季铵盐类物质检测方法与流程

1.本发明涉及季铵盐的分析方法，具体涉及一种一次性卫生用品的季铵盐类物质检测方法。


背景技术：

2.目前允许作为杀菌消毒原料使用的化合物种类繁多，季铵盐类化合物就是其中重要的一类，因其广谱、高效且低毒的特点，广泛应用于日常生活、工业领域及医疗卫生领域的杀菌消毒，特别是在卫生湿巾、消毒湿巾和抑菌洗手液中使用非常广泛。季铵盐类化合物种类多样，不同分子结构具有不同特性，消毒产品原料目录清单里列出了能够用于杀菌消毒的季铵盐共16种。在从事实际检测工作时我们发现由于原材料的生产工艺有别，同一种原料可能存在多种同系物，例如苯扎氯铵常见的有c12、c14、c16等同系物，对其进行定性定量时需要备齐各种同系物的标准物质，鉴于季铵盐类化合物种类繁多，结构复杂，在实际操作中难以实现。
3.消毒产品备案时需要提供产品的成分清单，企业在提交产品配方表时需要明确产品中添加的季铵盐种类及含量。目前gb26369-2020中主要是采用滴定法来计算样品中添加的季铵盐总量(以苯扎氯铵计)，无法分别检测各类季铵盐物质的含量；而对季铵盐单一含量定量检测仅有苯扎氯铵、苄索氯铵等少数化合物有效，针对其他种类的季铵盐的检测方法还没有明确。企业在产品备案时需对有效成分进行检测，但依据国家标准进行检测只能得到以苯扎氯铵计的总量，与实际添加的量有较大的差别，经常导致备案审核不通过企业急需制定出合理的季铵盐有效成分的单一成分的检测方法，与产品的配方添加量相匹配。
4.卫生湿巾、消毒湿巾因其自身的具有强吸附性的特点，从吸附性较强的样品介质中以较高的提取效率提取出目标物的难度较大，目前可及的标准文本中较少提前处理条件等方面的内容，这也在一定能程度上阻碍了现有分析方法拓展至其他样品的检测。卫生湿巾、消毒湿巾实际使用时起作用的主要为湿巾的中的挤出液，为了规避产品的吸附，使产品具有同样的消毒效果，企业多通过配方的调节，材质的选择来实现。由此导致不同的类型的产品有效成分的测定难度极大，目前尚无一种合适的可一次测定消毒产品原料目录清单中多种或所有目标物的分析方法。


