肽链上其他氨基酸的羟基或氨基相连形成环状结构。线形脂肽是指环脂肽开环后形成的线形产物。
[0012]
更具体地，所述脂肽选自表面活性素家族、伊枯草菌素家族和芬芥素(也称为丰原素)家族；优选地所述脂肽为选自下组的一种或多种：表面活性素、伊枯草菌素、芬芥素、地衣素、巴比伦素、帕米拉素、芽孢菌霉素、抗霉枯草菌素、制磷脂菌素、杀镰孢菌素、库尔斯塔克素、类芽孢杆菌素、多粘菌素、八肽霉素和多肽菌素。
[0013]
优选地，其中所述脂肽是由细菌产生的，更优选所述细菌是野生菌或基因工程菌，更优选所述细菌选自下组：芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属(pseudomonas)、链霉菌属(streptomyces)和节杆菌属(arthrobacter)，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌或假单胞菌得到，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌并调控脂肽合成相关基因的表达而得到的脂肽，更优选所述脂肽合成相关基因选自下组：脂肽合成基因srfa或芬芥素合成基因fen、地衣素合成基因lic、芽孢菌霉素合成基因bam、抗霉枯草菌素myc、伊枯草菌素合成基因itu、制磷脂菌素合成基因pps、杀镰孢菌素fus、库尔斯塔克素krs、多粘菌素pmx、八肽霉素oct、跨膜运输蛋白基因ycxa、生物素羧化酶基因yngh、芽孢合成基因spoiva/b/c/f、spova/b/d/e和亮氨酸合成途径基因leuabcd/ilvk；优选地，其由枯草芽孢杆菌thy-7/pg3-srfa发酵产生。
[0014]
本发明进而提供一种抑制5α-还原酶活性的组合物，其包括脂肽为活性成分。
[0015]
本发明所述组合物，其包括脂肽重量百分数为0.0001％-99.99％，具有抑制5α-还原酶活性的功能。可列举的有，0.0002％、0.0005％、0.001％、0.005％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、2.0％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99.99％；优选为0.01～5％。
[0016]
优选地，所述组合物还包括水、增稠剂、保湿剂、皮肤调理剂、润肤剂、抗氧剂、ph调节剂、乳化剂中的一种或多种；
[0017]
优选地，所述组合物是脂肽的水溶液所述脂肽的重量百分数大于等于0.0001％，可列举的有，0.0005％、0.001％、0.005％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、
0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、2.0％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99.99％；优选为0.01～5％。
[0018]
更优选地，所述脂肽是由细菌产生的，优选所述细菌是野生菌或基因工程菌，更优选所述细菌选自下组：芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属(pseudomonas)、链霉菌属(streptomyces)和节杆菌属(arthrobacter)，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌或假单胞菌得到，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌并调控脂肽合成相关基因的表达而得到的脂肽，更优选所述脂肽合成相关基因选自下组：脂肽合成基因srfa或芬芥素合成基因fen、地衣素合成基因lic、芽孢菌霉素合成基因bam、抗霉枯草菌素myc、伊枯草菌素合成基因itu、制磷脂菌素合成基因pps、杀镰孢菌素fus、库尔斯塔克素krs、多粘菌素pmx、八肽霉素oct、跨膜运输蛋白基因ycxa、生物素羧化酶基因yngh、芽孢合成基因spoiva/b/c/f、spova/b/d/e和亮氨酸合成途径基因leuabcd/ilvk。
[0019]
尤其优选地，所述脂肽是由枯草芽孢杆菌thy-7/pg3-srfa发酵产生；更优选地，所述脂肽按如下方法制备：枯草芽孢杆菌thy-7/pg3-srfa发酵得到发酵液，将所述发酵液即可；或者进一步地，将发酵液的ph调节至酸性，脂肽表面活性素形成沉淀，再经固液分离烘干，获得含脂肽表面活性素的产品，具体地表面活性素的含量在70％以上，更具体70-99％，75-99％。
