一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒及应用的制作方法

1.本发明属于细胞学技术领域，涉及一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒及应用。


背景技术：

2.在细胞学研究中，常需要对细胞样本进行制片与染色，以便准确观察细胞状态。液基薄层细胞学检测技术（thinprepcytologytest，tct）主要对细胞样本染色并观察细胞形态结构，其关键步骤为将采集的细胞样本快速放入细胞保存液中，去除红细胞、黏液、杂质等干扰因素并分散细胞团、维持细胞原有形态，再制成背景清晰的薄层涂片用于细胞学研究。该技术操作简便，但是检测结果依赖人为主观判断，存在一定的假阳性和/或假阴性现象。
3.免疫细胞化学染色是利用蛋白的特异性抗体检测细胞蛋白标志物表达情况的技术，已广泛应用于生命科学中。该技术能较好地弥补液基薄层细胞学检测结果不准确的问题。联合使用液基薄层细胞学和免疫细胞化学检测方法，进行双质控参数判读，有助于快速提高准确率和精度。
4.但是，液基薄层细胞学检测的细胞保存液体系中的化学物质容易导致细胞蛋白标志物的抗原决定簇封闭，从而影响免疫细胞化学染色结果。因此，有必要建立同时满足液基薄层细胞学和免疫细胞化学的检测体系，提高细胞学筛查的敏感度和特异度。


技术实现要素：

5.针对现有技术的不足及实际需求，本发明提供了一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒及应用，所述试剂盒中的细胞处理液不仅适用于液基薄层细胞学制片、染色，还适用于免疫细胞化学制片、染色，利用抗原抗体的特异性结合作用，为目标细胞提供了特异性染色补充，避免了非特异性染色的缺陷。
6.为达此目的，本发明采用以下技术方案：第一方面，本发明提供了一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒包括细胞处理液；所述细胞处理液包括n,n-二羟乙基甘氨酸、1,3-丁二醇、黄原胶、肌肽、甘露糖醇、多聚甲醛、nacl、kcl、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和水。
7.本发明中，n,n-二羟乙基甘氨酸和1,3-丁二醇协同作用，一方面配合多聚甲醛固定细胞结构、防止多聚甲醛封闭细胞抗原和使细胞聚集，另一方面有效解离蛋白质复合物，充分释放细胞抗原决定簇；肌肽和甘露糖醇能够维持有核细胞膜的张力，使细胞样本保持自然状态，并改变红细胞膜的通透性，与nacl和kcl配合破裂红细胞。本发明同时采用黄原胶和肌肽配合降解粘液等杂质成分，采用4-羟乙基哌嗪乙磺酸作为缓冲物，使各功效成分能够维持在稳定的体系中。
8.本发明的细胞处理液中的各组分协同配合，经处理的细胞具有自然的细胞形态和
结构，并具有充分活化的细胞表面蛋白，同时适用于液基细胞学和免疫细胞化学染色。
9.优选地，所述n,n-二羟乙基甘氨酸在所述细胞处理液中的终浓度为15~30mm，例如可以是15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm、21mm、22mm、23mm、24mm、25mm、26mm、27mm、28mm、29mm或30mm，优选为20~25mm。
10.优选地，所述1,3-丁二醇在所述细胞处理液中的终浓度为5~20mm，例如可以是5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm或20mm，优选为10~15mm。
11.优选地，所述黄原胶在所述细胞处理液中的终浓度为1~10mm，例如可以是1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm或10mm，优选为2~6mm。
12.优选地，所述肌肽在所述细胞处理液中的终浓度为0.1~5mm，例如可以是0.1mm、0.2mm、0.3mm、0.4mm、0.5mm、0.6mm、0.7mm、0.8mm、0.9mm、1mm、1.1mm、1.2mm、1.3mm、1.4mm、1.5mm、1.6mm、1.7mm、1.8mm、1.9mm、2mm、2.1mm、2.2mm、2.3mm、2.4mm、2.5mm、2.6mm、2.7mm、2.8mm、2.9mm、3mm、3.1mm、3.2mm、3.3mm、3.4mm、3.5mm、3.6mm、3.7mm、3.8mm、3.9mm、4mm、4.1mm、4.2mm、4.3mm、4.4mm、4.5mm、4.6mm、4.7mm、4.8mm、4.9mm或5mm，优选为0.5~1mm。
13.优选地，所述甘露糖醇在所述细胞处理液中的终浓度为10~20mm，例如可以是10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm或20mm，优选为12~16mm。
14.优选地，所述多聚甲醛在所述细胞处理液中的终浓度为0.1~1mm，例如可以是0.1mm、0.2mm、0.3mm、0.4mm、0.5mm、0.6mm、0.7mm、0.8mm、0.9mm或1mm，优选为0.1~0.5mm。
15.优选地，所述nacl在所述细胞处理液中的终浓度为50~100mm，例如可以是50mm、55mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm或100mm。
16.优选地，所述kcl在所述细胞处理液中的终浓度为10~20mm，例如可以是10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm或20mm。
17.优选地，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸在所述细胞处理液中的终浓度为10~50mm，例如可以是10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm或50mm，优选为30~40mm。