技术实现要素：

5.为了解决背景技术中的技术问题，本技术的提供一种季铵盐类物质检测方法，以实现前处理简便，准确度高，线性范围宽，精密度高、稳定性好的效果。
6.本技术的目的是通过以下技术方案实现的，一种季铵盐类物质检测方法，包括以下步骤：
7.1)样品前处理
8.称取样品0.1g精确至0.1mg，置于10ml玻璃比色管中，加入0.5％甲酸的甲醇溶液定容至刻度，超声提取20min，冷却至室温后，8000r/min离心5min，经0.22μm滤膜过滤，滤液
作为待测样液。
9.2)配置标准溶液
10.称取各季铵盐标准品10mg，精确到0.1mg，于10ml的容量瓶中，用0.5％甲酸的甲醇溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1000mg/l的标准储备液，密封储存于-18℃冰箱中；
11.分别吸取0.1ml各标准储备液于10ml棕色容量瓶中，用0.5％甲酸的甲醇溶液定容，配制成10mg/l混合标准溶液；
12.用0.5％甲酸的甲醇溶液将上述混合标准溶液分别配成一系列浓度10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、400ng/ml的混合标准工作溶液，现用现配。
13.3)检测
14.将步骤1或2所得待测溶液注入高效液相色谱串联质谱系统进行分析，方法采取部分进样、梯度淋洗、多反应监测模式，通过一级质谱扫描获得母离子，通过二级质谱扫描选取目标物特征离子对进行定性定量。
15.色谱条件为：色谱柱，beh c
18
柱，2.1mm
ⅹ
100mm，1.7μm；流动相a为含0.1％甲酸的水，流动相b为乙腈，梯度洗脱程序：0～1.0min，30％a；1.0～6.0min，30％a～2％a；6.0～8.0min，2％a；8.0～8.1min，2％a～30％a；8.1～10.0min，30％a；流速：0.3ml/min；柱温：35℃；进样体积：1μl；
16.质谱条件：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电压：3.0kv；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：450℃；去溶剂气流量：800l/h；锥孔气流量：50l/h；碰撞气体：氩气；碰撞气流量：0.20ml/min；扫描方式：多反应监测模式，利用特征母离子和子离子进行定性，质谱分析参数见实施例1中的表1。
17.4)建立标准曲线
18.将步骤2配置的系列混合标准工作溶液于步骤3中的检测方法下进行分析，得到标准物质的高效液相色谱串联质谱提取离子流图，以提取离子流图中定量离子对峰面积为纵坐标，纸张样品中各季铵盐的浓度为横坐标，绘制标准曲线；
19.5)获取样品中季铵盐的定性和定量结果
20.将待测样品中目标物定性离子对和标准溶液定性离子对的对照，对样品中所含季铵盐进行定性；
21.将步骤3所得样品高效液相色谱串联质谱选择离子流图中的目标物定量离子对特征峰面积值代入步骤4所得标准曲线中，计算获得样品中季铵盐的含量。
22.本技术的有益之处在于：采用液相色谱-串联质谱测定方法，可对同系物进行定性。具有前处理简便，准确度高，线性范围宽，精密度高、稳定性好的优点，可用于一次性卫生用品中季铵盐类物质的检测。
具体实施方式
23.下面对本技术的优选方式详细地进行说明，为了使本技术领域的人员更好的理解本技术方案，下面将对本技术中实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
24.本技术中各季铵盐的简称分别为：十二烷基二甲基苄基氯化铵简称c12-bac、十四
烷基二甲基苄基氯化铵简称c14-bac、十六烷基二甲基苄基氯化铵简称c16-bac、二癸基二甲基氯化铵简称ddac、十二烷基三甲基溴化铵简称dtab)、十二烷基二甲基-2-苯氧基-乙基溴化铵简称eddab。
25.实施例1
26.1、样品前处理
27.称取样品0.1g(精确至0.1mg)，于10ml玻璃比色管中，加入0.5％甲酸的甲醇溶液定容至刻度，超声提取20min，冷却至室温后，8000r/min离心5min，经0.22μm滤膜过滤，滤液作为待测样液备用。若被测组分含量较高，可用含0.5％甲酸的甲醇溶液稀释后，上机测试。
28.2、标准溶液的配制
29.准确称取各季铵盐标准品10mg，精确到0.1mg，于10ml的容量瓶中，用0.5％甲酸的甲醇溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1000mg/l的标准储备液，密封储存于-18℃冰箱中。