[0020]
优选地，所述增稠剂选自黄原胶、卡波姆、聚丙烯酸钠接枝淀粉、结冷胶、丙烯酸(酯)类共聚物、丙烯酸酯/c10-30烷基丙烯酸酯交链共聚物、丙烯酸(酯)类/山嵛醇聚醚-25甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、羟乙基纤维素中的一种或多种；优选地，增稠剂的重量百分数为0.01-50％,更优选为0.5-30％；
[0021]
所述保湿剂选自多元醇类保湿剂、聚醚类保湿剂、多糖类保湿剂、氨基酸类保湿剂中的一种或多种；作为多元醇类保湿剂的实例，包括但不限于，丁二醇、丙三醇、1,2-戊二醇、聚丙二醇、山梨醇、戊二醇；作为多糖类保湿剂的实例，包括但不限于，羟乙基脲、可溶性蛋白多糖、透明质酸钠、银耳多糖、木糖醇；作为聚醚类保湿剂的实例，包括但不限于，甘油聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物；
[0022]
优选地，所述保湿剂的重量百分数为0.01-50％,更优选为5-25％；
[0023]
所述皮肤调理剂的实例，包括但不限于，烟酰胺、泛醇、尿囊素、氢化卵磷脂、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮中的一种或多种；
[0024]
优选地，皮肤调理剂的重量百分数为0.01-50％,更优选为0.1-4％。
[0025]
所述润肤剂的实例，包括但不限于，牛油果树果油、鲸蜡硬脂醇、碳酸二辛酯、异壬酸异壬酯、辛酸/葵酸三甘油脂、橄榄油、霍霍巴籽油、角鲨烷、霍霍巴油、乳木果油、琥珀酸二乙氧基乙酯；
[0026]
优选地，润肤剂的重量百分数为0.01～50％,更优选为1-5％；
[0027]
所述ph调节剂的实例，包括但不限于，三乙醇胺、辛酰羟肟酸、氢氧化钠、碳酸氢钠；优选地，ph调节剂的重量百分数为0.01～50％；更优选为0.1-1％；
[0028]
所述乳化剂的实例，包括但不限于，甘油硬脂酸酯、甘油硬脂酸柠檬酸酯、失水山梨醇三油酸酯、peg-30二聚羟基硬脂酸脂、聚甘油-10异硬脂酸酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、卵磷脂、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物；优选地，乳化剂的重量百分数为0.01
～50％,,更优选为1-10％。
[0029]
本发明尤其还提供所述的组合物的应用，所述组合物作为化妆品中添加剂，优选地，所述化妆品为护肤类或洗涤类化妆品，如护肤乳液、洁面乳或爽肤水；优选地，所述化妆品用于抑制油脂分泌和/或收缩毛孔，或用于缓解痤疮、雄激素源性脱发、脂溢性皮炎、女性多毛症；
[0030]
优选地，所述护肤乳液，按重量百分数计，包括0.01～1.5％的脂肽、0.01～50％的增稠剂、0.01～50％的润肤剂、0.01～50％的保湿剂、0.01～50％的皮肤调理剂、0.01～50％的ph调节剂、0.01～50％的乳化剂和0.01～99.5％的水。
[0031]
本发明所述组合物可用于护肤类化妆品、洗涤类化妆品、面部油脂调理类产品的用途。
[0032]
本发明发现脂肽具有抑制5α-还原酶活性的功能，由此制备相应的组合物可应用于护肤类化妆品等中，使产品具有抑制油脂分泌和/或收缩毛孔的功效。对此进行了实验验证，证实本发明具有实际应用价值。
附图说明
[0033]
图1、本发明的组合物1的抑制实验。
[0034]
图2、本发明的组合物2、3和4的抑制实验。
[0035]
图3、23岁女性毛孔收缩实测图。
[0036]
图4、35岁女性毛孔收缩实测图。
具体实施方式
[0037]
为使本发明所述的技术方案更加清晰，以下结合附图和具体实施方式，对本发明进行进一步的说明。
[0038]
实施例1.脂肽组合物的制备
[0039]
1.含表面活性素的组合物的获得
[0040]
挑取枯草芽孢杆菌thy-7/pg3-srfa单菌落(cn109097315a)，接种于lb液体培养基中，37℃、200rpm条件下培养16小时，得到种子液，以5％的比例接入发酵培养基摇瓶中，37℃、200rpm条件下培养2-6小时时加入1mm iptg，继续培养至2天，即得到含表面活性素的初始发酵液。
[0041]
所使用的初始发酵培养基的组成为：糖类30-100g/l、无机氮源10-50g/l、有机氮源0.5-3g/l、kh2po40.1-1g/l、na2hpo4·
12h2o 0.5-0.3g/l、cacl
2 0.002-0.01g/l、mnso4·
h2o0.002-0.01g/l、feso4·