18.本发明中，在4-羟乙基哌嗪乙磺酸的调节作用下，n,n-二羟乙基甘氨酸、1,3-丁二醇、黄原胶、肌肽、甘露糖醇、多聚甲醛、nacl和kcl在合理的配比下形成细胞处理液，具有维持细胞固有形态、有效去除杂质成分、快速活化细胞蛋白、促进抗原抗体特异性结合的效果，对于同步提高液基细胞学和免疫细胞化学检测准确性具有重要作用。
19.优选地，所述细胞处理液由以下物质按终浓度配制形成：n,n-二羟乙基甘氨酸15~30mm1,3-丁二醇5~20mm黄原胶1~10mm肌肽0.1~5mm甘露糖醇10~20mm多聚甲醛0.1~1mm
nacl50~100mmkcl10~20mm4-羟乙基哌嗪乙磺酸10~50mm。
20.优选地，所述细胞处理液由以下物质按终浓度配制形成：n,n-二羟乙基甘氨酸20~25mm1,3-丁二醇10~15mm黄原胶2~6mm肌肽0.5~1mm甘露糖醇12~16mm多聚甲醛0.1~0.5mmnacl50~100mmkcl10~20mm4-羟乙基哌嗪乙磺酸30~40mm。
21.优选地，所述试剂盒还包括固相载体，所述固相载体上设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区。
22.优选地，所述免疫细胞化学检测区包被有细胞抗原的特异性抗体；所述抗原包括pr、er、ar、her2、p120、e-cadherin、mpo、cyclind1、mum1、sox10、hmb45、melana、maa、tpo或ct。
23.第二方面，本发明提供了第一方面所述的试剂盒在保存和/或染色细胞样本中的应用。
24.优选地，所述细胞样本包括腹水样本、乳腺样本、淋巴结样本、骨髓样本、黑色素肿瘤样本或甲状腺样本中的任意一种或至少两种的组合。
25.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明的试剂盒中细胞处理液的各组分相互配合发挥协同促进作用，不仅能够保持细胞的自然原始形态结构，而且能够有效去除杂质成分，有助于制备形成细胞分散、背景清晰的液基细胞学涂片；（2）本发明的试剂盒中细胞处理液还能够快速活化细胞抗原决定簇，使特异性抗体与抗原有效结合，优化了免疫细胞化学染色效果；（3）本发明的试剂盒中细胞处理液同时满足了液基薄层细胞学和免疫细胞化学的检测要求，细胞样本处理方法简单，实现了联合应用液基薄层细胞学和免疫细胞化学检测、提高细胞学筛查的敏感度和特异度的有益效果。
附图说明
26.图1为双孔玻片的结构示意图，分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，10-双孔玻片、11-液基细胞学检测区、12-免疫细胞化学检测区；图2a为实施例1的液基薄层细胞学染色结果，图2b为实施例1的免疫细胞化学染色结果；图3a为实施例6的液基薄层细胞学染色结果，图3b为实施例6的免疫细胞化学染色结果；
图4a为实施例12的液基薄层细胞学染色结果，图4b为实施例12的免疫细胞化学染色结果；图5a为对比例1的液基薄层细胞学染色结果，图5b为对比例1的免疫细胞化学染色结果。
具体实施方式
27.为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
28.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
29.实施例1，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
30.细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸22.5mm、1,3-丁二醇12mm、黄原胶5mm、肌肽0.8mm、甘露糖醇15mm、多聚甲醛0.25mm、nacl75mm、kcl14mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸35mm。
31.双孔玻片的结构示意图如图1所示，分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗pr单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的腹水细胞样本置于5ml细胞处理液中30min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
32.粘附剂包括铬明胶溶液（包括硫酸铬钾和明胶）和多聚赖氨酸；封闭液的各组分终浓度如下：脱脂奶粉95g/l、tritonx-10016.8g/l、proclin300265g/l和pbs缓冲液，ph为7.2；洗涤液为pbs缓冲液，ph为7.2；染色液包括dab染色液，其由dab底物、dab底物缓冲液和dab显色剂组成，其中，所述dab底物的成分包括过氧化物酶葡聚糖聚合物、tris/hcl、氯化钠、牛血清白蛋白、5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷、4-氨基安替比林、聚乙二醇（peg3000）、酪蛋白和吐温-20，所述dab底物的ph值为7.6；所述dab底物缓冲液的成分包括咪唑、n,n'-乙基双(2-[2-羟基苯基]甘氨酸)（edhpa）、乙基苯基聚乙二醇（nonidetp-40）、过氧化氢和氯化苯二甲烃铵，所述dab底物缓冲液的ph为7.5；所述dab显色剂由3,3二氨基联苯胺四氯化碳溶于80%丙二醇制成；苏木素显色液，配制方法为：在100份无水乙醇中溶解1份苏木素，并进行加热，得到溶液a；在100份蒸馏水中溶解60g明矾并加入100份甘油，再进行加热，得到溶液b；将溶液a和溶液b混合，并加入10份冰醋酸，得到溶液c；将溶液c暴露在空气和阳光中，持续3-4个星期，得到所述苏木素显色液。
