羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法

1.本发明属于药物缓释纳米粒子技术领域，具体涉及一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法及其应用。


背景技术：

2.癌症是发病率高的恶性肿瘤之一，且致死率高。而人参皂苷是人参中的活性成分，能够抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、提高人体免疫功能，在癌症肿瘤的防治中发挥作用。但由于其水溶性较差及在胃肠液环境中不稳定，普通的纳米粒子负载人参皂苷量少，且在口服时容易导致药物提前释放，致使其口服利用度较低。因此，需要研制一种可以提高载药量且保证人参皂苷具在胃液中具有稳定性又可以实现其体内缓释代谢的药物载体来提高药物生物利用度和稳定性。


技术实现要素：

3.本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法及其应用，该羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子能克服现有技术中在人参皂苷rb1的应用中存在水溶性、稳定性较差与生物利用度低的缺陷与不足。
4.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，该方法为：
5.s1、脱氧胆酸的活化：
6.将脱氧胆酸、n-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基(-3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入到无水乙醇中，室温下搅拌30min，得到活化后的脱氧胆酸；
7.s2、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的合成：
8.将羧甲基壳聚糖加入纯水中，室温下搅拌溶解后，得到羧甲基壳聚糖溶液；在室温条件下，边搅拌边将s1中得到的活化后的脱氧胆酸滴加到所述羧甲基壳聚糖溶液中，搅拌反应24h后，放入透析袋中置于纯水中，透析24h，在转速为9000r pm的条件下离心15min后，将得到的沉淀物冷冻干燥，即为羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物；
9.s3、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液的制备：将s2中得到的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物加入到甲醇中，室温下搅拌溶解后，边搅拌边滴加于去离子水中，得到微粒溶液，放入截留分子量为10000的透析袋中置于纯水中，透析24h后，进行超声处理10min，得到带浊光的光学透明液体，即为空白纳米胶束；将人参皂苷rb1粉末加入至所述空白纳米胶束中，在室温的条件下搅拌3h，得到负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液；
10.s4、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备：向s3中得到的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液中加入浓度为1mg/ml的海藻酸钠溶液和浓度为10mg/ml的聚磷酸钠溶液，搅拌30min后，在转速为10000rpm的条件下离心10min
后，将得到的沉淀物质真空冷冻干燥10h，得到羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子。
11.本发明中采用透析法合成具有两亲性的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束，以负载疏水性人参皂苷rb1；此外，采用双重包埋方法，再用海藻酸钠对纳米胶束进行再次包封，得到羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子；海藻酸钠的添加再次吸附了部分人参皂苷rb1与壳层上，进一步提高了对人参皂苷rb1的包埋率，有利于胃肠道给药中的应用；所得的纳米粒子分布均匀，稳定性良好，具有良好的ph敏感性。
12.优选地，s1中所述脱氧胆酸、n-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和无水乙醇的用量比为0.8g：0.5g：1g：30ml。
13.优选地，s2中所述羧甲基壳聚糖和活化后的脱氧胆酸的质量比为1：0.8。
14.优选地，s3中所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物、甲醇、纯水和人参皂苷rb1的用量比为4mg：1ml：10ml：6mg。
15.优选地，s4中所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液、海藻酸钠溶液和聚磷酸钠溶液的用量比为5ml：2.5ml：2.5ml。
