一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法

1.本发明属于苜蓿切叶蜂人工繁育与监测技术领域，具体涉及一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法。


背景技术：

2.紫花苜蓿(medicago sativa)被称为牧草之王，不仅产量高，而且草质优良，各种畜禽均喜食。由于花器的独特结构，雌雄蕊被龙骨瓣包藏，加之苜蓿自交不亲和、异花授粉等特性，需要借助特殊的传粉者压开龙骨瓣并传播花粉，导致田间实际授粉结荚率和种子产量很低，种子质量也参差不齐，缺乏有效的授粉者成为限制苜蓿种子产量和质量提高的主要瓶颈。
3.切叶蜂属(megachile)的授粉蜂是苜蓿制种业公认的为苜蓿授粉效果最好的授粉昆虫类群，我国自1988年开始引进苜蓿切叶蜂加拿大商业化种群为苜蓿授粉，在北京、吉林、内蒙古和黑龙江等地为建立繁蜂体系进行了多次规模化应用，在苜蓿切叶蜂应用技术方面得到了很大提升，但仍受限于二代蜂不滞育、缺乏高效的天敌诱杀技术和人工繁蜂技术等无法实现规模化繁育。
4.苜蓿切叶蜂在苜蓿地的授粉期为1～2个月，雌蜂筑巢产下后代，后代发育至预蛹期后，一部分进入滞育状态停滞发育，另一部分继续发育至成虫，期间寄生蜂等天敌发生严重。现有技术一般采用巢板吸引雌蜂筑巢，不具备抽检新筑巢室的功能，在抽检过程中常破坏巢室的完整性，无法准确检测出巢室内部情况，只能等待田间授粉服务结束后收回巢板，再利用计算机断层扫描技术或人工解剖巢室进行检测，这样只能得到子代在某一或几个时间点的发育情况，对子代的发育进程无法实时记录，也增加了试验成本。此外，现有技术无法评估雌蜂在不同时间段所产后代的发育状态，极易错过幼虫取样和确定子代发育历期的最佳时期，对于需要控制子代发育温度的试验亦会增大试验误差，导致结果不准确。
5.如何及时、快速地回收雌蜂筑的巢室，实时监测后代的发育情况，并准确检测寄生蜂和捕食者的为害情况，对于明确子代发育历期和天敌为害率至关重要。因此，亟需开发一种低成本、简易及准确性高的巢室回收及子代发育监测方法来解决上述问题。


技术实现要素：

6.为解决上述背景技术中存在的问题，本发明提供一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，用以实时监测后代的发育情况，并准确检测寄生蜂和捕食者的为害情况，同时为苜蓿切叶蜂的人工繁育提供数据参考。
7.本说明书中所涉及的“a
×
b规格”均表示垂直a个孔
×
水平b个孔，其中a和b均为正整数，a＝b或a≠b。
8.具体地，本发明采取如下技术方案：
9.本发明提供一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，包括下述步骤：
10.s1.安置蜂房及悬挂巢板：
11.在苜蓿初花期选定试验样地，在苜蓿地中央安置蜂房，蜂房朝向东南，并在蜂房内壁上悬挂8～10块巢板，悬挂高度为1.5～1.6m，每块巢板上设有120
×
30规格的小孔，每个所述小孔的孔径相同，小孔的孔径均为6mm，孔深度均为7cm；巢板上带有纹路和蓝色、黑色颜色涂层；
12.s2.巢板嵌套纸吸管：
13.在朝向东或东南的巢板上，将每块巢板分为上部、中部、下部3个矩形区域。
14.具体地，所述矩形区域划分方法如下：
15.上部为39
×
30规格的矩形区域，中部为42
×
30规格的矩形区域，下部为39
×
30规格的矩形区域；
16.在上部、中部和下部矩形区域内各选1个小矩形区域。具体地，小矩形区域选取方法如下：
17.上部小矩形区域位置为：垂直方位离巢板最上沿10孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔；
18.中部小矩形区域的位置为：垂直方位离巢板上部插纸吸管的小矩形区域27孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔；
19.下部小矩形区域的位置为：垂直方位离巢板中部插纸吸管的小矩形区域28孔，离巢板最下沿10孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔。
