免疫球蛋白轻链抗体及其用途

免疫球蛋白轻链抗体及其用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2020年12月14日提交的美国临时申请序列号63/125,281的权益，所述临时申请以引用的方式整体并入本文。


背景技术：

3.al淀粉样变性是一种未被广泛诊断的疾病，其由可能以轻链淀粉样蛋白(al)的形式在心脏、肾或肝中沉积的游离免疫球蛋白轻链(lc)的错误折叠引起。这种病况由潜在的浆细胞恶液质(plasma cell dyscrasias)引起，浆细胞恶液质导致浆细胞向循环中分泌大量过量的游离免疫球蛋白κ和/或λ轻链。疾病由单个克隆浆细胞群体所分泌的独特轻链的沉积引起。
4.然而，对al的起源知之甚少。因此，迫切需要开发出揭露al形成的潜在机制的工具，以便设计最佳疗法。


技术实现要素：

5.本文描述了人轻链的某些表位和结合所述表位的抗体。本文所述的表位是有利的，因为它们允许产生和/或筛选与错误折叠的轻链结合并促进其清除的抗体，而错误折叠的轻链是轻链淀粉样变性的致病因子。治疗轻链淀粉样变性的一个障碍是，不同的患者可能产生具有不同氨基酸序列的轻链，这些轻链不被当前靶向可变区的抗轻链抗体同等良好地结合。本文所述的抗体靶向κ和λ轻链恒定区中的表位，并且因此实现了更一致的临床结果和更少的患者间后果变异性。结合的普遍性还实现了将所公开的抗体用作针对轻链淀粉样变性的诊断测试的一部分的额外益处。另外，本文所述的抗体对错误折叠的轻链具有特异性，并且对正确折叠的轻链几乎没有反应性，因此减少了可归因于降低抗体水平的不希望的免疫副作用的机会。
6.本公开的某些方面涉及一种特异性结合人游离免疫球蛋白轻链(flc)的抗体(“抗flc抗体”)，其中抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至κ轻链，其中参考抗体结合在包含styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列或由其组成的免疫球蛋白κ轻链上的表位。在一些方面中，抗体在与styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合κ轻链。在一些方面中，抗体结合在包含styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列或由其组成的κ轻链上的表位。
7.本公开的某些方面涉及一种特异性结合人游离免疫球蛋白轻链的抗体(“抗flc抗体”)，其中抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至λ轻链，其中参考抗体结合在包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列或由其组成的免疫球蛋白λ轻链上的表位。在一些方面中，抗体在与nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列重叠的表位处结合λ轻链。在一些方面中，抗体结合在包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列或由其组成的λ轻链上的表位。
8.在一些方面中，抗体不结合包含与免疫球蛋白重链共价连接的免疫球蛋白轻链的
复合物。在一些方面中，flc包含免疫球蛋白轻链肽聚集体。在一些方面中，免疫球蛋白轻链肽聚集体包含一种或多种错误折叠的免疫球蛋白轻链肽。
9.在一些方面中，抗体结合轻链淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，淀粉样蛋白原纤维从获自对象的生物样品收集。在一些方面中，生物样品选自血液、血清、血浆、实体组织及其任何组合。
10.在一些方面中，flc包含免疫球蛋白轻链肽的片段。在一些方面中，flc包含全长免疫球蛋白轻链肽。在一些方面中，抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。在一些方面中，抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些方面中，抗体包含选自以下的抗体的抗原结合部分：fab、fab'、f(ab')2、scfv、dsfv、ds-scfv、二聚体、微型抗体、双抗体、其多聚体，以及双特异性抗体片段。在一些方面中，抗体是单链抗体。
11.在一些方面中，抗体与标记融合或缔合。在一些方面中，标记包括化学标记、生物标记、荧光标记或其任何组合。
12.在一些方面中，抗体包含重链和轻链。在一些方面中，抗体包含重链可变区和轻链可变区。在一些方面中，重链可变区包含可变重链互补决定区(vh-cdr)1、vh-cdr2和vh-cdr3，其中：(a)vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列；(b)vh-cdr1包含seq id no:16中示出的氨基酸序列；(c)vh-cdr1包含seq id no:17中示出的氨基酸序列；或(d)(a)-(c)的任何组合。在一些方面中，重链可变区包含vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3，其中：(a)vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列；(b)vh-cdr1包含seq id no:16中示出的氨基酸序列；并且(c)vh-cdr1包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。在一些方面中，轻链可变区包含可变轻链互补决定区(vl-cdr)1、vl-cdr2和vl-cdr3，其中：(a)vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列；(b)vl-cdr1包含seq id no:12中示出的氨基酸序列；(c)vl-cdr1包含seq id no:13中示出的氨基酸序列；或(d)(a)-(c)的任何组合。在一些方面中，轻链可变区包含vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3，其中：(a)vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列；(b)vl-cdr1包含seq id no:12中示出的氨基酸序列；并且(c)vl-cdr1包含seq id no:13中示出的氨基酸序列。
13.在一些方面中，抗体包含：(a)vl-cdr1，其包含seq id no:11中示出的氨基酸序列；(b)vl-cdr2，其包含seq id no:12中示出的氨基酸序列；(c)vl-cdr3，其包含seq id no:13中示出的氨基酸序列；(d)vh-cdr1，其包含seq id no:15中示出的氨基酸序列；(e)vh-cdr2，其包含seq id no:16中示出的氨基酸序列；以及(f)vh-cdr3，其包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。
14.在一些方面中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列。在一些方面中，抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。在一些方面中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。
15.本公开的某些方面涉及一种多核苷酸或多核苷酸的集合，其编码本文所公开的抗体。本公开的某些方面涉及一种载体或载体的集合，其包含本文所公开的多核苷酸或多核苷酸的集合。在一些方面中，载体还包含一种或多种调控元件。
16.本公开的某些方面涉及一种宿主细胞，其包含本文所公开的抗体、本文所公开的
多核苷酸或多核苷酸的集合或者本文所公开的载体或载体的集合。
17.本公开的某些方面涉及一种药物组合物，其包含：本文所公开的抗体、本文所公开的多核苷酸或多核苷酸的集合、本文所公开的载体或载体的集合或者本文所公开的宿主细胞；和药学上可接受的赋形剂。
18.本公开的某些方面涉及一种制备特异性结合flc的抗体的方法，其包括在合适的条件下培养本文所公开的宿主细胞。在一些方面中，所述方法还包括分离抗体。
19.本公开的某些方面涉及一种诊断al介导的淀粉样变性的方法，其包括使获自对象的生物样品与本文所公开的抗体接触。
20.本公开的某些方面涉及一种测量获自对象的生物样品中的flc的方法，其包括使生物样品与本文所公开的抗体接触。
21.在一些方面中，对象具有一种或多种淀粉样蛋白沉积物。在一些方面中，对象患有特征在于淀粉样蛋白沉积物的疾病或病况。在一些方面中，生物样品选自血液、血清、血浆、实体组织及其任何组合。
22.本公开的某些方面涉及一种治疗具有一种或多种淀粉样蛋白沉积物的对象的方法，其包括向对象施用治疗有效量的本文所公开的抗体。
23.本公开的某些方面涉及一种治疗患有特征在于淀粉样蛋白沉积物的疾病或病况的对象的方法，其包括向对象施用治疗有效量的本文所公开的抗体。
24.在一些方面中，对象患有浆细胞病症。在一些方面中，对象患有系统性淀粉样变性。在一些方面中，对象患有al淀粉样变性。
25.本公开的某些方面涉及一种治疗有需要的对象的浆细胞病症的方法，其包括向对象施用治疗有效量的本文所公开的抗体。
26.在一些方面中，浆细胞病症包括浆细胞恶液质(plasma cell dyscrasias)。在一些方面中，浆细胞恶液质选自意义未明的单克隆丙种球蛋白病(monoclonal gammopathy of unknown significance，mgus)、多发性骨髓瘤(mm)、浆细胞白血病(pcl)及其任何组合。
27.本公开的某些方面涉及一种治疗有需要的对象的系统性淀粉样变性的方法，其包括向对象施用治疗有效量的本文所公开的抗体。在一些方面中，系统性淀粉样变性包括al淀粉样变性。
28.在一些方面中，抗flc抗体使对象中的至少一种淀粉样蛋白沉积物的大小相对于施用之前对象中的至少一种淀粉样蛋白沉积物的大小而言减小。在一些方面中，抗flc抗体使对象中的淀粉样蛋白沉积物的数量相对于施用之前对象中的淀粉样蛋白沉积物的数量而言减少。在一些方面中，抗flc抗体使对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率相对于施用之前对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率而言减小。在一些方面中，抗flc抗体使对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率相对于施用之前对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率而言停止。
29.在一些方面中，本文公开一种制备、筛选或选择针对κ轻链恒定区的抗体的方法，其包括使抗体产生细胞或其条件培养基、多克隆抗体混合物或噬菌体展示文库与包含seq id no:1序列的多肽接触。在某些实施方案中，抗体产生细胞是杂交瘤。在某些实施方案中，多肽的长度小于50个氨基酸。在某些实施方案中，多肽的长度小于25个氨基酸。在某些实施方案中，多肽包含第一部分和第二部分，其中第一部分由seq id no:1序列组成，并且第二
部分包含与κ轻链恒定区异源的氨基酸序列。在某些实施方案中，多肽由seq id no:1组成。在某些实施方案中，所述方法还包括选择与seq id no:1结合的抗体。
30.在一些方面中，本文公开一种制备、筛选或选择针对λ轻链恒定区的抗体的方法，其包括使抗体产生细胞或其条件培养基、抗体混合物或噬菌体展示文库与包含序列seq id no:2的多肽接触。在某些实施方案中，抗体产生细胞是杂交瘤。在某些实施方案中，多肽的长度小于50个氨基酸。在某些实施方案中，多肽的长度小于25个氨基酸。在某些实施方案中，多肽包含第一部分和第二部分，其中第一部分由序列seq id no:2组成，并且第二部分包含与λ轻链恒定区异源的氨基酸序列。在某些实施方案中，多肽由seq id no:2组成。在某些实施方案中，所述方法还包括选择与seq id no:2结合的抗体。
附图说明
31.图1a-1b是全长fl-lc的κ和λ恒定结构域(c
l
)区中存在的病理特异性表位的示意图。图1a显示病理特异性c
l
表位为在正常的、天然折叠的fl-lc同源二聚体内埋藏但在al淀粉样变性中暴露的表位。图1b显示病理特异性c
l
表位在fl-lc淀粉样蛋白(fl-al)形成途径期间暴露在淀粉样原性(amyloidogenic)错误折叠中间体中，其可以使用抗体进行捕获。
32.图2a-2b是显示通过间接elisa，使用本文所述的κ轻链同种型兔多克隆抗体(图2a)或商业泛特异性抗体(图2b)，对天然和未折叠的全长轻链蛋白进行检测的图。
33.图3a-3b显示通过变性蛋白质印迹，使用来自骨髓瘤血浆的κ(klc)和λ(llc)汇集轻链，对未折叠的全长κ轻链蛋白进行的检测。图3a是蛋白质印迹，其显示本文所公开的κ轻链同种型兔多克隆抗体显示对κ轻链的特异性，而不显示对λ轻链的特异性。图3b是蛋白质印迹，其显示商业抗体对其指定的同种型具有特异性，并且仅二抗显示无结合。
34.图4是使用κ轻链同种型兔多克隆抗体检测的信号的曲线图，其显示ph依赖性聚集体结合。灰色条指示在指示的ph下的相对tht荧光(n＝3，左y轴)；白色圆圈指示κ轻链同种型兔多克隆抗体elisa读出，其显示结合与聚集之间的关系(n＝3，右y轴)；并且黑色圆圈指示商业抗κ读出，其不显示ph依赖性关系(n＝3，右y轴)。
35.图5a-5c是使用κ轻链同种型兔多克隆抗体的免疫金电子显微镜的图像，其显示与κ轻链聚集体的结合。图5a描绘用κ轻链同种型兔多克隆抗体对在ph 4.5下制备的聚集体进行的测定的结果，并且显示与大小为大约100nm的大聚集体的结合。图5b和5c描绘用κ轻链同种型兔多克隆抗体对在ph 6下制备的聚集体进行的测定的结果，并且显示与大小为大约75nm的大聚集体的结合。
36.图6a-6b是散点图，其显示κ轻链同种型兔多克隆抗体增强thp-1单核细胞对κ轻链聚集体的摄取。在存在κ轻链同种型兔单克隆抗体(图6b)的情况下，单核细胞吞噬phrodo标记的聚集体的频率是无抗体(图6a)的大约3倍。
37.图7a-7j显示患有λal淀粉样变性的患者的心脏组织的免疫组织化学染色。刚果红染色(图7a-7b)、刚果红荧光(图7c-7d)和dako抗λ抗体(图7e-7f)全部共同染色淀粉样蛋白，表明λ轻链心脏淀粉样变性患者。dako抗κ(图7g-7h)使组织的其他区域染色，并且κ轻链同种型兔多克隆抗体(图8i-8j)显示几乎没有染色，指示它不与λ淀粉样蛋白发生交叉反应。
38.图8a-8e显示attr心脏淀粉样蛋白患者的心脏组织的免疫组织化学染色。刚果红
染色(图8a)和刚果红荧光(图8b)指示淀粉样蛋白的存在。淀粉样蛋白不被dako抗λ抗体(图8c)、dako抗κ抗体(图8d)或κ轻链同种型兔多克隆抗体(图8e)结合。
39.图9是使用抗c
l
抗体，使用对各种患者血浆样品的间接elisa所检测的信号的箱须图。与hfpef对照(诸如attr淀粉样变性患者)相比，患有al淀粉样变性的患者血浆显示信号增加。
40.图10a-10d是lx-96抗κ单克隆抗体重链(图10a和10c)和轻链(图10b和10d)的氨基酸序列(图10a-10b)和核酸序列(图10c-10d)。信号肽序列为纯文本。
41.图11a-11c是说明使用lx-96(图11a)或商业对照抗体(图11b)检测κ轻链的天然或错误折叠形式的间接elisa的结果的线图。不同浓度的天然或错误折叠的al09被lx-96(图11a)或商业对照(图11b)结合，并且使用适当的hrp缀合的二抗，使用tmb化学进行检测。图11c展示lx-96与另一κ轻链变体al12的天然或错误折叠的形式的结合。
42.图12是使用错误折叠的或天然al09作为lx-96结合的竞争物的竞争elisa结果的图形表示。结合呈现为百分比，其中100％表示lx-96与吸附的al09之间的最大结合(无竞争)。递增浓度的错误折叠的al09竞争物成功地竞争lx-96结合(下/黑色)，而天然al09展示无竞争(上/灰色)。
