一种唑类化合物及其合成、制药应用

1.本发明涉及杂环化合物领域，特别是唑类抗真菌化合物及其制备方法，属于药物化合物的合成领域。


背景技术：

2.真菌感染是人和动物共患疾病。人类致病真菌常见念珠菌、癣菌、隐球菌等；毛皮动物真菌性皮肤病是临床上常见的动物疾病，病原主要为犬小孢子菌(microsporum canis)、石膏样小孢子菌(microsporum gypseum)、须癣毛癣菌(trichophyton mentagrophytes)和疣状毛癣菌(trichophyton verrucosum)。感染后会引起人、牛、马、猪、猫、犬等的皮肤癣病，且感染较为顽固，不易根治，容易出现交叉感染和传播的情况，若不及时治疗可能会诱发全身感染，危害性较大。
3.真菌感染治疗所需周期长、过程复杂、成本高，人医临床常用酮康唑、伊曲康唑、氟康唑，但已出现明显耐药；兽医临床上常用人医抗真菌药特比萘酚、酮康唑、伊曲康唑进行治疗，缺乏动物专用抗真菌化合物。一方面与《兽药管理条例》四十一条关于“禁止将人用药品用于动物”的规定相冲突，另一方面临床所用的抗真菌药物多存在真菌耐药性、药物不良反应、抗菌谱窄、组织浓度低、口服不吸收等问题。导致大量的抗真菌药物不恰当使用，逐渐显示出药物滥用问题，严重危害药物正常应用开发。
4.故开发安全性高、抗耐药、使用方便的抗真菌药物，特别是新型动物专用抗真菌药，很有必要。特别是，如何实现高效抗真菌、低毒副作用，对于养殖畜牧业具有重要意义，如果能够开发一种有效治疗动物真菌感染的药物，可以大幅度减少养殖业因为动物感染真菌导致的生长缓慢、动物死亡等问题，使得养殖业的成本降低，经济效益提高。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于克服现有技术中所存在的缺少动物专用抗真菌药物的不足，且现有人医用药应用于动物抗真菌治疗也存在耐药性和不良反应的现状，提供一种新型氮唑类化合物。该类化合物可以有效抑制犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须癣毛癣菌及白色念珠菌，且毒性较低，可应用于抗真菌应用，特别是兽医临床中抗真菌应用。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
7.一种唑类化合物，具有式i所示分子结构的化合物：
[0008][0009]
其中，r1至少一个，r1各自独立的选自氢、c
1-c4烷基、环己基、卤取代c
1-c3烷基、c
2-c4烯基、卤取代c
2-c4烯基、硝基、氰基、氨基、卤素、甲氨基、羟基、羧基、羟基取代c
1-c3烷基、
苯基、甲基苯基、苯甲基、c
1-c3烷氧基、c
2-c4烯基氧基、磺酸基、硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、苄氧羰基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、苯甲酰氧基、巯基、甲基磺酰基、磺酸基、c
1-c3烷基氨基、双c
1-c3烷基取代氨基、叔丁氧羰基。
[0010]
a表示r1的个数，a＝0-4；b表示r2的个数，b＝0-4。
[0011]
r2至少一个，r2各自独立的选自c
1-c3烷基、卤素、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基、羧基、硝基、氰基、卤代烷基。
[0012]
x1为-(ch2)n-或-(ch2)n-o-或-o-(ch2)n-，n＝0-4。
[0013]
x2为-(ch2)m-或-c(o)-ch(ch3)-(ch2)m-，m＝0-4。
[0014]
y为c或n。
[0015]
进一步，所述r1各自独立的选自：氢、甲基、卤取代甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、烯丙基、丙炔基、乙烯基、仲丁基、环己基、苯甲基、丙烯基、叔丁基、异丙烯基、乙炔基、苯基、对甲苯基、间甲苯基、邻甲苯基、邻硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、羧基、苄氧羰基、氰基、氨基、甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、二甲氨基、二乙氨基、硝基、羟基、甲氧基、乙氧基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、巯基、氟基、氯基、溴基、碘基、叔丁氧羰基、氟甲基。
[0016]
优选地，所述r1各自独立的选自：氢、羟基、氰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、氟、氯、溴、三氟甲基、全氟乙基、氨基、叔丁氧羰基等。
[0017]
进一步，所述r2各自独立的选自：c
1-c3烷基、卤素、氨基、硝基、氰基、氟基、氯基、溴基、碘基、羟基、全氟c
1-c3烷基。全氟c
1-c3烷基包括全氟甲基、全氟乙基、全氟正丙基、全氟异丙基。
[0018]
进一步，x1和x2处于苯环的邻位或对位。x1和x2在共同连接的苯环上，分别处于该苯环的邻位或对位。
[0019]
进一步，a表示r1的个数，a＝0-3。优选地，a＝0、1、2。
[0020]
进一步，b表示r2的个数，b＝0-3。优选地，b＝0、1、2。
[0021]
进一步，x1选自亚甲基、亚乙基、亚甲氧基、亚乙氧基。可以是亚甲基或亚乙基，也可以是亚甲氧基、亚乙氧基，亚乙氧基是指-ch
2-ch
2-o-。
[0022]
进一步，x2选自-c(o)-ch(ch2)-、亚甲基、亚乙基。
[0023]
进一步，n＝0-3。优选地，n＝0、1、2。
[0024]
进一步，m＝0-3。优选地，m＝0、1、2。例如，m＝0的时候，x2可以为-c(o)-ch(ch3)-。
[0025]
进一步，所述唑类化合物是具有式ii或式iii所示分子结构的化合物：
[0026][0027]
进一步，唑环连接的取代基和左侧苯环连接的取代基，在中间的苯环上连接位置为邻位或对位。即，所述唑类化合物是具有式iv或式v所示分子结构的化合物：
[0028][0029]
进一步，其中，n＝0-3；
[0030]
y为c或n；
[0031]
r1至少一个，r1各自独立的选自氢、c
1-c4烷基、环己基、卤取代c
1-c3烷基、c
2-c4烯基、卤取代c
2-c4烯基、硝基、氰基、氨基、卤素、甲氨基、羟基、羧基、羟基取代c
1-c3烷基、苯基、甲基苯基、苯甲基、c
1-c3烷氧基、c
2-c4烯基氧基、磺酸基、硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、苄氧羰基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、苯甲酰氧基、巯基、甲基磺酰基、磺酸基、c
1-c3烷基氨基、双c
1-c3烷基取代氨基、叔丁氧羰基。
[0032]
a表示r1的个数，a＝0-4；b表示r2的个数，b＝0-4。
[0033]
r2至少一个，r2各自独立的选自c
1-c3烷基、卤素、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基、羧基、硝基、氰基、卤代烷基。
[0034]
进一步，所述r1各自独立的选自：氢、甲基、卤取代甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、烯丙基、丙炔基、乙烯基、仲丁基、环己基、苯甲基、丙烯基、叔丁基、异丙烯基、乙炔基、苯基、对甲苯基、间甲苯基、邻甲苯基、邻硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、羧基、苄氧羰基、氰基、氨基、甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、二甲氨基、二乙氨基、硝基、羟基、甲氧基、乙氧基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、巯基、氟基、氯基、溴基、碘基、叔丁氧羰基、氟甲基、氟乙基。