20.取每个小矩形区域的四个角的5
×
5规格的小孔作为试验用小孔，小孔内分别插入纸吸管；巢室插入的纸吸管规格：外径6mm，内径5.7mm，长7.5～7.8cm。
21.s3.释放成蜂：
22.将装有3～4万个巢室的孵蜂盘运至蜂房内，打开盘盖，释放成蜂，使雌蜂在纸吸管中筑巢；
23.上述孵蜂盘在打开前，需要经过室内孵育，孵育条件为：温度29～30℃，相对湿度60％
±
5％，黑暗，孵育时间18～25天。
24.s4.回收纸吸管：
25.每隔7天回收巢板上产有子代并被封口的纸吸管，记录每根纸吸管对应的位置信息，并替换新的纸吸管继续吸引雌蜂筑巢，用橡皮筋捆扎从巢板中取下的纸吸管平放在硬纸箱中带回，所述硬纸箱的6个面扎若干个孔。
26.s5.幼虫培养：
27.在实验室内阴凉处将纸吸管自平滑封口一端剪开，取出步骤4带回的纸吸管内所有巢室，用镊子取下每个巢封口的巢盖，将单个巢按筑巢的先后顺序依次排列于96孔板(封口处为最后筑的，最里侧为最先筑的)，之后用96孔板上盖盖住或单层透明保鲜膜将96孔板包裹，并用1号昆虫针分别在保鲜膜上正对每个巢的位置扎1小孔；将96孔板水平放置转入温度设置为29～30℃、相对湿度60％
±
5％、黑暗的培养箱内培养，期间观察子代的发育，直至完成结茧(此时蜂茧内的子代称为预蛹)，记录卵、1～5龄幼虫期的发育时长，得到各个龄期及整个幼虫期的发育历期。96孔板规格：平底，深度1cm，直径7mm。
28.s6.预蛹培养：
29.将蜂茧内的苜蓿切叶蜂子代预蛹转入透明胶囊，胶囊为玉米淀粉或糯米制成，在胶囊两端分别用昆虫针扎1小孔，将胶囊按预蛹在巢中的先后顺序依次贴在硬纸板上；并将
硬纸板水平放置转入温度为29～30℃、相对湿度60％
±
5％、黑暗的培养箱内继续培养，透过胶囊观察预蛹的发育情况，将30天内仍不继续发育的预蛹记为滞育个体，继续发育至蛹期或成虫期的子代记为非滞育个体。
30.通过本发明提供的方法可统计到在回收子代和将子代从卵培养至预蛹阶段的过程中，死亡低龄幼虫、死亡高龄幼虫、死亡预蛹的数量，以及空巢、花粉球、被寄生和被捕食的巢室数量。
31.s7.数据统计与分析：
32.统计子代滞育率、子代死亡率、天敌为害率、空巢率和花粉球占比，明确授粉和筑巢期间蜂损失的原因，监测苜蓿切叶蜂的种群数量变化。
33.子代滞育率＝滞育个体数/(滞育个体数+非滞育个体数)
×
100％。
34.子代死亡率＝(低龄幼虫+死亡高龄幼虫+死亡预蛹)/(低龄幼虫+死亡高龄幼虫+死亡预蛹+滞育个体数+非滞育个体数)
×
100％；
35.天敌为害率＝(被寄生数量+被捕食数量)/巢总数
×
100％；
36.空巢率＝空巢数/巢总数
×
100％；
37.花粉球占比＝花粉球数/巢总数
×
100％。
38.另一方面，本发明还请求保护上述方法在苜蓿切叶蜂人工繁育与种群保护中的应用。
39.与现有技术相比，本发明“一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法”，具有以下有益效果：
40.1.可以准确得到选定的时间段和试验样地回收的巢室内的天敌为害情况和子代死亡情况，以便及时评估损失及采取对应的措施。
41.2.苜蓿切叶蜂子代发育监测数据的累计，可得到卵、各个龄期及整个幼虫期的发育历期，为不同发育阶段子代的取样和供试幼虫材料的获取等研究提供有效的数据参考。
42.3.通过运用纸吸管使产有子代的巢室与巢板分离更快捷，能根据回收纸吸管的数量确定雌蜂筑巢产卵的高峰期，并且能及时、便利地带回田间的苜蓿切叶蜂子代并在室内监测其发育情况，简化了子代发育监测的步骤，降低了试验成本。
43.4.通过运用玉米淀粉或糯米制成的透明胶囊，不限制苜蓿切叶蜂预蛹的活动，且无毒害和物理伤害作用，能直观检查子代预蛹形态变化，实现对子代发育情况的实时观测。
附图说明
44.图1为巢板在蜂房中的悬挂方式及巢板上、中、下部区域示意图。1.1为巢板，1.1.1为上部区域，1.1.2为中部区域，1.1.3为下部区域。
45.图2为插入纸吸管的矩形区域和小区的示意图。2.1.1、2.1.2、2.1.3和2.1.4为4个插入纸吸管的5
×
5规格的小区，2.2为未插入纸吸管的区域，2.3为插入纸吸管的区域，2.3.1为纸吸管。
46.图3为卵或幼虫在96孔板中培养。
