一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法

1.本发明属于半胱氨酸材料的检测技术领域，具体涉及一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法。


背景技术：

2.半胱氨酸是20种必需氨基酸中是含有巯基(-sh)的氨基酸，由于巯基具有还原性，使得半胱氨酸在多个领域，尤其是医药领域广泛应用。半胱氨酸作为一种重要的内源性小分子硫醇，参与众多生理过程，对细胞内氧化还原水平的调节和生物活性物质的合成具有重要意义。
3.半胱氨酸参加多种生物体生理活动过程。如可以保持皮肤角蛋白中巯基酶的活性和补充巯基，保证皮肤的正常代谢。同时半胱氨酸对很多有害物质和毒素也都具有解毒作用。血清中半胱氨酸水平与多种疾病有直接或间接关系，如动脉硬化、心血管疾病、高血压、神经系统疾病、糖尿病、恶性肿瘤、妊娠期疾病、眼部疾病和骨质疏松等症状。因此实现半胱氨酸准确、快速、高选择性地检测对生命科学研究以及临床诊断具有重要的作用。
4.目前虽然已经有各种化学分析法、电化学法、光谱法、色谱法等可以用于半胱氨酸的检验，但是这些技术都有各自的不足之处。如化学络合滴定法对微量物质的检测存在困难；电化学分析法虽然灵敏度高，但选择性较差；高效液相色谱法仪器耗资昂贵、运行费用高、操作要求繁琐。由于比色方法简单、快速同时具备良好的特异性和高灵敏度，尤其适合于现场检查，因此建立一种简单、快速、高灵敏的比色法实现现场半胱氨酸检查，对疾病诊断等有着重要的意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，以解决目前针对半胱氨酸的微量检测方法灵敏度差，运行费用高，操作复杂的问题。
6.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
8.步骤1，将edta溶液和haucl4溶液混合，得到第一混合溶液，取上清液备用，得到金纳米颗粒溶液，即aunps溶液；
9.步骤2，将组氨酸溶液和haucl4溶液混合，得到第二混合溶液，搅拌后得到金簇溶液，即auncs溶液；
10.步骤3，将aunps溶液和auncs溶液混合，形成aunps-auncs混合溶液；
11.步骤4，将含有ag
+
的溶液中加入待测半胱氨酸溶液，然后加入至aunps-auncs混合溶液中，得到第三混合溶液，室温下静置，观察颜色和/或测定吸光度值。
12.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述检测方法还包括：
13.步骤5，将步骤4中测试得到的吸光度值与吸光度值-半胱氨酸标准曲线比对，得到待测半胱氨酸溶液的浓度。
14.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述步骤1的步骤具体为：
15.将第一混合溶液在20-40℃下搅拌30min，然后离心分离，得到上清液备用。
16.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述步骤2的步骤具体为：
17.将第二混合溶液在室温下搅拌1-2h，得到金簇溶液；
18.所述组氨酸为l-组氨酸、d-组氨酸或外消旋组氨酸或任意比例混合的l-和d-型组氨酸。
19.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述步骤1中，第一混合溶液中haucl4和edta摩尔浓度比为1:7～1:10；
20.第一混合溶液中haucl4的浓度为1～50mm，edta的浓度为7～500mm；
21.优选地，步骤1中，以au计的aunps溶液的浓度为0.02～1.0g/l。
22.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述步骤2中，第二混合溶液中haucl4和组氨酸摩尔浓度比为1:20～1:50；
23.第二混合溶液中haucl4的浓度为1～50mm，组氨酸浓度为0.02～2.5m；
24.优选地，所述步骤2中，以au计的auncs的浓度为0.01～1.0g/l。
25.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述步骤4中，第三混合溶液中aunps的终浓度为43mg/l，auncs的终浓度为47～141mg/l；