7h2o 0.002-0.01g/l,ph 6.5-7.5，发酵添加剂(硅类消泡剂、多糖、氨基酸或其衍生物、寡肽、磷脂、糖脂、和/或脂肪酸或其衍生物)0.01-20重量％。
[0042]
调节初始发酵液的ph至6.0-6.5之间，4℃静置过夜使溶液中的物质完全沉淀或经轻微搅动加速其沉降，最后离心得到产物即为发酵液。检测发酵液中表面活性素含量检测采用cn105400784a中公开的方法。具体为：取1ml发酵液在12000rpm条件下离心1分钟，取100μl上清液加入1900μl去离子水，混匀，经0.22μm滤膜过滤后用hplc分析。hplc分析的流动相为甲醇和水，其比例为85/15，流速为1ml/分钟，色谱柱为c18-ods反相色谱柱，柱温40℃，紫外检测器，检测波长205nm。
[0043]
通过检测可知，发酵液中的表面活性素的含量为30％。所述发酵液作为本发明的组合物1。调节发酵液的ph至酸性，表面活性素形成沉淀，固液分离后，取固体部分烘干，获得含表面活性素产品。并通过冷冻干燥获得粉末产物，测得表面活性素的含量为100％，作为本发明的组合物2。
[0044]
2.含伊枯草菌素和芬芥素的组合物的获得
[0045]
伊枯草菌素和芬芥素购自medchemexpress，分别作为本发明的组合物3和4。
[0046]
实施例2.5α-还原酶抑制活性测定
[0047]
反应原理：5α-还原酶在还原型辅酶ⅱ的催化作用下可使睾酮转变为双氢睾酮，5α-还原酶抑制剂可抑制体内5α-还原酶作用，从而抑制双氢睾酮的产生。反应体系中的还原型辅酶ⅱ在340nm处有特征吸收，参与反应后生成的氧化型辅酶ⅱ在340nm处特征吸收消失，通过用紫外分光光度法监测反应系统在340nm处的吸光度值的变化，可考察物质对5α-还原酶是否有抑制作用和抑制作用的大小。
[0048]
经反复摸索，模拟体内5α-还原酶催化反应体系，确立总体积为100μl的反应体系。睾酮、5α-还原酶、磷酸盐缓冲液、还原型辅酶ⅱ及待筛药物的比例为3∶2∶33∶12∶2。
[0049]
空白对照组：反应管中依次加入睾酮、5α-还原酶、磷酸盐缓冲液、还原型辅酶ⅱ，混匀后测定0min吸光度a340nm值，37℃恒温孵育后测定60min吸光度a340nm值，扣除还原型辅酶ⅱ空白下降本底值，得到吸光度下降值(δa0)。
[0050]
待筛物组：反应管中依次加入睾酮、5α-还原酶、待筛物、磷酸盐缓冲液、还原型辅酶ⅱ，混匀后测定0min吸光度a340nm值，37℃恒温孵育后测定60min吸光度a340nm值，扣除还原型辅酶ⅱ空白下降本底值，得到吸光度下降值(δan)。比较δa0和δan值的大小，判断酶的活性是否被抑制，并用公式i％＝(δa0-δan)/δa0
×
100％，计算抑制率的大小。
[0051]
取0.01g组合物1溶解在99.99g的水中，配制重量百分数别为0.01％的组合物1水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定；同样配制方法，继续配制为重量百分数分别为0.05％、0.50％、0.25％、0.50％、1.0％、2.50％、5.0％、10.0％、20.0％、50.0％、70.0％、90.0％、99.99％的组合物1水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定。
[0052]
如下表2所示,当本发明的组合物1的添加量为0.01％(脂肽含量为0.003％)时，抑制率达到46％左右。当组合物1的添加量为0.05％(脂肽含量为0.015％)时，抑制率达到67％左右。当本发明的组合物1的添加量为0.25％(脂肽含量为0.075％)时，抑制率超过99％。当本发明的组合物1的添加量超过约0.5％(脂肽含量为0.09％)及以上时,抑制率保持在99.99％以上。(也参见图1)。
[0053]
表2.组合物1的抑制实验(组合物1)
[0054]
[0055]
取0.01g组合物2溶解在99.99g的水中，再取上述水溶液稀释100倍，配制重量百分数别为0.0001％的组合物2水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定；同样配制方法，继续配制为重量百分数分别为0.005％、0.025％、0.050％、0.075％、0.10％、0.50％、1.0％、5.0％、10.0％、50.0％、90.0％、99.99％的组合物2水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定。
[0056]