30.分别吸取0.1ml各标准储备液于10ml棕色容量瓶中，用0.5％甲酸的甲醇溶液定容，配制成10mg/l混合标准溶液。
31.用0.5％甲酸的甲醇溶液将上述混合标准溶液分别配成一系列浓度10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、400ng/ml的标准工作溶液，现用现配。
32.3、检测
33.将步骤1或2所得待测溶液注入高效液相色谱串联质谱系统进行分析，方法采取部分进样、梯度淋洗、多反应监测模式，通过一级质谱扫描获得母离子，通过二级质谱扫描选取目标物特征离子对进行定性定量。
34.色谱条件为：色谱柱，beh c
18
柱，2.1mm
ⅹ
100mm，1.7μm；流动相a为含0.1％甲酸的水，流动相b为乙腈，梯度洗脱程序：0～1.0min，30％a；1.0～6.0min，30％a～2％a；6.0～8.0min，2％a；8.0～8.1min，2％a～30％a；8.1～10.0min，30％a；流速：0.3ml/min；柱温：35℃；进样体积：1μl；
35.质谱条件：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电压：3.0kv；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：450℃；去溶剂气流量：800l/h；锥孔气流量：50l/h；碰撞气体：氩气；碰撞气流量：0.20ml/min；扫描方式：多反应监测模式，利用特征母离子和子离子进行定性，质谱分析参数见表1，其中*为定量离子。
36.表1季铵盐的质谱分析参数
[0037][0038]
4、建立标准曲线
[0039]
将步骤2配置的系列混合标准工作溶液于步骤3中的检测方法下进行分析，得到标准物质的高效液相色谱串联质谱提取离子流图，以提取离子流图中定量离子对峰面积为纵坐标，纸张样品中各季铵盐的浓度为横坐标，绘制标准曲线；5、获取样品中季铵盐的定性和定量结果
[0040]
将待测样品中目标物定性离子对和标准溶液定性离子对的对照，对样品中所含季铵盐进行定性；
[0041]
将步骤3所得样品高效液相色谱串联质谱选择离子流图中的目标物定量离子对特征峰面积值代入步骤4所得标准曲线中，计算获得样品中季铵盐的含量。
[0042]
6、方法学验证
[0043]
6.1、线性范围和检出限、定量限
[0044]
将配制好的的系列标准溶液，按照已建立的方法进行测定。结果发现，6种季铵盐在各自的质量浓度范围内，其峰面积y与质量浓度x(ng/ml)有良好的线性关系，相关系数r≥0.99。通过向空白样品加标的方式，按样品前处理步骤，以3倍信噪比确定了6种季铵盐的检出限(lod)，以10倍信噪比确定了6种季铵盐的定量限(loq)结果如表2所示。
[0045]
表2季铵盐的线性关系、检出限和定量限
[0046][0047]
6.2、回收率和精密度
[0048]
称取3份阴性样品0.1g于10ml玻璃比色管中，分别向其加入10mg/l混合标准溶液0.05ml、0.1ml和0.2ml，即得到添加量为5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg三个不同级别的加标样品，分别加入0.5％甲酸的甲醇溶液定容至刻度，超声提取20min，冷却至室温后，8000r/min离心5min，经0.22μm滤膜过滤。
[0049]
最后上机检测，得出回收率结果如表3所示。
[0050]
表3样品不同添加量回收率试验结果(n＝5)
[0051][0052][0053]
7、实际样品检测
[0054]
利用建立的方法，对实验室送检的样品进行测试，测试结果如表4所示。
[0055]
表4实际样品检测结果
[0056][0057]
本技术的任意实施例既可以作为独立的技术方案，也可以跟其他实施例相互组合。本技术说明书中提到的所有专利和出版物都表示这些是本领域的公开技术，本技术可以使用。这里所引用的所有专利和出版物都被同样列在参考文献中，跟每一个出版物具体的单独被参考引用一样。这里的本技术可以在缺乏任何一种元素或多种元素，一种限制或多种限制的情况下实现，这里这种限制没有特别说明。这里采用的术语和表达方式所为描述方式，而不受其限制，这里也没有任何意图来指明此书描述的这些术语和解释排除了任何等同的特征，但是可以知道，可以在本技术和权利要求的范围内做任何合适的改变或修改。可以理解，本技术所描述的实施例子都是一些在一些实施例中实施例子和特点，任何本领域的一般技术人员都可以根据本技术描述的精髓下做一些更改和变化，这些更改和变化也被认为属于本技术的范围和独立权利要求以及附属权利要求所限制的范围内。

