一种防治出血性脑卒中的药物组合物及其应用

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种防治出血性脑卒中的药物组合物及其应用。


背景技术：

2.脑卒中俗称脑血管意外,是一种急性脑血管疾病，其包括缺血性和出血性两种亚型。
3.出血性脑卒中是一种发病急迫、因脑血管出血而导致的脑血液循环障碍的疾病。出血性脑卒中患者的脑血管出血主要诱因为脑内动脉狭窄、闭塞或破裂，临床上表现为一次性或永久性脑功能障碍的症状和体征。出血性脑卒中因其高发病率、致残率、致死率的特点，严重危害着全球人类的身体健康。目前，临床上针对这一危害严重的疾病，尚无特效治疗方法，亟待开发新型治疗手段。


技术实现要素：

4.本发明公开一种防治出血性脑卒中的药物组合物及其应用，解决了现有技术中对出血性脑卒中尚无特效方法，临床防治及治疗效果有限的技术问题。
5.为了解决上述问题，本发明采用下述技术方案：本发明的第一方面提供了一种防治出血性脑卒中的药物组合物。
6.本发明防治出血性脑卒中的药物组合物，由如下所示的化合物或其盐组成：丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠；丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~400∶100~400∶100~400∶50~200∶1~4。
7.优选的，丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~200∶100~200∶100~200∶50~100∶1~2。
8.优选的，所述的防治出血性脑卒中的药物组合物还由药学上可接受的辅料或者辅助性成分组成。
9.优选的，所述的防治出血性脑卒中的药物组合物，它是以丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠或其盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。
10.本发明的第二方面提供了一种防治出血性脑卒中的药物组合物的应用。
11.本发明中任一项技术方案所述的防治出血性脑卒中的药物组合物在制备防治出血性脑卒中药物中的应用。
12.本发明采用的技术方案能够达到以下有益效果：本发明防治出血性脑卒中的药物组合物，由如下所示的化合物或其盐组成：丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠，其中，丁硫胺酸亚砜胺可显著降低出血性脑卒中模型中组织的铜死亡，去铁酮可显著降低出血性脑卒中模型中组织的铁死亡，呋塞米
对出血性脑卒中模型具有显著的利尿效果，双硫仑为打孔蛋白gsdmd抑制剂，可抑制il-1β等damps（damage associated molecular patterns，损伤相关的分子模式）的释放，硝普钠可显著降低出血性脑卒中模型中血压，将丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠联合使用，可显著降低出血性脑卒中小鼠模型的死亡率、出血量、神经损伤以及炎性因子水平。
13.另一方面，本发明提供了该药物组合各组分的最优配比，发现在此配比下，其能更好的改善出血性脑卒中。具体的，丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~400∶100~400∶100~400∶50~200∶1~4，尤其优选的配比是：丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~200∶100~200∶100~200∶50~100∶1~2。
14.本发明药物组合物的应用能够为出血性脑卒中的治疗提供新的药物来源，具有潜在的重大经济效应和社会效益。以丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠为活性成分制备而成的制剂，具有作为出血性脑卒中防治药物的应用前景，按照国家创新药物审批办法开发研制，有望成为高效低毒防治出血性脑卒中的创新药物，产业化前景广阔。
15.即本发明防治出血性脑卒中的药物组合物及其应用，解决了现有技术中对出血性脑卒中尚无特效方法，临床防治及治疗效果有限的技术问题。
具体实施方式
16.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
