线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用的制作方法

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用。


背景技术：

2.雄激素性脱发(androgenetic alopecia,aga)又称脂溢性脱发或早秃，是一种发生于青春期或青春期后的毛发减少性疾病，也是最常见的进行性脱发的原因之一。在男性中，aga主要表现为前额发际线后移、头顶部毛发进行性减少、变细，脱发区域逐渐增大；在女性中，则较少累积前额发际及颞部，而是头顶部毛发弥漫性减少、变细，发缝增宽。aga主要病理表现为毛囊生长期缩短，进而导致毛囊微型化，富含色素、有髓质且粗而硬的终毛被无髓质且细软、色素淡化的毳毛所取代。研究显示，aga发病机制涉及诸多因素，包括遗传易感性、雄激素代谢异常、基因改变、分子信号转导通路异常、毛囊区域微环境出现炎症反应等。
3.针对aga的治疗药物与方法各有优势和局限，临床上一般采用口服药物与外用药物相联合的治疗方案。目前美国食品药品监督管理局(food and drug administration，fda)批准的药物包括非那雄胺和米诺地尔两种，分别针对男性型aga和女性型aga。男性口服药物还包括度他雄胺，同非那雄胺一样，主要通过抑制ii型5α还原酶，抑制睾酮还原为二氢睾酮(dht)，改善毛囊微循环进而促进毛发生长；女性则主要可通过外用米诺地尔治疗，通过开放血管平滑肌和毛囊的钾通道，诱导微、小血管的舒张进而刺激毛囊周围的微循环；也可选择口服螺内酯和性激素(乙炔雌二醇及大剂量醋酸环丙孕酮)对抗雄激素。近年来，注射富血小板血浆、微针、低强度激光治疗、毛发移植、脂肪来源的干细胞成分提取物等作为新兴的治疗手段，可作为主流药物的辅助手段。
4.aga患者体内的雄激素水平通常在正常范围内，因为除了在性腺和其他器官中的激素合成途径之外，性激素在毛囊中能够独立合成并发生相互作用进而影响基因的转录与表达。aga伴有位于毛囊基部的雄激素敏感性毛囊周围细胞(dpcs)的衰老。高水平的dht可能导致dpcs衰老或退化。
5.健康美丽的秀发能给人以美好的形象，让人在人际交往中更加自信，人们对于脱发的防治也越来越重视。在本领域，仍需寻找一种安全高效的药物，来有效防治雄激素性脱发。


