一种苍黄拟无枝酸菌GB5-8及其在防治瓜列当中的应用

一种苍黄拟无枝酸菌gb5-8及其在防治瓜列当中的应用
技术领域
1.本发明涉及应用农业微生物与生物防治技术领域，具体涉及苍黄拟无枝酸菌gb5-8及其在防治瓜列当生长中的应用。


背景技术：

2.瓜列当(orabanche aegyptaica)是全寄生性高等植物，广泛分布在地中海地区、亚洲西部和欧洲东部，对当地的农作物生产造成巨大的影响，被认为是世界范围内危害最严重的寄生性杂草。由于瓜列当根寄生的特性，它对寄主的危害主要发生在出苗之前的地下生长时期，因此常见的人力拔除(伤害寄主根系)和农药等除草方式几乎不起作用，造成无法有效防除而严重影响农业生产。
3.近几年利用微生物防治瓜列当的方法越来越受到重视，也是目前公认的成本低、效果好、较安全的防治瓜列当的方法。但不同微生物菌种对瓜列当生长的抑制能力有较大的差异，筛选优良的微生物菌种是研究生物防治瓜列当生长的重要步骤。目前报道的用于防治瓜列当的菌株种类较少，主要包括镰刀菌、链格孢菌、腐霉菌等。因此，筛选有效抑制瓜列当生长能力的新菌株具有十分重要的意义。


技术实现要素：

4.为了解决以上技术问题，本发明的目的在于提供苍黄拟无枝酸菌gb5-8及其在防治瓜列当生长中的应用，苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsis lurida)gb5-8，其保藏编号为gdmcc no：62475，该菌株的发酵液能够显著抑制瓜列当种子的萌发，为防治瓜列当提供了一个新的路径。
5.本发明所采用的技术方案如下：
6.根据本技术的一个方面，提供了一种苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsis lurida)gb5-8，其保藏编号为gdmcc no：62475。
7.具体的，该菌株gb5-8的生物保藏信息：
8.菌株gb5-8已保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)。地址：中国广州市先烈中路100号，广东省微生物所，邮编：510070，保藏日期为2022年05月17日，保藏号为gdmcc no：62475，分类学名称为amycolatopsis lurida。
9.根据本技术的另一个方面，还提供了所述的苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsis lurida)gb5-8在防治瓜列当中的应用。
10.在本技术的具体实施方案中，提供了所述的苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsis lurida)gb5-8在抑制瓜列当种子萌发中的应用。
11.在本技术的具体实施方案中，使用苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液进行抑制瓜列当种子萌发。
12.在本技术的优选实施方案中，所述苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液的获得方法包括以下步骤：将苍黄拟无枝酸菌gb5-8在培养基上进行培养，得到苍黄拟无枝酸菌gb5-8的
发酵液。
13.优选的，所述培养的条件为：温度25～30℃，时间3～10d。
14.优选的，所述培养基包含七水合硫酸亚铁0.005～0.015g/l，七水合硫酸镁0.4～0.6g/l，硝酸钾0.5～1.5g/l，磷酸氢二钾0.4～0.6g/l，氯化钠0.4～0.6g/l，淀粉15～25g/l。
15.优选的，所述苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液的浓度为8
×
105～4
×
108cfu/ml。
16.具体的，菌株gb5-8发酵液的获得方法包括以下步骤：挑取菌落接种于高氏一号固体培养基平板上，26℃温度下培养24h后转接于高氏一号液体培养基中，置于摇床上培养5d(26℃，180r/min)，采用分光光度计法计算菌悬液浓度，使用灭菌水将菌悬液浓度稀释为4
×
108cfu/ml。将菌悬液分装于离心管中，8000r.min-1
，离心10min，发酵液上清即为发酵液原液。
17.高氏一号固体培养基的配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，琼脂20g，水1000ml。
18.高氏一号液体培养基的配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，水1000ml。
