一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法

一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法
发明领域：
1.本技术属于天然药物领域和中药炮制领域，具体地，本技术提供了一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法。


背景技术：

2.龙脑樟cinnamomum camphora(l.)presl是提取天然冰片(右旋龙脑)的主要原料之一，新鲜龙脑樟枝叶经水蒸气提取得到粗提物，再经精制得到天然冰片。天然冰片具有开窍醒神，清热止痛之功效，主治热病神昏，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳道流脓等病症。
3.现阶段，超声辅助提取技术被广泛用于植物挥发性成分提取。超声波提取是利用超声波的空化和扩散效应，破坏细胞壁进而加速活性成分溶出。相比传统提取方法，基于超声波提取的多糖、酚类、黄酮类等物质均有较高得率及较稳定活性。不同提取方法结合超声波提取法现已成为植物挥发性成分提取方法的研究热点，一方面，多种方法组合可以提高其提取率，另一方面可以一定程度的解决单重方法所需能耗高的问题。目前工业生产天然冰片大多采用水蒸气蒸馏法对原材料直接提取，很少会对原料进行预处理。目前有关天然冰片的已公开专利多集中在提取与精制装置的创新、日化用品开发及临床应用等方面，极少有关于龙脑樟前处理的中国专利。一方面，有专利(中国专利：cn110003983a)对龙脑樟原材料烘干、粉碎，再利用有机溶剂浸渍结合超声波辅助提取龙脑精油。然而，该专利存在成本高，污染环境等问题。另一方面，采用复合酶对粉碎后的龙脑樟酶解，也可以增加天然冰片得率(如中国专利：cn108484362a)，但存在生产成本高，且受酶活性影响大，得率不稳定等问题。因此，提供一种低成本、绿色安全的天然冰片制备方法尤为必要。
[0004]“发汗”作为一种绿色、低能耗的传统炮制方法，是将净制后的新鲜药材或经加热处理的药材堆积闷汗，使药材所含水分挥至表面。这种民间长期生产生活总结出来的传统炮制方式，早在《千金翼方》便有论述：“夫药所取，不依阴干、爆干，虽有药名，终无药实。”。后经过近代应用与发展，常被用于茯苓、川续断、白术、地黄等非挥发性中药材及广藿香等挥发性中药材的加工处理，但目前暂无龙脑樟的发汗研究。研究证明部分中药材在“发汗”过程中其化学成分会发生一定程度改变，可通过影响前体化合物使中药材中的无效成分和有效成分相互转化，进而提高中药材活性成分含量。
[0005]
天然冰片具有抗菌，抗病毒，抗氧化等作用，被广泛应用于医药、日化用品等领域。然而，国家药品监督管理局、欧美地区相关部门已经明确禁止人工合成冰片在医药、食品等相关产品的添加，使得天然冰片的使用需求将会大大增加，市场前景也极为可观。我国天然冰片资源短缺，国内需求量大，天然冰片还需进口，通过一种方法提高天然冰片产量尤为必要。针对以上问题，本发明对龙脑樟发汗、摊晾、超声及水蒸气提取的各项参数进行优化，优选得到一种无污染且可以增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法。


技术实现要素：

[0006]
为解决上述问题，提供一种简单易行成本低的增加右旋龙脑产量的天然冰片制备
方法：
[0007]
一方面，本技术提供了一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法，所述方法包括将龙脑樟堆积发汗的步骤。
[0008]
进一步地，所述方法包括以下步骤：
[0009]
(1)净选药材：将新鲜龙脑樟去除泥沙、虫卵等杂质；
[0010]
(2)发汗：将净选后的龙脑樟堆积发汗，避光控制发汗的温度、湿度、时间；
[0011]
(3)原料预处理：将发汗后的龙脑樟用水清洗，阴干后粉碎；
[0012]
(4)超声：将粉碎后的龙脑樟加入溶剂超声；
[0013]
(5)提取：将超声后的龙脑樟转移到提取设备中水蒸气蒸馏提取，提取得到天然冰片粗提物。
[0014]
进一步地，所述方法还包括：(6)检测：将粗提物用有机溶剂溶解，gc-ms测定粗提物中右旋龙脑含量。
[0015]
进一步地，所述堆积发汗的条件为湿度40％-90％，温度5℃-30℃，时间1d-8d；将龙脑樟于避光处堆积成堆，按照每18-24h将堆积发汗的龙脑樟里外翻匀，使龙脑樟充分发汗。
[0016]