16.优选地，s4中所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的平均粒径为341.99nm。
17.本发明还提供了上述的制备方法所制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的应用，所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子用于抗肿瘤药物人参皂苷rb1的胃肠道给药。
18.优选地，所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子在胃肠液环境中释放人参皂苷rb1时具有ph响应效应，用于口服抗肿瘤药物的缓释，提高持效时间和药物利用率。
19.本发明与现有技术相比具有以下优点：
20.1、本发明制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子克服现有技术中在人参皂苷rb1的应用中存在稳定性较差、生物利用度低，持效时间段的缺陷与不足。与现有技术相比，本发明采用透析法合成具有两亲性的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子，以负载疏水性人参皂苷rb1；所得粒子分布均匀，稳定性良好，具有良好的ph敏感性。此外，本发明采用离子凝胶法，用海藻酸钠对纳米胶束进行再次包封，得到羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子在海藻酸钠的添加过程中再次吸附了部分人参皂苷rb1于壳层上，进一步提高了对人参皂苷rb1的载药量；并且二次包封产物总质量比一次包封产物轻，因此载药率保持较高水平，有利于提高纳米粒子的载药率，利于胃肠道给药中的应用。
21.2、本发明获得的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子，分散均稳定性好，海藻酸钠浓度为1mg/ml时包封率最高为72.14％；在模拟胃肠液环境释放条件下，所负载的人参皂苷rb1可实现在ph为1.2的模拟胃液中，24h累计释放不超过20％；在ph为6.8的模拟肠液中，24h内累计释放97.41％；在ph为7.4的模拟正常细胞缓冲溶液时，5h内累计释放rb1约27.38％，50h内能够完全释放(99.19％)；表现出显著的ph响应性；模拟口服过程显示，前2h内胃液中累计释放小于10％，8h内肠液累计释放41.73％，在48h内能够将药物rb1完全释出，具有很强的缓释性能，能够有效延长药物作用时间，这对于减少给药次数有显著的益处，可以作为口服药物载体。
22.3、本发明通过透析法制备羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子，将天然活
性产物人参皂苷rb1负载于具有两亲性的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子中，增加人参皂苷rb1在粒子中的载药率，纳米粒子具有良好稳定性不易发生沉降、团聚的优势；同时，基于生物体内不同组织和细胞中ph环境存在差异的特性，使制备的纳米粒子具有ph敏感性，在ph＝1.2的胃液中，24h内基本不释放，在ph＝7.4的肠液中缓释负载的人参皂苷rb1，提高药物的生物利用度。该发明有利于拓展开发其在胃肠道给药等生物领域的应用。
23.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
附图说明
24.图1是本发明实施例1中壳聚糖、脱氧胆酸、羧甲基壳聚糖和羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的红外谱图。
25.图2是本发明实施例1中壳聚糖(cs)、脱氧胆酸(da)、羧甲基壳聚糖(cmcs)和羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物(cmcs-da)的核磁共振氢谱图。
26.图3是本发明实施例1中壳聚糖和羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的热重分析图。
27.图4是本发明实施例1中羧甲基壳聚糖和羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的接触角图。
28.图5是本发明实施例1中羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的荧光光谱图。
29.图6是本发明实施例1制备的cmda@rb1-nps和cmdalg
1.0
@rb1-nps的扫描电镜图。
30.图7是本发明实施例1、对比例1-3制备的各纳米粒子的(a)包封率及载药量；(b)粒径分布；(c)zeta电位。
31.图8是本发明实施例2中cmdalg
1.0
@rb1-nps负载的人参皂苷rb1在ph7.4、ph1.2和ph6.8的环境中药物释放曲线图。
32.图9是本发明实施例2中各纳米粒子负载的人参皂苷rb1在模拟胃肠液中连续释放图。
具体实施方式
33.实施例1