26.所述步骤4中，第三混合溶液中aunps和auncs的浓度比为1.2:1～0.4:1。
27.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述步骤4中，第三混合溶液中ag
+
的终浓度为10μm～1mm，半胱氨酸的终浓度为0～100μm。
28.优选地，所述步骤4中，在形成第三混合溶液之前加水稀释，稀释后得到的第三混合溶液中ag
+
的终浓度为10μm～1mm，半胱氨酸的终浓度为0～100μm。
29.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述第三混合溶液中，半胱氨酸的终浓度为2～6μm。
30.在如上所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，优选，所述吸光度值为采用紫外-可见吸收法测定的在520nm处的吸光度。
31.有益效果：
32.本发明提供的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，该方法利用半胱氨酸具有巯基，可与ag
+
结合的性质，可以实现半胱氨酸的定性或定量检测。
33.该方法创造性的提供了一种aunps-auncs混合溶液，edta还原氯金酸得到红色aunps溶液，组氨酸还原氯金酸得到的无色auncs溶液，两者单独溶液均不可在ag
+
作用下变色，而两者混合溶液可以在ag
+
作用下聚集变色呈蓝色。半胱氨酸加入后，与ag
+
结合，阻止了aunps纳米颗粒的聚集变色，进而使混合溶液呈现颜色的改变，通过对颜色的观察可以对半胱氨酸做定性分析。而对一定范围内的半胱氨酸浓度，混合溶液中在520nm处的吸光度值呈现线性变化，通过对待测溶液测量该处的吸光度值进而与标准曲线进行比对，可以实现对待测半胱氨酸溶液进行定量分析。
34.该检测方法操作简单，只需将事先制备好的aunps溶液、auncs溶液、ag
+
溶液与待测半胱氨酸样品混合，静置1小时，即可裸眼比色检查；如需精确测定含量，采用操作简单的uv-vis法即可完成定量检测。
附图说明
35.构成本技术的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。其中：
36.图1为本发明实施例的ag
+
加入aunps-auncs混合溶液后检测半胱氨酸的原理图；
37.图2为本发明实施例1的第三混合溶液在不同半胱氨酸浓度下的aunps的uv-vis吸收图谱；
38.图3为本发明实施例1的第三混合溶液在不同半胱氨酸浓度下的溶液颜色变化；
39.图4为本发明实施例1的半胱氨酸浓度对520nm处吸光度值的标准曲线；
40.图5为本发明实验例1的不同溶液与aunps相互作用的紫外-可见吸收图谱及溶液颜色(图5a为不同溶液与aunps相互作用的紫外-可见吸收图谱；图5b自左至右，溶液分别为aunps溶液、aunps+ag
+
溶液、aunps+auncs+ag
+
溶液、aunps+auncs溶液、auncs溶液)；
41.图6为本发明实验例2的不同溶液的tem图谱及溶液颜色(图6a为aunps溶液的tem图谱；图6b为aunps+auncs+ag
+
溶液的tem图谱；图6c为aunps+auncs+cys+ag
+
溶液的tem图谱；图6d自左至右溶液分别为aunps+auncs+ag
+
溶液、aunps+auncs+cys+ag
+
溶液、aunps溶液)。
具体实施方式
42.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
43.下面将结合实施例来详细说明本发明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
44.本发明提供的一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，主要是基于纳米金颗粒(aunps)聚集产生颜色变化和uv-vis吸收曲线变化的方法，用于半胱氨酸含量的定性和定量测定。
45.本发明的基本原理是：乙二胺四乙酸(edta)还原氯金酸(haucl4)生成红色的金纳米颗粒(aunps)溶液，其最大吸光度在520nm处；组氨酸还原氯金酸生成无色的金簇(auncs)溶液。aunps溶液与auncs溶液的混合溶液在ag
+