进一步地，所述堆积发汗的条件为湿度60％，温度15℃，时间6d；
[0017]
进一步地，步骤(3)中，将发汗后的龙脑樟用水冲洗1-3次，直至龙脑樟枝叶无肉眼可见明显泥沙等杂质；洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1-3cm，控制摊晾环境，使摊晾温度5-15℃，摊晾湿度50-80％，摊晾时间4-8h；将龙脑樟枝叶粉碎，粉碎后的龙脑樟粒径小于20目。
[0018]
进一步地，步骤(4)中，将经过粉碎后的龙脑樟加入去离子水超声；超声条件为：料液比1:10-40，超声时间15-60min，超声温度10-25℃，超声期间装有物料的容器处于密闭状态。
[0019]
进一步地，步骤(5)中恒温提取1-6h。
[0020]
进一步地，步骤(5)所得天然冰片粗提物用无水na2so4干燥后密封，于2-6℃保存。
[0021]
进一步地，步骤(6)中将步骤(5)所得天然冰片粗提物用乙酸乙酯溶解，gc-ms测定粗提物中天然冰片含量；
[0022]
进一步地，步骤(6)包括供试品和对照品溶液制备、gc-ms检测；
[0023]
进一步地，所述配制供试品与对照品溶液的方法为：
[0024]
供试品溶液：取适量粗提物，置于容量瓶中，配成0.1-10mg/ml浓度溶液，过0.22μm滤膜，放入冰箱中4℃保存备用；
[0025]
对照品溶液：称取适量右旋龙脑对照品置于10ml容量瓶中，加入乙酸乙酯溶液，配成浓度为1-10mg/ml的对照品母液，加入乙酸乙酯稀释2-120倍。
[0026]
进一步地，gc-ms检测色谱条件：色谱柱为agilent j&w hp-5ms(30m
×
0.25μm,0.25mm)，载气为高纯度氦气，色谱柱流量0.7-1.5ml/min，进样量0.5-6μl；进样口温度220-250℃，分流比10-40:1；柱箱起始温度50-90℃，保持1-6min，按照8-20℃/min升至220-250℃，保持6-12min；质谱条件：进样口温度220-250℃，离子源温度200-280℃；溶剂延迟3-4min，质谱扫描范围m/z 30-450，电子能量70ev；gc-ms进样量为0.5-6μl，根据外标法测定供试品溶液与对照品溶液中右旋龙脑含量。
[0027]
另一方面，本技术提供了上述方法在制备天然冰片中的应用。
[0028]
另一方面，本技术提供了使用上述方法制备的天然冰片。
[0029]
发汗过程中：一方面，适宜的堆积温度、堆积湿度及堆积时间会使氧化还原酶、水解酶等多种生物酶活性及优势菌群发生变化，进而促进天然冰片含量增加；另一方面，上述因素的改变会导致细胞壁结构发生会改变，有助于天然冰片提取。
[0030]
超声过程中：超声波提取利用超声波的空化和扩散效应，破坏龙脑樟细胞壁进而加速活性成分溶出；粉碎过程中产生的摩擦、剪切等机械力，破坏龙脑樟细胞壁，加速挥发性成分提取。
[0031]
本技术中使用的龙脑樟原料优选1-6年生新鲜龙脑樟枝叶。
[0032]
本发明的优点为：
[0033]
龙脑樟主产于湖南、江西等地，主要提取时间在十月至次年一月。本发明综合考察湖南省怀化市、江西省吉安市集中提取天然冰片时段的温度和湿度，设计贴合当地环境的工艺参数，通过超声结合水蒸气蒸馏法优选得到一种显著增加天然冰片含量的龙脑樟制备方法。本发明采用拟合当地环境的直接堆积发汗法，无需烘干或蒸煮，无需塑料薄膜覆盖，尽可能减少能源损耗；本发明不使用有机溶剂提取天然冰片，水蒸气蒸馏法结合超声辅助提取，绿色无污染。
附图说明
[0034]
图1为本技术的方法详细工艺流程示意图。
具体实施方式
[0035]
下面结合实施例对本发明作详细描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
[0036]
实施例1
[0037]
一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法，其具体制备方法为:
[0038]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过15℃、相对湿度60％及6d的条件堆积发汗后洗净，直至龙脑樟枝叶无肉眼可见明显泥沙等杂质；洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，按照料液比1:16加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流3h，龙脑樟粗提物得率为3.29％。
[0039]
实施例2