19.本发明的有益效果包括但不限于：
20.(1)本发明提供了一种新的苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsis lurida)gb5-8，该菌株gb5-8能够很好地抑制瓜列当生长，这次首次报道苍黄拟无枝酸菌防治瓜列当的应用，丰富了防治瓜列当生长的菌株种类。
21.(2)本发明提供的苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsis lurida)gb5-8在防治瓜列当中的应用，利用分离出的菌种发酵液及发酵稀释液对瓜列当种子萌发的抑制率高达100％，使用菌株gb5-8的发酵液处理的瓜列当出土数量为0，且对寄生的番茄植株生长有明显的促进作用，对于瓜列当生物防治具有广泛的应用价值。
附图说明
22.图1为本发明基于16srdna的基因序列构建系统发育树；
23.图2为不同处理得到的瓜列当种子，(a)是菌株gb5-8发酵液处理瓜列当种子，(b)是清水处理瓜列当种子；
24.图3为本发明不同处理的番茄植株鲜重；
25.图4为本发明不同处理的瓜列当结节数量；
26.图5为本发明不同处理的瓜列当生物量。
具体实施方式
27.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，以下实施例仅为方便本领域技术人员理解本发明技术方案，实现或使用本发明所做的说明，并不以此限定本发明的保护范围。
28.本发明中，如未指定，所采用原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。实施例中的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
29.实施例1菌株gb5-8的的分离、筛选及鉴定
30.土壤样本采集：使用小铲子将茎基部罹病的瓜列当茎基部上层土壤轻轻刮除，将
瓜列当植株轻轻拔出，使用小刷子刷取瓜列当罹病处周围土壤100～150g，放入塑料袋，将塑料袋放置在装有冰袋的泡沫箱中，及时带回实验室保存。
31.称取10g土样加入有50ml灭菌水的离心管中，均匀振荡后静置10min，吸取1ml上清液，加入9ml灭菌水记得到10-1
稀释液，依次按10倍梯度稀释法得到10-2
～10-5
倍稀释液。取10-2
～10-5
倍稀释液200μl均匀涂布于高氏一号平板，静置30min后将平板置于28℃培养24h，挑取不同的单菌落转移至新平板中置于28℃培养48h进行纯化，连续纯化3次，将纯化后的菌株转移至试管中，4℃保存。
32.瓜列当种子收集：于8月中下旬瓜列当种子集中成熟期，采集瓜列当植株，装入塑料袋中带回实验室。瓜列当植株平铺后自然晾晒7～10d后收集种子，将种子一次过40目、60目和100目的筛子清除杂质后装入自封袋中备用。
33.瓜列当种子消毒：将瓜列当种子在75％的酒精消毒1.5min后转移至1％的次氯酸钠消毒12min，无菌水冲洗3次后，放置在无菌滤纸上晾干备用。
34.菌株发酵液原液获得方法：用灭菌枪头从试管中挑取少量菌落接种于高氏一号固体培养基平板上，26℃温度下培养24h后转接于装有50ml高氏一号液体培养基中，置于摇床上培养5d(26℃，180r/min)，采用分光光度计法计算菌悬液浓度，使用灭菌水将菌悬液浓度稀释为4
×
108cfu/ml。将菌悬液分装于离心管中，8000r.min-1，离心10min，使用移液枪吸取发酵液上清即为发酵液原液。其中高氏一号固体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，琼脂20g，水1000ml。高氏一号液体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，水1000ml。
35.菌株初步筛选：每个菌株为一个处理，每个处理3次重复。使用灭菌水浸湿一张whatman滤纸(ga/a)，置于90
×
20mm培养皿中，然后将30～40粒瓜列当种子置于滤纸上，在每个培养皿中加入2ml发酵液原液和2ml浓度为10μg/ml的gr24。空白对照中加入2ml无菌水和2ml相同浓度的gr24，液体发酵培养基对照处理中加入2ml高氏一号液体培养基和2ml相同浓度的gr24。25℃黑暗条件下培养5d，体式显微镜下观察瓜列当种子萌发情况并记录萌发数量。
36.菌株复筛：选择能够抑制全部瓜列当种子萌发的菌株，并将其菌株发酵液原液分别稀释至20倍、50倍、100倍、200倍和250倍、500倍、1000倍、2000倍和5000倍进一步进行筛选。试验操作步骤同上。在初筛和复筛试验中，筛选得到对瓜列当种子萌发抑制效果最好的菌株gb5-8。