[0033]
实施例2，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0034]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸24 mm、1,3-丁二醇14 mm、黄原胶5 mm、肌肽0.6 mm、甘露糖醇13 mm、多聚甲醛0.2 mm、nacl 65 mm、kcl 18 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸32 mm。
[0035]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗her2单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的乳腺细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0036]
实施例3，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0037]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸20 mm、1,3-丁二醇15 mm、黄原胶6 mm、肌肽0.5 mm、甘露糖醇12 mm、多聚甲醛0.5 mm、nacl 85 mm、kcl 17.5 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸40 mm。
[0038]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗p120单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的乳腺细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0039]
实施例4，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0040]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸25 mm、1,3-丁二醇10 mm、黄原胶2 mm、肌肽1 mm、甘露糖醇16 mm、多聚甲醛0.1 mm、nacl 55 mm、kcl 12 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸30 mm。
[0041]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗er单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的腹水细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0042]
实施例5，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0043]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸27.5 mm、1,3-丁二醇8 mm、黄原胶1.5 mm、肌肽3 mm、甘露糖醇18 mm、多聚甲醛0.6 mm、nacl 80 mm、kcl 15 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸25 mm。
[0044]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞
学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗mpo单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的骨髓细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0045]
实施例6，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0046]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸17 mm、1,3-丁二醇16 mm、黄原胶1.5 mm、肌肽0.4 mm、甘露糖醇12 mm、多聚甲醛0.7 mm、nacl 55 mm、kcl 18 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸45 mm。
[0047]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗cyclind单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的淋巴结细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0048]
实施例7，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0049]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸15 mm、1,3-丁二醇20 mm、黄原胶1 mm、肌肽5 mm、甘露糖醇10 mm、多聚甲醛0.1 mm、nacl 100 mm、kcl 10 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸10 mm。