47.图4为预蛹按纸吸管中的先后顺序依次贴在硬纸板上。
48.图5为卵期-预蛹期发育过程中各龄期幼虫累积占比时间动态曲线(50头子代)。
49.图6为样地1和样地2回收的纸吸管内子代的滞育率动态图。
50.图7为样地1和样地2回收的纸吸管内子代的死亡率动态图。
51.图8为样地1和样地2回收的纸吸管内的天敌为害率动态图。
52.图9为样地1和样地2回收的纸吸管内的空巢率动态图。
53.图10为样地1和样地2回收的纸吸管内花粉球占比动态图。
具体实施方式
54.下面，结合实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
55.在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上部”“中部”“下部”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
56.实施例1
57.本实施例提供了所述苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法的具体步骤。
58.1.安置蜂房及悬挂巢板：
59.在苜蓿初花期，选定宁夏回族自治区石嘴山市平罗县(样地1，调查时间为2022年6月3日-7月14日)和内蒙古自治区鄂尔多斯市(样地2，调查时间为2022年6月1日-7月12日)的紫花苜蓿种植区作为试验样地，每个样地分别在苜蓿地中央安置蜂房3个，蜂房朝向东南，并在蜂房内壁垂直悬挂8～10块巢板(如图1)，悬挂高度为1.5～1.6m，巢板上带有纹路和蓝色、黑色颜色涂层，每块巢板上有120
×
30规格的小孔，小孔的孔径均为6mm，孔深度均为7cm。
60.2.巢板嵌套纸吸管：
61.在每个蜂房内选取朝向为东或东南的巢板3块，将每块巢板分为上部、中部、下部3个矩形区域(如图1中1.1.1、1.1.2、1.1.3所标记)，其中：
62.上部为垂直39孔
×
水平30孔的矩形区域；
63.中部为垂直42孔
×
水平30孔的矩形区域；
64.下部为垂直39孔
×
水平30孔的矩形区域。
65.上部、中部和下部区域内各选1个20孔
×
15孔的小矩形区域(如图2)，其中，
66.选上部矩形区域位置为：垂直方位离巢板最上沿10孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔；
67.选中部矩形区域的位置为：垂直方位离巢板上部插纸吸管的矩形区域27孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔；
68.选下部矩形区域的位置为：垂直方位离巢板中部插纸吸管的矩形区域28孔，离巢板最下沿10孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔。
69.在每个小矩形区域的四个角的5
×
5规格的小孔作为试验用小孔(如图2中2.1.1、2.1.2、2.1.3、2.1.4所标记)，在小孔中插入100根纸吸管。巢室插入的纸吸管规格：外径6mm，内径5.7mm，长7.5～7.8cm。
70.3.释放成蜂
71.将经过室内孵育后的装有3～4万个巢室的孵蜂盘运至蜂房内，打开盘盖，释放成
蜂，使雌蜂在纸吸管中筑巢；室内孵育条件为：温度29～30℃，相对湿度60％
±
5％，黑暗，孵育时间18～25天。
72.4.回收纸吸管
73.每7天回收巢板上产有子代并被叶片平滑封口的纸吸管1次，用镊子将纸吸管从巢板中取出，记录每根纸吸管的筑巢位置信息，并替换新的纸吸管继续吸引雌蜂筑巢，用橡皮筋捆扎从巢板中取下的纸吸管平放在硬纸箱中带回。
74.硬纸箱长30cm、宽17cm、高19cm，厚度约3.5mm，6个面用剪刀或大号镊子等工具扎若干孔，抗压性、隔热性和透气性良好，使纸吸管在回收过程中能抵抗外界极端高温或物理挤压等，确保子代正常发育。
75.橡皮筋能固定纸吸管的目的在于，减缓纸吸管在硬纸盒中的震荡程度，确保子代安全、顺利的到达室内。
76.5.幼虫培养