[0040]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过15℃、相对湿度60％及6d的条件堆积发汗后洗净，直至龙脑樟枝叶无肉眼可见明显泥沙等杂质；洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，按照料液比1:10加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流1.5h，龙脑樟粗提物得率为3.19％。
[0041]
实施例3
[0042]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过15℃、相对湿度60％及6d的条件堆积发汗后洗净，直至龙脑樟枝叶无肉眼可见明显泥沙等杂质；洗净的龙脑樟在摊晾平台上
阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，按照料液比1:16加入去离子水，不超声，水蒸气蒸馏法加热回流1.5h，龙脑樟粗提物得率为2.13％。
[0043]
实施例4
[0044]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过10℃、相对湿度43％及2d的条件堆积发汗后洗净，洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，取粉碎后的药材按照料液比1:16加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流2h，收集得到龙脑樟粗提物。将粗提物用无水na2so4干燥后密封，4℃保存备用。取25mg粗提物，置于25mg/ml容量瓶中，用乙酸乙酯将其溶解至刻度，过0.22μm滤膜，即得。
[0045]
将制备好的供试品注入顶空瓶中，进样分析，具体方法gc-ms为：
[0046]
色谱柱为agilent j&w hp-5ms(30m
×
0.25μm,0.25mm)，载气为高纯度氦气，色谱柱流量1ml/min，进样量1μl；进样口温度250℃，分流比20:1；柱箱起始温度60℃，保持1min，按照10℃/min升至250℃，保持6min；进样口温度250℃，离子源温度230℃；溶剂延迟3.5min，质谱扫描范围m/z 40-400，电子能量70ev。根据外标法测定粗提物中右旋龙脑含量为0.47mg
·
ml-1。
[0047]
实施例5
[0048]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过10℃、相对湿度82％及6d的条件堆积发汗后洗净，洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，取粉碎后的药材按照料液比1:16加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流2h，收集得到龙脑樟粗提物。将粗提物用无水na2so4干燥后密封，4℃保存备用。
[0049]
取25mg粗提物，置于25mg/ml容量瓶中，用乙酸乙酯将其溶解至刻度，过0.22μm滤膜，即得。
[0050]
将制备好的供试品注入顶空瓶中，进样分析，具体方法gc-ms为：
[0051]
色谱柱为agilent j&w hp-5ms(30m
×
0.25μm,0.25mm)，载气为高纯度氦气，色谱柱流量1ml/min，进样量1μl；进样口温度250℃，分流比20:1；柱箱起始温度60℃，保持1min，按照10℃/min升至250℃，保持6min；进样口温度250℃，离子源温度230℃；溶剂延迟3.5min，质谱扫描范围m/z 40-400，电子能量70ev。根据外标法测定粗提物中右旋龙脑含量为0.58mg
·
ml-1。
[0052]
实施例6
[0053]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过15℃、相对湿度60％及6d的条件堆积发汗后洗净，洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，取粉碎后的药材按照料液比1:16加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流2h，收集得到龙脑樟粗提物。将粗提物用无水na2so4干燥后密封，4℃保存备用。
[0054]