[0050]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗sox10单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的黑色素瘤细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0051]
实施例8，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0052]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸30 mm、1,3-丁二醇5 mm、黄原胶10 mm、肌肽5 mm、甘露糖醇20 mm、多聚甲醛1 mm、nacl 50 mm、kcl 20 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸50 mm。
[0053]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗melana单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的黑色素瘤细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0054]
实施例9，本实施例提供一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，所述
试剂盒内含细胞处理液和双孔玻片。
[0055]
细胞处理液由以下物质按终浓度用去离子水制备：n,n-二羟乙基甘氨酸15 mm、1,3-丁二醇12 mm、黄原胶5 mm、肌肽1 mm、甘露糖醇15 mm、多聚甲醛0.5 mm、nacl 60 mm、kcl 15 mm、4-羟乙基哌嗪乙磺酸25 mm。
[0056]
双孔玻片分别设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区，其中，液基细胞学检测区预先使用粘附剂处理，免疫细胞化学检测区预先包被有兔抗tpo单克隆抗体；双制片染步骤如下：将取自供者的甲状腺细胞样本置于5 ml细胞处理液中30 min，随后添加在双孔玻片的液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区内，经常规的洗涤、封闭、染色后，显微镜下观察细胞染色情况。
[0057]
实施例10，与实施例1相比，细胞处理液中n,n-二羟乙基甘氨酸的终浓度为19 mm，其他条件与实施例1相同。
[0058]
实施例11，与实施例2相比，细胞处理液中1,3-丁二醇的终浓度为19 mm，其他条件与实施例2相同。
[0059]
实施例12，与实施例3相比，细胞处理液中肌肽的终浓度为1.5 mm，其他条件与实施例3相同。
[0060]
实施例13，与实施例4相比，细胞处理液中甘露糖醇的终浓度为14 mm，其他条件与实施例4相同。
[0061]
实施例14，与实施例3相比，细胞处理液中n,n-二羟乙基甘氨酸的终浓度为10 mm，其他条件与实施例3相同。
[0062]
实施例15，与实施例4相比，细胞处理液中1,3-丁二醇的终浓度为25 mm，其他条件与实施例4相同。
[0063]
实施例16，与实施例3相比，细胞处理液中黄原胶的终浓度为12 mm，其他条件与实施例3相同。
[0064]
实施例17，与实施例3相比，细胞处理液中肌肽的终浓度为8 mm，其他条件与实施例3相同。
[0065]
实施例18，与实施例4相比，细胞处理液中甘露糖醇的终浓度为7.5 mm，其他条件与实施例4相同。
[0066]
对比例1，与实施例1相比，细胞处理液不含n,n-二羟乙基甘氨酸，其他条件与实施例1相同。
[0067]
对比例2，与实施例1相比，细胞处理液不含n,n-二羟乙基甘氨酸，1,3-丁二醇的终浓度为34.5 mm，其他条件与实施例1相同。
[0068]
对比例3，与实施例1相比，细胞处理液不含1,3-丁二醇，其他条件与实施例1相同。
[0069]
对比例4，与实施例1相比，细胞处理液不含肌肽，其他条件与实施例1相同。
[0070]
对比例5，与实施例1相比，细胞处理液不含黄原胶，肌肽的终浓度为5.8 mm，其他条件与实施例1相同。
[0071]
对比例6，与实施例1相比，细胞处理液不含甘露糖醇，其他条件与实施例1相同。
[0072]
对比例7，与实施例1相比，细胞处理液中的4-羟乙基哌嗪乙磺酸替换为pbs，其他条件与实施例1相同。
[0073]
对以上各实施例和对比例的双制片染色情况进行观察和统计分析，细胞形态和免疫细胞化学染色程度评分为1~5，分数越高代表细胞清晰度越高。结果如表1所示，使用实施例1~4的细胞处理液处理细胞样本并双制片染色，细胞均匀分散，形态完整、细胞膜和细胞核可见，染色清晰、无杂质遮挡和背景干扰，免疫着色清楚；使用实施例5~13的细胞处理液处理细胞样本并双制片染色，结果与实施例1~4的结果类似，细胞形态清晰、着色清晰易辨；使用实施例14~18的细胞处理液处理细胞样本并双制片染色，部分细胞发生聚集，一定程度影响了免疫细胞化学染色。以上结果表明，采用本发明的细胞处理液处理细胞并双制片染色，能够同时满足液基薄层细胞学和免疫细胞化学的检测要求，有助于提高细胞学筛查的敏感度和特异度。
[0074]
对比例1~6的细胞处理液缺少关键成分，经处理的细胞样本双制片染色，破碎细胞和杂质成分比例较大，不能观察到完整的细胞形态，免疫细胞化学染色结果不清晰。对比例7采用的缓冲介质不能维持细胞处理液体系的稳定性，未用于细胞处理和双制片染色。
[0075]