存在时发生聚集，溶液变为蓝色，520nm处的吸光度值下降。利用半胱氨酸中的巯基可与ag
+
结合的特性，混合溶液中自由的ag
+
量减少，从而aunps的聚集程度降低，混合溶液颜色随着半胱氨酸含量的改变(含量不变增加)产生从蓝色到红色的显著变化，520nm处的吸光度值在一定范围内呈现线性改变，且在650nm处出现明显的吸收峰。根据混合溶液颜色变化以及紫外-可见吸光曲线的变化实现对半胱氨酸的含量测定，在混合溶液中的半胱氨酸浓度在2～6μm范围内，半胱氨酸浓度与520nm处的吸光度值之间存在线性关系，进而实现半胱氨酸浓度的定量检测。本发明的ag
+
加入aunps-auncs混合溶液后检测半胱氨酸原理图如图1所示。
46.aunps溶液的制备除使用edta为还原剂外，还有使用柠檬酸等还原剂制备的方法。同样，auncs的制备除使用组氨酸外，还可以使用牛血清白蛋白(bsa)等。但其他还原剂制备所得的aunps和auncs混合后，在ag
+
加入aunps-auncs混合溶液后不会诱导产生aunps聚集现象，亦即无明显的颜色变化及吸光曲线改变。因此无法实现ag
+
介导的半胱氨酸检测。
47.本发明提供的一种含aunps-auncs的混合溶液。该溶液的制备以haucl4为金源，以edta为还原剂，制备得到aunps溶液；以haucl4为金源，以组氨酸为还原剂，制备得到auncs溶液；上述两溶液按一定比例混合，得到aunps和auncs的混合溶液。auncs提高了aunps对ag
+
的敏感度，ag
+
促使aunps聚集。本发明还提供了一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，方法需要用到的试剂即上述技术方案的aunps-auncs混合溶液。
48.本发明还提供了一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，检测方法包括以下步骤：
49.首先说明的是，本发明中采用的edta溶液、haucl4溶液、组氨酸溶液、半胱氨酸溶液和ag
+
分别为乙二胺四乙酸四钠盐(edta
·
4na)、haucl4、组氨酸、半胱氨酸、agno3在室温下分别溶于去离子水中，并将溶液搅拌至完全溶解，得到的5种溶液。
50.步骤1，将edta溶液和haucl4溶液混合，得到第一混合溶液，取上清液备用，得到金纳米颗粒溶液，即aunps溶液。
51.本发明的具体实施例中，将第一混合溶液在20-40℃(比如25℃、30℃、35℃)下搅拌30min，然后以10000rpm离心5分钟，得到上清液备用。
52.本发明的具体实施例中，步骤1中，第一混合溶液中haucl4和edta摩尔浓度比为1:7～1:10(比如1:8、1:8.5、1:9、1:9.5)。第一混合溶液中haucl4的浓度为1～50mm(比如5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm)，相应的edta的浓度为7～500mm(比如10mm、50mm、100mm、150mm、200mm、300mm、400mm)。
53.本发明的具体实施例中，步骤1中，以au计的aunps溶液的浓度为0.02～1.0g/l(比如0.05g/l、0.1g/l、0.2g/l、0.4g/l、0.6g/l、0.8g/l)。aunps的浓度过低检测的灵敏度会降低，对于半胱氨酸的检测限会升高，浓度过高则容易聚集，使得反应现象发生过快，不好定量检测。
54.步骤2，将组氨酸溶液和haucl4溶液混合，得到第二混合溶液，搅拌后得到金簇溶液，即auncs溶液。
55.本发明的具体实施例中，将第二混合溶液在室温下搅拌1-2h，得到金簇溶液；
56.组氨酸为l-组氨酸、d-组氨酸或外消旋组氨酸或任意比例混合的l-和d-型组氨酸。
57.本发明的具体实施例中，步骤2中，第二混合溶液中haucl4和组氨酸摩尔浓度比为1:20～1:50(比如1:30、1:35、1:40、1:45)；第二混合溶液中haucl4的浓度为1～50mm(比如5mm、10mm、20mm、30mm、40mm)，组氨酸浓度为0.02～25m(比如0.05m、0.1m、0.5m、1m、5m、10m、15m、20m)。
58.本发明的具体实施例中，步骤2中，以au计的auncs的浓度为0.01～1.0g/l(比如0.05g/l、0.1g/l、0.2g/l、0.4g/l、0.6g/l、0.8g/l)。auncs的浓度过低会导致检测灵敏度降低，对于半胱氨酸的检测限升高，浓度过高会提前引起aunps聚集，无法检测样品。