43.图13a-13d是lx-96与错误折叠的(图13a、13c)或天然κ轻链变体(图13b、13d)之间的结合相互作用的生物层干涉测量传感图。lx-96与其靶标在一系列的靶标浓度下的结合通过在2000秒(300s缔合，1700s解离)内的波长(nm)变化来测量。使用octet systems软件拟合缔合和解离曲线以确定kd、kd误差、x2和r2值(表格插图；图13a-13d)。
44.图14a-14b是使用商业对照抗体(图14a)或lx-96(图14b)的错误折叠、天然或淀粉样蛋白物质的天然蛋白质印迹的图像。通过从天然sds-page转移并使用以适当的二抗的licor系统进行检测来制备蛋白质印迹。天然(n)或错误折叠的(m)al09的单体物质出现为约25kda谱带，而聚集体或大mw物质(》250kda)在淀粉样蛋白(a)和天然泳道中出现为拖尾。
45.图15a-15e是活检确认的κal淀粉样变性病例的免疫组织化学染色的图像。使用非特异性抗κ抗体(图15a和15c)或lx-96(图15b、15d和15e)对一个肝脏病例(图15a-15b)和两个心脏病例(图15c-15e)进行染色(深色区域)。比例尺＝100μm。
46.图16a-16i是对作为病理学对照组织的活检确认的淀粉样变性病例的免疫组织化学染色的图像。attr心脏(图16a-16d)、al-λ心脏(图16e-16h)或iapp胰脏组织(图16i)使用刚果红(图16a和16e；深色染色)、非特异性抗λ抗体(图16b和16f)、非特异性抗κ抗体(图16c和16g)或lx-96(图16d、16h和16i)染色。阳性抗体染色出现为黑色。lx-96在这些组织中的任一个中均未显示染色。比例尺＝100μm。
47.图17是体外lx-96对al09聚集的抑制的图形表示。在终点时测量在存在不同亚化学计量浓度的lx-96的情况下fitc标记的al09的聚集。聚集通过归一化从可溶性材料的fitc荧光得出，并且呈现为百分比，趋势线充当眼睛的指导。
48.图18a-18f是以亮视野(图18a、18c和18e)和phrodo(图18b、18d和18f)通道的代表性视野中raw细胞的亮视野和落射荧光图像。将细胞与phrodo标记的al09一起在存在lx-96(图18e-18f)、同种型抗体(图18c-18d)的情况下或作为对照的不存在抗体(图18a、18b)的情况下孵育3h。phrodo荧光信号(白色)表示经由吞噬细胞摄取而内化al09淀粉样蛋白的细胞。图18g是说明如通过每个细胞的平均phrodo荧光所定量的摄取的条形图。p值使用学生t
检验计算。
49.图19是植入κ轻链淀粉样蛋白聚集体(淀粉样瘤；虚线)并经由尾静脉注射输注单次10mg/kg剂量的荧光标记的lx-96抗体的小鼠的荧光图像。白色信号说明输注60min内lx-96向淀粉样瘤的积聚增加。
50.图20a是植入phrodo标记的κ轻链淀粉样蛋白以及在单次尾静脉输注10mg/kg的lx-96或同种型抗体对照之后3小时小鼠的荧光图像。信号增加(白色)表示吞噬作用增加。图20b是使用三种抗体施用方式的吞噬作用的定量图形表示：在植入之前将淀粉样蛋白与抗体共同混合(共同植入)、皮下注射(subq)或尾静脉注射。
51.图21a是植入荧光标记的淀粉样瘤(上)或预混合10mg/kg lx-96的标记的淀粉样瘤(下)的小鼠的荧光图像。经3天取得图像，并且白色信号表明淀粉样蛋白大小。图21b列表显示通过总荧光信号定量的淀粉样蛋白的相对大小。图21c是说明施用lx-96时淀粉样蛋白大小减小速度相比于未治疗的淀粉样瘤而提高(3倍)的图。
52.图22是从输注之后24h用同种型对照或lx-96治疗的小鼠切除的淀粉样瘤组织的免疫组织化学染色。显示了代表性视野。使用巨噬细胞标志物(f4/80)或中性粒细胞标志物(mpo)对组织进行染色。阳性染色显示为黑色。
具体实施方式
53.本公开的某些方面涉及特异性结合人游离免疫球蛋白轻链(flc)的抗体(“抗flc抗体”)。在一些方面中，抗flc抗体结合κ轻链。在一些方面中，抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至κ轻链，其中参考抗体结合在包含styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的免疫球蛋白κ轻链上的表位。在一些方面中，抗flc抗体在与styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合κ轻链。在一些方面中，抗flc抗体结合在包含styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的κ轻链上的表位。
54.在一些方面中，抗flc抗体结合λ轻链。在一些方面中，抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至λ轻链，其中参考抗体结合在包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的免疫球蛋白λ轻链上的表位。在一些方面中，抗flc抗体在与nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合λ轻链。在一些方面中，抗flc抗体结合在包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的λ轻链上的表位。
55.i.术语
56.为了更容易地理解本公开，首先定义某些术语。如本技术中所用，除了如本文另外明确提供那样，否则以下术语中的每一个应具有下文所阐述的含义。额外的定义在整个申请中阐述。
57.应注意，术语“一个”或“一种”实体是指一个(种)或多个(种)所述实体：例如，“一个核苷酸序列”应理解为表示一个或多个核苷酸序列。因此，术语“一个(种)”、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可互换使用。
58.此外，当在本文中使用时“和/或”被视为对两个指定特征或组分中的每一者与或不与另一者一起的具体公开。因此，如在本文中诸如“a和/或b”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“a和b”、“a或b”、“a”(单独)和“b”(单独)。同样地，如以短语如“a、b和/或c”使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面中的每一个：a、b和c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a
和b；b和c；a(单独)；b(单独)；以及c(单独)。
59.术语“约”在本文中用于意指大约、大致、大概或在
……
左右。在术语“约”结合数字范围使用时，其通过扩展所述数值上下的边界来修饰所述范围。通常，术语“约”在本文中用于向上或向下(较高或较低)以10％的差异修饰高于和低于所述值的数值。
60.应理解，本文中无论用语言“包含”描述任何方面，还提供了以“由
……
组成”和/或“基本上由
……
组成”描述的其他类似方面。
61.除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开文本所涉及领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。例如，concise dictionary of biomedicine and molecular biology,juo,pei-show,第二版,2002,crc press；the dictionary of cell and molecular biology,第三版,1999,academic press；以及oxford dictionary of biochemistry and molecular biology,修订版,2000,oxford university press，为技术人员提供了本公开文本中所使用的许多术语的通用词典。
62.单位、前缀和符号以其国际单位制(si)公认的形式来表示。数字范围包括限定所述范围的数字。除非另外指示，核苷酸序列从左向右以5'至3'取向书写。氨基酸序列从左向右以氨基至羧基取向书写。本文所提供的标题不是对本公开文本的各种方面的限制，这些方面可以通过参考整个说明书来获得。因此，即将在以下定义的术语通过参考整个说明书而得到更充分地定义。
63.如本文所述，相对于氨基酸或核酸序列异源是指与和异源序列相比较的氨基酸或核酸序列相比具有不同来源或起源的序列。
64.如本文所用，“抗体”(ab)包括但不限于与抗原特异性结合并包含通过二硫键互连的至少两条重(h)链和两条轻(l)链的糖蛋白免疫球蛋白或其抗原结合部分。每条h链包含重链可变区(本文缩写为vh)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域，即c
h1
、c
h2
和c
h3
。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为v
l
)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域c
l
。vh和v
l
区可以进一步细分为具有高变性的区，称为互补决定区(cdr)，其散布有更保守的区，称为框架区(fr)。每个vh和v
l
包含三个cdr和四个fr，其按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(c1q)。术语“抗体”包括单克隆抗体，并且包括完整抗体及其功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(fab)片段、f(ab')2片段、fab'片段、fv片段、重组igg(rigg)片段、单链抗体片段(包括单链可变片段(sfv或scfv))和单结构域抗体(例如，sdab、sdfv、纳米抗体)片段。
65.术语“互补决定区”和“cdr”(其与“高变区”或“hvr”同义)在本领域中已知是指抗体可变区内的非连续氨基酸序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个cdr(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)，并且在每个轻链可变区中有三个cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)。“框架区”和“fr”在本领域中是已知的，指代重链和轻链的可变区的非cdr部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个fr(fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个fr(fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4)。给定cdr或fr的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知方案中的任一种容易地确定，所述方案包括以下文献中所述
的那些：kabat等人(1991),“sequences of proteins of immunological interest,”5th ed.public health service,national institutes of health,bethesda,md(“kabat”编号方案)；al-lazikani等人,(1997)jmb 273,927-948(“chothia”编号方案)；maccallum等人,j.mol.biol.262:732-745(1996),“antibody-antigen interactions:contact analysis and binding site topography,”j.mol.biol.262,732-745.”(“contact”编号方案)；lefranc mp等人,“imgt unique numbering for immunoglobulin and t cell receptor variabledomains and ig superfamily v-like domains,”dev comp immunol,2003jan；27(1):55-77(“imgt”编号方案)；honegger a和pl
ü
ckthun a,“yet another numbering scheme for immunoglobulin variabledomains:an automatic modeling and analysis tool,”jmolbiol,2001jun 8；309(3):657-70(“aho”编号方案)；以及whitelegg nr和rees ar,“wam:an improved algorithm for modelling antibodies on the web,”proteineng.2000dec；13(12):819-24(“abm”编号方案)。在某些实施方案中，本文所述的抗体的cdr可以通过选自kabat、chothia、imgt、aho、abm或其组合的方法定义。
66.术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为vh和v
l
)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(fr)和三个cdr(参见例如，kindt等人kubyimmunology,第六版,w.h.freeman and co.,91页(2007))。单个vh或v
l
结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合特定抗原的抗体的vh或v
l
结构域分离结合所述抗原的抗体，以分别筛选互补的v
l
或vh结构域的文库(参见例如，portolano等人,j.immunol.150:880-887(1993)；clarkson等人,nature 352:624-628(1991))。
67.如本文所用，“中间”轻链是指不为成熟轻链免疫球蛋白的轻链免疫球蛋白多肽。在一些方面中，中间轻链是未折叠的轻链多肽。在一些方面中，中间轻链是错误折叠的轻链多肽。
68.免疫球蛋白可以源自任何公知的同种型，包括但不限于iga、分泌型iga、igg和igm。igg亚类也是本领域技术人员熟知的并且包括但不限于人igg1、igg2、igg3和igg4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别或亚类(例如，igm或igg1)。举例来说，术语“抗体”包括天然存在的抗体和非天然存在的抗体二者；单克隆抗体和多克隆抗体；嵌合抗体和人源化抗体；人抗体或非人抗体；全合成抗体；和单链抗体。可以通过重组方法将非人抗体人源化以降低其在人体中的免疫原性。在没有明确说明的情况下，除非上下文另有指示，否则术语“抗体”还包括任何上述免疫球蛋白的抗原结合片段或抗原结合部分，并且包括单价和二价片段或部分以及单链抗体。
[0069]“人源化”抗体是其中所有或基本上所有cdr氨基酸残基都来源于非人cdr并且所有或基本上所有fr氨基酸残基都来源于人fr的抗体。人源化抗体任选地可以包括来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指通常为了降低对人的免疫原性而经历了人源化，同时保留了亲本非人抗体的特异性和亲和力的非人抗体的变体。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些fr残基被非人抗体(例如，cdr残基所来源的抗体)的对应残基取代，例如以恢复或提高抗体特异性或亲和力。
[0070]
术语“分离抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。然而，与抗原特异性结合的分离抗体可能与其他抗原(诸如来自不同物种的抗原)具有交叉反应
性。此外，分离抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学品。
[0071]