表1编号细胞形态红细胞比例免疫细胞化学染色程度实施例15≤1%5实施例25≤1%5实施例35≤1%5实施例45≤1%5实施例55≤5%4实施例65≤5%4.5实施例74≤5%4实施例85≤5%4实施例95≤5%5实施例105≤5%4.5实施例114≤5%3.5实施例124.5≤5%5实施例135≤5%5实施例142.5≤30%3实施例153≤20%3.5实施例163.5≤20%4实施例173≤20%3实施例182.5≤30%3对比例12≥60%2对比例22≥60%2对比例32≥60%2对比例42≥60%2对比例52≥60%2对比例62≥60%2对比例7
‑‑‑
[0076]
图2a和图2b所示为实施例1的液基薄层细胞学染色结果和免疫细胞化学染色结果，液基薄层细胞学染色细胞形态完整、细胞膜和细胞核可见，免疫细胞化学染色细胞形态清晰、无背景干扰。
[0077]
图3a和图3b所示为实施例6的液基薄层细胞学染色结果和免疫细胞化学染色结果，与实施例1的结果基本一致，液基薄层细胞学染色细胞形态完整、细胞膜和细胞核可见，免疫细胞化学染色细胞形态清晰、无背景干扰。
[0078]
图4a和图4b所示为实施例12的液基薄层细胞学染色结果和免疫细胞化学染色结果，液基薄层细胞学染色细胞形态完整、细胞膜和细胞核可见，存在一定程度的细胞聚集，免疫细胞化学染色可以清楚地看到细胞形态。
[0079]
图5a和图5b所示为对比例1的液基薄层细胞学染色结果和免疫细胞化学染色结果，液基薄层细胞学染色部分细胞破裂、红细胞残留较多，影响制片清晰度，免疫细胞化学染色细胞聚集严重，免疫细胞化学染色程度低。
[0080]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括细胞处理液；所述细胞处理液按终浓度包括：15~30mmn,n-二羟乙基甘氨酸、5~20mm1,3-丁二醇、1~10mm黄原胶、0.1~5mm肌肽、10~20mm甘露糖醇、0.1~1mm多聚甲醛、50~100mmnacl、10~20mmkcl、10~50mm4-羟乙基哌嗪乙磺酸和水。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述n,n-二羟乙基甘氨酸在所述细胞处理液中的终浓度为20~25mm。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述1,3-丁二醇在所述细胞处理液中的终浓度为10~15mm。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述黄原胶在所述细胞处理液中的终浓度为2~6mm。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肌肽在所述细胞处理液中的终浓度为0.5~1mm。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述甘露糖醇在所述细胞处理液中的终浓度为12~16mm。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述多聚甲醛在所述细胞处理液中的终浓度为0.1~0.5mm。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸在所述细胞处理液中的终浓度为30~40mm。9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞处理液由以下物质按终浓度配制形成：n,n-二羟乙基甘氨酸15~30mm1,3-丁二醇5~20mm黄原胶1~10mm肌肽0.1~5mm甘露糖醇10~20mm多聚甲醛0.1~1mmnacl50~100mmkcl10~20mm4-羟乙基哌嗪乙磺酸10~50mm。10.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞处理液由以下物质按终浓度配制形成：n,n-二羟乙基甘氨酸20~25mm1,3-丁二醇10~15mm黄原胶2~6mm肌肽0.5~1mm甘露糖醇12~16mm多聚甲醛0.1~0.5mm
nacl50~100mmkcl10~20mm4-羟乙基哌嗪乙磺酸30~40mm。11.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括固相载体，所述固相载体上设置有液基细胞学检测区和免疫细胞化学检测区。12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫细胞化学检测区包被有细胞抗原的特异性抗体；所述抗原包括pr、er、ar、her2、p120、e-cadherin、mpo、cyclind1、mum1、sox10、hmb45、melana、maa、tpo或ct。13.权利要求1-12任一项所述的试剂盒在保存和/或染色细胞样本中的应用。14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述细胞样本包括腹水样本、乳腺样本、淋巴结样本、骨髓样本、黑色素肿瘤样本或甲状腺样本中的任意一种或至少两种的组合。

技术总结
本发明提供了一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒及应用，所述试剂盒包括细胞处理液；所述细胞处理液包括N,N-二羟乙基甘氨酸、1,3-丁二醇、黄原胶、肌肽、甘露糖醇、多聚甲醛、NaCl、KCl、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和水。本发明试剂盒中的细胞处理液各功效成分协同作用，具有维持细胞固有形态、有效去除杂质成分、快速活化细胞蛋白、促进抗原抗体特异性结合的效果，不仅适用于液基薄层细胞学制片、染色，还适用于免疫细胞化学制片、染色，利用抗原抗体的特异性结合作用，为目标细胞提供了特异性染色补充，避免了非特异性染色的缺陷，对于同步提高液基细胞学和免疫细胞化学检测准确性具有重要作用。有重要作用。有重要作用。


技术研发人员：黄小军 朱峻
受保护的技术使用者：深圳市森盈生物科技有限公司
技术研发日：2023.06.05
技术公布日：2023/7/7