77.在室内阴凉处用剪刀将纸吸管自平滑封口一端剪开，取出步骤4带回的纸吸管内所有巢室，用镊子取下每个巢封口的叶片(巢盖)，将单个巢按筑巢的先后顺序依次排列于96孔板(封口处为最后筑的，最里侧为最先筑的)，之后用96孔板上盖盖住或用单层透明保鲜膜将96孔板包裹，并用1号昆虫针在每个巢正对的保鲜膜上分别扎1小孔；将96孔板水平放置转入温度设置为29～30℃、相对湿度60％
±
5％、黑暗的培养箱内培养(如图3)，期间观察子代的发育，直至完成结茧(此时蜂茧内的子代称为预蛹)，记录卵、1～5龄幼虫期的发育时长，得到各个龄期及整个幼虫期的发育历期。
78.96孔板规格：平底，深度1cm，直径7mm，与子代的巢室长度及直径吻合，能确保幼虫在96孔板中正常发育。
79.6.预蛹培养
80.用尖头镊子或小剪刀对准蜂茧最上沿插入1～2mm，水平划割或剪切一圈，将蜂茧上部完全剪下，将每粒蜂茧内的苜蓿切叶蜂子代预蛹转入胶囊，在胶囊两端分别用昆虫针扎1小孔，将胶囊按预蛹在巢中的先后顺序依次贴在硬纸板上；并将硬纸板水平放置转入温度为29～30℃、相对湿度60％
±
5％、黑暗的培养箱内继续培养，透过胶囊观察预蛹的发育情况(如图4)，将30天内仍不继续发育的预蛹记为滞育个体，继续发育至蛹期或成虫期的子代记为非滞育个体。
81.胶囊为玉米淀粉或糯米制成，长17～21mm，直径6～7mm，不限制苜蓿切叶蜂预蛹的活动，无毒和物理伤害，透明，能直观检查子代预蛹形态变化。
82.硬纸板厚度为1～1.3mm，长29.7cm，宽21cm，黄褐色，每张硬纸板能容纳25～26个纸吸管内的所有子代，配合胶囊使用对比度更高，使观测结果更准确。
83.本发明的一种苜蓿切叶蜂子代回收和发育监测方法可得到选定时间段内回收的子代的滞育率：
84.滞育率＝滞育个体数/(滞育个体数+非滞育个体数)
×
100％。
85.实施例2
86.在实施例1的基础上，本实施例结合试验数据进一步描述苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，具体为：
87.1.样地1和样地2筑巢期间每7天回收的封口纸吸管的数量(见表1)。
88.从表1可知，样地1和样地2在调查期间回收的封口纸吸管数先增后减。样地1在6月10日～6月30日回收封口的纸吸管数量较多(超过200根，累积占比达68.94％)，以6月24日～6月30日回收封口的纸吸管数最多，为284根(占比25.13％)；样地2在6月1日～6月28日回收的封口纸吸管数较多(超过200根，累积占比91.27％)，其中6月8日～6月14日回收的封口纸吸管数最多，为1667根(占比48.05％)。因此，样地1和样地2的苜蓿切叶蜂筑巢高峰期均在6月内，可在此时段内增加巢板上插入纸吸管的数量或加快回收频率以获得更多的子代，两地7月回收的封口纸吸管明显减少，可根据回收数量适时回收巢板，结束苜蓿切叶蜂的田间繁育，转入室内研究。
89.表1，样地1和样地2调查期间每7天回收的封口纸吸管数量
[0090][0091][0092]
2.在温度为29～30℃，相对湿度60％
±
5％的黑暗条件下，96孔板内苜蓿切叶蜂卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、4龄幼虫和5龄幼虫的发育时长以及卵发育至预蛹的总历时(以50头从0日龄卵开始培养的子代为例，见表2)、每个时期对应的各龄幼虫占比(以50头从0日龄卵开始培养的子代为例，见图5)。
[0093]
表2，苜蓿切叶蜂各个虫期发育时长
[0094][0095]
从表2可知，苜蓿切叶蜂卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、4龄幼虫和5龄幼虫平均发育时长分别为2.52天、1.17天、1.26天、1.55天、1.68天和2.74天，卵发育至预蛹的总历时为10.91天，总体上，各个龄期发育时长均在3天以内，从低龄幼虫到高龄幼虫转变十分迅速。
[0096]
由图5可知，对于不同发育阶段子代的取样和供试幼虫材料的获取等试验，在开始培养后的3天内可取样到卵或胚胎，在培养2～3天内可取样到1龄幼虫，第3～4天内取样到2龄幼虫，第4～6天可取样到3龄幼虫，第5～8天可取样到4龄幼虫，第7～10天可取样到5龄幼虫，第9～12天预蛹开始出现，可在此时间段或之后取样得到预蛹。
[0097]