59.步骤3，将aunps溶液和auncs溶液混合，形成aunps-auncs混合溶液。
60.本发明的具体实施例中，步骤4中，第三混合溶液中aunps的终浓度为43mg/l，auncs的终浓度为47～141mg/l(比如50mg/l、60mg/l、80mg/l、100mg/l、120mg/l、140mg/l)。
61.步骤4中，第三混合溶液中aunps和auncs的浓度比为1.2:1～0.4:1(比如0.5:1、0.6:1、0.8:1、1.0:1)。两者比值过高，即aunps的含量过高会导致混合溶液发生聚集沉淀，比值过低即aunps的含量过低则灵敏度不够。
62.步骤4，将含有ag
+
的溶液中加入待测半胱氨酸溶液，然后加入至aunps-auncs混合溶液中，得到第三混合溶液，室温下静置，观察颜色和/或测定吸光度值。
63.本发明的具体实施例中，步骤4中，第三混合溶液中ag
+
的终浓度为10μm～1mm，银离子的浓度过低不能引起aunps-auncs混合溶液变蓝色的现象，浓度过高则会引起aunps的聚集，同时灵敏度会降低，影响半胱氨酸(cys)的检测；半胱氨酸的终浓度为0～100μm(比如1μm、10μm、20μm、40μm、60μm、80μm)，在此范围内的半胱氨酸的终浓度可以有利于进行颜色对比或者吸光度值的比对。
64.优选地，步骤4中，在形成第三混合溶液之前加水稀释，稀释后得到的第三混合溶液中ag
+
的终浓度为10μm～1mm(比如100μm、200μm、400μm、600μm、800μm)，半胱氨酸的终浓度为0～100μm(比如1μm、10μm、20μm、40μm、60μm、80μm)。
65.本发明的具体实施例中，第三混合溶液中，半胱氨酸的终浓度为2～6μm(比如2.5μm、3μm、3.5μm、4μm、4.5μm、5μm、5.5μm)，在此范围内的半胱氨酸的浓度与吸光度值呈现线性关系，可以与标准曲线比对，用于待测半胱氨酸溶液的定量检测。
66.步骤5，将步骤4中测试得到的吸光度值与吸光度值-半胱氨酸标准曲线比对，得到待测半胱氨酸溶液的浓度。
67.本发明的具体实施例中，吸光度值为采用紫外-可见吸收法测定的在520nm处的吸光度。
68.实施例1
69.本实施例提供的一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，包括以下步骤：
70.步骤1，将edta溶液和haucl4溶液混合，得到第一混合溶液，将第一混合溶液在30℃下搅拌30min，然后以10000rpm离心5分钟，得到上清液备用，得到金纳米颗粒(aunps)溶液。
71.其中，第一混合溶液中，haucl4的浓度为1.25mm，相应的edta的浓度为10mm。以au计的aunps溶液的浓度为0.25g/l。
72.步骤2，将l-组氨酸溶液和haucl4溶液混合，得到第二混合溶液，将第二混合溶液在室温下搅拌1h后得到金簇溶液，即auncs溶液。
73.其中，第二混合溶液中haucl4和组氨酸摩尔浓度比为1:30；第二混合溶液中haucl4的浓度为2.9mm，组氨酸浓度为0.086m。以au计的auncs的浓度为0.47g/l。
74.步骤3，将aunps溶液和auncs溶液混合，形成aunps-auncs混合溶液。
75.步骤4，将agno3溶液中加入11个半胱氨酸溶液中，然后加入至aunps-auncs混合溶液中，得到第三混合溶液，室温下静置，观察各个溶液的颜色和测定520nm处吸光度值。第三混合溶液中aunps的终浓度均为43mg/l，auncs的终浓度均为141mg/l，ag
+
的终浓度均为10μm，半胱氨酸的终浓度分别为0μm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm。
76.本实施例1中测定的11个样品的颜色和吸光度值如图2和图3所示，图2为混合溶液中不同半胱氨酸浓度下的aunps的uv-vis吸收图谱，其在520nm处的吸光度随着半胱氨酸浓度的升高而升高，吸光度值与2～6μm范围内的半胱氨酸浓度之间存在线性关系如图4所示，回归方程为y＝43.27x+0.6656，r2＝0.9963。