34.本实施例为负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，该方法为：
35.s1、脱氧胆酸的活化：
36.将0.8g脱氧胆酸(da)、0.5g n-羟基琥珀酰亚胺和1g 1-乙基(-3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入到30ml无水乙醇中，室温下搅拌30min，得到活化后的脱氧胆酸；
37.s2、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的合成：
38.将1g羧甲基壳聚糖(cmcs)加入700μl纯水中，室温下搅拌溶解后，得到羧甲基壳聚糖溶液；在室温条件下，边搅拌边将s1中得到的0.8g活化后的脱氧胆酸滴加到所述羧甲基壳聚糖溶液中，搅拌反应24h后，放入透析袋中置于纯水中，透析24h，在转速为9000rpm的条件下离心15min后，将得到的沉淀物冷冻干燥，即为羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物(cmcs-da)；
39.本实施例合成的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物采用傅立叶变换红外吸收光谱仪
进行表征，光谱范围为4000～500cm-1
，结果如图1所示。壳聚糖(cs)在1658cm-1
处为nh-co伸缩振动，1596cm-1
处为n-h键弯曲振动；羧甲基壳聚糖(cmcs)在1410cm-1
处为coo-对称伸缩峰，表明发生了羧基取代，原壳聚糖1658cm-1
和1596cm-1
处的峰发生转移，在1689cm-1
和1552cm-1
处出现新的特征峰；脱氧胆酸(da)在1706cm-1
处的羧酸基团的羰基对称拉伸振动，1460cm-1
和1400cm-1
处对应于脱氧胆酸的羟基，1041cm-1
的峰是c-o拉伸振动的特征峰；羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物(cmcs-da)中，在2935cm-1处和2861cm-1处显示出更强的c-h延伸吸收带，可能是由于脱氧胆酸链插入壳聚糖的c2。在1650-1550cm-1
处是脱氧胆酸基团和羧甲基的c＝o伸缩振动与n-h面内弯曲振动峰重叠的谱带。红外光谱表明，cmcs和da之间通过生成一个新的酰胺键的反应得到了cmcs-da。
40.本实施例合成的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的结构采用核磁共振氢谱表征，结果如图2所示。图中羧甲基壳聚糖在δ＝3.43处为糖环c2位上发生氨基取代的羟基，δ＝4.05-4.45处为糖环c3或c6羟基上取代的羧甲基，羧甲基取代主要为c6-o-羧甲基或c3-o-羧甲基，为羟基上的羧甲基取代，因此仍有活性氨基可与da发生反应；脱氧胆酸在0.6ppm、0.84ppm和2.12ppm处的峰分别对应脱氧胆酸18-ch3、21-ch3和21-ch3，12.0ppm是其羧基的特征峰；在羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物谱图中，δ＝4.05-4.45处保留了羧甲基壳聚糖的特征峰，位于12.0ppm的羧基峰消失，表明壳聚糖上的氨基与脱氧胆酸的羧基发生缩合反应，由此证明羧甲基壳聚糖与脱氧胆酸成功接枝。
41.图3为本实施例合成的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的热重分析图。如a图中所述，壳聚糖(cs)在254.72℃～382.28℃发生了分解，失重率为43.66％，这一分解主要是由于壳聚糖上多糖环发生了崩解，壳聚糖结构坍塌。羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物(cmcs-da)发生了三段较为明显的分解，首先第一阶段发生在73.72℃～106.22℃，此阶段失重率约2.59％，在此阶段主要是材料中结晶水发生了分解；第二阶段发生在217.28℃～264.48℃，这一阶段主要是由于材料发生热分解，失重率约为9.4％，此阶段相较于cs热失重发生较早，这可能是改性后da的插入使得原本壳聚糖结构发生变化，主链上的多糖环率先部分分解；第三阶段发生在329.93℃～422.57℃，失重率为64.20％，在此阶段发生大量热分解，这是由于多糖环和糖苷键在最后阶段被分解，材料几乎无残留。第二阶段降解失重在较低的温度并以较快的速度进行，表明其热稳定性与原壳聚糖相比降低。
42.由图4本实施例合成的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的亲疏性通过接触角测量得到，羧甲基壳聚糖(cmcs)在改性前接触角平均值为35.35
°
，显示出较强的亲水特征；在接枝脱氧胆酸后接触角值增大，具有了一定的疏水特征。这一结果是由于脱氧胆酸本身的疏水性，在成功接枝后给羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸带来了一定的疏水效应，其疏水性将有利于负载疏水性的人参皂苷rb1。