[0035]
其中，氟甲基包括全氟甲基，氟乙基包括全氟乙基。
[0036]
优选地，所述r1各自独立的选自：氢、羟基、氰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、氟、氯、溴、三氟甲基、氨基、叔丁氧羰基等。
[0037]
进一步，所述r2各自独立的选自：c
1-c3烷基、卤素、氨基、硝基、氰基、氟基、氯基、溴基、碘基、羟基、全氟c
1-c3烷基。
[0038]
进一步，a表示r1的个数，a＝0-3。优选地，a＝0、1、2。
[0039]
进一步，b表示r2的个数，b＝0-3。优选地，b＝0、1、2。例如b＝0，在中间苯环上无取代。
[0040]
进一步，n＝0、1、2。例如n＝1。
[0041]
进一步，y为c。
[0042]
进一步，y为n。
[0043]
对于上述式i、式ii、式iii、式iv或式v化合物的取代基，可以互相进行替换。
[0044]
进一步，所述唑类化合物是以下化合物中的一种：
[0045][0046]
本发明的再一目的是将上述唑类化合物在制备药物中的应用。
[0047]
上述唑类化合物应用于制备药物，特别是应用于制备动物抗真菌药物，具有优秀的抗菌活性，能够有效治疗毛皮动物真菌性皮肤病，具有低毒高效的优势。
[0048]
与现有技术相比，本发明的有益效果：
[0049]
1、本发明唑类化合物可以有效的解决现有技术缺乏动物专用抗真菌化学药物的问题，本发明筛选得到的氮唑类化合物具有低毒高效特点，更适合作为动物专用抗真菌药物的活性成分使用。
[0050]
2、本发明唑类化合物经过动物实验，相比于临床一线用药氟康唑、伊曲康唑、酮康唑具有更加优秀的抑菌活性，对于毛皮动物真菌感染使用效果好，特别是对犬小孢子菌、须毛癣菌、石膏样小孢子菌及白色念珠菌的菌丝生长抑制作用显著。
[0051]
3、本发明唑类化合物对正常细胞毒性较小，优于酮康唑。动物实验表明本发明唑类化合物选择性优秀，在有效抑菌的同时，具有更低的细胞毒性，应用动物皮肤病，不影响动物正常生长，对于集中养殖的养殖场经济效益显著。
附图说明
[0052]
图1为化合物4与1eqp的对接图。
[0053]
图2为化合物4与1cz1的对接图。
[0054]
图3为化合物4与1ai9的对接图。
[0055]
图4为化合物4与4iib的对接图。
具体实施方式
[0056]
本发明的另一目的是提供一种上述唑类化合物的合成方法，包括以下步骤：取代苯基甲基氯或取代苯基甲基溴，和咪唑或三唑，在乙腈溶液中氢氧化钠催化作用下反应，得到唑类化合物。
[0057]
其中，取代苯基甲基氯或取代苯基甲基溴的取代基是：苯甲基、苯基、叔丁基氧羰基苯基、苯甲氧基、
[0058]
本发明所述卤素是指氟、氯、溴、碘，所述卤取代是指卤素取代，具体的卤素是指氟取代、氯取代、溴取代、碘取代，可以是单取代也可以是多取代，可以是一种卤素取代也可以是混合多种卤素取代。
[0059]
所述c
1-c3烷基是指：甲基、乙基、正丙基、异丙基。
[0060]
所述卤取代c
1-c3烷基是指卤素取代的c
1-c3烷基，如氟取代、氯取代、溴取代、碘取代。
[0061]
所述c
1-c3烷氧基是指：甲氧基、乙氧基、正丙基氧基、异丙基氧基。
[0062]
所述c
2-c4烯基是指：乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-丁烯基、2-丁烯基。
[0063]
所述c
2-c4烯基氧基是指：乙烯基氧基、丙烯基氧基、丁烯基氧基等。
[0064]
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0065]
实施例1
[0066]
咪唑类化合物1-4合成
[0067]
反应的基本过程如下所示。
[0068][0069]
咪唑类化合物合成路线
[0070]
(1)在微波反应管中加入1.2eq(反应当量，缩写自equivalent，下同)咪唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢氧化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 1-苄基-2-氯甲基苯，在室温下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基咪唑衍生物(1)，即化合物1，化合物1结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0071]
(2)在微波反应管中加入1.2eq咪唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢氧化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 2-溴甲基-1,1'-联苯，在室温下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基咪唑衍生物(2)，即化合物2，化合物2结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0072]
(3)在微波反应管中加入1.2eq咪唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢氧化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 4'-溴甲基-[1,1'-联苯]-2-羧酸叔丁酯，在室温下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基咪唑衍生物(3)，即化合物3，化合物结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0073]
(4)在微波反应管中加入1.2eq咪唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢氧化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 1-(4-苄氧基)苯基-2-溴-1-丙酮，在室温下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基咪唑衍生物(4)，即化合物4，化合物4结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0074]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物1-4结果如下：
[0075]
化合物1，hr-ms m/z:calculated for c
17h16
n2na 271.1211,found 271.1206[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.58(d,j＝1.2hz,1h),7.55
–
7.40(m,6h),7.30
–
7.24(m,3h),7.19
–
7.15(m,1h),6.95(t,j＝1.3hz,1h),5.21(s,2h),4.17(s,2h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ139.36,138.24,137.38,134.24,131.09,129.53,128.64,128.58,128.52,128.42,127.25,126.42,119.21,48.31,38.73.