术语“单克隆抗体”(mab)是指具有单分子组成的抗体分子的非天然存在的制备物，即，其一级序列基本上相同并且对特定表位表现出单一结合特异性和亲和力的抗体分子。mab是分离抗体的实例。mab可以通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其他技术产生。
[0072]
术语“多克隆抗体”(“pab”)是指具有多于一种分子组成的抗体分子的非天然存在的制备物，即，其一级序列不一定相同并且对特定表位可能表现出可变的结合特异性和亲和力的抗体分子。
[0073]“人”抗体是指具有可变区的抗体，其中框架区和cdr区均来源于人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则所述恒定区也来源于人种系免疫球蛋白序列。本公开的人抗体可以包括并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，在体外通过随机或位点特异性诱变引入的突变或在体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中来源于另一种哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的cdr序列已经被接枝到人框架序列上的抗体。术语“人”抗体和“完全人”抗体同义使用。
[0074]“人源化”抗体是指其中在非人抗体的cdr结构域之外的一些、大部分或所有氨基酸被来源于人免疫球蛋白的对应氨基酸替代的抗体。在抗体的人源化形式的一个方面中，在cdr结构域之外的一些、大部分或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸替代，而在一个或多个cdr区内的一些、大部分或所有氨基酸未改变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是被允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力即可。“人源化”抗体保留与原始抗体类似的抗原特异性。
[0075]“嵌合抗体”是指可变区来源于一个物种并且恒定区来源于另一物种的抗体，诸如可变区来源于小鼠抗体并且恒定区来源于人抗体的抗体。
[0076]“抗原”是指能够被抗体结合或引起免疫应答的任何分子，例如肽。如本文所用，“表位”是指能够被抗体结合或引起免疫应答的多肽的一部分。本领域技术人员将容易理解，任何大分子，包括实际上所有蛋白质或肽，都可以充当抗原。抗原和/或表位可以是内源性表达的，即，由基因组dna表达，或者可以从外源dna重组表达。抗原和/或表位可以对某一组织(诸如癌细胞)具有特异性，或者它可以被广泛表达。此外，较大分子的片段可以充当抗原。在一个方面中，抗原是肿瘤抗原。表位可以存在于较长的多肽中(例如，蛋白质中)，或者表位可以作为较长的多肽的片段而存在。在一些方面中，表位与主要组织相容性复合物(mhc)复合(在本文中也称为与hla分子(例如，hla 1类分子)复合)。在某些实施方案中，表位包括某些非蛋白质分子(例如，糖、脂质、磷酸盐等)或修饰蛋白质分子的氨基酸的非蛋白质分子。
[0077]“抗-抗原”抗体是指特异性结合抗原的抗体。例如，抗flc抗体特异性结合flc。
[0078]
抗体的“抗原结合部分”(也称为“抗原结合片段”)是指抗体保留特异性结合完整抗体所结合的抗原的能力的一个或多个片段。
[0079]
关于参考多肽序列的序列同一性百分比(％)是在用以实现最大序列同一性百分比而比对序列和引入缺口(如果需要)并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。可以使用可用的计算机软件以多种方式实现出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对。能够确定用
于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序align-2生成氨基酸序列同一性百分比值。align-2序列比较计算机程序由genentech,inc.编写，并且源代码已经以用户文档提交在washington d.c.,20559的美国版权局(u.s.copyright office)中，其中它在美国版权登记号txu510087下进行了登记。align-2程序可从south san francisco,calif.的genentech,inc.公开获得，或者可以从源代码编译。应编译align-2程序以在unix操作系统(包括数字unix v4.0d)上使用。所有序列比较参数均由align-2程序设置并且不改变。
[0080]
在采用align-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列a与、和或相对于给定氨基酸序列b的氨基酸序列同一性百分比(其可以替代地以短语表述为与、和或相对于给定氨基酸序列b具有或包含某一氨基酸序列同一性百分比的给定氨基酸序列a)计算如下：100乘分数x/y，其中x是序列比对程序align-2在a和b的程序比对中被评分为相同匹配的氨基酸残基数，并且其中y是b中氨基酸残基的总数。将理解的是，在氨基酸序列a的长度不等于氨基酸序列b的长度的情况下，a与b的氨基酸序列同一性百分比将不等于b与a的氨基酸序列同一性百分比。除非另外明确说明，否则本文所用的全部氨基酸序列同一性百分比值如紧接上一段中所述那样使用align-2计算机程序获得。
[0081]
如本文所用，“淀粉样变性”是指特征在于可能呈轻链淀粉样蛋白(al)沉积在心脏、肾或肝中的游离免疫球蛋白轻链(lc)的错误折叠的病或病况。这种病况由潜在的浆细胞恶液质引起，浆细胞恶液质导致浆细胞向循环中分泌大量过量的游离免疫球蛋白κ和/或λ轻链。如本文所用，“原发性淀粉样变性”或“al淀粉样变性”是指最常见的系统性淀粉样变性的类型，在西方国家每年每百万人中有9-14人发病。
[0082]
如本文所用，“浆细胞恶液质”是指一种增殖性浆细胞病症，在所述病症下，单个异常的浆细胞克隆(终末分化b细胞)经历不受调控的扩增并产生高于正常量的轻链蛋白。浆细胞恶液质分为良性(如在意义未明的单克隆丙种球蛋白病(mgus)中所见)或恶性(如在多发性骨髓瘤(mm)和浆细胞白血病(pcl)中所见)。无论所涉及的恶液质的类型如何，这些分泌的轻链都可能经历错误折叠事件，使它们易于在包括心脏、肾和神经系统的重要器官中呈淀粉样蛋白聚集和积聚。此类浸润可能导致肾病综合征、肝肿大、周围神经病变、限制型心肌病以及最终死亡。
[0083]“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任一种将剂物理引入于对象。本文所公开的制剂的示例性施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊椎或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用的短语“肠胃外施用”意指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射施用，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心脏内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。在一些方面中，制剂经由非肠胃外途径(例如，经口)施用。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、经阴道、经直肠、舌下或局部施用。施用还可以例如进行一次、多次和/或经一个或多个延长的时间段。
[0084]
如本文所用，“治疗”是指例如对有意干预生理疾病状态，从而减轻疾病或病况的严重程度；缩短病程的持续时间；改善或消除与疾病或病况相关联的一种或多种症状；或向患有疾病或病况的对象提供有益效果。治疗不需要治愈潜在的疾病或病况。
[0085]
药物或治疗剂的“治疗有效量”、“有效剂量”、“有效量”或“治疗有效剂量”是药物在单独地或与另一治疗剂组合使用时，保护对象免于疾病的发作或者促进疾病消退的任何量，所述疾病消退通过疾病症状的严重程度的降低、无疾病症状时期的频率和持续时间的增加或对由于疾病困扰引起的损伤或残疾的预防证明。可以使用熟练从业人员已知的各种方法评价治疗剂促进疾病消退的能力，如在临床试验期间在人类对象中、在预测在人中的功效的动物模型系统中或通过在体外测定中测定药剂的活性来评价。
[0086]
术语“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式改变免疫应答的方法对罹患疾病或处于感染疾病或遭受疾病复发风险中的对象进行治疗。免疫疗法的实例包括但不限于施用刺激对象中的免疫应答的抗体或其抗原结合部分。
[0087]
在以下小节中更详细地描述本公开文本的各个方面。
[0088]
ii.本公开的组合物
[0089]
本公开的某些方面涉及特异性结合人游离免疫球蛋白轻链(flc)的抗体(“抗flc抗体”)。免疫球蛋白在本质上具有高度可变的氨基酸序列。此外，淀粉样变性典型的al沉积物包含错误折叠的游离免疫球蛋白轻链(lc)聚集体。因此，flc的靶向需要识别许多可变序列中的恒量的能力。为了克服这种异质性，本文所述的抗体被专门设计成识别免疫球蛋白轻链序列的恒定区中的表位。
[0090]
在某些方面中，抗flc抗体结合免疫球蛋白轻链多肽，不管免疫球蛋白轻链的抗原特异性如何。在一些方面中，抗flc抗体结合在免疫球蛋白轻链多肽上的表位，其中所述表位位于免疫球蛋白轻链恒定区内。在一些方面中，表位位于免疫球蛋白轻链恒定区的一部分内，当免疫球蛋白轻链与免疫球蛋白重链一起以复合物的形式时，所述部分在构象上不可接近。在一些方面中，表位位于免疫球蛋白轻链恒定区的一部分内，当免疫球蛋白轻链与免疫球蛋白重链一起以复合物的形式时，所述部分不是表面暴露的。在一些方面中，抗flc抗体特异性结合位于免疫球蛋白轻链恒定区内的表位，其中当免疫球蛋白轻链不与免疫球蛋白重链一起以复合物的形式时，抗flc抗体仅结合所述表位。
[0091]
在某些方面中，抗flc抗体特异性结合不与免疫球蛋白重链缔合的免疫球蛋白轻链。在一些方面中，抗flc抗体不结合包含与免疫球蛋白重链共价连接的免疫球蛋白轻链的复合物。
[0092]
本文所公开的抗flc抗体能够结合任何组成和任何来源的游离免疫球蛋白轻链。在一些方面中，本文所公开的抗flc抗体结合包含轻链恒定区的全部或一部分的任何免疫球蛋白轻链。在一些方面中，flc包含全长免疫球蛋白轻链肽。在一些方面中，flc包含免疫球蛋白轻链肽的片段。在一些方面中，免疫球蛋白轻链肽的片段包含轻链恒定区的全部或一部分。在一些方面中，flc包含免疫球蛋白轻链肽聚集体。在一些方面中，聚集体包含全长免疫球蛋白轻链肽。在一些方面中，聚集体包含免疫球蛋白轻链肽的片段。在一些方面中，聚集体包含全长免疫球蛋白轻链肽和免疫球蛋白轻链肽的片段。在一些方面中，免疫球蛋白轻链肽聚集体包含一种或多种错误折叠的免疫球蛋白轻链肽。
[0093]
在一些方面中，抗flc抗体结合一种或多种轻链淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，抗flc抗体能够在体内结合轻链淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，抗flc抗体选择性结合轻链原纤维的效率高于其结合天然折叠的轻链。在一些方面中，抗flc抗体选择性结合轻链原纤维的效率是其结合天然折叠的轻链的至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0
倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。在一些方面中，抗flc抗体选择性结合轻链原纤维的效率高于其结合天然折叠的轻链。在一些方面中，抗flc抗体选择性结合轻链原纤维的效率是其结合天然折叠的轻链的至少2.0倍。在一些方面中，淀粉样蛋白原纤维从获自对象的生物样品收集。在一些方面中，生物样品选自血液、血清、血浆、实体组织及其任何组合。
[0094]
在一些方面中，抗flc抗体能够破坏轻链原纤维形成。在一些方面中，抗flc抗体通过溶液中错误折叠的轻链中间体破坏轻链原纤维形成。在一些方面中，抗flc抗体在体内破坏从错误折叠的轻链中间体的轻链原纤维形成。
[0095]
在一些方面中，抗flc抗体能够减少轻链原纤维形成。在一些方面中，抗flc抗体通过溶液中错误折叠的轻链中间体减少轻链原纤维形成。在一些方面中，抗flc抗体通过体内错误折叠的轻链中间体减少轻链原纤维形成。在一些方面中，抗flc抗体使轻链原纤维形成相对于在缺乏抗flc抗体的相似条件下的轻链原纤维形成减少至少约1.5倍、至少约2.0倍、至少约2.5倍、至少约3.0倍、至少约3.5倍、至少约4.0倍、至少约4.5倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍或至少约10倍。
[0096]
在一些方面中，抗flc抗体能够诱导体内免疫应答。在一些方面中，在对象中抗flc抗体与(例如淀粉样原纤维中的)免疫球蛋白轻链的结合诱导和/或增强对象中的免疫应答。在一些方面中，免疫应答是细胞免疫应答。在一些方面中，免疫应答包括清除、去除和/或解离对象中的免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)。在一些方面中，抗flc抗体使免疫应答相对于未施用抗flc抗体的对象中的免疫应答增强至少约1.5倍、至少约2.0倍、至少约2.5倍、至少约3.0倍、至少约3.5倍、至少约4.0倍、至少约4.5倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍或至少约10倍。在一些方面中，抗flc抗体诱导对象中针对免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的免疫应答，其中对象在不存在抗flc抗体的情况下不产生针对免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的免疫应答。
[0097]
在一些方面中，抗flc抗体能够调理对象中的轻链免疫球蛋白聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)。在一些方面中，抗flc抗体能够诱导对象中的轻链免疫球蛋白聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的去除。
[0098]
在一些方面中，抗flc抗体是多克隆抗体。在一些方面中，抗flc抗体是单克隆抗体。在一些方面中，抗flc抗体是嵌合抗体。在一些方面中，抗flc抗体是人源化抗体。在一些方面中，抗flc抗体是人抗体。
[0099]
在一些方面中，抗flc抗体包含抗体的抗原结合部分。在一些方面中，抗flc抗体包含fab。在一些方面中，抗flc抗体包含fab'。在一些方面中，抗flc抗体包含f(ab')2。在一些方面中，抗flc抗体包含scfv。在一些方面中，抗flc抗体包含dsfv。在一些方面中，抗flc抗体包含ds-scfv。在一些方面中，抗flc抗体包含二聚体。在一些方面中，抗flc抗体包含微型抗体。在一些方面中，抗flc抗体包含双抗体。在一些方面中，抗flc抗体包含上文任一种的多聚体。在一些方面中，抗flc抗体包含双特异性抗体片段。在一些方面中，抗flc抗体是单链抗体。
[0100]
免疫球蛋白轻链从人基因组中的两个基因座表达：免疫球蛋白κ基因座，其编码κ轻链；和免疫球蛋白λ基因座，其编码λ轻链。每个b淋巴细胞仅表达一类轻链，来自κ或λ基因
座。因此，人血清包含κ轻链和λ轻链抗体的混合物。κ轻链(uniprotp0dox7；seq id no:5)和λ轻链(uniprotp0dox8；seq id no:7)的经典氨基酸序列示出于表1。
[0101]
表1：人免疫球蛋白轻链序列
[0102][0103]
如上文所述，每条免疫球蛋白轻链都包含可变结构域和恒定结构域。κ轻链可变结构域从seq id no:5的氨基酸残基1延伸至108，并且κ轻链恒定区从seq id no:5的氨基酸残基109延伸至214(捕捉为seq id no:6)。λ轻链可变结构域从seq id no:7的氨基酸残基1延伸至112，并且λ轻链恒定区从seq id no:7的氨基酸残基112延伸至216(捕捉为seq id no:8)。