43.图5为制备的cmcs-da的荧光发射光谱及临界胶束浓度图。以芘为探针，采用荧光分光光度法测定cmcs-da的临界胶束浓度(cmc)，表征cmcs-da在水溶液中聚集成纳米粒子的能力。不同cmcs-da浓度在水溶液中自聚集后的荧光光谱及i1/i3值之间的关系如图5所示。计算i1/i3比值后，cmcs-da的cmc为0.4642mg/ml。cmc值越小，说明了聚合物越容易自团聚，且团聚体的稳定性越好。因此说明了cmda-nps能够在较低浓度下发生自聚集。
44.s3、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液的制备：将4mg s2中得到的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物加入到1ml甲醇中，室温下搅拌溶解后，边搅拌边滴加于10ml去离子
水中，得到微粒溶液，放入截留分子量为10000的透析袋中置于纯水中，透析24h后，进行超声处理10min，得到带浊光的光学透明液体，即为空白纳米胶束；将6mg人参皂苷rb1粉末加入至所述空白纳米胶束中，在室温的条件下搅拌3h，通过透析法使得rb1进入羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束，得到负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液；
45.s4、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备：向5ml的s3中得到的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液中依次加入2.5ml浓度为1mg/ml的海藻酸钠溶液和2.5ml浓度为10mg/ml的聚磷酸钠溶液，搅拌30min后，在转速为10000rpm的条件下离心10min后，将得到的沉淀物质真空冷冻干燥10h，得到平均粒径为341.99nm的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子cmdalg@rb1-nps(记为cmdalg
1.0
@rb1-nps)。
46.对比例1
47.本对比例的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，该方法同实施例1，不同之处为步骤s4中海藻酸钠溶液的浓度为0.5mg/ml，制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子记为cmdalg
0.5
@rb1-nps。
48.对比例2
49.本对比例的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，该方法同实施例1，不同之处为步骤s4中海藻酸钠溶液的浓度为2.0mg/ml，制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子记为cmdalg
2.0
@rb1-nps。
50.对比例3
51.本对比例的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，该方法同实施例1，不同之处为步骤s4中海藻酸钠溶液的浓度为3.0mg/ml，制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子记为cmdalg
3.0
@rb1-nps。
52.图6是实施例1制备的cmdalg
1.0
@rb1-nps的表面形貌图，a是作为对比的cmda@rb1-nps的扫描电镜图；b是cmdalg@rb1-nps的扫描电镜图，由图可知，纳米粒子呈圆球形，分布均匀，表面光滑，无明显粘连现象。
53.图7是实施例1制备的各纳米粒子的(a)包封率及载药量；(b)粒径分布；(c)zeta电位。由图7a可知，添加海藻酸钠后cmdalg@rb1-nps对rb1包封率(ee)相对于cmda@rb1-nps有显著增加，海藻酸钠的添加再次吸附了部分rb1于海藻酸钠壳层上，因此包封率增加；尽管随海藻酸钠浓度的增加，载药量(dl)发生下降，但与cmda@rb1-nps的载药量相比依旧能够保持较高的水平，这是由于cmdalg@rb1-nps的总质量比cmda@rb1-nps轻。海藻酸钠浓度为1mg/ml时包封率最高为72.14％，并且载药量也较高，为149.6mg/g，优选的，选择海藻酸钠浓度1mg/ml为最优条件。
54.图7b为制备的各纳米粒子的粒径分布图。如图可知cmda-nps粒径分布在100～500nm之间，平均粒径为257nm，pdi为0.052，粒径分布窄且均匀。cmda@rb1-nps和cmdalg@rb1-nps的平均粒径分别为295.31nm和341.99nm，cmda@rb1-nps粒径略有增加是因为rb1的加入，cmdalg@rb1-nps的粒径有较为明显的增加，这是由于海藻酸钠的加入在cmda@rb1-nps上形成海藻酸钠层，并且吸附了一部分rb1，因此粒径增大。粒径分布的结果与sem图中观察到的粒径基本一致。
55.图7c为制备的各纳米粒子的zeta电位图。cmda聚合物和cmda-nps的zeta电位相差
不大，分别为13.27