77.图3中为第三混合溶液随着半胱氨酸浓度的不断升高，溶液颜色的改变，从左到右半胱氨酸浓度分别为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μm，最右端溶液为aunps-auncs混合溶液。
78.实施例2
79.本实施例中将步骤2中l-组氨酸更换为d-组氨酸，其他方法步骤与实施例1相同，在此不再赘述。
80.对本实施例中制备的第三混合溶液进行颜色的观察和吸光度值的测定，性能结果及实验数据和实施例1相同。
81.实施例3
82.本实施例中将步骤2中l-组氨酸更换为外消旋组氨酸，其他方法步骤与实施例1相同，在此不再赘述。
83.对本实施例中制备的第三混合溶液进行颜色的观察和吸光度值的测定，性能结果及实验数据和实施例1相同。
84.实施例4
85.本实施例中步骤1中第一混合溶液中，haucl4的浓度为1.5mm，相应的edta的浓度为12mm，以au计的aunps溶液的浓度为0.30g/l。
86.步骤4中，加水稀释后得到第三混合溶液，室温下静置，观察各个溶液的颜色和测定520nm处吸光度值。加水稀释后的第三混合溶液中aunps的终浓度均为43mg/l，auncs的终浓度均为141mg/l，ag
+
的终浓度均为10μm；其他方法步骤与实施例1相同，在此不再赘述。
87.对本实施例中制备的第三混合溶液进行颜色的观察和吸光度值的测定，性能结果及实验数据和实施例1相同。
88.实施例5
89.本实施例中步骤2中第一混合溶液中，第二混合溶液中haucl4和组氨酸摩尔浓度比为1：50；第二混合溶液中haucl4的浓度为7mm，组氨酸浓度为0.35m。以au计的auncs的浓度为0.60g/l。
90.步骤4中，加水稀释后得到第三混合溶液，室温下静置，观察各个溶液的颜色和测定520nm处吸光度值。加水稀释后的第三混合溶液中aunps的终浓度均为43mg/l，auncs的终浓度均为141mg/l，ag
+
的终浓度均为10μm；其他方法步骤与实施例1相同，在此不再赘述。
91.对本实施例中制备的第三混合溶液进行颜色的观察和吸光度值的测定，性能结果及实验数据和实施例1相同。
92.实施例6
93.本实施例提供的一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，步骤1-步骤3与实施例1相同，在步骤4中将待测半胱氨酸(100μm)溶液加水稀释20倍后，加入agno3溶液，然后加入至aunps-auncs混合溶液中，得到第三混合溶液，室温下静置，观察溶液的颜色和测定520nm处吸光度值。第三混合溶液中aunps的终浓度均为43mg/l，auncs的终浓度均为141mg/l，ag
+
的终浓度均为10μm。
94.测定得到第三混合溶液中在520nm处吸光度值为0.881，与实施例1中的标准曲线比对，得到第三混合溶液中的半胱氨酸浓度为4.98μm，进而得到待测半胱氨酸溶液为99.6μm，定量检测准确率达到99.6％。
95.实验例1
96.ag
+
诱导aunps-auncs混合溶液聚集。
97.分别制备下述五种溶液：aunps溶液、auncs溶液、aunps+ag
+
溶液、aunps-auncs溶液、aunps-auncs+ag
+
溶液，在室温下静置1小时后，测定五种溶液的uv-vis吸收光谱。
98.以au计的aunps的浓度为43mg/l，以au计的auncs的浓度为141mg/l；
99.aunps+ag
+
混合溶液中以au计的aunps的终浓度为43mg/l，ag
+
的终浓度为10μm。
100.aunps-auncs+ag
+
混合溶液中以au计的aunps的终浓度为43mg/l，以au计的auncs的终浓度为141mg/l，ag
+
的终浓度为10μm。
101.图5a为不同溶液与aunps相互作用的紫外-可见吸收图谱；图5b自左至右，溶液分别为aunps溶液、aunps+ag
+
溶液、aunps+auncs+ag
+
溶液、aunps+auncs溶液、auncs溶液。
102.图5中可知，aunps溶液呈红色，其最大紫外-可见吸光曲线最大吸收峰位于520nm处。auncs溶液为无色，其最大紫外-可见吸光曲线最大吸收峰位于255nm处。二者混合得到的aunps-auncs溶液在520nm和255nm处有两个吸收峰，其吸光曲线基本相当于两个单独溶液吸光曲线的叠加，溶液颜色为红色，与单独的aunps溶液颜色一致。aunps溶液加入ag
+
后，溶液仍呈红色，最大吸收峰位于520nm，说明ag
+