[0104]
ii.a.抗κ轻链抗体
[0105]
在一些方面中，抗flc抗体特异性结合κ轻链多肽。在一些方面中，抗flc抗体特异性结合错误折叠的κ轻链多肽。在一些方面中，抗flc抗体结合错误折叠的κ轻链多肽并且不结合天然κ轻链多肽。在一些方面中，抗flc抗体特异性结合未折叠的κ轻链多肽。在一些方面中，抗flc抗体结合未折叠的κ轻链多肽并且不结合天然折叠的κ轻链多肽。
[0106]
在一些方面中，抗flc抗体结合κ轻链恒定区中存在的表位。在一些方面中，表位在错误折叠的κ轻链多肽中表面展示。在一些方面中，表位在未折叠的κ轻链多肽中表面展示。在一些方面中，表位不在天然折叠的κ轻链多肽中表面展示。
[0107]
在一些方面中，抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至κ轻链多肽，其中参考抗体
结合包含styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的表位的一个或多个氨基酸。在一些方面中，抗flc抗体在与styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合κ轻链。在一些方面中，抗flc抗体结合在包含styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的κ轻链上的表位。在某些实施方案中，参考抗体包含分别为seq id no:14和seq id no:10的重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列。
[0108]
在一些方面中，表位包含seq id no:1中示出的氨基酸中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
、thr
180
或其任何组合，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含thr
172
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含tyr
173
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
174
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含leu
175
、ser
176
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
177
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含thr
178
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含leu
179
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含thr
180
，对应于seq id no:5。
[0109]
在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少两个，对应于seq idno:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少三个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少四个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少五个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少六个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少七个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少八个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
中的至少九个，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。
[0110]
在一些方面中，表位包含ser
171
和thr
172
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
和tyr
173
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
和ser
174
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
和leu
175
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
和ser
176
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
和ser
177
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
和thr
178
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
171
、thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
和leu
179
，对应于seq id no:5。
[0111]
在一些方面中，表位包含leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和
thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。在一些方面中，表位包含thr
172
、tyr
173
、ser
174
、leu
175
、ser
176
、ser
177
、thr
178
、leu
179
和thr
180
，对应于seq id no:5。
[0112]
在一些方面中，抗flc抗体特异性结合κ轻链多肽，并且包含(i)重链和(ii)轻链；其中重链包含可变区和恒定区；其中重链可变区包含可变重链互补决定区(vh-cdr)1、vh-cdr2和vh-cdr3；并且其中轻链可变区包含可变轻链(vl)cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3。在一些方面中，vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vl-cdr2包含seq id no:12中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vl-cdr3包含seq id no:13中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vh-cdr2包含seq id no:16中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vh-cdr3包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。
[0113]
表2：抗κ轻链单克隆抗体序列(lx-96)
[0114][0115][0116]
在一些方面中，抗flc抗体包含(i)重链和(ii)轻链；其中重链包含可变区和恒定区；其中重链可变区包含vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3；并且其中轻链可变区包含可变轻链(vl)cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3；其中vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列；vh-cdr2包含seq id no:16中示出的氨基酸序列；并且vh-cdr3包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列，vl-cdr2包含seq id no:12中示出的氨基酸序列，并且vl-cdr3包含seq id no:13中示出的氨基酸序列。
[0117]
在一些方面中，抗flc抗体包含(i)重链和(ii)轻链；其中重链包含可变区和恒定区；其中重链可变区包含vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3；并且其中轻链可变区包含可变轻链(vl)cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3；其中vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列；vl-cdr2包含seq id no:12中示出的氨基酸序列；并且vl-cdr3包含seq id no:13中示出的氨基酸序列。在一些方面中，vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列，vh-cdr2包含
seq id no:16中示出的氨基酸序列，并且vh-cdr3包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。
[0118]
在某些方面中，抗flc抗体包含(i)重链和(ii)轻链；其中重链包含可变区和恒定区；其中重链可变区包含vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3；并且其中轻链可变区包含可变轻链(vl)cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3；其中vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列，vl-cdr2包含seq id no:12中示出的氨基酸序列，vl-cdr3包含seq id no:13中示出的氨基酸序列，vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列；vh-cdr2包含seq id no:16中示出的氨基酸序列；并且vh-cdr3包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。
[0119]
在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列；其中重链可变区包含有包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1、包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2和包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列。
[0120]
在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出
的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列；其中轻链可变区包含有包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1、包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2和包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些方面中，抗flc抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。
[0121]
在一些方面中，抗flc抗体包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列，轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。
[0122]
在一些方面中，抗flc抗体包含重链和轻链，重链包含seq id no:18中示出的氨基酸序列，轻链包含seq id no:19中示出的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体缺乏重链和轻链的分泌前导序列。
[0123]
在一些方面中，抗flc抗体与参考抗体竞争结合κ轻链多肽，其中参考抗体包含(i)重链和(ii)轻链；其中重链包含可变区和恒定区；其中重链可变区包含vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3；并且其中轻链可变区包含可变轻链(vl)cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3；其中vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列，vl-cdr2包含seq id no:12中示出的氨基酸序列，vl-cdr3包含seq id no:13中示出的氨基酸序列，vh-cdr1包含seq id no:14中示出的氨基酸序列，vh-cdr2包含seq id no:15中示出的氨基酸序列，并且vh-cdr3包含seq id no:16中示出的氨基酸序列。在一些方面中，参考抗体包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列，轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。
[0124]
在一些实施方案中，本文所提供的抗κ轻链抗体以对于抗体靶标约1μm、100nm、
50nm、40nm、30nm、20nm、15nm、10nm、5nm、2nm、1nm、0.5nm、0.1nm、0.05nm、0.01nm或更小(例如10-8
m或更小，例如10-8
m至10-13
m，例如10-9
m至10-13
m)的解离常数(kd)结合错误折叠的κ轻链。在一些实施方案中，本文所提供的抗体对于抗体靶标的解离常数(kd)为约100nm、50nm、40nm、30nm、20nm、15nm、10nm、5nm、2nm、1nm、0.5nm、0.1nm、0.05nm、0.01nm或0.001nm或更大(例如10-8
m或更小，例如10-8
m至10-13
m，例如10-9
m至10-13
m)。抗体可以以在100pm与100nm之间、100pm与50nm之间、100pm与10nm之间、500pm与100nm之间、500pm与50nm之间、500pm与10nm之间、1nm与100nm之间、1nm与50nm之间、1nm与10nm之间的kd结合，kd可以通过合适的测定包括如本文所述的生物层干涉测量法测量。
[0125]
在某些实施方案中，抗κ轻链抗体以在500皮摩尔与25纳摩尔之间的kd与al09淀粉样蛋白结合。在某些实施方案中，抗κ轻链抗体以在500皮摩尔与10纳摩尔之间的kd与al09淀粉样蛋白结合。在某些实施方案中，抗κ轻链抗体以在1皮摩尔与10纳摩尔之间的kd与al09淀粉样蛋白结合。
[0126]
ii.b.抗λ轻链抗体
[0127]
在一些方面中，抗flc抗体结合λ轻链。在一些方面中，抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至λ轻链，其中参考抗体结合在所示氨基酸序列的免疫球蛋白λ轻链上的表位。在一些方面中，抗flc抗体在与nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合λ轻链。在一些方面中，抗flc抗体结合在包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的λ轻链上的表位。
[0128]
在一些方面中，抗flc抗体特异性结合λ轻链多肽。在一些方面中，抗flc抗体结合λ轻链恒定区中存在的表位。