如下表3所示,当本发明的组合物2的添加量为0.0001％(脂肽含量为0.0001％)时，抑制率达到38％左右。当组合物2的添加量为0.005％(脂肽含量为0.005％)时，抑制率达到67％左右。当本发明的组合物2的添加量为0.075％(脂肽含量为0.075％)时，抑制率超过99.9％。当本发明的组合物2的添加量超过约0.1％(脂肽含量为0.1％)及以上时,抑制率保持在100％。
[0057]
表3.组合物2的抑制实验(组合物2)
[0058][0059]
分别取0.05g组合物3和组合物4分别溶解在99.95g的水中，配制重量百分数别为0.05％的组合物3水溶液和组合物4水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定，平行测试3次。
[0060]
再分别取0.1g组合物3和组合物4分别溶解在99.9g的水中，配制重量百分数别为0.1％的组合物3水溶液和组合物4水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定，平行测试3次。
[0061]
再分别取0.15g组合物3和组合物4分别溶解在99.85g的水中，配制重量百分数别为0.15％的组合物3水溶液和组合物4水溶液进行5α-还原酶抑制活性测定，平行测试3次。
[0062]
表4.组合物3和4的抑制实验
[0063]
由结果数据可以看出(如图2所示)，含脂肽(包含表面活性素、伊枯草菌素或芬芥素)样品均可以与5α-还原酶进行特异性结合，降低5α-还原酶活性。
[0064]
实施例3、控油效果和皮肤毛孔改善情况评价实验
[0065]
本实施例中分别利用实施例1中的含脂肽组合物作为活性物，添加到化妆品基质中制备护肤乳液，并以各护肤乳液为测试样品，考察其对于控油和皮肤毛孔改善情况的效果。各测试样品的配方和生产工艺如下：
[0066]
原料含量％
[0067]
油相：
[0068][0069]
添加相：
[0070]
对羟基苯乙酮
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量
[0071]
香精
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量
[0072]
活性物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.3％
[0073]
水相：
[0074]
[0075]
生产工艺：基质(油相+水相)的制备按照传统工艺，具体是将油相中的原料依次加入油相反应釜中，水相中的原料加至水相反应釜中，开启搅拌，加热至85～90℃，均质乳化，温度降至50℃以下加入添加相原料。所制得的各测试样品中活性物参照表5。
[0076]
表5各测试样品中活性物
[0077][0078]
实验方法：
[0079]
志愿者要求：年龄22～40岁，男性与女性各一半，油性及混合性肌肤，无任何皮肤病及皮肤过敏史，自愿参与试验，试验前签署知情同意书，测试前2天不能使用任何化妆品，试验过程中不得使用测试样品以外的任何化妆品。受试者用温水洗净面部后，将化妆品制剂均匀涂于面部，早晚各一次，试用8周。
[0080]
1、控油实验
[0081]
实验原理：油脂测试基于光度计原理。选择一种0.1mm厚的特殊消光胶带，可以迅速吸收人体皮肤上的油脂。由于油脂的作用，消光胶带即变成半透明状，吸收的油脂越多，透光量就会越大，用光度计测定透光量，根据消光胶带前后透光量发生的变化，即可测出皮肤油脂的含量。
[0082]
测试仪器：德国courage+khazaka公司(德国ck公司)制造的cuotometer mpa580油脂测试探头sebumeter
[0083]
使用前和使用2、4、6、8周后分别随访和测试一次。采取随机入组的形式进行，选择受试者面部额头受试区域。1组受试者使用样品1；2组使用样品2；3组使用样品3，4组使用样品4；对照组使用样品5。技术人员使用皮肤油脂测试探头测试测试部位3次，取平均值，第一次采集空白值。
[0084]
采用每天早晚涂抹2次，早晚各涂抹受试者在连续使用样品2周，4周、6周、8周，由测试人员使用皮肤油脂探头测量3次，取平均值，测试部位额头。
[0085]
统计测得的数值，采用均值法，分析皮肤油脂分泌变化规律及持久性。
[0086]
结果分析：油脂含量变化反映在测试周期内，试验区域油脂含量随时间变化规律。具体结果参见表6。
[0087]
表6使用前及使用后不同时间额头皮肤油脂含量(μg/cm2)
[0088] 使用前2周4周6周8周1组78.83
±
18.2475.33
±
16.7977.00
±
15.3776.83
±
14.2176.17
±
16.192组83.17
±
21.566750
±
15.7358.00