±
0.16mv和11.96
±
0.92mv，而人参皂苷rb1呈负电，因此在负载人参皂苷rb1后，cmda@rb1-nps的zeta电位降低，为3.4
±
0.2mv；海藻酸钠的zeta电位为-48.7
±
0.88mv，因此能通过离子交联反应在cmda@rb1-nps上进行再次包覆，并且能与少量rb1发生静电吸附，能够提升包封率。与海藻酸钠反应后，cmdalg@rb1-nps的zeta电位显著下降，且呈负电性，为-28.23
±
1.25mv。
56.实施例2
57.本实施例1制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子(cmdalg
1.0
@rb1-nps)的应用，所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子用于抗肿瘤药物人参皂苷rb1的胃肠道给药；所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子在胃肠液环境中释放人参皂苷rb1时具有ph响应效应，用于抗肿瘤药物的缓释。
58.(一)cmdalg
1.0
@rb1-nps中的人参皂苷rb1在ph为7.4的环境中的释放情况：
59.将冻干后的cmdalg@rb1-nps粉末分散在ph7.4的缓冲溶液中，使浓度为1.0mg/ml；取上述溶液2ml装入透析袋中，夹封好后浸入10ml的磷酸缓冲溶液(pbs)中，并在37℃和100rmp下振荡；按规定时间间隔取出2ml磷酸缓冲溶液并补充2ml新鲜磷酸缓冲溶液。用液相色谱仪测量不同时间取得的pbs中人参皂苷的含量，计算rb1累积释放率。
60.(二)cmdalg
1.0
@rb1-nps中的人参皂苷rb1在ph为1.2的环境中的释放情况：
61.方法同(一)，区别在于磷酸缓冲溶液ph为1.2，类似胃液ph环境。
62.(三)cmdalg
1.0
@rb1-nps中的人参皂苷rb1在ph为6.8的环境中的释放情况：
63.方法同(一)，区别在于磷酸缓冲溶液ph为6.8，类似肠液ph环境。
64.图8是本实施例的人参皂苷rb1在ph1.2、ph6.8和ph7.4环境中的释放曲线图。由图8可知，在ph1.2的环境中，rb1的释放在24h内始终不超过20％；在ph6.8的环境中，24h累计释放率为97.41％；在ph7.4的环境中，cmdalg
1.0
@rb1-nps负载的人参皂苷rb1在前5h内累计释放率约27.38％，24h的累计释放率为86.61％，50h内能够基本释放nps中的rb1，累计释放率为99.19％。此外，需要注意的是，在11h前cmdalg@rb1-nps在ph 7.4环境下的释放速率比在ph 6.8下较快，在11h后，纳米粒子cmdalg@rb1-nps在ph 6.8的环境中释放的更快，这可能是由于海藻酸钠层在酸性环境中分子链发生收缩，壳层较为致密，抑制了rb1的释放，随着海藻酸钠层被逐渐溶蚀，cmda@rb1-nps暴露出来，其在ph 6.8的环境中能够更快将rb1释放出来。
65.(4)cmdalg
1.0
@rb1-nps中的人参皂苷rb1在模拟胃肠液环境中连续释放情况：
66.将实施例1制备的cmdalg
1.0
@rb1-nps纳米粒子粉末用pbs制备成1.0mg/ml的混合液，取2ml装入透析袋中。根据胃肠道给药过程中的转运时间，将装好的透析袋浸入10ml模拟胃液(ph为1.2盐酸的含1％胃蛋白酶的缓冲液)，2h后取出；然后将透析袋浸入10ml模拟肠液(ph为6.8kh2po4的含1％的胰蛋白酶的溶液)，6h后取出；最后将透析袋置于ph为7.4的pbs缓冲液中，在37℃、100rpm下震荡。按设定时间间隔在各个pbs缓冲液中取样2ml，并补充新鲜pbs缓冲液2ml，用液相色谱仪测定采样的pbs缓冲液中人参皂苷的含量，计算rb1的累积释放率。
67.图9是人参皂苷rb1在模拟胃肠液中连续释放图。
68.cmdalg
1.0
@rb1-nps前2h在ph1.2的模拟胃液中累计释放小于10％；随后在ph6.8模拟肠溶液中持续释放，前5h内累计释放率约27.38％，8h时内累计释放41.73％；最后在
ph7.4的溶液中持续释放，在50h左右能够将rb1完全释出。结果表明：cmdalg
1.0
@rb1-nps在胃酸条件下能够保护被包埋的药物人参皂苷rb1，避免过早释放；而在模拟肠液中能够长时间缓慢释放，延长药物作用时间。
69.以上结果与ph响应性研究结果相同，为羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子具有口服药物制剂提供可实行性依据。
70.以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

技术特征：