[0129]
在一些方面中，抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合λ轻链多肽，其中参考抗体结合包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的表位的一个或多个氨基酸。在一些方面中，抗flc抗体在与nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合λ轻链。在一些方面中，抗flc抗体结合在包含nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列的λ轻链上的表位。
[0130]
在一些方面中，表位包含seq id no:2中示出的氨基酸中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或十个。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
、leu
184
或其任何组合，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含lys
175
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含tyr
176
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ala
177
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ala
178
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ser
179
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ser
180
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含tyr
181
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含leu
182
，对应于seq idno:7。在一些方面中，表位包含ser
183
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含leu
184
，对应于seq id no:7。
[0131]
在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少两个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少三个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、
tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少四个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少五个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少六个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少七个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少八个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
中的至少九个，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。
[0132]
在一些方面中，表位包含asn
174
和lys
175
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
和tyr
176
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
和ala
177
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
和ala
178
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
和ser
179
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
和ser
180
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
和tyr
181
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
和leu
182
。在一些方面中，表位包含asn
174
、lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
和ser
183
，对应于seq id no:7。
[0133]
在一些方面中，表位包含ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。在一些方面中，表位包含lys
175
、tyr
176
、ala
177
、ala
178
、ser
179
、ser
180
、tyr
181
、leu
182
、ser
183
和leu
184
，对应于seq id no:7。
[0134]
ii.c.核酸分子
[0135]
本公开的某些方面涉及编码本文所述的抗flc抗体的核酸分子。核酸可以存在于完整细胞中，存在于细胞裂解液中或者以部分纯化或大致上纯的形式存在。当通过标准技术(包括碱性/sds处理、cscl显带(banding)、柱色谱法、限制性酶、琼脂糖凝胶电泳和本领域中熟知的其他技术)与其他细胞组分或其他污染物(例如，其他染色体dna，例如，本质上连接至分离dna的染色体dna)或蛋白质纯化时，核酸“被分离”或“变得大致上纯”。参见，f.ausubel等人,ed.(1987)current protocols in molecular biology,greene publishing and wiley interscience,new york。本文所述的核酸可以是例如dna或rna，并且可以包含或不包含内含子序列。在一些方面中，核酸是cdna分子。
[0136]
本文所述的核酸可以使用标准分子生物学技术获得。对于杂交瘤所表达的抗体
(例如，从携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤，如下文进一步描述)，通过杂交瘤制成的编码抗体轻链和重链的cdna可以通过标准pcr扩增或cdna克隆技术获得。对于从免疫球蛋白基因文库(例如，使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可以从文库回收编码抗体的核酸。
[0137]
用于制备本文所公开的抗flc抗体的方法可以包括在包含编码具有信号肽的重链和轻链的核苷酸序列的细胞系中表达重链和轻链。本文涵盖包含这些核苷酸序列的宿主细胞。
[0138]
一旦获得编码vh和vl区段的dna片段，便可以通过标准重组dna技术进一步操作这些dna片段，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、fab片段基因或scfv基因。在这些操作中，编码vl或vh的dna片段可操作地连接至编码另一蛋白质的另一dna片段，诸如抗体恒定区或柔性接头。如此情境中所用，术语“可操作地连接”旨在表示两个dna片段接合，使得由两个dna片段编码的氨基酸序列保持在框内。
[0139]
可以通过将vh编码dna可操作地连接至编码重链恒定区(铰链、ch1、ch2和/或ch3)的另一dna分子来将编码vh区的分离dna转化成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如kabat,e.a.等人(1991)sequences of proteins of immunological interest,第十五版,u.s.department of health and human services,nih出版号91-3242)，并且涵盖这些区的dna片段可以通过标准pcr扩增获得。重链恒定区可以是igg1、igg2、igg3、igg4、iga、ige、igm或igd恒定区，例如igg1区。对于fab片段重链基因，vh编码dna可以可操作地连接至仅编码重链ch1恒定区的另一dna分子。
[0140]
可以通过将vl编码dna可操作地连接至编码轻链恒定区cl的另一dna分子来将编码vl区的分离dna转化成全长轻链基因(以及fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如kabat,e.a.等人(1991)sequences of proteins of immunological interest,第十五版,u.s.department of health and human services,nih出版号91-3242)，并且涵盖这些区的dna片段可以通过标准pcr扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
[0141]
为了产生scfv基因，将vh和vl编码dna片段可操作地连接至编码柔性接头(例如，编码氨基酸序列(gly
4-ser)3)的另一片段，使得vh和vl序列可以被表达为连续的单链蛋白，其中vl和vh区通过柔性接头接合(参见例如，bird等人,(1988)science 242:423-426；huston等人,(1988)proc.natl.acad.sci.usa 85:5879-5883；mccafferty等人,(1990)nature 348:552-554)。
[0142]
ii.d.载体
[0143]
本公开的某些方面涉及包含本文所公开的核酸分子的载体。在一些方面中，载体是病毒载体。在一些方面中，载体是病毒颗粒或病毒。在一些方面中，载体是哺乳动物载体。在一些方面中，载体是细菌载体。
[0144]
在某些方面中，载体是逆转录病毒载体。在一些方面中，载体选自：腺病毒载体、慢病毒、仙台病毒(sendai virus)、杆状病毒载体(baculoviral vector)、eb病毒载体(epstein barr viral vector)、乳多空病毒载体(papovaviral vector)、牛痘病毒载体(vaccinia viral vector)、单纯疱疹病毒载体(herpes simplex viral vector)和腺相关病毒(aav)载体。在具体方面中，载体是aav载体。在一些方面中，载体是慢病毒。在具体方面
中，载体是aav载体。在一些方面中，载体是仙台病毒。在一些方面中，载体是杂交载体。可以在本公开中使用的杂交载体的实例可见于huang和kamihira,biotechnol.adv.31(2):208-23(2103)中，其以引用的方式整体并入本文。
[0145]
在一些方面中，载体还包含一个或多个调控元件。可用于本文所公开的载体的调节元件包括但不限于启动子、增强子、polya序列、mirna结合序列、内含子序列、剪接受体位点及其任何组合。在一些方面中，载体包含组织特异性启动子。在一些方面中，载体包含组织特异性增强子。
[0146]
ii.e.药物组合物
[0147]
本公开的某些方面涉及药物组合物，其包含本文所公开的抗flc抗体和药学上可接受的赋形剂。本公开的一些方面涉及药物组合物，其包含本文所公开的编码抗flc抗体的核酸分子和药学上可接受的赋形剂。本公开的一些方面涉及药物组合物，其包含本文所公开的载体或载体的集合和药学上可接受的赋形剂。
[0148]
在一些方面中，本公开的组合物还包含增量剂(bulking agent)。增量剂可以选自：nacl、甘露醇、甘氨酸、丙氨酸及其任何组合。在其他方面中，本公开的组合物包含稳定剂。稳定剂可以选自：蔗糖、海藻糖、棉子糖、精氨酸或其任何组合。在其他方面中，本公开的组合物包含表面活性剂。表面活性剂可以选自：聚山梨醇酯80(ps80)、聚山梨醇酯20(ps20)及其任何组合。在某些方面中，组合物还包含螯合剂。螯合剂可以选自：二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)、乙二胺四乙酸、次氮基三乙酸及其任何组合。药物组合物可以包含溶解在适当的等渗缓冲液(诸如0.9％ nacl或5％葡萄糖)中的本文所述的抗体，并且可以包含其他表面活性剂、ph缓冲液或抗氧化剂。
[0149]
在一个方面中，组合物还包含nacl、甘露醇、喷替酸(dtpa)、蔗糖、ps80及其任何组合。
[0150]
如本文所用，“药学上可接受的载剂”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。在一些方面中，载剂适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊椎或表皮施用(例如，通过注射或输注)。根据施用途径，可以将活性化合物(即，抗体)用材料包衣以保护化合物免受酸和可使化合物失活的其他天然条件的作用。
[0151]
本文所述的药物化合物可以包括一种或多种药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”是指保留母体化合物的所需生物活性并且不赋予任何非所需的毒理学效应的盐(参见例如，berge,s.m.等人(1977)j.pharm.sci.66:1-19)。此类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸(诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等)以及衍生自无毒有机酸(诸如脂肪族单羧酸和脂肪族二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等)的那些。碱加成盐包括衍生自碱土金属(诸如钠、钾、镁、钙等)以及衍生自无毒有机胺(诸如n,n'-二苄基乙二胺、n-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等)的那些。
[0152]
本文所述的药物组合物还可以包含药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(bha)、丁基化羟基甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，诸如
柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
[0153]
可用于本文所述的药物组合物中的合适的水性和非水性载剂的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如，甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(诸如，橄榄油)和可注射有机酯(诸如，油酸乙酯)。可以例如通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)、在分散体的情况下通过维持所需粒度、以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。
[0154]
这些组合物还可以含有佐剂，诸如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以通过上述灭菌程序以及通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚山梨酸等)两种方法来确保防止微生物的存在。还可以期望在组合物中包含等渗剂，诸如糖、氯化钠等。此外，可以通过包含延迟吸收的试剂(诸如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延长吸收。
[0155]