技术实现要素：

6.为了解决上述防治雄激素性脱发的技术问题，本发明提供了线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用。本发明通过探讨线粒体醌在缓解dht刺激下小鼠毛发脱落的应用及相关的分子机制，明确线粒体醌抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常、促进毛发再生方面的有效性，从而为干预或治疗脱发疾病尤其是雄激素性脱发的临床应用提供实验依据，给出了线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用。
7.本发明的具体技术方案为：一方面，本发明提供了线粒体醌在制备干预和/或治疗雄激素性脱发的产品中的应用。
8.线粒体醌，是一种存在于线粒体内的脂溶性物质，是一种人体内源性物质。现有技术中，线粒体醌作为一种线粒体靶向抗氧化剂被应用。本发明以小鼠皮肤中毛囊和毛囊部位细胞为研究对象，明确了线粒体醌在抵抗aga模型小鼠的真皮乳头细胞线粒体功能异常及毛发生长周期异常方面的作用，基于此，给出了线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用，为有效防治雄激素性脱发提供了另一种安全高效的物质。
9.作为本发明上述技术方案的优选，所述产品为药品、日化用品、食品或食品添加剂。
10.作为本发明上述技术方案的优选，所述产品通过抵抗dht引起的毛囊生长抑制来对雄激素性脱发进行干预和/或治疗。所述产品优选为抵抗dht引起的毛囊生长抑制的药品、日化用品、食品、或食品添加剂。
11.本发明通过探讨线粒体醌在缓解dht刺激下小鼠毛发脱落的应用及相关的分子机制，明确了线粒体醌在抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常的有效性，也证明了线粒体醌在促进毛发再生方面的可行性，为干预或治疗雄激素性脱发提供了依据，给出了线粒体醌通过抵抗dht引起的毛囊生长抑制来对雄激素性脱发进行干预和/或治疗的可行性。
12.一方面，本发明提供了一种治疗雄激素性脱发的制品，所述制品的活性成分包括线粒体醌。
13.本发明以小鼠皮肤中毛囊和毛囊部位细胞为研究对象，明确了线粒体醌在抵抗aga模型小鼠的真皮乳头细胞线粒体功能异常及毛发生长周期异常方面的作用，基于此，给出了线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用。
14.作为本发明上述技术方案的优选，所述制品的活性成分为线粒体醌。
15.本发明通过探讨线粒体醌在缓解dht刺激下小鼠毛发脱落的应用及相关的分子机制，明确了线粒体醌在抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常的有效性，证明了线粒体醌在促进毛发再生方面的可行性，为干预或治疗雄激素性脱发提供了依据，给出了线粒体醌通过抵抗dht引起的毛囊生长抑制来对雄激素性脱发进行干预和/或治疗的可行性。
16.作为本发明上述技术方案的优选，所述制品为药品、日化用品、食品、或食品添加剂。
17.作为本发明上述技术方案的优选，所述制品通过抵抗dht引起的毛囊生长抑制来对雄激素性脱发进行干预和/或治疗。所述制品优选为抵抗dht引起的毛囊生长抑制的药品、日化用品、食品、或食品添加剂。
18.与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：本发明通过探讨线粒体醌在缓解dht刺激下小鼠毛发脱落的应用及相关的分子机制，明确线粒体醌在抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常、促进毛发再生方面的有效性，从而为干预或治疗脱发疾病尤其是雄激素性脱发的临床应用提供实验依据，给出了线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用，为有效防治雄激素性脱发提供了另一种安全高效的物质。
附图说明
19.图1为本发明实施例1中小鼠不同时期的毛发生长情况；图2为本发明实施例3中处理19天后各组小鼠背部皮肤h&e染色情况；图3为本发明实施例4中各组小鼠ki67免疫荧光染色结果图；图4为本发明实施例5中各组小鼠皮肤的黑色素染色观察结果图。
具体实施方式
20.下面结合实施例及附图对本发明作进一步的描述。本发明实施例中，线粒体醌简写为mitoq。
21.本发明实施例相关材料的来源及处理如下：
①
实验材料实验动物：清洁级6周龄雄性c57bl/6小鼠(购自浙江省医学科学院动物实验中心)。小鼠随机分组如下：未处理组(对照)，dht组，dht+mitoq组，每组4只，分笼饲养。
22.②
饲养浙江省医学科学院动物实验中心负责小鼠日常饲养。
23.③
试剂苏木素伊红染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；dht(美雄诺龙)购自上海麦克林生化科技有限公司；mitoq购自西安瑞禧生物科技有限公司；二甲基亚砜(dmso)购自sigma-aldrich公司；anti-ki67抗体购自abcam[艾博抗(上海)贸易有限公司]；荧光二抗购自南京艾思易生物科技有限公司；黑色素染色液(硫酸亚铁法)购自珠海贝索生物技术有限公司。
[0024]
实施例1小鼠模型的建立购买的小鼠适应性喂养7天后随机分组：对照组(仅剃毛)，dht组(颈背部涂抹dht)，dht+mitoq组(颈背部涂抹dht，同时腹腔注射mitoq)，每组4只，共12只，分笼饲养。实验当日(记为day 0)小鼠背部剃毛并涂抹脱毛膏脱毛，面积约为2cm
×
2cm，次日(记为day 1)起脱毛区域涂抹dht溶解液200μl，处理组腹腔注射mitoq溶解液200μl，每日1次，共19天。19天期间每天固定时间根据不同分组实施对应处理。第19天收集小鼠背部皮肤，进行后续指标检测。
[0025]
第0、10、19天分别拍照，结果如图1所示。
[0026]
实施例2蜡块制备及切片取小鼠新鲜背部皮肤组织(1cm
×
1cm)用4％多聚甲醛固定，脱水后进行石蜡包埋。将蜡块切成厚度为4μm的切片后放进60℃烘箱内烤片，用于后续实验。
[0027]
实施例3苏木素伊红(h&e)染色将实施例2得到的切片置于二甲苯中浸泡15min，重复1次，将脱蜡后的切片逐级脱水放入苏木素水溶液中5min，流水冲洗15min，置于75％和90％乙醇中脱水各10min。取出置于0.5％乙醇-伊红染色液中2min，流水冲洗1min，染色后的切片经无水乙醇脱水。
[0028]
切片置于二甲苯中透明3min，重复1次，中性树胶封片，显微镜拍照观察，结果如图2所示，其中，a为h&e染色观察结果图，b为毛囊数量统计图，c为皮肤厚度统计图。(**代表p《0.01,***代表p《0.001,ns代表无统计学差异)
实施例4免疫荧光观察将实施例2得到的切片放入55℃恒温箱中30min，脱蜡并完成抗原修复后，用5％山羊血清孵育切片，置于湿盒内于37℃避光放置30min后加入1:200稀释后的ki67兔抗(abcam,cambridge,uk)，4℃孵育过夜。次日复温15min后，去除一抗并用pbs洗涤3次，每次5min。加入1:5000稀释后的橙色荧光鼠抗(ace，南京，中国)，室温下避光孵育1h后，去除二抗并用pbs洗涤3次，每次5min。加入dapi工作液室温避光孵育10min后，用pbs液洗涤3次，每次5min。抗荧光萃灭剂封片后，荧光显微镜(ix70-141倒置显微镜，奥林巴斯，日本)观察，结果见图3。
[0029]
实施例5黑色素染色参照黑色素染色试剂盒(硫酸亚铁法)进行黑色素染色，具体步骤如下：实施例2得到的切片放入55℃恒温箱中30min，脱蜡并完成抗原修复后，用蒸馏水洗1次，硫酸亚铁液处理1h，蒸馏水洗3次后滴加铁氰化钾醋酸液处理30min，冰醋酸液洗3s后甩干。van gieson液染色1min，去除染液后置于95％乙醇30sec，无水乙醇脱水后二甲苯透明并封片。
[0030]
各组小鼠皮肤的黑色素染色观察结果图见图4。
[0031]
数据分析(1)对实施例1数据结果进行分析图1为分别在药物处理0天、10天、19天对三组小鼠进行拍照观察背部毛发生长情况结果图。
[0032]
由图1可知，在第10天可见对照组组和dht+mitoq组小鼠背部有毛发再生，而dht组小鼠皮肤仍为粉红色且无毛发再生；第19天时对照组小鼠背部毛发几乎完全再生，dht+mitoq组毛发再生明显且皮肤变为灰黑色，dht组小鼠皮肤无明显变化。由此表明，mitoq具有促进毛发再生的作用。
[0033]
(2)对实施例3数据结果进行分析图2为第19天取三组小鼠皮肤做病理切片并进行h&e染色观察的结果图。
[0034]
如图2a所示，dht组毳毛比对照组和dht+mitoq组明显增加，而终毛数量比对照组和dht+mitoq组减少，且由可以观察到dht+mitoq组可恢复dht导致的皮肤组织形态异常。如图2a及2b所示，在对照组和dht+mitoq组可见大量毛囊，与二者相比，dht组毛囊数量极显著减少，且如图2a及2c所示，dht组真皮层厚度较对照组和dht+mitoq组极显著变薄，因此说明dht组小鼠背部毛发生长期延迟，而mitoq可以促进毛发进入生长期。
[0035]
由此可知，mitoq具有增加毛囊和终毛数量的作用。
[0036]
(3)对实施例4数据结果进行分析图3为各组小鼠ki67免疫荧光染色结果图。
[0037]
如图3所示，对照组和dht+mitoq组可见毛囊部位细胞增殖明显，反之dht组未显示明显增殖，dht组小鼠背部毛发尚未进入生长期，由此可知，mitoq的干预可以促进毛囊细胞增殖。
[0038]
(4)对实施例5数据结果进行分析图4为各组小鼠皮肤的黑色素染色观察结果图。
[0039]
如图4所示，对照组和dht+mitoq组毛囊中均出现明显的黑色素分布，而dht组毛囊
中少见黑色素染色，表明mitoq促进毛囊黑色素生成。
[0040]
综上所述，线粒体醌具有促进毛发再生、增加毛囊和终毛数量、促进毛囊细胞增殖、促进毛囊黑色素生成的作用。进一步地，说明线粒体醌可以抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常，可以有效促进毛发再生，并证明了线粒体醌通过抵抗dht引起的毛囊生长抑制来对雄激素性脱发进行干预和/或治疗的可行性。
[0041]
上述实施例在动物实验水平上进一步探讨mitoq在缓解dht刺激下小鼠毛发脱落的应用及相关的分子机制。通过应用mitoq腹腔注射，结合背部脱毛区域涂抹dht溶液，明确mitoq在抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常，促进毛发再生方面的有效性，从而为干预或治疗脱发疾病尤其是雄激素性脱发的临床应用提供实验依据，并为mitoq作为药品、日化用品、食品或食品添加剂或其有效成分，用于干预和/或治疗雄激素性脱发提供了理论依据。
[0042]
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0043]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。