不能使得aunps聚集。当aunps-auncs混合溶液和ag
+
溶液混合后，520处吸光度快速下降，650nm处出现吸收峰，溶液颜色变为蓝色。表明aunps-auncs混合溶液在ag
+
作用下发生聚集。
103.实验例2
104.aunps-auncs溶液体系对半胱氨酸检测的可行性。
105.配置三种溶液：
106.(1)乙二胺四乙酸四钠盐溶液(edta
·
4na)与haucl4溶液混合，在30℃下剧烈搅拌30分钟，然后以10000rpm离心5分钟，取上清液备用，即aunps溶液(溶液a)。
107.(2)l-组氨酸溶液与haucl4溶液混合，在室温下搅拌1小时，即得auncs溶液。
108.将以上两溶液混合，得到aunps-auncs混合溶液，再和agno3混合，得到溶液b。溶液b中含aunps浓度43mg/l，auncs浓度为141mg/l，ag
+
浓度为10μm。
109.(3)半胱氨酸溶液与agno3的混合溶液加入到aunps-auncs混合溶液中，室温下静置1小时，得到溶液c。溶液c中含aunps浓度43mg/l，auncs浓度为141mg/l，ag
+
浓度为10μm，半胱氨酸浓度为10μm。
110.分别对本发明实施例中溶液a、溶液b、溶液c分别作透射电子显微镜，如图4所示，从电镜图可以看出溶液a中aunps分散良好；溶液b中由于加入了ag
+
和auncs，使得aunps发生聚集；溶液c中aunps没有发生聚集，其原因是半胱氨酸中的巯基与ag
+
结合，阻断了ag
+
诱导的aunps聚集。
111.图6a为aunps溶液的tem图谱，图6b为aunps+auncs+ag
+
溶液的tem图谱，图6c为aunps+auncs+半胱氨酸(cys)+ag
+
溶液的tem图谱，图6d中自左至右溶液分别为aunps+auncs+ag
+
溶液、aunps+auncs+半胱氨酸(cys)+ag
+
溶液、aunps溶液。
112.对照例1
113.本对照例与实施例1的区别在于，步骤1中采用柠檬酸溶液和haucl4溶液混合，得到第一混合溶液，其他步骤和方法与实施例1相同，在此不再赘述。
114.得到的第三混合溶液，即aunps+auncs+半胱氨酸(cys)+ag
+
溶液的颜色依然为蓝色，不发生改变。
115.对照例2
116.本对照例与实施例1的区别在于，步骤2中采用牛血清白蛋白溶液和haucl4溶液混合，得到第二混合溶液，其他步骤和方法与实施例1相同，在此不再赘述。
117.得到的第三混合溶液，即aunps+auncs+半胱氨酸(cys)+ag
+
溶液的颜色依然为蓝色，不发生改变。
118.综上所述：本发明提供的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，该方法利用半胱氨酸具有巯基，可与ag
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结合的性质，可以实现半胱氨酸的定性或定量检测。
119.该方法创造性的提供了一种aunps-auncs混合溶液，edta还原氯金酸得到红色aunps溶液，组氨酸还原氯金酸得到的无色auncs溶液，两者单独溶液均不可在ag
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作用下变色，而两者混合溶液可以在ag
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作用下聚集变色呈蓝色。半胱氨酸加入后，与ag
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结合，阻止了aunps纳米颗粒的聚集变色，进而使混合溶液呈现颜色的改变，通过对颜色的观察可以对半胱氨酸做定性分析。而对一定范围内的半胱氨酸浓度，混合溶液中在520nm处的吸光度值呈现线性变化，通过对待测溶液测量该处的吸光度值进而与标准曲线进行比对，可以实现对待测半胱氨酸溶液进行定量分析。
120.该检测方法操作简单，只需将事先制备好的aunps溶液、auncs溶液、ag
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溶液与待测半胱氨酸样品混合，静置1小时，即可裸眼比色检查；如需精确测定含量，采用操作简单的uv-vis法即可完成定量检测。