药学上可接受的载剂包括无菌水性溶液或分散体以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。此类介质和药剂用于药物活性材料的用途是本领域已知的。除非任何常规介质或药剂与活性化合物不相容，否则涵盖其用于本文所述的药物组合物中。药物组合物可以包含防腐剂或可以不含防腐剂。可以将补充性活性化合物掺入到组合物中。
[0156]
治疗性组合物在制造和储存的条件下通常必须是无菌和稳定的。可以将组合物配制成溶液、微乳液、脂质体或适合高药物浓度的其他有序结构。载剂可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。可以例如通过以下方式维持适当流动性：通过使用诸如卵磷脂等包衣，在分散体情况下通过维持所需粒径，以及通过使用表面活性剂。在许多情况下，组合物可以在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包含延迟吸收的剂(例如，单硬酯酸盐和明胶)来实现。
[0157]
可以通过将所需量的活性化合物在需要时与以上列举的一种成分或成分的组合一起掺入在适当溶剂中，随后进行灭菌微过滤来制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入到无菌媒介物中来制备分散体，无菌媒介物含有基础分散介质和来自本文列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，一些制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，这些方法由其先前无菌过滤溶液产生活性成分加任何另外期望成分的粉末。
[0158]
可以与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的对象和特定施用模式而变化。可以与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常将是产生治疗效果的组合物的量。通常，在100％中，此量的范围为约0.01％至约99％的活性成分，约0.1％至约70％或约1％至约30％的活性成分与药学上可接受的载剂的组合。
[0159]
本文所述的组合物可以被配制用于经由一种或多种途径施用。在一些方面中，药物组合物被配制用于静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊椎或其他肠胃外施用，例如通过注射或输注。如本文所用的短语“肠胃外施用”意指除了肠施用和局部施用之外的、通常通过注射的施用模式，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内、硬膜外以及胸骨内注射和输注。
[0160]
在一些方面中，药物组合物被配制用于非肠胃外施用途径，诸如局部、表皮或粘膜
施用途径，例如鼻内、经口、经阴道、经直肠、舌下或局部。
[0161]
可以将flc抗体与保护化合物免于快速释放的载剂一起制备，诸如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多用于制备此类制剂的方法是获得专利权的或是本领域的技术人员通常已知的。参见例如，sustained and controlled release drug delivery systems,j.r.robinson,ed.,marcel dekker,inc.,new york,1978。
[0162]
在一些方面中，本文所述的抗flc抗体被配制成确保在体内适当的分布。例如，血脑屏障(bbb)排斥许多高度亲水性化合物。为确保本文所述的治疗性化合物穿过bbb(如果需要)，可以将它们以例如脂质体的形式配制。对于制造脂质体的方法，参见例如美国专利4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含一个或多个选择性运输到特定细胞或器官中，因此增强靶向药物递送的部分(参见例如，v.v.ranade(1989)j.clin.pharmacol.29:685)。示例性靶向部分包括：叶酸盐或生物素(参见例如，low等人的美国专利5,416,016)；甘露糖苷(umezawa等人,(1988)biochem.biophys.res.commun.153:1038)；抗体(p.g.bloeman等人(1995)febslett.357:140；m.owais等人(1995)antimicrob.agentschemother.39:180)；表面活性蛋白a受体(briscoe等人(1995)am.j.physiol.1233:134)；pl20(schreier等人(1994)j.biol.chem.269:9090)；还参见k.keinanen；m.l.laukkanen(1994)febslett.346:123；j.j.killion；i.j.fidler(1994)immunomethods 4:273。
[0163]
iii.使用方法
[0164]
本文所用的抗flc抗体可以用于任何目的。本公开的某些方面涉及测量样品中的flc的方法。本公开的其他方面涉及治疗有需要的对象的疾病或病况的方法。在一些方面中，抗flc抗体被修饰和/或配制，例如，如本文所述，以用于特定用途。
[0165]
iii.a.测量方法
[0166]
本公开的某些方面涉及测量轻链免疫球蛋白的方法。本文所公开的抗体可以用于测量任何免疫球蛋白轻链或其聚集体。在一些方面中，抗flc抗体用于在体内测量免疫球蛋白轻链或其聚集体。在一些方面中，抗flc抗体用于测量从对象收集的生物样品中的免疫球蛋白轻链或其聚集体。在一些方面中，生物样品是血浆样品、血液样品、组织样品(例如，组织活检)、尿液样品或其任何组合。
[0167]
在一些方面中，所述方法包括测量轻链原纤维。因此，本文所述的抗体可用于鉴定患有特征在于形成免疫球蛋白轻链沉积物(例如，淀粉样蛋白原纤维沉积物)的疾病或病况的对象。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定(例如，诊断)为患有淀粉样变性。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定为患有系统性淀粉样变性。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定为患有al淀粉样变性。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定为患有浆细胞恶液质。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定为患有意义未明的单克隆丙种球蛋白病(mgus)。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定为患有多发性骨髓瘤(mm)。在一些方面中，抗flc抗体用于将对象鉴定为患有浆细胞白血病(pcl)。
[0168]
在一些方面中，抗flc抗体包含一个或多个标记。本领域已知的任何标记都可以用于增加抗flc被检测和/或可视化的能力。在一些方面中，标记包括化学标记。在一些方面
中，标记包括酶标记。在一些方面中，标记包括底物，其在存在特定酶的情况下是可检测的。在一些方面中，标记是荧光标记。
[0169]
本公开的某些方面涉及使用本文所公开的抗flc抗体在体内测量轻链免疫球蛋白的方法。在一些方面中，抗flc抗体包含可检测探针。在一些方面中，抗flc抗体是对比剂缀合的抗体。在一些方面中，所述方法是诊断性医学成像方法，例如，pet/ct、spect、mri或其任何组合。
[0170]
iii.b.治疗方法
[0171]
本公开的某些方面涉及治疗有需要的对象的疾病或病况的方法，其包括施用本文所公开的抗flc抗体。在一些方面中，疾病或病况包括淀粉样变性。在一些方面中，疾病或病况包括系统性淀粉样变性。在一些方面中，疾病或病况包括al淀粉样变性。在一些方面中，疾病或病况包括浆细胞恶液质。在一些方面中，疾病或病况包括意义未明的单克隆丙种球蛋白病(mgus)。在一些方面中，疾病或病况包括多发性骨髓瘤(mm)。在一些方面中，疾病或病况包括浆细胞白血病(pcl)。
[0172]
本公开的某些方面涉及减少和/或清除有需要的对象中的免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的方法，其包括施用本文所公开的抗flc抗体。在一些方面中，对象的心脏中具有一种或多种免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，对象的肾中具有一种或多种免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，对象的神经系统组织中具有一种或多种免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，对象的脑中具有一种或多种免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维。
[0173]
本公开的某些方面涉及治疗有需要的对象的肾病综合征的方法，其包括向对象施用本文所公开的抗flc抗体，其中肾病综合征包含一种或多种免疫球蛋白轻链沉积物，例如一种或多种淀粉样蛋白原纤维沉积物。本公开的某些方面涉及治疗有需要的对象的肝肿大的方法，其包括向对象施用本文所公开的抗flc抗体，其中肝肿大包含一种或多种免疫球蛋白轻链沉积物，例如一种或多种淀粉样蛋白原纤维沉积物。本公开的某些方面涉及治疗有需要的对象的周围神经病变的方法，其包括向对象施用本文所公开的抗flc抗体，其中周围神经病变包含一种或多种免疫球蛋白轻链沉积物，例如一种或多种淀粉样蛋白原纤维沉积物。本公开的某些方面涉及治疗有需要的对象的限制型心肌病的方法，其包括向对象施用本文所公开的抗flc抗体，其中限制型心肌病包含一种或多种免疫球蛋白轻链沉积物，例如一种或多种淀粉样蛋白原纤维沉积物。
[0174]
在一些方面中，向对象施用抗flc抗体减少和/或清除对象中的一种或多种免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维。在一些方面中，在施用抗flc抗体之后，对象中的免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的大小减小。在一些方面中，在施用抗flc抗体之后，对象中的免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的大小减小至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些方面中，在施用抗flc抗体之后，免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)完全解离或以其他方式从对象清除。
[0175]
在一些方面中，向对象施用抗flc抗体减少或减慢对象中的一种或多种免疫球蛋
白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的形成。在一些方面中，在施用抗flc抗体之后，对象中的免疫球蛋白轻链聚集体形成(例如淀粉样蛋白原纤维形成)的速率降低。在一些方面中，在施用抗flc抗体之后，对象中的免疫球蛋白轻链聚集体(例如淀粉样蛋白原纤维)的大小减小至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些方面中，在施用抗flc抗体之后，对象中的免疫球蛋白轻链聚集体形成(例如淀粉样蛋白原纤维形成)的速率停止，例如不再形成免疫球蛋白轻链聚集体。
[0176]
在一些方面中，在施用之后，抗flc抗体诱导对象中的免疫应答。在一些方面中，抗flc抗体调理对象中的免疫球蛋白轻链(例如免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维)。在一些方面中，免疫应答包括巨噬细胞的诱导。在一些方面中，免疫应答包括巨噬细胞的募集。在一些方面中，免疫应答包括对象中的免疫球蛋白轻链(例如免疫球蛋白轻链聚集体，例如淀粉样蛋白原纤维)的吞噬作用增加。在一些方面中，免疫应答相对于施用抗flc抗体之前的免疫应答增加至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约4.5倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍。
[0177]
iv.抗体产生
[0178]
本文所述的抗flc抗体可以使用多种已知技术产生，诸如kohler和milstein,nature 256:495(1975)描述的标准体细胞杂交技术。虽然体细胞杂交程序是优选的，但原则上也可以采用其他用于产生单克隆抗体的技术，例如，b淋巴细胞的病毒或致癌转化、使用人抗体基因文库的噬菌体展示技术。
[0179]
用于制备杂交瘤的动物系统的实例是鼠系统。在小鼠中的杂交瘤产生是非常成熟的程序。免疫方案和分离免疫脾细胞用于融合的技术是本领域已知的。融合配偶体(例如鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。
[0180]
本文所述的嵌合或人源化抗flc抗体可以基于如上文所述制备的鼠单克隆抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的dna可以从感兴趣的鼠杂交瘤获得并且使用标准分子生物学技术工程化成含有非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠可变区连接至人恒定区(参见例如，cabilly等人的美国专利号4,816,567)。为了产生人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠cdr区插入到人框架中(参见例如，winter的美国专利号5,225,539以及queen的美国专利号5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370)。
[0181]
在一些方面中，本文所述的抗flc抗体是人单克隆抗体。可以使用携带人免疫系统的一部分而不是小鼠系统的转基因或转染色体小鼠生成此类针对flc的人单克隆抗体。这些转基因和转染色体小鼠包括本文中分别称为humab小鼠(例如，humab-(medarex,inc.))和km小鼠的小鼠，并且在本文中统称为“人ig小鼠”。
[0182]
在一些方面中，本文所述的抗flc抗体使用在转基因和转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠(诸如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠)产生。此类小鼠在本文中称为“km小鼠”，详细描述于ishida等人的pct公开wo 02/43478中。
[0183]
更进一步地，表达人免疫球蛋白基因的替代转基因动物系统在本领域中可供使用
并且可用于产生本文所述的抗flc抗体。例如，可以使用称为xenomouse(abgenix,inc.)的替代转基因系统；此类小鼠描述于例如kucherlapati等人的美国专利号5,939,598、6,075,181、6,114,598、6,150,584和6,162,963中。
[0184]
此外，表达人免疫球蛋白基因的替代转染色体动物系统在本领域中可供使用并且可用于产生本文所述的抗flc抗体。例如，可以使用携带人重链转染色体和人轻链转染色体的小鼠，称为“tc小鼠”；此类小鼠描述于tomizuka等人(2000)proc.natl.acad.sci.usa 97:722-727中。例如，本领域中已经描述了携带人重链和轻链转染色体的母牛(kuroiwa等人(2002)naturebiotechnology 20:889-894)，并且它们可用于产生本文所述的抗flc抗体。
[0185]