3.样地1和样地2筑巢期间每7天回收的子代的滞育率(以每7天随机选取的100根回收的封口纸吸管内的子代为例，见图6)。
[0098]
由图6可知，样地1子代在筑巢期间的滞育率变化不大，平均滞育率为50.69％，样地2子代在筑巢期间的滞育率随时间逐渐升高，平均滞育率为92.03％，整体上，样地2在各个时间段的子代滞育率均高于样地1，说明样地2释放的雌蜂更易产滞育子代，在该地扩繁苜蓿切叶蜂更为适宜。
[0099]
实施例3
[0100]
在实施例1和实施例2的基础上，本实施例结合试验数据进一步描述本发明方法对子代死亡情况和天敌为害情况的调查结果。试验结果具体为样地1和样地2筑巢期间每7天回收的封口纸吸管中子代死亡率、天敌为害率、空巢率和花粉球占比，明确授粉和筑巢期间蜂损失的原因，监测苜蓿切叶蜂的种群数量变化。
[0101]
子代死亡率＝(低龄幼虫数+死亡高龄幼虫数+死亡预蛹数)/(低龄幼虫数+死亡高龄幼虫数+死亡预蛹数+滞育个体数+非滞育个体数)
×
100％；
[0102]
天敌为害率＝(被寄生数+被捕食数)/巢总数
×
100％；
[0103]
空巢率＝空巢数/巢总数
×
100％；
[0104]
花粉球占比＝花粉球数/巢总数
×
100％。
[0105]
统计结果分别如图7、图8、图9和图10所示，样地1的子代死亡率、天敌为害率、空巢率和花粉球占比普遍高于样地2，说明样地1回收的子代或巢的质量相对较差，造成的损失更大，因此，在样地2扩繁苜蓿切叶蜂更有优势。其中，6月1日～6月9日以及7月6日～7月14日苜蓿切叶蜂损失更为严重，在该时间段内可在田间诱杀苜蓿切叶蜂的天敌等措施降低损失。
[0106]
综上，通过本发明提供的一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，可有效吸引雌蜂筑巢，并通过回收纸吸管的数量预测雌蜂筑巢的高峰期，能及时、便利地将苜蓿切叶蜂子代由田间带回并实时监测其发育情况，监测数据可为不同发育阶段子代的取样和供试幼虫材料的获取等试验的开展提供参考。
[0107]
此外，本发明提供的方法可以检测并获得选定时间段的子代滞育率、幼虫死亡率、天敌为害率、空巢率、花粉球占比等数据，以便更快速地分析子代损失的原因，并及时采取相应措施将损失降至最低，从而提高苜蓿切叶峰在田间扩繁和提供授粉服务的种群数量，进一步提升苜蓿的产量和质量。
[0108]
以上所述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。在依据本发明构思的条件下本领域普通技术人员进行的相关推演和替换，在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

技术特征：
1.一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，包括如下步骤：s1.安置蜂房及悬挂巢板：在苜蓿初花期选定试验样地，在苜蓿地中央安置蜂房，蜂房朝向东南，并在蜂房内壁上悬挂8～10块巢板，每块巢板上设有120
×
30规格的小孔，每个所述小孔的孔径相同，每个所述小孔的孔深相同；s2.巢板嵌套纸吸管：在朝向东或东南的巢板上，选取4个5
×
5规格的小孔分别插入纸吸管以吸引雌蜂筑巢；s3.释放成蜂：将经过室内孵育后的装有3～4万个巢室的孵蜂盘运至蜂房内，打开盘盖，释放成蜂，使雌蜂其在纸吸管中筑巢；s4.回收纸吸管：每隔7天回收巢板上产有子代并被封口的纸吸管，记录每根纸吸管对应的位置信息，并替换新的纸吸管继续吸引雌蜂筑巢，将取下的纸吸管平放在硬纸箱中带回；s5.幼虫培养：取出带回的纸吸管内所有巢室，按筑巢顺序，将子代排列于96孔板，于黑暗的培养箱内培养，期间观察子代的发育，记录卵、1～5龄幼虫期的发育时长，得到各个龄期及整个幼虫期的发育时长；s6.预蛹培养：将每粒蜂茧内子代的预蛹转入透明胶囊，将胶囊按预蛹在巢中的先后顺序依次贴在硬纸板上；在适宜条件下继续培养，透过胶囊观察预蛹的发育情况，分别记录滞育、非滞育个体数据，统计结果；s7.数据统计与分析：统计子代滞育率、子代死亡率、天敌为害率、空巢率和花粉球占比，明确授粉和筑巢期间蜂损失的原因。2.根据权利要求1所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述步骤s1中，所述蜂房内壁垂直悬挂8～10块巢板，所述巢板悬挂高度1.5～1.6m，孔径6mm，孔深为7cm。3.根据权利要求1所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述步骤s2中，所述4个5