[0076]
化合物2，hr-ms m/z:calculated for c
16h14
n2na 257.1055,found 257.1059[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.50
–
7.38(m,5h),7.35(dd,j＝7.3,1.7hz,1h),7.29(s,1h),7.27
–
7.23(m,2h),7.20(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),7.05(d,j＝1.1hz,1h),6.75(d,j＝1.3hz,1h),5.09(s,2h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ141.81,139.89,137.15,133.26,130.33,129.25,128.77,128.45,128.38,128.19,127.91,127.50,118.92,48.62.
[0077]
化合物3，hr-ms m/z:calculated for c
21h22
n2nao
2 357.1579,found 357.1579[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.78(dd,j＝7.7,1.4hz,1h),7.58(d,j＝1.2hz,1h),7.48(td,j＝7.6,1.5hz,1h),7.39(td,j＝7.6,1.3hz,1h),7.31
–
7.26(m,2h),7.18(m,2h),7.08(m,2h),6.94(d,j＝1.3hz,1h),5.16(s,2h),1.24(s,9h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ168.08,142.37,141.56,137.66,135.26,133.08,131.13,130.78,130.09,130.07,129.55,127.73,127.28,119.59,81.70,50.96,27.95.
[0078]
化合物4，hr-ms m/z:calculated for c
19h18
n2nao
2 329.1267,found 329.1266[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.94
–
7.89(m,2h),7.63(s,1h),7.44
–
7.37(m,4h),7.35(ddt,j＝8.5,5.6,2.1hz,1h),7.08(s,1h),7.05
–
6.99(m,3h),5.76(q,j＝7.1hz,1h),5.13(s,2h),1.75(d,j＝7.1hz,3h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ193.56,193.52,163.51,163.46,136.49,136.45,135.93,135.89,131.03,130.99,129.61,129.57,128.85,128.81,128.48,128.44,127.57,127.53,127.24,127.21,118.30,118.26,115.21,115.18,77.34,77.12,76.91,70.37,70.34,55.88,55.84,19.34,19.30.
[0079]
实施例2
[0080]
1,2,4-三氮唑衍生物的合成(化合物5-8)
[0081]
基本反应的基本过程如下所示。
[0082][0083]
三唑类化合成合成路线
[0084]
在微波反应管中加入1.2eq1,2,4-三氮唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 1-苄基-2-氯甲基苯，在50℃下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基三唑衍生物(5)，即化合物5，化合物5结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0085]
在微波反应管中加入1.2eq1,2,4-三氮唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 2-溴甲基-1，1'-联苯，在50℃下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基三唑衍生物(6)，即化合物6，化合物6结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0086]
在微波反应管中加入1.2eq1,2,4-三氮唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 4'-溴甲基-[1,1'-联苯]-2-羧酸叔丁酯，在50℃下反应5h，用适量蒸馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基三唑衍生物(7)，即化合物7，化合物7结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0087]
在微波反应管中加入1.2eq1,2,4-三氮唑溶于适量乙腈中再加入1eq氢化钠活化0.5h，再向反应管中加入1eq 1-(4-苄氧基)苯基-2-溴-1-丙酮，在50℃下反应5h，用适量蒸
馏水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得苄基三唑衍生物(8)，即化合物8，化合物8结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0088]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物5-8结果如下：
[0089]
化合物5，hr-ms m/z:calculated for c
16h16n3 250.1340,found 250.1344[m+h]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.93(s,1h),7.68(s,1h),7.34(td,j＝7.5,1.4hz,1h),7.31
–
7.18(m,5h),7.15(dd,j＝7.6,1.4hz,1h),7.10
–
7.04(m,2h),5.26(s,2h),4.03(s,2h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ172.45,145.03,125.82,116.51,112.21,109.71,109.39,108.42,106.74,96.37,51.33,42.15.
[0090]
化合物6，hr-ms m/z:calculated for c
15h13
n3na 258.0990,found 258.1007[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.89(s,1h),7.61(s,1h),7.49
–
7.34(m,5h),7.34
–
7.28(m,2h),7.25
–
7.19(m,2h),5.29(s,2h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ151.89,143.01,142.04,139.85,131.83,130.42,129.34,128.83,128.64,128.52,128.04,127.66,51.33.
[0091]
化合物7，hr-ms m/z:calculated for c
20h21
n3nao
2 358.1540,found 358.1531[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.17(s,1h),8.13(s,1h),7.99(s,1h),7.78(dd,j＝7.7,1.4hz,1h),7.48(td,j＝7.5,1.4hz,1h),7.39(td,j＝7.6,1.3hz,1h),7.35
–
7.27(m,4h),5.39(s,2h),1.23(s,9h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ167.88,152.11,143.07,142.55,141.30,133.43,132.80,130.96,130.56,129.89,129.41,127.82,127.56,81.57,53.55,29.78,27.71.
[0092]
化合物8，hr-ms m/z:calculated for c
18h17
n3nao
2 330.1218,found 330.1215[m+na]
+
；1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.35(s,1h),8.21(s,1h),8.07
–
7.88(m,3h),7.49
–
7.32(m,4h),7.17
–
6.92(m,2h),6.14(q,j＝7.3hz,1h),5.15(s,2h),1.83(d,j＝7.3hz,3h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ193.14,163.95,151.68,142.95,136.15,131.54,129.11,128.74,127.83,127.21,115.51,70.65,59.50,18.89.