±
9.3558.17
±
12.1958.67
±
8.363组82.67
±
18.4578.17
±
14.1778.84
±
14.1678.00
±
16.0678.17
±
14.974组89.33
±
14.9990.83
±
7.1478.84
±
7.6379.00
±
13.7171.17
±
15.565组85.67
±
13.1687.00
±
13.5588.67
±
11.1887.83
±
12.4587.17
±
13.82
[0089]
在8周内对照组5组皮肤油脂变化不明显，1～4组均有制皮肤油脂分泌的效果，其中2组抑制皮肤油脂分泌效果明显，可以表明在控制油脂分泌方面，脂肽具有明显作用。
[0090]
2、皮肤毛孔改善评估试验
[0091]
选择面部同一部位作为测试部位。采用digimic800型皮肤图像分析仪测试皮肤毛孔孔径，通过对同一位置毛孔摄像(放大20倍)，分析得出毛孔孔径大小，用于评估化妆品制剂细致毛孔功效。实验结果见表3。
[0092]
表3受试后毛孔孔径(μm)
[0093]
检测指标使用前2周4周6周8周1组182.2
±
26.4177.7
±
23.82171.3
±
22.95167.7
±
27.24166.3
±
21.132组173.3
±
21.13168.3
±
22.36162.2
±
20.27158.5
±
17.49152.4
±
18.283组177.7
±
20.38174.7
±
27.24172.9
±
11.27169.6
±
16.66167.2
±
15.564组183.6
±
25.23189.4
±
25.76176.5
±
18.93173.7
±
20.37171.6
±
25.325组178.7
±
21.3189.3
±
21.13178.8
±
21.13181.5
±
19.37189.7
±
24.25
[0094]
5组使用样品5八周内皮肤毛孔孔径变化不明显。1～4组毛孔孔径均有不同程度的缩小，其中2组使用样品2八周后，皮肤毛孔孔径缩小明显，皮肤的弹性和紧致度也明显优于试用前。连续使用八周后，面部毛孔孔径比使用前缩小19.1～23.3μm，且皮肤变得细滑紧致。由此可见，脂肽在收缩毛孔具有协同作用。
[0095]
实施例4、控油洁面乳
[0096]
本实施例利用实施例1中的组合物2生产了一种控油洁面乳。其配方及工艺如下：
[0097]
配方：
[0098][0099]
d相：
[0100]
防腐剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量
[0101]
香精
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量
[0102]
实施例1组合物2
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.8
[0103]
e相：
[0104][0105]
制备方法：
[0106]
取a相，加热到70～75℃，熔化后，加入b相；将e相混合加热到70℃，加入混合后的a+b相进行搅拌，30min后加入c相并搅拌；冷却到50℃加入d相，搅拌，继续降温到30℃度时，检验合格后出料。
[0107]
本实施例的洁面乳，无不可接受的异味。经过24h的耐寒(5
±
1℃)耐热(40
±
1℃)放置测试，体系正常，无结晶析出，无混浊、变色、分层现象。产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。
[0108]
本实施例的洁面乳，经10名22～40岁志愿者试用2周后，均反映具有明显的控油效果。一名28岁男性试用例的控油实测图如图3所示，方法为拍摄visia紫外光面部照片，扫描计数相同区域(面部蓝色标记线内)内卟啉显示值。左侧照片为使用前拍摄，计数为6600左右，右侧为试用2周后拍摄，计数为5100左右，下降了24％左右。由此显示面部出油情况具有明显改善。
[0109]
实施例5、控油紧致爽肤水
[0110]
本实施例利用实施例1的组合物2生产了一种控油紧致爽肤水。其配方及工艺如下：
[0111]
配方：
[0112][0113]
制备方法：
[0114]
1.将透明质酸钠配置成1％的水溶液，备用。
[0115]
2.将除护肤组合物、透明质酸钠水溶液、防腐剂、香精之外的所有物料添加至反应釜中，开搅拌(转速为30rpm)，同时开启加热，温度控制在90℃～98℃，灭菌5min。
[0116]
3.物料搅拌冷却至45℃时，添加组合物，透明质酸钠水溶液、防腐剂、香精，并搅拌均匀。
[0117]
4.检验合格后，温度降至38℃以下即可灌装。