取25mg粗提物，置于25mg/ml容量瓶中，用乙酸乙酯将其溶解至刻度，过0.22μm滤膜，即得。
[0055]
将制备好的供试品注入顶空瓶中，进样分析，具体方法gc-ms为：
[0056]
色谱柱为agilent j&w hp-5ms(30m
×
0.25μm,0.25mm)，载气为高纯度氦气，色谱柱流量1ml/min，进样量1μl；进样口温度250℃，分流比20:1；柱箱起始温度60℃，保持1min，按照10℃/min升至250℃，保持6min；进样口温度250℃，离子源温度230℃；溶剂延迟3.5min，质谱扫描范围m/z 40-400，电子能量70ev。根据外标法测定粗提物中右旋龙脑含量为0.61mg
·
ml-1。
[0057]
实施例7
[0058]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，经过20℃、相对湿度82％及4d的条件堆积发汗后洗净，洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，取粉碎后的药材按照料液比1:16加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流2h，收集得到龙脑樟粗提物。将粗提物用无水na2so4干燥后密封，4℃保存备用。
[0059]
取25mg粗提物，置于25mg/ml容量瓶中，用乙酸乙酯将其溶解至刻度，过0.22μm滤膜，即得。
[0060]
将制备好的供试品注入顶空瓶中，进样分析，具体方法gc-ms为：
[0061]
色谱柱为agilent j&w hp-5ms(30m
×
0.25μm,0.25mm)，载气为高纯度氦气，色谱柱流量1ml/min，进样量1μl；进样口温度250℃，分流比20:1；柱箱起始温度60℃，保持1min，按照10℃/min升至250℃，保持6min；进样口温度250℃，离子源温度230℃；溶剂延迟3.5min，质谱扫描范围m/z 40-400，电子能量70ev。根据外标法测定粗提物中右旋龙脑含量为0.54mg
·
ml-1。
[0062]
实施例8
[0063]
将新鲜龙脑樟枝叶抖落表面泥沙和杂质，洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1cm，控制摊晾环境，使摊晾温度15℃，摊晾湿度65％，摊晾时间8h，将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，作为未发汗对照组。取粉碎后的药材按照料液比1:16加入去离子水，在温度25℃、频率40khz、功率360w条件下超声时间45min，水蒸气蒸馏法加热回流2h，收集得到龙脑樟粗提物。将粗提物用无水na2so4干燥后密封，4℃保存备用。
[0064]
取25mg粗提物，置于25mg/ml容量瓶中，用乙酸乙酯将其溶解至刻度，过0.22μm滤膜，即得。
[0065]
将制备好的供试品注入顶空瓶中，进样分析，具体方法gc-ms为：
[0066]
色谱柱为agilent j&w hp-5ms(30m
×
0.25μm,0.25mm)，载气为高纯度氦气，色谱柱流量1ml/min，进样量1μl；进样口温度250℃，分流比20:1；柱箱起始温度60℃，保持1min，按照10℃/min升至250℃，保持6min；进样口温度250℃，离子源温度230℃；溶剂延迟3.5min，质谱扫描范围m/z 40-400，电子能量70ev。根据外标法测定粗提物中右旋龙脑含量为0.48mg
·
ml-1。
[0067]
实施例4
‑‑
8中gc
‑‑
ms方法学考察结果
[0068]
标准曲线绘制：分别精密吸取2.4项下各梯度浓度溶液，进样1μl。以浓度(mg/ml)
为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，绘制右旋龙脑的标准曲线，得到回归方程及其线性范围。得右旋龙脑标准曲线为y＝1.4*106x-8.8*104(r2＝0.9992)，表明右旋龙脑在0.055-2.00mg/ml线性范围内良好；
[0069]
精密度实验：精密吸取对照品母液1μl，连续进样六次。测定右旋龙脑、樟脑峰面积，计算rsd值。测得右旋龙脑rsd＝1.53(％)，表明仪器精密度良好；
[0070]
稳定性实验：取粗提物供试品溶液，分别于2、4、6、8、10、12h进样1μl，测定右旋龙脑峰面积。测得右旋龙脑rsd＝2.07(％)，表明供试品溶液在12h内稳定性良好；
[0071]