[0093]
实施例3
[0094]
化合物4衍生物的制备
[0095]
1.化合物4的氟取代衍生物
[0096]
反应的基本过程如下所示，
[0097][0098]
氟取代衍生物
[0099]
在微波反应管中加入1.2eq n-氟吡啶三氟甲磺酸盐溶于适量无水二氯甲烷中，再向反应管中加入1eq化合物4，在40℃下反应20h，用适量饱和氯化钠稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，干燥，粗产品柱层析分离，即可得化合物4的氟取代化合物9、10，即化合物9、10，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0100]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物9-10结果如下：
[0101]
化合物9，hr-ms m/z:calculated for c
19h16
f2n2nao
2 365.1078,found 365.1083
[m+na]
+
；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ8.01
–
7.73(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.42(dd,j＝4.0,1.6hz,1h),7.34(dt,j＝7.7,1.0hz,1h),7.19
–
7.02(m,3h),6.98
–
6.84(m,2h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.22(d,j＝1.1hz,2h),1.60(s,3h)；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,162.82,161.64,160.74,137.27,131.30,130.51,129.19,128.90,120.95,120.24,115.34,111.72,104.81,63.80,56.84,20.59.
[0102]
化合物10，hr-ms m/z:calculated for c
19h17
fn2nao
2 347.1172,found 347.1175[m+na]
+
；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.92
–
7.87(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.51
–
7.37(m,3h),7.09
–
7.01(m,4h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,162.71,137.27,133.69,131.30,130.11,129.19,128.90,120.95,115.40,115.33,70.02,56.84,20.59.
[0103]
2.化合物4的氯取代衍生物
[0104]
反应的基本过程如下所示，
[0105][0106]
氯取代衍生物
[0107]
向装有搅拌子和冷凝管是烧瓶中加入次氯酸钙0.039mol、水100ml、乙酸10ml。然后将烧瓶浸入冰水中水浴(0℃)并搅拌至内容物至次氯酸钙全部溶解并获得浅黄色溶液。然后在三分钟内加入化合物4的丙酮溶液0.039mol，0℃下搅拌1h。然后将反应混合物用水稀释，瓶底有不溶的油状物，然后用乙醚萃取，用饱和碳酸氢钠洗，干燥。粗产品柱层析分离，即可得化合物4的氯取代化合物11、12，即化合物11、12，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0108]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物11、12结果如下：
[0109]
化合物11，hr-ms m/z:calculated for c
19h16
cl2n2nao
2 397.0487,found 397.0483[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.96
–
7.86(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.48(dt,j＝8.3,1.1hz,1h),7.45
–
7.37(m,2h),7.33(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),7.09
–
7.03(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.20(t,j＝0.8hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,162.82,137.27,135.03,133.92,131.33,131.30,131.21,129.19,128.90,128.05,127.41,120.95,115.33,68.73,56.84,20.59.
[0110]
化合物12，hr-ms m/z:calculated for c
19h17
cln2nao
2 363.0876,found 363.0874[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.95
–
7.85(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.47
–
7.32(m,5h),7.11
–
6.93(m,3h),5.75
–
5.70(m,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,137.27,136.11,134.36,131.30,129.87,129.19,128.90,128.64,120.95,115.33,70.02,56.84,20.59.
[0111]
3.化合物4的溴取代
[0112]
反应的基本过程如下所示
[0113][0114]
将溴代丁酰亚胺(nbs)和无水fecl3(摩尔比：1：0.1)放入装有搅拌子的烧瓶中，以摩尔比(nbs：化合物4＝3：1)加入化合物4，再加入反应体积20％的乙腈，加热至90℃，反应7h，反应完成后用乙醚萃取，无水硫酸钠干燥。粗产品柱层析分离，即可得化合物4的溴取代化合物13、14，即化合物13、14，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0115]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物13、14结果如下：
[0116]
化合物13，hr-ms m/z:calculated for c
19h16
br2n2nao
2 484.9476,found 484.9491[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.95
–
7.88(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.59(d,j＝1.9hz,1h),7.48(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.45
–
7.37(m,2h),7.13
–
6.88(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.23(d,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,162.82,137.27,134.46,132.34,131.30,131.03,130.91,129.19,128.90,124.97,122.15,120.95,115.33,71.39,56.84,20.59.
[0117]
化合物14，hr-ms m/z:calculated for c
19h17
brn2nao
2 407.0371,found 407.0365[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.94
–
7.88(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.57
–
7.47(m,2h),7.47
–
7.35(m,3h),7.12
–
7.02(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,137.27,136.68,131.92,131.30,130.14,129.19,128.90,123.33,120.95,115.33,70.02,56.84,20.59.
[0118]
4.化合物4的氨基取代
[0119]
反应的基本过程如下所示，
[0120][0121]
氨基取代衍生物
[0122]
将化合物4(0.20mmol)、三甲基硅叠氮化物(tmsn3，0.24mmol)、chcl3(500μl)和三氟甲磺酸(tfoh，1.8mmol)加到带有搅拌子的反应管中，然后用密封小瓶，然后在60℃下反应20min。反应后，将小瓶在冰浴中冷却，在搅拌下缓慢加入500μl甲醇。用适量饱和碳酸氢钠溶液洗，然后用二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥。粗产品柱层析分离，即可得化合物4的氨基取代化合物15，即化合物15，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0123]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物15结果如下：
[0124]
化合物15，hr-ms m/z:calculated for c
19h19
brn3nao
2 344.1375,found 344.1359[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ8.02
–
7.83(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.42(dd,j＝4.0,1.6hz,1h),7.36
–
7.26(m,2h),7.14
–
6.98(m,3h),6.61
–
6.48(m,2h),
5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),4.17(d,j＝5.7hz,1h),4.07(d,j＝5.7hz,1h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,147.95,137.27,131.30,129.92,129.19,128.90,128.10,120.95,115.61,115.33,70.02,56.84,20.59.
[0125]
5.化合物4的三氟甲基取代
[0126]
三氟甲基取代衍生物合成反应的基本过程如下所示，
[0127][0128]
将化合物4(100μl)，二甲基亚砜(2.0ml)，1n二甲基亚砜硫酸溶液(2.0ml)，3.0mol/l三氟甲基碘二甲基亚砜溶液(1.0ml)，30％过氧化氢水溶液(0.2ml)和1.0mol/l硫酸亚铁(ii)水溶液(0.3ml)装入双颈烧瓶中，在氩气环境下将混合物搅拌20min。在搅拌过程中，反应体系的温度在40℃至50℃。此后将所得溶液冷却至室温。用适量饱和氯化钠稀释，用乙酸乙酯萃取三次，水洗三次，干燥，粗产品柱层析分离，即可得化合物4的三氟甲基取代化合物16、17，即化合物16、17，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0129]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物16、17结果如下：
[0130]
化合物16，hr-ms m/z:calculated for c
20h17
f3n2nao
2 397.1140,found 397.1144[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.96
–
7.85(m,2h),7.72
–
7.58(m,3h),7.53
–
7.35(m,3h),7.12
–
6.98(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,137.27,137.10,131.30,130.64,129.19,128.90,128.86,126.17,124.13,120.95,115.33,70.12,56.84,20.59.