1.一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，其特征在于，该方法为：s1、脱氧胆酸的活化：将脱氧胆酸、n-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基(-3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入到无水乙醇中，室温下搅拌30min，得到活化后的脱氧胆酸；s2、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的合成：将羧甲基壳聚糖加入纯水中，室温下搅拌溶解后，得到羧甲基壳聚糖溶液；在室温条件下，边搅拌边将s1中得到的活化后的脱氧胆酸滴加到所述羧甲基壳聚糖溶液中，搅拌反应24h后，放入透析袋中置于纯水中，透析24h，在转速为9000rpm的条件下离心15min后，将得到的沉淀物冷冻干燥，即为羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物；s3、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液的制备：将s2中得到的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物加入到甲醇中，室温下搅拌溶解后，边搅拌边滴加于纯水中，得到微粒溶液，放入截留分子量为10000的透析袋中置于纯水中，透析24h后，进行超声处理10min，得到带浊光的光学透明液体，即为空白纳米胶束；将人参皂苷rb1粉末加入至所述空白纳米胶束中，在室温的条件下搅拌3h，得到负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液；s4、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备：向s3中得到的负载人参皂苷rb1的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液中加入浓度为1mg/ml的海藻酸钠溶液和浓度为10mg/ml的聚磷酸钠溶液，搅拌30min后，在转速为10000rpm的条件下离心10min后，将得到的沉淀物质真空冷冻干燥10h，得到羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子。2.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，其特征在于，s1中所述脱氧胆酸、n-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和无水乙醇的用量比为0.8g：0.5g：1g：30ml。3.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，其特征在于，s2中所述羧甲基壳聚糖和活化后的脱氧胆酸的质量比为1：0.8。4.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，其特征在于，s3中所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物、甲醇、去离子水和人参皂苷rb1的用量比为4mg：1ml：10ml：6mg。5.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，其特征在于，s4中所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液、海藻酸钠溶液和聚磷酸钠溶液的用量比为5ml：2.5ml：2.5ml。6.根据权利要求1所述的一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，其特征在于，s4中所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的平均粒径为341.99nm。7.一种如权利要求1-6任一权利要求的制备方法所制备的羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的应用，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子用于抗肿瘤药物人参皂苷rb1的胃肠道给药。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子在胃肠液环境中释放人参皂苷rb1时具有ph响应效应，用于抗肿瘤药物的缓释。

技术总结
本发明提供了一种羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备方法，包括羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸聚合物的合成、羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸纳米胶束悬浮液的制备和羧甲基壳聚糖-脱氧胆酸-海藻酸钠纳米粒子的制备。还提供了应用，用于抗肿瘤药物人参皂苷Rb1的胃肠道给药。本发明制备的载药纳米粒子具有pH响应性，分散均稳定性好，能够在特定环境下长时间缓慢释放，这对于减少给药次数有显著的益处。这对于减少给药次数有显著的益处。这对于减少给药次数有显著的益处。


技术研发人员：何艳慧 董羽嘉 张佳璇 武占省 安紫苑 王婉莹
受保护的技术使用者：西安工程大学
技术研发日：2023.05.10
技术公布日：2023/10/8