17.实施例1本实施例对本发明药物组合物对出血性脑卒中模型的影响进行详细说明。
18.分组及给药：随机将c57bl/6小鼠分成9组，分别是假手术组、模型组、药物干预组1、药物干预组2、药物干预组3、药物干预组4、药物干预组5、药物干预组6和药物干预组7，每组10只。药物干预组1~药物干预组7进行药物组合灌胃干预（丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米和双硫仑）与尾静脉注射干预（硝普钠），每天一次，造模前一天开始给药。
19.造模及收样：腹腔注射3.5%戊巴比妥钠麻醉小鼠，并于俯卧位固定于立体定位仪上，俯卧位固定于立体定位仪，碘酒局部消毒并暴露颅骨钻孔，而后使用微量进样器注射0.3 μl的vii型胶原酶（0.35 u），滞留针滞留5分装后缓慢拔出针头，骨胶覆盖颅骨钻孔后缝合皮肤。假手术组以同样方法入针注射不含胶原酶的溶媒。
20.出血性脑卒中模型构建24小时后进行神经功能测定。采用zea-longa 评分标准对其神经功能进行评分。出血性脑卒中越严重神经功能损伤症状愈明显，神经功能评分愈高。
21.4分：小鼠出现意识障碍，不能自主行走。
22.3分：小鼠行走时身体向未损伤侧倾倒。
23.2分：小鼠身体向未损伤侧转圈，并成追尾状。
24.1分：小鼠未损伤侧前肢不能完全伸展。
25.脑出血量的测定：造模24 h后戊巴比妥钠麻醉，pbs心脏灌注后，马上取脑组织，切下小鼠出血侧大脑，生理盐水冲洗除去脑组织表面的血液，而后匀浆，取上清用血红蛋白检
测试剂盒检测血红蛋白含量，并用il-1β试剂盒检测脑组织炎性因子水平，在24小时内检测各组小鼠死亡率。
26.药物干预组1~药物干预组7所包括的药物组分及重量如下：药物干预组1：丁硫胺酸亚砜胺200 mg/kg、去铁酮125 mg/kg、呋塞米100 mg/kg、双硫仑50 mg/kg、硝普钠1 mg/kg；药物干预组2：丁硫胺酸亚砜胺100 mg/kg、去铁酮400 mg/kg、呋塞米300 mg/kg、双硫仑200 mg/kg、硝普钠4 mg/kg；药物干预组3：丁硫胺酸亚砜胺400 mg/kg、去铁酮100 mg/kg、呋塞米400 mg/kg、双硫仑100 mg/kg、硝普钠4 mg/kg；药物干预组4：丁硫胺酸亚砜胺400 mg/kg、去铁酮400 mg/kg、呋塞米100 mg/kg、双硫仑200 mg/kg、硝普钠2 mg/kg；药物干预组5：丁硫胺酸亚砜胺50 mg/kg、去铁酮400 mg/kg、呋塞米300 mg/kg、双硫仑200 mg/kg、硝普钠4 mg/kg；药物干预组6：丁硫胺酸亚砜胺400 mg/kg、去铁酮50 mg/kg、呋塞米400 mg/kg、双硫仑100 mg/kg、硝普钠4 mg/kg；药物干预组7：丁硫胺酸亚砜胺400 mg/kg、去铁酮400 mg/kg、呋塞米50 mg/kg、双硫仑200 mg/kg、硝普钠2 mg/kg。
27.表1 药物组合对出血性脑卒中模型死亡率的影响分组死亡率（%）假手术组0模型组40药物干预组10药物干预组210药物干预组310药物干预组410药物干预组520药物干预组620药物干预组720表1示出了药物组合物对出血性脑卒中模型死亡率的影响。从表1中的数据可知：药物干预组1~药物干预组7所使用的药物组合物可以显著降低出血性脑卒中的死亡率，尤其是药物干预组1所使用的药物组合物的效果最优。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
28.表2 药物组合对出血性脑卒中模型出血量的影响分组脑组织血红蛋白含量（μg/ml）假手术组232
±
32模型组980
±
81药物干预组1311
±
31药物干预组2370
±
33药物干预组3378
±
36
药物干预组4367
±
39药物干预组5454
±
38药物干预组6483
±
48药物干预组7421
±
40表2示出了药物组合物对出血性脑卒中模型出血量的影响。从表2中的数据可知：药物干预组1~药物干预组7所使用的药物组合物可以显著降低出血性脑卒中模型的出血量，尤其是药物干预组1所使用的药物组合物的效果最优。具体的，模型组的出血量增加了748 μg/ml，使用药物干预组1的组合物处理后降低了89 %。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
29.表3 药物组合对出血性脑卒中模型神经损伤的影响分组神经学评分（zea-longa评分）假手术组0模型组2.9