[0131]
化合物17，hr-ms m/z:calculated for c
21h16
f6n2nao
2 465.1014,found 465.1017[m+na]+；1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.94
–
7.86(m,3h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.51(dd,j＝6.4,1.8hz,1h),7.44
–
7.35(m,2h),7.10
–
6.99(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.28(t,j＝0.9hz,2h),1.60(s,3h).；
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,162.82,137.27,133.06,131.30,130.09,130.06,129.64,129.19,128.90,125.35,124.16,123.89,123.43,120.95,115.33,69.38,56.84,20.59.
[0132]
6.化合物4的氰基取代
[0133]
氰基取代衍生物合成反应的基本过程如下所示，
[0134][0135]
将pd(oac)2(4.5mg，0.02mmol，10mol％)、3-(三氟甲基)喹啉(7.9mg，0.040mmol，20mol％)、n-乙酰甘氨酸(7.0mg，0.060mmol，30mol％)、agf(101.5mg，0.80mmol,4eq)、芳烃(0.20mmol,1eq)、cucn(35.8mg，0.40mmol，2eq)和hfip(2ml)。将反应容器密封，混合物在室温下搅拌2分钟后，加热至90℃，并将反应混合物在该温度下以1000rpm搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温，粗产品柱层析分离，即可得化合物4的氰基取代化合物18，即化合物18，
结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0136]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物18结果如下：
[0137]
化合物18，hr-ms m/z:calculated for c
20h17
n3nao
2 354.1218,found 354.1222[m+na]+；
[0138]1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.96
–
7.85(m,2h),7.69
–
7.60(m,3h),7.54
–
7.45(m,2h),7.42(dd,j＝4.0,1.6hz,1h),7.10
–
7.00(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
[0139]
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,139.40,137.27,132.22,131.30,129.19,129.09,128.90,120.95,118.50,115.33,110.20,70.02,56.84,20.59.
[0140]
7.化合物4的羟基取代
[0141]
羟基取代衍生物反应的基本过程如下。
[0142][0143]
将乙腈(5ml)中的苯(1mmol)和催化剂cu-au@g-c3n4(30mg)加入到25ml装有磁力搅拌子圆底烧瓶中。随后，将30％ h2o2(1mmol)加入到反应混合物中，并使用20w家用冷led灯照射，通过tlc监测反应的进程。反应完成后，从反应混合物中分离出催化剂，然后离心。用乙酸乙酯萃取，减压干燥，得到化合物4的羟基取代化合物19，即化合物19，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0144]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物19结果如下：
[0145]
化合物19，hr-ms m/z:calculated for c
19h18
n2nao
3 345.1215,found 345.1221[m+na]+；
[0146]1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ8.79(s,1h),7.96
–
7.83(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.42(dd,j＝4.0,1.6hz,1h),7.36
–
7.22(m,2h),7.09
–
7.01(m,3h),6.82
–
6.60(m,2h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.07(t,j＝1.0hz,2h),1.60(s,3h).；
[0147]
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,157.08,137.27,131.30,129.97,129.65,129.19,128.90,120.95,115.90,115.33,70.02,56.84,20.59.
[0148]
8.化合物4的烷基取代
[0149]
烷基取代过程，反应的基本过程如下，
[0150][0151]
在大气压下，在带有玻璃管(8mm内径)的连续流喷射鼓泡反应器中反应。将催化剂：h型丝光沸石(h-mor，0.5g)从环境温度原位热处理至673k(10k/min)。然后将化合物4：甲醇(1:1)的混合物加入反应器(whsv＝2.0hr-1)，反应3h，冷却至室温。得到化合物4的烷
基取代化合物20，即化合物20，结构经1h nmr，
13
c nmr及hr-ms确定。
[0152]1h nmr，
13
c nmr及hr-ms，测试化合物20结果如下：
[0153]
化合物20，hr-ms m/z:calculated for c
20h20
n2nao
2 3431422,found 3431427[m+na]+；
[0154]1h nmr(500mhz,chloroform-d)δ7.96
–
7.89(m,2h),7.66(t,j＝1.6hz,1h),7.42(dd,j＝4.0,1.7hz,1h),7.34
–
7.24(m,2h),7.20
–
7.12(m,2h),7.12
–
6.98(m,3h),5.74(q,j＝5.3hz,1h),5.06(t,j＝1.0hz,2h),1.59(d,j＝5.3hz,3h).；
[0155]
13
c nmr(125mhz,chloroform-d)δ194.03,163.06,137.88,137.27,135.07,131.30,129.23,129.19,128.90,128.51,120.95,115.33,70.02,56.84,21.04,20.59.