37.菌株gb5-8的生理生化特性测定结果如表1所示，试验结果表明，菌株gb5-8革兰氏阳性，不抗酸。营养菌丝断裂成四方体。气丝有或无，不育，断裂成四方体或类似孢子的链，不游动。无内生孢子和菌丝束。该菌能利用蔗糖、d-葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、d-甘露醇和半乳糖，水解淀粉和明胶，但不能水解纤维素。过氧化氢酶、v-p试验、硝酸盐还原和牛奶凝固与胨化等生理生化试验呈阳性，m.r.测定为阴性。需盐性及耐盐性测试表明，盐浓度0、5％为阳性，10％、20％为阴性。
38.通过革兰氏染色和芽孢染色进行形态特征观察，生理生化特性鉴定参照《常见细菌系统鉴定手册》。
39.菌株分子生物学鉴定是通过16srdna序列进行菌株鉴定。采用sk8255ezup柱式细
菌基因组dna抽提试剂盒(上海生工生物工程有限公司)提取菌株dna基因组。16srdna测序扩增引物为：f16s-27：(5
′‑
agagtttgatcctggctcag-3
′
)；r16s-1492:(5
′‑
cggttaccttgttacgacttc-3
′
)。pcr反应程序：94℃预变性5min，94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min30s，其中变性、退火、延伸三步共35次循环，最后72℃延伸10min。
40.回收pcr产物：2.0％琼脂糖凝胶电泳，切取目的片断；加入回收试剂溶液a 300μl/0.1g，60℃水浴至胶完全溶化；加入50μl回收试剂溶液b，混匀；将溶液置于离心柱中，静置5min，12000rpm，1min，弃液体；加入500μl80％乙醇，12000rpm，离心1min，弃液体，重复一次；12000rpm，离心5min，甩干余液，弃液体，晾干5～8min；将离心柱置于新的离心管中，加入30μl灭菌双蒸水，静置10min；13000rpm，离心3min，管底即为纯化产物，取3μl电泳检测。
41.纯化产物在上海生工生物工程有限公司进行测序。根据测序结果，采用blast搜索程序从genbank数据库中下载同源性较高的相关菌株的基因序列，利用mega 5.0软件进行序列多重比对后，采用邻接法法构建系统进化树。
42.表1菌株gb5-8生理生化特性测定结果
[0043][0044]
基于16s rdna基因序列测序结果表明，菌株gb5-8与苍黄拟无枝酸菌amycolatopsis lurida聚在同一分支，亲缘关系最近(图1)。
[0045]
菌株gb5-8的序列为：
[0046]
ttaccatgcagtcgaacgatgaagcctttcggggtggattagtggcgaacgggtgagtaaca
[0047]
cgtgggcaatctgccctgtactttgggataagcctgggaaactgggtctaataccggatatga
[0048]
ctgggcctcgcatggggtttggtggaaagctccggcggtacaggatgagcccgcggcctatc
[0049]
agcttgttggtggggtaatggcctaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggtgac
[0050]
cggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattg
[0051]
cacaatgggcgcaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaa
[0052]
acctctttcgccagggacgaagcgcaagtgacggtacctggataagaagcaccggctaacta
[0053]
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[0054]
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[0055]
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[0056]
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[0057]
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[0058]