121.以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：步骤1，将edta溶液和haucl4溶液混合，得到第一混合溶液，取上清液备用，得到金纳米颗粒溶液，即aunps溶液；步骤2，将组氨酸溶液和haucl4溶液混合，得到第二混合溶液，搅拌后得到金簇溶液，即auncs溶液；步骤3，将aunps溶液和auncs溶液混合，形成aunps-auncs混合溶液；步骤4，将含有ag
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的溶液中加入待测半胱氨酸溶液，然后加入至aunps-auncs混合溶液中，得到第三混合溶液，室温下静置，观察颜色和/或测定吸光度值。2.如权利要求1所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：步骤5，将步骤4中测试得到的吸光度值与吸光度值-半胱氨酸标准曲线比对，得到待测半胱氨酸溶液的浓度。3.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述步骤1的步骤具体为：将第一混合溶液在20-40℃下搅拌30min，然后离心分离，得到上清液备用。4.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述步骤2的步骤具体为：将第二混合溶液在室温下搅拌1-2h，得到金簇溶液；所述组氨酸为l-组氨酸、d-组氨酸或外消旋组氨酸或任意比例混合的l-和d-型组氨酸。5.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述步骤1中，第一混合溶液中haucl4和edta摩尔浓度比为1:7～1:10；第一混合溶液中haucl4的浓度为1～50mm，edta的浓度为7～500mm；优选地，步骤1中，以au计的aunps溶液的浓度为0.02～1.0g/l。6.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述步骤2中，第二混合溶液中haucl4和组氨酸摩尔浓度比为1:20～1:50；第二混合溶液中haucl4的浓度为1～50mm，组氨酸浓度为0.02～2.5m；优选地，所述步骤2中，以au计的auncs的浓度为0.01～1.0g/l。7.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述步骤4中，第三混合溶液中aunps的终浓度为43mg/l，auncs的终浓度为47～141mg/l；所述步骤4中，第三混合溶液中aunps和auncs的浓度比为1.2:1～0.4:1。8.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述步骤4中，第三混合溶液中ag
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的终浓度为10μm～1mm，半胱氨酸的终浓度为0～100μm。优选地，所述步骤4中，在形成第三混合溶液之前加水稀释，稀释后得到的第三混合溶液中ag
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的终浓度为10μm～1mm，半胱氨酸的终浓度为0～100μm。9.如权利要求8所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所
述第三混合溶液中，半胱氨酸的终浓度为2～6μm。10.如权利要求1或2所述的基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，其特征在于，所述吸光度值为采用紫外-可见吸收法测定的在520nm处的吸光度。

技术总结
本发明提供一种基于银离子和金纳米颗粒的半胱氨酸检测方法，包括以下步骤：步骤1，将EDTA溶液和HAuCl4溶液混合，得到第一混合溶液，取上清液备用，得到AuNPs溶液；步骤2，将组氨酸溶液和HAuCl4溶液混合，得到第二混合溶液，搅拌后得到AuNCs溶液；步骤3，将AuNPs溶液和AuNCs溶液混合，形成AuNPs-AuNCs混合溶液；步骤4，将含有Ag


技术研发人员：刘巍 柳雨彤 高一乔 上官璟芳 孙堂强
受保护的技术使用者：新乡医学院
技术研发日：2023.03.20
技术公布日：2023/7/12