技术特征：
1.一种季铵盐类物质检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)样品前处理：称取样品，置于玻璃比色管中，加入0.5％甲酸的甲醇溶液定容，超声提取，离心，过滤，滤液作为待测样液；2)配置标准溶液：准确称取各季铵盐标准品，加入0.5％甲酸的甲醇溶液溶解，配成系列混合标准溶液；3)检测：将步骤1或2所得待测溶液注入高效液相色谱串联质谱系统进行分析，方法采取部分进样、梯度淋洗、多反应监测模式，通过一级质谱扫描获得母离子，通过二级质谱扫描选取目标物特征离子对进行定性定量；4)建立标准曲线：将步骤2配置的系列混合标准工作溶液于步骤3中的检测方法下进行分析，得到标准物质的高效液相色谱串联质谱提取离子流图，以提取离子流图中定量离子对峰面积为纵坐标，纸张样品中各季铵盐的浓度为横坐标，绘制标准曲线；5)获取样品中季铵盐的定性和定量结果：将待测样品中目标物定性离子对和标准溶液定性离子对的对照，对样品中所含季铵盐进行定性；将步骤3所得样品高效液相色谱串联质谱选择离子流图中的目标物定量离子对特征峰面积值代入步骤4所得标准曲线中，计算获得样品中季铵盐的含量。2.根据权利要求1所述一种季铵盐类物质检测方法，其特征在于：步骤1中的样品为一次性卫生用品。3.根据权利要求1所述一种季铵盐类物质检测方法，其特征在于：步骤1具体为：称取样品0.1g精确至0.1mg，置于10ml玻璃比色管中，加入0.5％甲酸的甲醇溶液定容至刻度，超声提取20min，冷却至室温后，8000r/min离心5min，经0.22μm滤膜过滤，滤液作为待测样液。4.根据权利要求1所述一种季铵盐类物质检测方法，其特征在于：步骤2具体为：称取各季铵盐标准品10mg，精确到0.1mg，于10ml的容量瓶中，用0.5％甲酸的甲醇溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1000mg/l的标准储备液，密封储存于-18℃冰箱中；分别吸取0.1ml各标准储备液于10ml棕色容量瓶中，用0.5％甲酸的甲醇溶液定容，配制成10mg/l混合标准溶液；用0.5％甲酸的甲醇溶液将上述混合标准溶液分别配成一系列浓度10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、400ng/ml的混合标准工作溶液，现用现配。5.根据权利要求1所述一种季铵盐类物质检测方法，其特征在于：步骤2中色谱条件为：色谱柱，beh c
18
柱，2.1mm
ⅹ
100mm，1.7μm；流动相a为含0.1％甲酸的水，流动相b为乙腈，梯度洗脱程序：0～1.0min，30％a；1.0～6.0min，30％a～2％a；6.0～8.0min，2％a；8.0～8.1min，2％a～30％a；8.1～10.0min，30％a；流速：0.3ml/min；柱温：35℃；进样体积：1μl；质谱条件：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电压：3.0kv；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：450℃；去溶剂气流量：800l/h；锥孔气流量：50l/h；碰撞气体：氩气；碰撞气流量：0.20ml/min；扫描方式：多反应监测模式，利用特征母离子和子离子进行定性，质谱分析参数见表1，其中标*为定量离子
表1 季铵盐的质谱分析参数

技术总结
本发明申请提供了一种季铵盐类物质检测方法，包括以下步骤：1)样品前处理：称取样品，置于玻璃比色管中，加入0.5％甲酸的甲醇溶液定容，超声提取，离心，过滤，滤液作为待测样液；2)配置标准溶液；3)检测：将步骤1或2所得待测溶液注入高效液相色谱串联质谱系统进行分析，方法采取部分进样、梯度淋洗、多反应监测模式，通过一级质谱扫描获得母离子，通过二级质谱扫描选取目标物特征离子对进行定性定量；4)建立标准曲线；5)获取样品中季铵盐的定性和定量结果。本申请采用液相色谱-串联质谱测定方法，优化了样品前处理，达到了前处理简便，准确度高，线性范围宽，精密度高、稳定性好的效果，以更有利于一次性卫生用品中季铵盐类物质的检测。利于一次性卫生用品中季铵盐类物质的检测。


技术研发人员：沈宋利 李长于 胡丹 鹿燕 叶涛 卢珩俊 蔡振杭 石瑞瑞 廖上富
受保护的技术使用者：浙江方圆检测集团股份有限公司
技术研发日：2022.09.23
技术公布日：2023/7/11