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[0059]
ggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggcggag
[0060]
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[0061]
ctagagatagggcttcccttgtggttggtgtacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgt
[0062]
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[0063]
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[0064]
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[0065]
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[0066]
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[0067]
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[0068]
accgctgcagagggagt
[0069]
基于菌体形态、生理生化检测结果和分子鉴定结果，将菌株gb5-8鉴定为苍黄拟无枝酸菌a.lurida。
[0070]
实施例2gb5-8菌株发酵液原液对瓜列当种子萌发抑制作用
[0071]
菌株发酵液原液获得方法：用灭菌枪头从试管中挑取少量菌落接种于高氏一号固体培养基平板上，26℃温度下培养24h后转接于装有50ml高氏一号液体培养基中，置于摇床上培养5d(26℃，180r/min)，采用分光光度计法计算菌悬液浓度，使用灭菌水将菌悬液浓度稀释为4
×
108cfu/ml。将菌悬液分装于离心管中，8000r.min-1
，离心10min，使用移液枪吸取发酵液上清即为发酵液原液。其中高氏一号固体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，琼脂20g，水1000ml。高氏一号液体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，水1000ml。
[0072]
瓜列当种子收集：于8月中下旬瓜列当种子集中成熟期，采集瓜列当植株，装入塑料袋中带回实验室。瓜列当植株平铺后自然晾晒7～10d后收集种子，将种子一次过40目、60目和100目的筛子清除杂质后装入自封袋中备用。
[0073]
瓜列当种子消毒：将瓜列当种子在75％的酒精消毒1.5min后转移至1％的次氯酸钠消毒12min，无菌水冲洗3次后，放置在无菌滤纸上晾干备用。
[0074]
独脚金内酯人工合成物gr24溶液配制：用1ml丙酮将装有1mg独脚金内酯人工合成物gr24溶解，再加入100ml灭菌水稀释，配制成终浓度为10μg/ml的溶液。
[0075]
菌株gb5-8发酵液原液抑制瓜列当种子萌发试验方法：试验设置3个处理，分别为gb5-8菌株发酵液原液处理、培养基对照处理和空白对照，每处理3次重复。使用灭菌水浸湿一张whatman滤纸(ga/a)，置于90
×
20mm培养皿中，然后将30～40粒瓜列当种子置于滤纸上，共计9个培养皿。gb5-8菌株发酵液原液处理的每个培养皿中加入2ml菌株gb5-8发酵液原液和2ml浓度为10μg/ml的独脚金内酯人工合成物gr24溶液。培养基对照处理的每个培养皿中加入2ml高氏一号液体培养基和2ml浓度为10μg/ml的独脚金内酯人工合成物gr24溶
液。空白对照的每个培养皿中加入2ml无菌水和2ml浓度为10μg/ml的独脚金内酯人工合成物gr24溶液。25℃黑暗条件下培养5d，体式显微镜下观察瓜列当种子萌发情况并记录萌发数量。
[0076]
试验结果如表2和图2所示，试验结果表明，瓜列当种子在培养5d、7d和10d后，菌株gb5-8发酵液原液处理(浓度4
×
108cfu/ml)的瓜列当种子萌发率均为0，显著低于高氏一号液体培养基处理和清水对照处理。说明gb5-8菌株发酵液原液可以有效抑制瓜列当种子萌发。
[0077]
表2菌株gb5-8发酵液原液、培养基和清水处理的瓜列当种子萌发率比较
[0078][0079]