×
5规格的小孔选定方法如下：将巢板分为上部、中部、下部三个矩形区域，在每个矩形区域内各选定一个小矩形区域，在每个小矩形区域的四个角的5
×
5规格的小孔作为试验用小孔；所述纸吸管规格：外径6mm，内径5.7mm，长7.5～7.8cm。4.根据权利要求3所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述矩形区域划分方法如下：上部为39
×
30规格的矩形区域，中部为42
×
30规格的矩形区域，下部为39
×
30规格的矩形区域；所述小矩形区域划分方法如下：上部小矩形区域位置为：垂直方位离巢板最上沿10孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔；中部小矩形区域的位置为：垂直方位离巢板上部插纸吸管的矩形区域27孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔；下部小矩形区域的位置为：垂直方位离巢板中部插纸吸管的矩形区域28孔，离巢板最下沿10孔，水平方位离巢板左右边缘各5孔。5.根据权利要求1所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述室内孵育的环境条件为：温度29～30℃，相对湿度60％
±
5％，黑暗，孵育
时间18～25天。6.根据权利要求1所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述步骤s4中，所述硬纸箱的6个面扎若干个孔。7.根据权利要求1所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述步骤s6中，所述透明胶囊为玉米淀粉或糯米制成，长17～21mm，直径6～7mm；所述硬纸板厚度1～1.3mm，长29.7cm，宽21cm，能容纳25～26个纸吸管内的所有子代；所述适宜条件为：温度29～30℃、相对湿度60％
±
5％、黑暗。8.根据权利要求1所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其特征在于，所述步骤s7中，所述子代滞育率、子代死亡率、天敌为害率、空巢率和花粉球占比计算方法为：子代滞育率＝滞育个体数/(滞育个体数+非滞育个体数)
×
100％；子代死亡率＝(低龄幼虫+死亡高龄幼虫+死亡预蛹)/(低龄幼虫+死亡高龄幼虫+死亡预蛹+滞育个体数+非滞育个体数)
×
100％；天敌为害率＝(被寄生数量+被捕食数量)/巢总数
×
100％；空巢率＝空巢数/巢总数
×
100％；花粉球占比＝花粉球数/巢总数
×
100％。9.根据权利要求1～8任一项所述的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法在苜蓿切叶蜂人工繁育中与种群保护的应用。

技术总结
本发明公开了一种苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法，其步骤：1.安置蜂房及悬挂巢板；2.巢板嵌套纸吸管；3.释放成蜂；4.回收纸吸管；5.幼虫培养；6.预蛹培养；7.数据统计与分析。本发明提供的苜蓿切叶蜂巢室回收及子代发育监测的方法可及时、快速地回收雌蜂新筑的巢室，实时监测后代的发育情况，可得到选定时间段内回收的子代的滞育率、子代死亡率、天敌为害率、空巢率和花粉球占比等信息，为及时准确掌握扩繁和应用苜蓿切叶蜂过程中的蜂损失原因提供了一种简易、快速的监测技术。本发明提供的方法可指导本领域技术人员及时采取措施减少子代损失，通过保护和利用苜蓿切叶蜂来为苜蓿制种提供更高效、优质的授粉服务。优质的授粉服务。优质的授粉服务。


技术研发人员：朱猛蒙 王宪辉 段盼 张蓉 侯丽 赵紫华
受保护的技术使用者：中国科学院动物研究所
技术研发日：2023.08.02
技术公布日：2023/10/6