[0118]
本实施例的添加了控油、收缩毛孔组合物的爽肤水淡黄色，纯净透明，无不可接受的异味。经过24h的耐寒(5
±
1℃)耐热(40
±
1℃)放置测试，无结晶析出，无变色等不稳定现象。产品各项感观指标、理化指标、卫生指标均符合相应的国家标准。
[0119]
本实施例的爽肤水，经10名22～40岁女性志愿者试用4周后，均认为具有明显的控油以及收缩毛孔的效果。一名23岁女性试用例，毛孔收缩实测图如图4所示，方法为拍摄visia面部照片，扫描计数相同区域(面部蓝色标记线内)内毛孔数量。左侧照片为使用前拍摄，计数为335左右，右侧为试用4周后拍摄，计数为200左右，下降了40％左右。由此显示毛孔情况具有明显改善。

技术特征：
1.至少一种脂肽在抑制5α-还原酶活性中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其中所述脂肽为环状或线形脂肽，优选具有下式(i)-(iii)之一：其中，r表示脂肪酸链的碳链，a1、a2、a3
…
am分别表示肽链上的第1、第2、第3
…
第m个氨基酸，脂肪酸的羧基与a1的n-端相连，am的c-端羧基又与脂肪酸或者肽链上其他氨基酸的羟基或氨基相连形成环状结构。线形脂肽是指环脂肽开环后形成的线形产物。3.根据权利要求2所述的应用，其中所述脂肽为选自下组的一种或多种：表面活性素家族、伊枯草菌素家族和芬芥素家族；优选地所述脂肽为选自下组的一种或多种：表面活性素、伊枯草菌素、芬芥素、地衣素、巴比伦素、帕米拉素、芽孢菌霉素、抗霉枯草菌素、制磷脂菌素、杀镰孢菌素、库尔斯塔克素、类芽孢杆菌素、多粘菌素、八肽霉素和多肽菌素。4.根据权利要求3所述的应用，其中所述脂肽是由细菌产生的，优选所述细菌是野生菌或基因工程菌，更优选所述细菌选自下组：芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属(pseudomonas)、链霉菌属(streptomyces)和节杆菌属(arthrobacter)，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌或假单胞菌得到，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌并调控脂肽合成相关基因的表达而得到的脂肽，更优选所述脂肽合成相关基因选自下组：脂肽合成基因srfa或芬芥素合成基因fen、地衣素合成基因lic、芽孢菌霉素合成基因bam、抗霉枯草菌素myc、伊枯草菌素合成基因itu、制磷脂菌素合成基因pps、杀镰孢菌素fus、库尔斯塔克素krs、多粘菌素pmx、八肽霉素oct、跨膜运输蛋白基因ycxa、生物素羧化酶基因yngh、芽孢合成基因spoiva/b/c/f、spova/b/d/e和亮氨酸合成途径基因leuabcd/ilvk；优选地，其由枯草芽孢杆菌thy-7/pg3-srfa发酵产生。5.一种抑制5α-还原酶活性的组合物，其特征在于，包括脂肽为活性成分，优选地还包括水、增稠剂、保湿剂、皮肤调理剂、润肤剂、抗氧剂、ph调节剂、乳化剂中的一种或多种；优选地，所述组合物是脂肽的水溶液所述脂肽的重量百分数为0.0001％-99.99％，可列举的有，0.0002％、0.0005％、0.001％、0.005％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、2.0％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99.99％；优选为0.01～5％。6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述脂肽是由细菌产生的，优选所述细菌是野生菌或基因工程菌，更优选所述细菌选自下组：芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属
(pseudomonas)、链霉菌属(streptomyces)和节杆菌属(arthrobacter)，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌或假单胞菌得到，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌并调控脂肽合成相关基因的表达而得到的脂肽，更优选所述脂肽合成相关基因、跨膜运输蛋白基因ycxa、生物素羧化酶基因yngh、芽孢合成基因spoiva/b/c/f、spova/b/d/e和亮氨酸合成途径基因leuabcd/ilvk。