实施例3gb5-8菌株发酵液原液在不同稀释浓度下对瓜列当种子萌发抑制效果
[0080]
菌株发酵液获得方法：用灭菌枪头从试管中挑取少量菌落接种于高氏一号固体培养基平板上，26℃温度下培养24h后转接于装有50ml高氏一号液体培养基中，置于摇床上培养5d(26℃，180r.min-1
)，采用分光光度计法计算菌悬液浓度，使用灭菌水将菌悬液浓度稀释为4
×
108cfu/ml。将菌悬液分装于离心管中，8000r.min-1
，离心10min，使用移液枪吸取发酵液上清即为发酵液原液。将菌株发酵液原液分装于8个无菌离心管中，使用灭菌水将菌株发酵液原液分别稀释成12.5、25、50、100、125、250、500、1000和2500倍稀释液。其中高氏一号固体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，琼脂20g，水1000ml。高氏一号液体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，水1000ml。
[0081]
瓜列当种子收集：于8月中下旬瓜列当种子集中成熟期，采集瓜列当植株，装入塑料袋中带回实验室。瓜列当植株平铺后自然晾晒7～10d后收集种子，将种子一次过40目、60目和100目的筛子清除杂质后装入自封袋中备用。
[0082]
瓜列当种子消毒：将瓜列当种子在75％的酒精消毒1.5min后转移至1％的次氯酸钠消毒12min，无菌水冲洗3次后，放置在无菌滤纸上晾干备用。
[0083]
独脚金内酯人工合成物gr24溶液配制：用1ml丙酮将装有1mg独脚金内酯人工合成物gr24溶解，再加入100ml灭菌水稀释，配制成终浓度为10μg/ml的溶液。
[0084]
菌株gb5-8菌株发酵液不同浓度稀释液抑制瓜列当种子萌发试验方法：试验设置17个处理，分别为gb5-8菌株发酵液原液25、50、100、250、500、1000、2000、5000倍液、培养基对照25、50、100、250、500、1000、2000、5000倍液和空白对照，每处理3次重复。使用灭菌水浸湿一张whatman滤纸(ga/a)，置于90
×
20mm培养皿中，然后将30～40粒瓜列当种子置于滤纸上，共计51个培养皿。分别在gb5-8菌株发酵液原液12.5、25、50、100、125、250、500、1000和2500倍稀释液处理的每个培养皿中加入2ml菌株gb5-8发酵液稀释液和2ml浓度为10μg/ml的独脚金内酯人工合成物gr24溶液，配制成终浓度为25、50、100、250、500、1000、2000、5000倍gb5-8发酵液溶液。分别在12.5、25、50、100、125、250、500、1000和2500倍培养基对照处理的培养皿中加入2ml高氏一号液体培养基稀释液和2ml浓度为10μg/ml的独脚金内酯人工合
成物gr24溶液，配制成终浓度为25、50、100、250、500、1000、2000、5000倍培养基溶液。空白对照中加入2ml灭菌水和2ml浓度为10μg/ml的独脚金内酯人工合成物gr24溶液。25℃黑暗条件下培养5d，体式显微镜下观察瓜列当种子萌发情况并记录萌发数量。
[0085]
试验结果如表3所示，试验结果表明，gb5-8株菌发酵液25、50、100、250、500、1000、2000和5000倍稀释液处理的瓜列当种子萌发率均为0，显著低于高氏一号液体培养基处理和清水对照处理。说明菌株gb5-8菌株发酵液在各浓度下均能完全抑制瓜列当种子萌发。
[0086]
表3gb5-8株菌发酵液不同稀释浓度下瓜列当种子萌发率比较
[0087][0088]
实施例4盆栽试验
[0089]
发酵液制备：用灭菌枪头挑取少量gb5-8菌落培养物，加于500ml高氏一号液体培养基中，28℃震荡培养(180r.min-1
)1d，之后将震荡好发酵液倒入5000ml高氏一号液体培养基中震荡培养(28℃)2d。其中高氏一号液体培养基配方为：七水合硫酸亚铁0.01g，七水合硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，淀粉20g，水1000ml。
[0090]
试验设置3个处理，分别为菌株gb5-8发酵液处理、培养基处理和空白对照，每处理9次重复。番茄品种为屯河9号。采用基质穴盘育苗，在番茄苗4～5片真叶时开始移栽。移栽前先在直径25cm、高18cm，底部带孔的塑料盆中装入1/2体积的营养土，然后将100mg(约20000粒)瓜列当种子装入600ml塑料瓶中，装入少量土，摇匀后均匀撒在塑料盆中，最后将2株番茄苗移栽后覆土。
[0091]