本领域中描述的用于产生人抗体(例如，人抗flc抗体)的额外小鼠系统包括：(i)小鼠(regeneron pharmaceuticals,inc.)，其中内源性小鼠重链和轻链可变区已经经由同源重组被可操作地连接至内源性小鼠恒定区的人重链和轻链可变区替代，使得在小鼠中产生嵌合抗体(人v/小鼠c)，然后使用重组dna技术随后转化成全人抗体；以及(ii)小鼠(merus biopharmaceuticals,inc.)，其中小鼠含有未重排的人重链可变区，但含有单个重排的人共同轻链可变区。此类小鼠以及其产生抗体的用途描述于例如wo 2009/15777、us2010/0069614、wo 2011/072204、wo 2011/097603、wo 2011/163311、wo 2011/163314、wo 2012/148873、us2012/0070861和us2012/0073004中。
[0186]
本文所述的人单克隆抗flc抗体还可以使用用于筛选人免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法来制备。此类用于分离人抗体的噬菌体展示方法是本领域中已建立的。参见例如：ladner等人的美国专利号5,223,409、5,403,484和5,571,698；dower等人的美国专利号5,427,908和5,580,717；mccafferty等人的美国专利号5,969,108和6,172,197；以及griffiths等人的美国专利号5,885,793、6,521,404、6,544,731、6,555,313、6,582,915和6,593,081。
[0187]
本文所述的人单克隆抗flc抗体还可以使用scid小鼠来制备，已经将人免疫细胞重建到所述小鼠中，使得可以在免疫之后产生人抗体应答。此类小鼠描述于例如wilson等人的美国专利号5,476,996和5,698,767。
[0188]
编码本文所述的抗体的核酸可用于感染、转染、转化合适的细胞或以其他方式使合适的细胞对于核酸是转基因的，因此实现用于商业或治疗用途的抗体的产生。用于从大规模细胞培养中产生抗体的标准细胞系和方法是本领域已知的。参见例如，li等人,“cell culture processes for monoclonal antibody production.”mabs.2010sep-oct；2(5):466-477。在某些实施方案中，细胞是真核细胞。在某些实施方案中，真核细胞是哺乳动物细胞。在某些实施方案中，哺乳动物细胞是可用于产生抗体的细胞系，是中国仓鼠卵巢细胞(cho)细胞、ns0鼠骨髓瘤细胞或细胞。在某些实施方案中，将编码抗体的核酸整合到可用于产生抗体的细胞的基因组基因座中。在某些实施方案中，本文描述了一种制备抗体的方法，其包括在足以允许产生和分泌所述抗体的体外条件下培养包含编码抗体的核酸的细胞。
[0189]
在某些实施方案中，本文描述一种主细胞库，其包含：(a)哺乳动物细胞系，其包含整合在基因组位置处的编码本文所述的抗体的核酸；和(b)冷冻保护剂。在某些实施方案中，冷冻保护剂包含甘油或dmso。在某些实施方案中，主细胞库包含：(a)cho细胞系，其包含
整合在基因组位置处的编码本文所述的抗体的核酸；和(b)冷冻保护剂。在某些实施方案中，冷冻保护剂包含甘油或dmso。在某些实施方案中，将主细胞库包含在能够承受液氮冷冻的合适的小瓶或容器中。
[0190]
本文还描述了制备本文所述的抗体的方法。此类方法包括将包含编码抗体的核酸的细胞或细胞系在细胞培养基中在足以允许抗体表达和分泌的条件下孵育，以及进一步从细胞培养基中收获抗体。收获还可以包括一个或多个纯化步骤以去除活细胞、细胞碎片、非抗体蛋白或多肽、不希望的盐、缓冲液和培养基组分。在某些实施方案中，额外纯化步骤包括离心、超速离心、蛋白a、蛋白g、蛋白a/g或蛋白l纯化和/或离子交换色谱。
[0191]
实施例
[0192]
以下说明性实施例代表本文所述的组合物和方法的实施方案，并且不意味着以任何方式进行限制。
[0193]
实施例1：抗体的生成
[0194]
选择埋藏在天然lc结构内的表位，其在κ(styslsstlt(seq id no:1))和λ(nkyaassylsl(seq id no:2))轻链蛋白中贡献相同的结构折叠。在轻链恒定结构域上选择表位，因为该序列存在于所有al患者中，并且因此其在患者之间的结合变异性相比于针对可变结构域设计的抗体更小。两种抗原均包含免疫球蛋白结构域的双层β-夹心基序的内链，并且》85％埋藏在天然折叠的二聚体和单体中(图1a)。抗原不参与二硫键形成，并且具有显著的抗原性，如通过emboss探测器所评估(kolaskar等人,1990)。因为这些抗原被埋藏在天然结构中，所以针对这些抗原产生的抗体应该不结合天然折叠的轻链。
[0195]
然后设计合适的肽序列(gkggstyslsstltggkg(seq id no:3)和gkggnkyaassylslggkg(seq id no:4))以产生可能仅靶向al蛋白的病理性错误折叠状态的抗体，同时使天然折叠的正常免疫球蛋白轻链不受影响。这些抗体被称为抗κ抗体和抗λ抗体。
[0196]
使用fl-lc蛋白表达系统测试抗κ抗体针对变性和天然形式的κfl-lc的特异性。间接elisa测定显示，抗κ抗体对κfl-lc蛋白的未折叠形式具有特异性(图2a)。然而，泛特异性的商业抗体未检测到折叠与未折叠的lc蛋白之间的差异。(图2b)。还以抗κ抗体(图3a)和商业抗体(图3b)，使用变性sds-page蛋白质印迹，确认了抗κ抗体的特异性。
[0197]
然后使用硫黄素t(tht)荧光测定测试了抗κ抗体在体外结合错误折叠的κ轻链聚集体的能力。测量了κ轻链聚集的ph依赖性。显示在ph 2.5与5之间聚集倾向增加(图4)。然后使用产生的聚集体以抗κ抗体和商业泛特异性抗体进行elisa。观察到产生的聚集体(tht)的量与抗κ抗体(而不是商业抗体)的结合之间的相关性(图5)。这些结果通过对聚集体进行免疫金电子显微镜(igem)来验证。简而言之，将200目铜网格在ph 4.5或ph 6下涂覆聚集体，封闭并且用抗κ抗体探测。使用金缀合的抗兔二抗来实现6nm电子不透明金颗粒的可视化(通过em的黑点)。在两种ph下均观察到抗κ抗体与聚集体的结合(图5a-5c)。
[0198]
实施例2：al聚集体的体外清除
[0199]
通过吞噬作用测定测试了抗κ抗体在体外促进al聚集体的免疫清除的能力。测定使用thp-1单核细胞和用在低ph下发出荧光的ph敏感性罗丹明(phrodo)染料标记的轻链聚集体进行。将聚集体与抗κ抗体一起(图6b)或不与其一起(图6a)孵育，并且添加单核细胞。细胞内phrodo荧光的存在指示标记的聚集体的摄取和向内体性溶酶体的内化。phrodo的摄
取通过标准流式细胞术方法评估，对荧光强度设门。在存在抗κ抗体的情况下观察到单核细胞摄取增加三倍，指示免疫复合物的有效清除(图6a-6b)。
[0200]
还使用人心脏组织，通过免疫组织化学验证了抗κ抗体的特异性。结果指示，抗κ抗体不结合λ轻链淀粉样蛋白(图7a-7j)或attr淀粉样蛋白(形成心脏淀粉样蛋白的另一种蛋白质)(图8a-8e)。
[0201]
实施例3：抗κ抗体的体内免疫反应性
[0202]
使用患有al-cm的患者的血浆进行间接elisa测定，以评估抗κ抗体在体内对al物质的免疫反应性。抗κ抗体成功地将患有al-cm的患者与先前用抗骨髓瘤化疗治疗的患者和非al心脏淀粉样变性患者(例如，attr-cm)区分开，不管患者al同种型如何(图9)。
[0203]
实施例4：抗κ单克隆抗体的生成
[0204]
本实施例描述了抗κ单克隆抗体的设计和生成。为了生成针对错误折叠的免疫球蛋白轻链的抗体，我们选择两条内部β-链作为抗原，一条在κ轻链恒定结构域中(styslsstlt；seq id no:1)，seq id no:5的残基171-180，并且第二条在λ轻链恒定结构域中(nkyaassylsl；seq id no:2)，seq id no:7的残基174-184，如实施例1中所述。
[0205]
将额外残基添加到这些表位中，以生成抗原肽(乙酰基-cgkggstyslsstltggkg-酰胺；seq id no:3，和乙酰基-cggnkyaassylslgg-酰胺；seq id no:9)。然后，通过n末端cys残基的侧链和马来酰亚胺化学，将这些肽共价偶联到匙孔血蓝蛋白的表面。将肽缀合物用作免疫原以产生抗体，所述抗体可能仅靶向轻链蛋白的病理性错误折叠状态，同时使天然折叠的正常免疫球蛋白轻链不受影响。单克隆抗体通过小鼠杂交瘤技术产生。
[0206]
在经由杂交瘤技术在小鼠中使用κ抗原肽(seq id no:1)生成的若干单克隆抗体中，鉴定一种杂交瘤克隆，其产生具有最佳错误折叠特异性结合特性的抗体(本文称为lx-96)。此杂交瘤细胞含有编码抗体重链(图10c)和轻链(图10d)的dna序列，氨基酸序列注释于图10a-10b中。对恒定结构域的分析表明，抗体为igg1/κ亚类，而可变结构域的序列分析揭示了独特的cdr序列(表3和4)。这6个cdr序列给予lx-96其结合κ轻链的错误折叠和聚集形式的特性，同时避开天然构象。
[0207]
表3：lx-96轻链可变结构域的氨基酸序列(seq id no:10)
[0208]
[0209]
[0210]
[0211][0212]
表4：lx-96重链可变结构域的氨基酸序列(seq id no:14)
[0213]
[0214]
[0215][0216]
实施例5：抗κ单克隆抗体的表征
[0217]
为了验证lx-96仅对非天然、错误折叠/未折叠的κ轻链的结合特异性，我们使用从t7shuffle细胞(new england biolabs)表达和纯化的al疾病相关联的κ轻链变体(al09或al12)进行了免疫化学测定。使用间接elisa，我们证明lx-96对错误折叠/未折叠的κ轻链变体均具有强结合亲和力(该变体通过在6m盐酸胍中解折叠al09或al12，然后在二硫苏糖醇中还原并用碘乙酰胺烷基化而产生)，但对天然折叠的κ轻链没有强结合亲和力(图11a和11c)。这种结合活性与商业抗κ轻链抗体(agilent dako)形成对比，商业抗κ轻链抗体不能将天然al09与错误折叠/未折叠的al09区分开(图11b)。进行竞争elisa以获得lx-96对错误折叠κ轻链与天然κ轻链的相对结合亲和力的测量。将错误折叠的al09涂覆在96孔板中，并且在一抗结合期间添加lx-96和竞争物的混合物。错误折叠的al09有效竞争结合至lx-96，
抑制常数(ic
50
)为30nm(图12)，指示强结合亲和力。另一方面，天然折叠的κ轻链不显示任何可测量的结合竞争，指示lx-96对错误折叠的轻链具有特异性结合，但是对天然折叠的轻链没有。
[0218]
实施例6：使用生物层干涉测量法定量结合亲和力(kd)
[0219]
我们使用生物层干涉测量法(bli)定量了lx-96的单价结合亲和力。将lx-96加载到抗小鼠igg fc捕获(amc)生物传感器上，并浸入不同浓度的错误折叠的al09(0-200nm)或天然al09(0-3000nm)的溶液中。从传感图中，我们观察到错误折叠的al09与lx-96的快速缔合，之后是缓慢的解离步骤(图13a)。这表明了抗体与靶标之间的结合相互作用非常紧密。使用octet systems软件拟合缔合和解离传感图，并且测量出lx-96对错误折叠的al09的结合亲和力为1.119
±
0.01nm(图13a)，而在测定的浓度下没有检测到对天然al09的可测量的结合(图13b)。我们重复了对不同的引起疾病的κ轻链变体(al12)的测定，并且确定对错误折叠形式的kd为7.5
±
0.1nm(图13c)，并且对天然形式没有有意义的结合(图13d)。这确认了，lx-96能够以相似的个位数纳摩尔亲和力特异性地结合至不同κ轻链变体的错误折叠形式。
[0220]
为了进一步验证lx-96特异性结合错误/未折叠的κ轻链，使用处于天然、错误/未折叠和淀粉样蛋白状态的al09进行天然蛋白质印迹(图14a-14b)。al09的错误/未折叠状态通过在6m盐酸胍中解折叠al09，之后在二硫苏糖醇中还原并且用碘乙酰胺烷基化来生成，并且al09的淀粉样蛋白状态通过在ph 7、57℃、500rpm下将al09孵育5天来生成。使用硫磺素t(tht)荧光确认淀粉样蛋白的存在。针对lx-96和dakoκ兔多克隆抗体(商业对照)使用一抗浓度5μg/ml制备蛋白质印迹。根据制造商的说明，将二抗(licor山羊抗小鼠680lt抗体和山羊抗兔680lt)稀释至1:10,000。蛋白质印迹分析指示，虽然商业κ轻链抗体识别al09的所有形式(天然、错误/未折叠和淀粉样蛋白)，但lx-96仅识别错误/未折叠和淀粉样蛋白形式，但不识别天然al09。在淀粉样蛋白形成条件下，如通过商业抗体对照所检测，al09的天然形式仍然以较小的量存在。然而，这些物质也未被lx-96识别，进一步证明了淀粉样蛋白特异性。
[0221]
实施例7：lx-96特异性识别人组织中的κal淀粉样原纤维
[0222]
我们通过对来自淀粉样变性验证病例的心脏、肝脏和胰脏组织进行免疫组织化学分析来评估lx-96的反应性。在经活检确认的κal淀粉样变性的病例中，我们使用非特异性抗κ抗体对照验证了组织中κ轻链的存在，并且确认了在心脏κal淀粉样变性的两个病例(图15d和15e)和肝脏κal淀粉样变性的一个病例(图15b)中lx-96对κal淀粉样蛋白沉积物的在靶染色。
[0223]
然后我们评估了lx-96在3个病理对照组织中的交叉反应性。在这些情况下，通过使用刚果红染料或用商业抗体进行染色确认了组织内淀粉样蛋白的分布(图16a-16i)。在attr心脏淀粉样变性病例中，我们观察到淀粉样蛋白的阳性刚果红染色(图16a)以及商业抗λ和抗κ轻链抗体的非特异性、非淀粉样蛋白结合(图16b和16c)。另一方面，lx-96未显示心脏组织的染色(图16d)。为了评估与λal心脏淀粉样蛋白沉积物的交叉反应性，我们首先验证了组织与刚果红和抗λ抗体的共同染色(图16e-16f)。尽管商业抗κ抗体显示与此组织的非特异性、非淀粉样蛋白结合(图16g)，但lx-96显示没有交叉反应性(图16h)。此外，在经活检确认的iapp(胰岛淀粉样多肽)淀粉样变性的病例中没有观察到交叉反应性(图16i)。
总之，这种免疫组织化学分析提供了以下证据，即lx-96能够在多种组织中离体特异性结合κ轻链淀粉样蛋白沉积物，而不与天然蛋白质或其他非特异性淀粉样蛋白形式发生脱靶相互作用。
[0224]
实施例8：经由lx-96结合对al09聚集的无细胞抑制。
[0225]
接下来我们评估了体外在淀粉样蛋白形成条件下lx-96结合对al09聚集的影响。将最终浓度15μm的fitc标记的al09(按重量标记2％)溶液用低ph(4.0)和600rpm搅拌进行处理以在14h内诱导聚集。在高速离心以沉淀不溶性聚集材料之后，通过可溶性al09级分的fitc荧光间接测量聚集。我们在聚集过程开始时向al09中引入了亚化学计量浓度(0-4μm)的lx-96，并且在终点时测量al09的可溶性级分。lx-96能够在亚化学计量浓度下抑制al09的聚集，估计ic
50
《1μm(图17)。
[0226]
实施例9：lx-96在鼠单核细胞中诱导抗体介导的κ轻链淀粉样蛋白的吞噬细胞摄取
[0227]
最后，我们试图检查lx-96在体外促进al09聚集体的免疫清除的能力。因此，我们使用raw264.7(atcc)鼠单核细胞和用ph敏感性罗丹明(phrodo)染料标记的al09淀粉样蛋白聚集体进行了吞噬作用测定，所述染料在吞噬作用和进入溶酶体中时由于ph降低而使荧光增加。将通过先前所述的方法(57℃，500rpm，5天)生成的al09淀粉样蛋白聚集体进行标记，并且将其与lx-96(同种型对照)或不与抗体一起预孵育，并且添加到raw264.7细胞中，在37℃、5％co2下持续3小时，最终浓度为100μg/ml al09和20μg/ml抗体。使用亮视野和phrodo荧光通道对细胞进行成像，以可视化标记的al09淀粉样蛋白聚集体的吞噬细胞摄取。通过视觉评估，与同种型或无抗体对照相比，lx-96显著增加内化al09聚集体的raw细胞的数量，如通过phrodo阳性细胞的数量增加所证明(图18b、18d和18f)。经由每个细胞的平均phrodo荧光的摄取的定量确认，与同种型对照(p＝0.0236)和无抗体对照(p＝0.0102)相比，lx-96显著增加al09的吞噬细胞摄取，指示免疫复合物的清除的显著增加(图18g)。
[0228]
实施例10：鼠淀粉样瘤模型中的lx-96依赖性吞噬细胞清除
[0229]