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述脂肽合成基因选自下组：表面活性素合成基因srfa、芬芥素合成基因fen、地衣素合成基因lic、芽孢菌霉素合成基因bam、抗霉枯草菌素myc、伊枯草菌素合成基因itu、制磷脂菌素合成基因pps、杀镰孢菌素fus、库尔斯塔克素krs、多粘菌素pmx、八肽霉素oct。8.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述增稠剂选自黄原胶、卡波姆、聚丙烯酸钠接枝淀粉、结冷胶、丙烯酸(酯)类共聚物、丙烯酸酯/c10-30烷基丙烯酸酯交链共聚物、丙烯酸(酯)类/山嵛醇聚醚-25甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、羟乙基纤维素中的一种或多种；优选地，增稠剂的重量百分数为0.01-50％,更优选为0.5-30％；所述保湿剂选自多元醇类保湿剂、聚醚类保湿剂、多糖类保湿剂、氨基酸类保湿剂中的一种或多种；作为多元醇类保湿剂的实例，包括但不限于，丁二醇、丙三醇、1,2-戊二醇、聚丙二醇、山梨醇、戊二醇；作为多糖类保湿剂的实例，包括但不限于，羟乙基脲、可溶性蛋白多糖、透明质酸钠、银耳多糖、木糖醇；作为聚醚类保湿剂的实例，包括但不限于，甘油聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物；优选地，所述保湿剂的重量百分数为0.01-50％,更优选为5-25％；所述皮肤调理剂的实例，包括但不限于，烟酰胺、泛醇、尿囊素、氢化卵磷脂、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮中的一种或多种；优选地，皮肤调理剂的重量百分数为0.01-50％,更优选为0.1-4％。所述润肤剂的实例，包括但不限于，牛油果树果油、鲸蜡硬脂醇、碳酸二辛酯、异壬酸异壬酯、辛酸/葵酸三甘油脂、橄榄油、霍霍巴籽油、角鲨烷、霍霍巴油、乳木果油、琥珀酸二乙氧基乙酯；优选地，润肤剂的重量百分数为0.01～50％,更优选为1-5％；所述ph调节剂的实例，包括但不限于，三乙醇胺、辛酰羟肟酸、氢氧化钠、碳酸氢钠；优选地，ph调节剂的重量百分数为0.01～50％；更优选为0.1-1％；所述乳化剂的实例，包括但不限于，甘油硬脂酸酯、甘油硬脂酸柠檬酸酯、失水山梨醇三油酸酯、peg-30二聚羟基硬脂酸脂、聚甘油-10异硬脂酸酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、卵磷脂、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物；优选地，乳化剂的重量百分数为0.01～50％,更优选为1-10％。9.一种制备含有脂肽的组合物方法，其包括：在适于产生脂肽的条件下培养能够产生脂肽的细菌得到含脂肽的发酵液，并将所述发酵液作为所述组合物；或者将发酵液的ph调节至酸性，脂肽形成沉淀，再经固液分离烘干，获得含脂肽固体产品，并将所述固体产品作为所述组合物；或者对所述培养液、发酵液、固体混合物或产物进行浓缩和/或干燥和/或部分纯化和/或纯
化，并将浓缩和/或干燥和/或部分纯化和/或纯化的脂肽作为所述组合物；优选所述能够产生脂肽的细菌是野生菌或基因工程菌，更优选所述细菌选自下组：芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属(pseudomonas)、链霉菌属(streptomyces)和节杆菌属(arthrobacter)，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌或假单胞菌得到，更优选所述脂肽是通过培养芽孢杆菌并调控脂肽合成相关基因的表达而得到的脂肽，更优选所述脂肽合成相关基因、跨膜运输蛋白基因ycxa、生物素羧化酶基因yngh、芽孢合成基因spoiva/b/c/f、spova/b/d/e和亮氨酸合成途径基因leuabcd/ilvk。。10.根据权利要求1-9任一项所述的组合物用于护肤类化妆品、洗涤类化妆品、面部油脂调理类产品、洗发护发类产品的用途。

技术总结
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及脂肽及其组合物在抑制5α-还原酶活性中的应用。本发明发现脂肽具有抑制5α-还原酶活性的功能，由此制备相应的组合物可应用于护肤类化妆品等中，使产品具有抑制油脂分泌和/或收缩毛孔的功效。的功效。


技术研发人员：王苗苗 苏鹏 崔抒燕 陈博
受保护的技术使用者：北京衍微科技有限公司
技术研发日：2023.04.10
技术公布日：2023/10/6