番茄苗移栽7d后开始浇灌浓度为4
×
108cfu/ml的gb5-8菌株发酵液，每盆浇灌250ml，间隔7d浇灌1次，连续浇灌3次。培养基对照每盆浇灌250ml高氏一号液体培养基，空白对照每盆浇灌250ml清水。番茄苗移栽35d后第一次调查并记录瓜列当出土数量，番茄苗移栽42d后拨出番茄植株，使用自来水冲洗番茄根部后计数列当结节数量，称取瓜列当鲜重和番茄植株鲜重，使用烘箱烘干后称取瓜列当干重。
[0092]
试验结果表明，番茄苗移栽35d后，高氏一号野兔培养基处理和空白对照均有瓜列当出土，且两个处理瓜列当出土数量无显著差异，但是菌株gb5-8发酵液处理未见瓜列当出
土(表4)。番茄苗移栽42d后，培养基处理(lbck)和空白对照(ck)的番茄植株鲜重、番茄根系寄生的瓜列当结节数和瓜列当生物量均无显著差异(图3、4、5)，说明培养基对番茄植株无促生作用，且对瓜列当无防治效果。菌株gb5-8处理的番茄植株鲜重显著高于培养基处理(lbck)和空白对照(ck)(图4)，说明菌株gb5-8能够促进番茄植株生长；菌株gb5-8处理的番茄植株根系寄生瓜列当的结节数和瓜列当生物量显著低于培养基处理(lbck)和空白对照(ck)(图4，图5)，说明菌株gb5-8发酵液对瓜列当具有防治作用。
[0093]
表4番茄苗移栽35d后不同处理列当出土数量比较
[0094][0095]
以上对本发明所提供的苍黄拟无枝酸菌gb5-8及其在防治瓜列当中的应用进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和优化，这些改进和优化也落入本发明权利要求的保护范围内。

技术特征：
1.一种苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsislurida)gb5-8，其特征在于，其保藏编号为gdmccno：62475。2.权利要求1所述的苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsislurida)gb5-8在防治瓜列当中的应用。3.权利要求1所述的苍黄拟无枝酸菌(amycolatopsislurida)gb5-8在抑制瓜列当种子萌发中的应用。4.根据权利要求3所述中的应用，其特征在于，使用苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液进行抑制瓜列当种子萌发。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液的获得方法包括以下步骤：将苍黄拟无枝酸菌gb5-8在培养基上进行培养，得到苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养的条件为：高氏一号液体培养基，摇床转速180r/min，温度25～30℃，时间5～10d。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养基包含七水合硫酸亚铁0.005～0.015g/l，七水合硫酸镁0.4～0.6g/l，硝酸钾0.5～1.5g/l，磷酸氢二钾0.4～0.6g/l，氯化钠0.4～0.6g/l，淀粉15～25g/l。8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述苍黄拟无枝酸菌gb5-8的发酵液的浓度为8
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105～4
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108cfu/ml。

技术总结
本发明提供了一种苍黄拟无枝酸菌GB5-8及其在防治瓜列当中的应用，菌株GB5-8的保藏编号为GDMCCNo：62475。这次首次报道苍黄拟无枝酸菌防治瓜列当的应用，丰富了防治瓜列当生长的菌株种类。本发明提供的苍黄拟无枝酸菌(Amycolatopsislurida)GB5-8在防治瓜列当中的应用，利用分离出的菌种发酵液及发酵稀释液对瓜列当种子萌发的抑制率高达100％，使用菌株GB5-8的发酵液处理的瓜列当出土数量降低为0，其对寄生的番茄植株生长有明显的促进作用，对于瓜列当生物防治具有广泛的应用价值。对于瓜列当生物防治具有广泛的应用价值。对于瓜列当生物防治具有广泛的应用价值。


技术研发人员：何伟 许建军 罗文芳 周军辉 陈晓刚 叶仙涛 陈雅欢
受保护的技术使用者：新疆农业科学院植物保护研究所
技术研发日：2022.12.16
技术公布日：2023/7/11