重复性实验：取s2粗提物6份，分别配制成6份供试品溶液。进样1μl，测定右旋龙脑峰面积，测得右旋龙脑rsd＝1.98(％)，表明该方法重复性良好。加样回收率实验：分别取同一批已知含量的粗提物9份，各50mg，分别配制成6份供试品溶液，按照右旋龙脑含量的80％、100％、120％加入对照品。进样1μl，测定右旋龙脑含量，计算回收率和rsd值。测得右旋龙脑平均回收率100.4％，rsd＝2.19(％)，表明该方法回收率良好。结果见表1：
[0072]
表1右旋龙脑加样回收实验结果
[0073][0074]
实施例4-8的右旋龙脑增长率见表2：
[0075]
表2优选龙脑增长率(实施例4-7为“发汗组，实施例8为”未发汗“组)
[0076]
[0077]
本发明提供的方法显著提高了龙脑樟中天然冰片含量。相较于鲜样阴干，堆积发汗可显著增加天然冰片的产出，一定程度缓和天然冰片资源短缺的现状，降低合成冰片在医药、日化用品的使用率。本发明提供的制备方法绿色环保，通过优化发汗、摊晾、超声及水蒸气蒸馏提取等条件，增加右旋龙脑产量，无需使用化学试剂对龙脑樟诱导。
[0078]
以上内容仅是本发明结合具体实施例的进一步说明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，不能局限于本发明的具体实施内容。在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干推演或替换，这些推演或替换也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法，所述方法包括将龙脑香樟堆积发汗的步骤。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：(1)净选药材：将新鲜龙脑樟去除泥沙、虫卵等杂质；(2)堆积发汗：将净选后的龙脑樟堆积发汗，控制发汗的温度、湿度、时间；(3)原料预处理：将发汗后的龙脑樟用水清洗，阴干后粉碎；(4)超声：将粉碎后的龙脑樟加入溶剂超声；(5)提取：将超声后的龙脑樟转移到提取设备中水蒸气蒸馏提取，提取得到天然冰片粗提物。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述方法还包括：(6)检测：将粗提物用有机溶剂溶解，gc-ms测定粗提物中右旋龙脑含量。4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述堆积发汗的条件为：湿度40％-90％，温度5℃-30℃，时间1d-8d；按照每18-24h将堆积发汗的龙脑樟里外翻匀，使龙脑樟充分发汗。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述堆积发汗的条件为湿度60％，温度15℃，时间6d。6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中步骤(3)中，将发汗后的龙脑樟用水冲洗1-3次，直至龙脑樟枝叶无肉眼可见明显泥沙等杂质；洗净的龙脑樟在摊晾平台上阴干，摊晾厚度为1-3cm，控制摊晾环境，使摊晾温度5-15℃，摊晾湿度50-80％，摊晾时间4-8h；将阴干后的龙脑樟枝叶粉碎，粉碎后的龙脑樟粒径小于20目。7.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中步骤(4)中，将经过粉碎后的龙脑樟加入去离子水超声；超声条件为：料液比1:10-40，超声时间15-60min，超声温度10-25℃，超声期间装有物料的容器处于密闭状态。8.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中步骤(5)中恒温提取1-6h；所得天然冰片粗提物用无水na2so4干燥后密封，于2-6℃保存。9.根据权利要求1-8任一项所述的方法在制备天然冰片中的应用。10.根据权利要求1-8任一项所述的方法制备的天然冰片。

技术总结
本申请提供了一种增加右旋龙脑产量的天然冰片制备方法，所述方法包括将龙脑香樟堆积发汗的步骤。本申请采用拟合当地环境的直接堆积发汗法，无需烘干或蒸煮，无需塑料薄膜覆盖，尽可能减少能源损耗；不使用有机溶剂提取天然冰片，水蒸气蒸馏法结合超声辅助提取，绿色无污染；同时本申请的方法还能有效增加右旋龙脑产量。产量。产量。


技术研发人员：庞玉新 邵长柳 俸婷婷 周英 汪祖华 朱月
受保护的技术使用者：贵州中医药大学
技术研发日：2023.07.11
技术公布日：2023/10/15