[0156]
实施例4
[0157]
合成化合物体外抗真菌活性测定
[0158]
1.实验菌种
[0159]
石膏样小孢子菌标准菌株(microsporum gypseum，m873.579)、须毛癣菌标准菌株(trichophyton mentagrophytes，m3.859)、犬小孢子菌标准菌株(microsporum canis，atcc8137)、白色念珠菌(candida albicans(robin)berkhout,atcc10231)。
[0160]
2实验方法
[0161]
2.1药物溶液配备
[0162]
将氟康唑、酮康唑、伊曲康唑以及合成的化合物于25℃下减压干燥12h，精密称定干燥后样品，加入适量20％dmso溶解，定容，配成药物摩尔浓度分别为6μmol/ml、3μmol/ml、1.5μmol/ml、0.75μmol/ml、0.375μmol/ml的原液各4ml。用0.22μm的微孔滤膜过滤后，置4℃冰箱保存备用。
[0163]
2.2培养基制备
[0164]
(1)马铃薯琼脂培养基(pda)制备：取新鲜去皮马铃薯，切成小块，称量200g，放入1l蒸馏水中煮30min，用三层纱布过滤后，补足因蒸发而减少的蒸馏水至1l。在滤液中加入20g的葡萄糖和20g的琼脂，加热，待琼脂完全融化后，趁热分装于250ml的锥形瓶中并塞上棉塞，用报纸包好，于121℃高压蒸汽灭菌锅高压灭菌30min。灭菌完成后，转移至无菌操作台，待培养基温度降至50℃左右。倒无菌平板晃匀，平放，制成pda平板，凝固后4℃保存，备用。
[0165]
(2)含药平板的制备：分别取上述制备的不同药液1ml以及上述冷却至50℃左右的pda培养基9ml倒入灭菌的培养皿中，制成浓度为0.6μmol/ml、0.3μmol/ml、0.15μmol/ml、0.075μmol/ml、0.0375μmol/ml的含药平板。待培养基冷却至50℃，加入1ml 30％dmso以及9mlpda培养基制成该含药平板的对照平板，凝固后4℃保存，备用。
[0166]
2.3菌悬液的制备
[0167]
将试验所需的石膏样小孢子菌、须毛癣菌、犬小孢子菌、白色念珠菌从冰箱中取出，用无菌接种环分别将3种真菌接种到sda平板上，27℃培养2周，活化真菌，使菌落均匀覆盖在培养基上。吸取灭菌的生理盐水2ml冲洗菌落表面的菌丝和孢子，将含有菌丝和孢子的冲洗液用血细胞计数板计数，将浓度调至为105～106cfu/ml，获得菌悬液，备用。
[0168]
2.4菌丝生长速率和抑菌率的测定
[0169]
将供试真菌接种在pda平板上27℃培养5天备用。用已灭菌的打孔器在接种供试菌
的pda平板边缘切取直径为1cm的菌饼，将该菌饼接入含药培养基上，有菌丝的一面朝下，每个培养皿接种1个菌饼。同时设置空白对照、阴性对照、阳性对照(氟康唑、伊曲康唑、酮康唑)。做3次重复试验，置于27℃的恒温培养箱中培养。培养7d，用十字交叉法测量供试真菌在含药培养基上的菌落直径，与对照比较计算各药液处理对菌丝直线生长的抑制率。按下式求出菌丝生长速率和抑菌率：菌丝生长速率(cm/d)＝(测量直径平均值-1.0)/天数；抑菌率(％)＝(空白对照菌落直径-处理菌落直径)
÷
空白对照菌落直径
×
100。
[0170]
2.5mic测定
[0171]
取无菌96孔板，首先每孔加入100μl的pdb培养基，然后在第1列、第2列每孔分别加入药溶液100μl，混匀；2～10列进行倍比稀释：从第二列取100μl液体至第3列，混匀；从第3列取100μl液体至第4列，依次类推，至第10列(浓度范围6000μmol/l-11.78μmol/l)。在第11列加入100μl dmso，10、11列混匀后取出100μl液体，弃去；最后12列每孔加入菌悬液100μl。第1列为空白对照，第11列为阴性对照，第12列为生长对照。将该96孔板置于27℃恒温培养箱中培养48h，以溶液澄清透明的孔的最小药液浓度为mic。每个设置三组重复。
[0172]
3.抑菌试验结果
[0173]
3.1化合物1-8对菌丝生长速率的影响
[0174]
菌丝生长速率法测试结果见表1-3。
[0175]
其中阳性对照组伊曲康唑和氟康唑对对犬小孢子菌、须毛癣菌、石膏样小孢子菌的菌丝生长抑制作用不明显，酮康唑有明显的抑制作用且效果较好，尤其是对须毛癣菌的菌丝生长速率的影响更甚。化合物1-8对这三种菌的菌丝生长有不同程度的影响，且均比伊曲康唑和氟康唑效好。在6μmol/ml时化合物5的对犬小孢子菌菌丝的生长抑制作用非常明显，化合物3、4对须毛癣菌和石膏样小孢子菌的菌丝生长速率的影响均最大，均小于1mm/d。
[0176]
表1不同浓度的化合物对犬小孢子菌的菌丝生长速率的影响
[0177][0178]
表2不同浓度的化合物对须毛癣菌的菌丝生长速率的影响
[0179][0180]
表3不同浓度的化合物对石膏样小孢子菌的菌丝生长速率的影响
[0181][0182][0183]
4.1.2化合物1-8对三种菌的抑菌率
[0184]
抑菌率的测定结果见表4-6。
[0185]
阳性对照组中酮康唑的抑菌率最大，抑菌效果均比伊曲康唑和氟康唑好。化合物1-8对三种真菌均具有不同程度的抑菌作用。在浓度为6μmol/ml时，化合物3、4对三种菌的抑菌率均大于60％，抑菌效果好，化合物2对犬小孢子菌、须毛癣菌的抑菌率大于60％抑菌效果好，但对于石膏样小孢子菌的抑菌率大于45％，抑菌效果较好。化合物1对须毛癣菌抑菌效果好，对于犬小孢子菌和石膏样小孢子菌的抑菌效果较好。在浓度为3μmol/ml时，化合物4对三种菌仍然有好的抑菌效果，化合物3对须毛癣菌和石膏样小孢子菌的抑菌效果好，但对于犬小孢子菌抑菌效果较差，化合物1均有较好的抑菌效果。
[0186]
表4不同浓度的化合物对犬小孢子菌的抑菌率
[0187][0188]
表5不同浓度的化合物对须毛癣菌的抑菌率
[0189][0190][0191]
表6不同浓度的化合物对石膏样小孢子菌的抑菌率
[0192][0193]
4.1.3化合物1-20对四种真菌的mic测定结果
[0194]
mic的测定结果见表7。化合1-20对四种真菌均具有不同程度的抑制作用。与阳性对照组(伊曲康唑、氟康唑及酮康唑)比较，化合物4及其衍生物化合物9,10,13,14,16,17对犬小孢子菌、须毛癣菌、石膏样小孢子菌及白色念珠菌的mic均优于阳性对照；化合物11,12,18次之；化合物1-3,15,19,20均优于伊曲康唑及氟康唑。
[0195]
表7化合物1-20对四种菌的mic
[0196][0197][0198]