接下来，我们使用nu/nu小鼠评估了lx-96在淀粉样瘤小鼠模型中诱导免疫应答的能力。我们首先使用共同定位测定追踪lx-96的分布(图19)。将100μg al09淀粉样蛋白与matrigel混合并皮下植入到小鼠胁腹中以形成淀粉样瘤。经由尾静脉注射输注单剂量10mg/kg的荧光标记的lx-96，并且使用spectrum体内成像系统在几小时内对小鼠进行成像。我们在输注的60分钟内观察到lx-96与淀粉样蛋白瘤的共同定位，表明lx-96能够通过血流到达细胞外淀粉样蛋白沉积物。然后，我们使用吞噬细胞摄取测定评估了lx-96是否可以增强小鼠的免疫应答。如先前所述植入100μg phrodo标记的al09淀粉样蛋白，并且经由尾静脉注射以单次10mg/kg剂量向小鼠施用lx-96(或同种型抗体对照)。3h之后测量phrodo荧光。尽管注射同种型抗体之后phrodo(吞噬作用的指示剂)信号没有变化，但是注射lx-96的小鼠的吞噬作用信号增加较大(图20a)。我们使用另外两种抗体递送方式重复了测定：在植入之前与淀粉样瘤共同混合(共同植入)以及直接皮下注射到淀粉样瘤中(subq)，并且观察到吞噬作用的类似增强，在所有3种递送方法中增加大约2倍(图20b)。接下来，我们通过在同一动物中植入两个相同大小的荧光标记的淀粉样瘤来测量在存在或不存在lx-96的情况下淀粉样蛋白减少的速率(图21a)。在此测定中，一个淀粉样瘤未经治疗，并且相邻植入物与10mg/kg的lx-96预混合。在3天内通过荧光成像测量并定量淀粉样瘤的
减少(图21b)。尽管两种淀粉样瘤的大小均减小，但由于lx-96的存在，减小率显著增加(三倍)，与不存在抗体的情况下的3天相比，淀粉样蛋白减少在1天内达到80％(图21c)。我们通过切除淀粉样瘤(与lx-96或同种型对照预混合)并使用巨噬细胞或嗜中性粒细胞标志物通过免疫组织化学对切除的组织进行染色进一步确认了lx-96的作用机制(图22)。染色结果表明，lx-96通过增强巨噬细胞和中性粒细胞向部位的募集来增强淀粉样瘤的吞噬清除。总之，这些体内研究结果表明，lx-96能够增强动物模型中沉积的淀粉样蛋白的吞噬清除。
[0230]
具体方面的前述描述将如此充分地揭示本公开文本的一般性质，其他人可以通过应用本领域技术范围内的知识，在无需过度实验并且不偏离本公开文本总体概念的情况下容易地修改和/或调整此类具体方面用于各种应用。因此，基于本文给出的传授内容和指导，此类调整和修改旨在包含在所公开的方面的等效方案的含义和范围内。应理解，本文中的措辞或术语是出于描述而非限制的目的，因此本说明书的术语或措辞将由本领域技术人员根据传授内容和指导来解释。
[0231]
考虑到本文公开的说明书和实践，本公开文本的其他方面对于本领域技术人员而言是清楚的。所述说明书和实施例旨在仅被视为示例性的，所附权利要求指示了本公开文本的真实范围和精神。
[0232]
本文所公开的所有出版物、专利和专利申请都以引用的方式并入，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物专利或专利申请都以引用的方式并入。

技术特征：
1.一种特异性结合人游离免疫球蛋白轻链(flc)的抗体，其中所述抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至κ轻链，其中所述参考抗体结合styslsstlt(seq id no:1)中示出的免疫球蛋白κ轻链上的表位，任选地，其中所述参考抗体包含分别为seq id no:14和seq id no:10的重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗体，其在与styslsstlt(seq id no:1)中示出的氨基酸序列的全部或一部分重叠的表位处结合κ轻链。3.如权利要求1或2所述的抗体，其结合styslsstlt(seq id no:1)中示出的κ轻链氨基酸序列上的表位。4.一种特异性结合人游离免疫球蛋白轻链(flc)的抗体，其中所述抗flc抗体与参考抗体交叉竞争结合至λ轻链，其中所述参考抗体结合nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的免疫球蛋白λ轻链上的表位。5.如权利要求4所述的抗体，其在与nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的氨基酸序列重叠的表位处结合λ轻链。6.如权利要求4或5所述的抗体，其结合nkyaassylsl(seq id no:2)中示出的λ轻链上的表位。7.如权利要求1至6中任一项所述的抗体，其不结合包含与免疫球蛋白重链共价连接的免疫球蛋白轻链的复合物。8.如权利要求1至7中任一项所述的抗体，其结合免疫球蛋白轻链肽聚集体。9.如权利要求8所述的抗体，其中所述免疫球蛋白轻链肽聚集体包含一种或多种错误折叠的免疫球蛋白轻链肽。10.如权利要求1至9中任一项所述的抗体，其结合轻链淀粉样蛋白原纤维。11.如权利要求10所述的抗体，其中所述淀粉样蛋白原纤维从获自对象的生物样品收集。12.如权利要求11所述的抗体，其中所述生物样品选自血液、血清、血浆、实体组织及其任何组合。13.如权利要求1至12中任一项所述的抗体，其中所述flc包含免疫球蛋白轻链肽的片段。14.如权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述flc包含全长免疫球蛋白轻链肽。15.如权利要求1至14中任一项所述的抗体，其为多克隆抗体或单克隆抗体。16.如权利要求1至15中任一项所述的抗体，其为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。17.如权利要求1至15中任一项所述的抗体，其包含选自以下的抗体的抗原结合部分：fab、fab'、f(ab')2、scfv、dsfv、ds-scfv、二聚体、微型抗体、双抗体、其多聚体，以及双特异性抗体片段。18.如权利要求1至17中任一项所述的抗体，其为单链抗体。19.如权利要求1至18中任一项所述的抗体，其与标记融合或缔合。20.如权利要求19所述的抗体，其中所述标记包括化学标记、生物标记、荧光标记或其任何组合。21.如权利要求1至20中任一项所述的抗体，其包含重链和轻链。22.如权利要求1至21中任一项所述的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区。
23.如权利要求22所述的抗体，其中所述重链可变区包含可变重链互补决定区(vh-cdr)1、vh-cdr2和vh-cdr3，其中：(a)所述vh-cdr1包含seq id no:15中示出的氨基酸序列；(b)所述vh-cdr2包含seq id no:16中示出的氨基酸序列；并且/或者(c)所述vh-cdr3包含seq id no:17中示出的氨基酸序列。24.如权利要求22所述的抗体，其中所述轻链可变区包含可变轻链互补决定区(vl-cdr)1、vl-cdr2和vl-cdr3，其中：(a)所述vl-cdr1包含seq id no:11中示出的氨基酸序列；(b)所述vl-cdr1包含seq id no:12中示出的氨基酸序列；并且/或者(c)所述vl-cdr1包含seq id no:13中示出的氨基酸序列。25.如权利要求1至24中任一项所述的抗体，其包含：(a)包含seq id no:11中示出的氨基酸序列的vl-cdr1；(b)包含seq id no:12中示出的氨基酸序列的vl-cdr2；(c)包含seq id no:13中示出的氨基酸序列的vl-cdr3；(d)包含seq id no:15中示出的氨基酸序列的vh-cdr1；(e)包含seq id no:16中示出的氨基酸序列的vh-cdr2；以及(f)包含seq id no:17中示出的氨基酸序列的vh-cdr3。26.如权利要求1至25中任一项所述的抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:14中示出的氨基酸序列具有至少90％、95％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。27.如权利要求26所述的抗体，其中所述重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列。28.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与seq id no:10中示出的氨基酸序列具有至少90％、95％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。29.如权利要求28所述的抗体，其中所述轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。30.如权利要求1至29中任一项所述的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含seq id no:14中示出的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seq id no:10中示出的氨基酸序列。31.如权利要求1至30中任一项所述的抗体，其以在500皮摩尔与25纳摩尔之间的k
d
与al09淀粉样蛋白结合。32.如权利要求1至30中任一项所述的抗体，其以在500皮摩尔与10纳摩尔之间的k
d
与al09淀粉样蛋白结合。33.如权利要求1至30中任一项所述的抗体，其以在1皮摩尔与10纳摩尔之间的k
d
与al09淀粉样蛋白结合。34.一种多核苷酸或多种多核苷酸，其编码如权利要求1至33中任一项所述的抗体。35.一种载体或多种载体，其包含如权利要求34所述的多核苷酸或多种多核苷酸。36.如权利要求35所述的载体，其还包含一个或多个调控元件。
37.一种宿主细胞，其包含如权利要求1至33中任一项所述的抗体、如权利要求34所述的多核苷酸或多种多核苷酸或者如权利要求35或36所述的载体或多种载体。38.一种药物组合物，其包含如权利要求1至33中任一项所述的抗体、如权利要求34所述的多核苷酸或多种多核苷酸的集合、如权利要求35或36所述的载体或多种载体的集合或者如权利要求37所述的宿主细胞；以及药学上可接受的赋形剂。39.一种制备特异性结合flc的抗体的方法，其包括在合适的条件下培养如权利要求37所述的宿主细胞。40.如权利要求39所述的方法，其还包括分离所述抗体。41.一种诊断al介导的淀粉样变性的方法，其包括将获自对象的生物样品与如权利要求1至33中任一项所述的抗体接触。42.一种测量获自对象的生物样品中的flc的方法，其包括将所述生物样品与如权利要求1至33中任一项所述的抗体接触。43.如权利要求41或42所述的方法，其中所述对象具有一种或多种淀粉样蛋白沉积物。44.如权利要求41至43中任一项所述的方法，其中所述对象患有特征在于淀粉样蛋白沉积物的疾病或病况。45.如权利要求41至44中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自血液、血清、血浆、实体组织及其任何组合。46.一种治疗具有一种或多种淀粉样蛋白沉积物的对象的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1至33中任一项所述的抗体或如权利要求38所述的药物组合物，从而治疗具有一种或多种淀粉样蛋白沉积物的所述对象。47.一种治疗患有特征在于淀粉样蛋白沉积物的疾病或病况的对象的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1至33中任一项所述的抗体或如权利要求38所述的药物组合物，从而治疗患有特征在于淀粉样蛋白沉积物的所述疾病或病症的所述对象。48.如权利要求41至47中任一项所述的方法，其中所述对象患有浆细胞病症。49.如权利要求41至47中任一项所述的方法，其中所述对象患有系统性淀粉样变性。50.如权利要求41至47中任一项所述的方法，其中所述对象患有al淀粉样变性。51.一种治疗有需要的对象的浆细胞病症的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1至33中任一项所述的抗体或如权利要求38所述的药物组合物，从而治疗所述对象的所述浆细胞病症。52.如权利要求51所述的方法，其中所述浆细胞病症包括浆细胞恶液质。53.如权利要求52所述的方法，其中所述浆细胞恶液质选自意义未明的单克隆丙种球蛋白病(mgus)、多发性骨髓瘤(mm)、浆细胞白血病(pcl)及其任何组合。54.一种治疗有需要的对象的系统性淀粉样变性的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1至33中任一项所述的抗体或如权利要求38所述的药物组合物，从而治疗所述有需要的对象的所述系统性淀粉样变性。55.如权利要求54所述的方法，其中所述系统性淀粉样变性包括al淀粉样变性。56.如权利要求46至55中任一项所述的方法，其中所述抗flc抗体使所述对象中的至少一种淀粉样蛋白沉积物的大小相对于所述施用之前所述对象中的所述至少一种淀粉样蛋白沉积物的大小而言减小。
57.如权利要求46至55中任一项所述的方法，其中所述抗flc抗体使所述对象中的淀粉样蛋白沉积物的数量相对于所述施用之前所述对象中的淀粉样蛋白沉积物的数量而言减少。58.如权利要求46至57中任一项所述的方法，其中所述抗flc抗体使所述对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率相对于所述施用之前所述对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率而言减小。59.如权利要求46至58中任一项所述的方法，其中所述抗flc抗体使所述对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率相对于所述施用之前所述对象中的淀粉样蛋白沉积物形成的速率而言停止。60.一种用于增加有需要的对象中对淀粉样蛋白沉积物的吞噬作用的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1至33中任一项所述的抗体或如权利要求38所述的药物组合物，从而增加所述对象中对所述淀粉样蛋白沉积物的所述吞噬作用。61.一种制备针对κ轻链恒定区的抗体的方法，其包括使抗体产生细胞或其条件培养基、多克隆抗体混合物或噬菌体展示文库与包含seq id no:1序列的多肽接触。62.如权利要求61所述的方法，其中所述抗体产生细胞是杂交瘤。63.如权利要求61所述的方法，其中所述多肽的长度小于50个氨基酸。64.如权利要求61所述的方法，其中所述多肽的长度小于25个氨基酸。65.如权利要求61所述的方法，其中所述多肽包含第一部分和第二部分，其中所述第一部分由seq id no:1序列组成，并且所述第二部分包含与κ轻链恒定区异源的氨基酸序列。66.如权利要求61所述的方法，其中所述多肽由seq id no:1组成。67.如权利要求61所述的方法，其还包括选择与seq id no:1结合的抗体。68.一种制备针对λ轻链恒定区的抗体的方法，其包括使抗体产生细胞或其条件培养基、多克隆抗体混合物或噬菌体展示文库与包含序列seq id no:2的多肽接触。69.如权利要求68所述的方法，其中所述抗体产生细胞是杂交瘤。70.如权利要求68所述的方法，其中所述多肽的长度小于50个氨基酸。71.如权利要求68所述的方法，其中所述多肽的长度小于25个氨基酸。72.如权利要求68所述的方法，其中所述多肽包含第一部分和第二部分，其中所述第一部分由序列seq id no:2组成，并且所述第二部分包含与λ轻链恒定区异源的氨基酸序列。73.如权利要求68所述的方法，其中所述多肽由seq id no:2组成。74.如权利要求68所述的方法，其还包括选择与seq id no:2结合的抗体。

技术总结
本公开涉及特异性结合游离免疫球蛋白轻链(FLC)的抗体或其抗原结合部分、编码它们的多核苷酸和载体以及包含它们的药物组合物。本公开的一些方面涉及测量生物样品中的FLC的方法，其包括使样品与抗FLC抗体接触。本公开的一些方面涉及治疗疾病或病况的方法，其包括向有需要的对象施用抗FLC抗体。需要的对象施用抗FLC抗体。需要的对象施用抗FLC抗体。


技术研发人员：A
受保护的技术使用者：大学健康网络
技术研发日：2021.12.13
技术公布日：2023/10/7