±
0.4药物干预组10.8
±
0.2药物干预组21.2
±
0.2药物干预组31.3
±
0.3药物干预组41.2
±
0.1药物干预组51.5
±
0.3药物干预组61.6
±
0.4药物干预组71.6
±
0.3表3示出了药物组合物对出血性脑卒中模型神经损伤的影响。从表3中的数据可知：药物干预组1~药物干预组7所使用的药物组合物可以降低出血性脑卒中的神经损伤，尤其是药物干预组1所使用的药物组合物的效果最优。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
30.表4 药物组合对出血性脑卒中模型血清炎性因子的影响分组血清il-1β水平（ng/ml）假手术组0.21
±
0.06模型组2.87
±
0.25药物干预组10.31
±
0.07药物干预组20.57
±
0.06药物干预组30.62
±
0.05药物干预组40.68
±
0.07药物干预组51.17
±
0.12药物干预组61.23
±
0.10药物干预组71.15
±
0.11表4示出了药物组合物对出血性脑卒中模型血清炎性因子的影响。从表4中的数据可知：药物干预组1~药物干预组7所使用的药物组合物可以降低出血性脑卒中模型脑组织炎性因子水平，尤其是药物干预组1所使用的药物组合物的效果最优。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
31.从以上数据，发现组合药物丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠可显著降低出血性脑卒中模型的死亡率、出血量、神经学损伤和炎性因子分泌，具有优良的防治出血性脑卒中的效果；上述数据还证实丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠的最优配比为：丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~400∶100~400∶100~400∶50~200∶1~4，尤其优选的配比是：丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~200∶100~200∶100~200∶50~100∶1~2。
32.实施例2本实施例对本发明药物组合物的药物毒性评价进行详细说明。
33.分组及给药：随机将c57bl/6小鼠分成3组，分别是假手术组、模型组、药物组合组1（丁硫胺酸亚砜胺200 mg/kg；去铁酮125 mg/kg；呋塞米100 mg/kg；双硫仑50 mg/kg；硝普钠1 mg/kg）和药物组合组2（丁硫胺酸亚砜胺200 mg/kg；去铁酮125 mg/kg；双硫仑50 mg/kg），每组10只。药物组合组1和药物组合组2进行药物组合灌胃干预（药物组合组1：丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米和双硫仑；药物组合组2：丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、双硫仑）与尾静脉注射干预（药物组合组1：硝普钠；药物组合组2：无），每天一次，造模前一天开始给药。
34.造模及收样：腹腔注射3.5%戊巴比妥钠麻醉小鼠，并于俯卧位固定于立体定位仪上，俯卧位固定于立体定位仪，碘酒局部消毒并暴露颅骨钻孔，而后使用微量进样器注射0.3 μl的vii型胶原酶（0.35 u），滞留针滞留5分装后缓慢拔出针头，骨胶覆盖颅骨钻孔后缝合皮肤。假手术组以同样方法入针注射不含胶原酶的溶媒。
35.出血性脑卒中模型构建24小时后进行神经功能测定。采用zea-longa 评分标准对其神经功能进行评分。出血性脑卒中越严重神经功能损伤症状愈明显，神经功能评分愈高。
36.4分：小鼠出现意识障碍，不能自主行走。
37.3分：小鼠行走时身体向未损伤侧倾倒。
38.2分：小鼠身体向未损伤侧转圈，并成追尾状。
39.1分：小鼠未损伤侧前肢不能完全伸展。
40.脑出血量的测定：造模24 h后戊巴比妥钠麻醉，pbs心脏灌注后，马上取脑组织，切下小鼠出血侧大脑，生理盐水冲洗除去脑组织表面的血液，而后匀浆，取上清用血红蛋白检测试剂盒检测血红蛋白含量，并用il-1β试剂盒检测脑组织炎性因子水平，在24小时内检测各组小鼠死亡率。