通过抑菌试验可知，20个化合物中，除化合物5-8外，其余化合物对四种病原真菌均具有优于阳性对照或与阳性对照相当的抗真菌活性。
[0199]
实施例5
[0200]
将上述实施例合成的化合物1-20，进行正常细胞的细胞毒性测定
[0201]
1.细胞株
[0202]
nih3t3细胞
[0203]
2.实验方法
[0204]
2.1接种细胞
[0205]
待nih3t3细胞生长良好并处于对数生长期时，按照传代操作，将细胞经重悬于1ml的完全培养基中，加入适量完全培养液稀释，计数为5
×
104个/ml。取配制好的细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔中加入100μl，封口后转移至37℃、5％ co2恒温培养箱中培养24h。
[0206]
2.2配置药液和给药
[0207]
将化合物用dmso溶解，并以相应溶剂作为阴性对照组。对照组加入100μl完全培养基，实验组补充完全培养基至200μl，使每孔药液的终浓度20μm，平行5组。在20μm浓度下显示出良好抑制活性的衍生物，按照一定的浓度梯度使用nih3t3细胞对活性药物进行复筛。
[0208]
2.3mts试剂盒检测细胞活力
[0209]
细胞经药物处理48h后，按1:10的比例将mts溶液和完全培养液混合，弃去96孔板中含药液的培养基，每孔加入200μl混合液，并设置5个不含细胞的混合液空白组，置于恒温箱中反应2-4h。用酶标仪检测在490nm吸收波长下各孔的吸光度，导出数据并计算抑制率，
通过graphpad prism 8软件利用bliss法计算ic
50
。
[0210]
3.实验结果
[0211]
化合物对nih3t3细胞的ic
50
结果见表8。
[0212]
所测化合物中，化合物3的ic
50
最小，细胞毒性最大，其余化合物叫酮康唑均细胞毒性较小，可见这些化合物对正常组织的毒性应低于酮康唑。
[0213]
表8化合物1-20对nih3t3细胞的ic
50
[0214][0215]
结论
[0216]
综上可知，阳性对照氟康唑和伊曲康唑对于犬小孢子菌、须毛癣菌、石膏样小孢子菌的抑制作用不明显，酮康唑对这三种菌有明显抑制作用。三种阳性对照对白色念珠菌均有一定抑制作用。而合成的化合物1-20对犬小孢子菌、须毛癣菌、石膏样小孢子菌及白色念珠菌均具有不同程度的抑菌作用，其中化合物4,9,10,13,14,16,17对这四种菌均有明显的抑制作用，且均优于氟康唑、伊曲康唑及酮康唑(部分相当)；化合物11,12,18次之；化合物1-3,15,19,20再次之。且化合物1-20对正常细胞均表现出较低的细胞毒性，安全性较高。以上化合物均具有潜在的抗真菌应用价值。
[0217]
实施例6
[0218]
代表性化合物抗真菌作用靶点预测
[0219]
选择代表性化合物1-4，采用分子对接的方法，考察代表化合物与常见抗真菌作用靶点蛋白的结合情况和作用模式，预测本技术中活性化合物的可能作用靶点。
[0220]
1.分子对接方法
[0221]
从rcsb数据库(http://www.rcsb.org/)分别找到：致病性酵母白色念珠菌的甾醇14-α脱甲基酶(cyp51，pdb id:5fsa)；白色念珠菌的甾醇14-α脱甲基酶(cyp51，pdb id:5tz1)；白色念珠菌的外切-β(1,3)-葡聚糖酶(xog1，pdb id：1eqp)；白色念珠菌的外切-β(1,3)-葡聚糖酶(xog1，pdb id:1cz1)；来自白色念珠菌的几丁质合成酶2(chs2，pdb id：7stl)；白色念珠菌的二氢叶酸还原酶(dfr1，pdb id：1ai9)；白色念珠菌n-肉豆蔻酰转移酶(nmt1，pdb id：1iyk)；白色念珠菌的磷酸甘露糖异构酶(pmi，pdb id：1pmi)；来自曲霉的β-(1,4)-半乳糖酶(gal1，pdb id：1fob)；来自曲霉的β-葡萄糖苷酶1(bgl1，pdb id：4iib)；来自曲霉的鼠李半乳糖醛酸酶a(rhga，pdb id：1rmg)的晶体结构。
[0222]
从pub chem数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中下载化合物1-4以及阳性对照氟康唑、酮康唑、伊曲康唑结构的sdf格式文件，将其导入discovery软件，获得其3d结构。运用discovery软件移除靶蛋白中的配体和非蛋白分子(如水分子)并进行加氢处理，然后在软件中对化合物和靶点蛋白进行分子对接，并进行可视化处理。
[0223]
2.分子对接结果及分析
[0224]
lib dock score指示了配体与靶点蛋白晶体的结合程度，lib dock score越高，小分子与受体结合的活性越高。将化合物1-4分别与“1.1”中的蛋白质分别进行分子对接，并进行可视化处理，代表性结合图如图1至图4所示，分别展示了化合物4与1eqp、1cz1、1ai9、4iib进行分子对接的空间构型，以及化合物活性基团结合情况。lib dock score见表9。
[0225]
甾醇14-α脱甲基酶为多数唑类化合物潜在抗真菌靶点，但通过分子对接发现，与活性最优的酮康唑为对比，化合物1-4与甾醇14-α脱甲基酶(cyp51,pdb id:5fsa和cyp51，pdb id:5tz1)的结合能力不强，而与葡聚糖酶(xog1，pdb id：1eqp、1cz1和xog1，pdb id:1cz1)、二氢叶酸还原酶(dfr1，pdb id：1ai9)以及β-葡萄糖苷酶1(bgl1，pdb id：4iib)显示较高的结合能力。
[0226]
表9各化合物与靶点蛋白的lib dock score
[0227][0228]
分子对接结果表明，与传统唑类化合物的作用靶点不同，所合成的活性化合物并非作用于甾醇14-α脱甲基酶，而可能通过多靶点完成抗真菌作用，其抗真菌作用可能与葡聚糖酶、二氢叶酸还原酶以及β-葡萄糖苷酶1高度相关。
[0229]
实施例8
[0230]
制剂例(喷雾剂)
[0231]
一种皮毛动物外用喷雾剂(10mg/ml)，由以下原料按重量百分比制备而成：活性化合物1％、乙醇40％、甘油5％、硫代硫酸钠0.2％、水溶性氮酮0.5％、山梨酸0.2％、pva 0.5％、pvp 2％、1％吐温80。其中，活性化合物可以采用上述实施例制备的化合物1-20中的任意一种。
[0232]