技术特征：
1.线粒体醌在制备干预和/或治疗雄激素性脱发的产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品为药品、日化用品、食品、或食品添加剂。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述产品为抵抗dht引起的毛囊生长抑制的药品、日化用品、食品、或食品添加剂。4.一种治疗雄激素性脱发的制品，其特征在于：所述制品的活性成分包括线粒体醌。5.根据权利要求4所述的一种治疗雄激素性脱发的制品，其特征在于：所述制品的活性成分为线粒体醌。6.根据权利要求4所述的一种治疗雄激素性脱发的制品，其特征在于：所述制品为药品、日化用品、食品、或食品添加剂。7.根据权利要求6所述的一种治疗雄激素性脱发的制品，其特征在于：所述制品为抵抗dht引起的毛囊生长抑制的药品、日化用品、食品、或食品添加剂。

技术总结
本发明涉及医药技术领域，公开了一种线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用。本发明通过探讨线粒体醌在缓解DHT刺激下小鼠毛发脱落的应用及相关的分子机制，明确线粒体醌抑制双氢睾酮引起的小鼠毛囊生长异常、促进毛发再生方面的有效性，从而为干预或治疗脱发疾病尤其是雄激素性脱发的临床应用提供实验依据，给出了线粒体醌在干预和治疗雄激素性脱发中的应用，为有效防治雄激素性脱发提供了另一种安全高效的物质。安全高效的物质。安全高效的物质。


技术研发人员：关翠萍 李煜婕 宋秀祖 王维
受保护的技术使用者：杭州市第三人民医院
技术研发日：2023.07.13
技术公布日：2023/10/15