制备方法如下：按照上述原料配方比例取各种原料成分，将酒精置于烧杯中，加入甘油、硫代硫酸钠、水溶性氮酮、山梨酸，搅拌10min，混合均匀。然后缓慢加入pva(聚乙烯醇，可乐丽pva-217，下同)、pvp(聚乙烯吡咯烷酮，k30，下同)，充分搅拌，可适当加热以促进溶解，待pva和pvp充分溶解后，加入吐温80，继续搅拌20min。冷却至50℃以下，加入活性化
合物，搅拌至溶解充分，过滤，装瓶，制得皮毛动物外用喷雾剂。
[0233]
实施例9
[0234]
制剂例(喷雾剂)
[0235]
一种皮毛动物外用喷雾剂(10mg/ml)，由以下原料按重量百分比制备而成：活性化合物1％、dmso5％、10％吐温80、20％peg400、乙醇20％、甘油5％、硫代硫酸钠0.2％、水溶性氮酮0.5％、山梨酸0.2％、pva0.5％、pvp 2％。其中，活性化合物可以采用上述实施例制备的化合物1-20中的任意一种。
[0236]
按照上述配方比例准备好原料，然后按照以下制备方法制成喷雾剂。
[0237]
①
称1g活性化合物，用5ml dmso(二甲基亚砜)溶解，加入10ml吐温80，20ml peg400(聚乙二醇，分子量380～420)，5ml甘油，20ml乙醇混合均匀。
[0238]
②
向40ml水中加入0.2g硫代硫酸钠，0.2g山梨酸，0.5ml水溶性氮酮溶解后，一点点的加入2g pvp，0.5g pva加热至溶解，冷却至室温。
[0239]
③
将
②
中溶解缓慢加入
①
中，逐渐搅拌至溶解，装瓶，制得皮毛动物外用喷雾剂。

技术特征：
1.一种唑类化合物，其特征在于，具有式i所示分子结构的化合物：其中，r1至少一个，r1各自独立的选自氢、c
1-c4烷基、环己基、卤取代c
1-c3烷基、c
2-c4烯基、卤取代c
2-c4烯基、硝基、氨基、卤素、甲氨基、羟基、羧基、羟基取代c
1-c3烷基、苯基、甲基苯基、苯甲基、c
1-c3烷氧基、c
2-c4烯基氧基、磺酸基、硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、苄氧羰基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、苯甲酰氧基、巯基、甲基磺酰基、磺酸基、c
1-c3烷基氨基、双c
1-c3烷基取代氨基、叔丁氧羰基；a表示r1的个数，a＝0-4；b表示r2的个数，b＝0-4；r2至少一个，r2各自独立的选自c
1-c3烷基、卤素、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基、羧基、硝基、氰基、卤代烷基；x1为-(ch2)n-或-(ch2)n-o-或-o-(ch2)n-，n＝0-4；x2为-(ch2)m-或-c(o)-ch(ch3)-(ch2)m-，m＝0-4；y为c或n。2.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，所述r1各自独立的选自：氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、烯丙基、丙炔基、乙烯基、仲丁基、环己基、苯甲基、丙烯基、叔丁基、异丙烯基、乙炔基、苯基、对甲苯基、间甲苯基、邻甲苯基、邻硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、羧基、苄氧羰基、氨基、甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、二甲氨基、二乙氨基、硝基、羟基、甲氧基、乙氧基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、氟基、巯基、氯基、溴基、碘基、叔丁氧羰基、氟甲基。3.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，所述r2各自独立的选自：c
1-c3烷基、卤素、氨基、氟基、氯基、溴基、碘基、羟基、全氟c
1-c3烷基；全氟c
1-c3烷基是指全氟甲基、全氟乙基、全氟正丙基、全氟异丙基。4.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，a表示r1的个数，a＝0-3；优选地，a＝0、1、2。5.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，b表示r2的个数，b＝0-3；优选地，b＝0、1、2。6.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，n＝0-3；优选地，n＝0、1、2。7.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，m＝0-3；优选地，m＝0、1、2。8.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，所述唑类化合物是具有式ii或式iii所示分子结构的化合物：
其中，n＝0-3；y为c或n；r1至少一个，r1各自独立的选自氢、c
1-c4烷基、环己基、卤取代c
1-c3烷基、c
2-c4烯基、卤取代c
2-c4烯基、硝基、氰基、氨基、卤素、甲氨基、羟基、羧基、羟基取代c
1-c3烷基、苯基、甲基苯基、苯甲基、c
1-c3烷氧基、c
2-c4烯基氧基、磺酸基、硝基苯基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、苄氧羰基、苄氧基、苯氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、苯甲酰氧基、巯基、甲基磺酰基、磺酸基、c
1-c3烷基氨基、双c
1-c3烷基取代氨基、叔丁氧羰基；a表示r1的个数，a＝0-4；b表示r2的个数，b＝0-4；r2至少一个，r2各自独立的选自c
1-c3烷基、卤素、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基、羧基、硝基、氰基、卤代烷基。9.根据权利要求1所述一种唑类化合物，其特征在于，所述唑类化合物是以下化合物中的一种：
10.权利要求1-9任意一项所述唑类化合物在制备药物中的应用，特别是应用于制备动物抗真菌药物。

技术总结
本发明涉及一种唑类化合物及其合成、制药应用，所述唑类化合物具有式I所示分子结构：其中，R1至少一个，R1各自独立的选自氢、C


技术研发人员：梁晓霞 王雅璐
受保护的技术使用者：四川农业大学
技术研发日：2023.07.10
技术公布日：2023/10/15