41.表5 药物组合组1和药物组合组2对出血性脑卒中模型死亡率的影响分组死亡率（%）假手术组0模型组40药物组合组10药物组合组210表5示出了药物组合组1和药物组合组2对出血性脑卒中模型死亡率的影响。从表5中的数据可知：药物组合组1和药物组合组2所使用的药物组合物可以显著降低出血性脑卒中的死亡率，尤其是药物组合组1所使用的药物组合物的效果更优。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
42.表6 药物组合组1和药物组合组2对出血性脑卒中模型出血量的影响
分组脑组织血红蛋白含量（μg/ml）假手术组232
±
32模型组980
±
81药物组合组1311
±
31药物组合组2458
±
42表6示出了药物组合组1和药物组合组2对出血性脑卒中模型出血量的影响。从表6中的数据可知：药物组合组1和药物组合组2所使用的药物组合物可以显著降低出血性脑卒中模型的出血量，尤其是药物干预组1所使用的药物组合物的效果最优。具体的，模型组的出血量增加了748 μg/ml，使用药物干预组1的组合物处理后降低了89 %。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
43.表7 药物组合组1和药物组合组2对出血性脑卒中模型神经损伤的影响分组神经学评分（zea-longa评分）假手术组0模型组2.9
±
0.4药物组合组10.8
±
0.2药物组合组21.2
±
0.2表7示出了药物组合物对出血性脑卒中模型神经损伤的影响。从表7中的数据可知：药物组合组1和药物组合组2所使用的药物组合物可以降低出血性脑卒中的神经损伤，尤其是药物干预组1所使用的药物组合物的效果最优。数值以均值
±
sed表示。n＝10，p《0.05 vs model。
44.从以上数据发现，相比于组合药物丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮和双硫仑，组合药物丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠可显著降低出血性脑卒中模型的死亡率、出血量和神经学损伤。具体的，双硫仑为打孔蛋白gsdmd抑制剂，出血性脑卒中过多使用具有脱靶效应，可能会产生毒副作用，而硝普钠为扩血管药物，呋塞米为利尿药物，其可促进螯合铜离子的丁硫胺酸亚砜胺、螯合铁离子的去铁酮速度排除体外发挥清除体内毒素的作用，因此硝普钠与呋塞米的联合使用可降低体内毒素，增加出血性脑卒中的存活率，减低脑出血量和神经损伤。
45.以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种防治出血性脑卒中的药物组合物，其特征在于，由如下所示的化合物或其盐组成：丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠；丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~400∶100~400∶100~400∶50~200∶1~4。2.根据权利要求1所述的防治出血性脑卒中的药物组合物，其特征在于，丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~200∶100~200∶100~200∶50~100∶1~2。3.根据权利要求1或2所述的防治出血性脑卒中的药物组合物，其特征在于，还由药学上可接受的辅料或者辅助性成分组成。4.根据权利要求3所述的防治出血性脑卒中的药物组合物，其特征在于，它是以丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠或其盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。5.权利要求1至4中任一项所述的防治出血性脑卒中的药物组合物在制备防治出血性脑卒中药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种防治出血性脑卒中的药物组合物及其应用，涉及医药技术领域，解决了现有技术中对出血性脑卒中尚无特效方法，临床防治及治疗效果有限的技术问题。本发明防治出血性脑卒中的药物组合物，由如下所示的化合物或其盐组成：丁硫胺酸亚砜胺、去铁酮、呋塞米、双硫仑和硝普钠；丁硫胺酸亚砜胺∶去铁酮∶呋塞米∶双硫仑∶硝普钠的重量比为100~400∶100~400∶100~400∶50~200∶1~4。本发明防治出血性脑卒中的药物组合物，可显著降低出血性脑卒中小鼠模型的死亡率、出血量、神经损伤以及炎性因子水平，能够为出血性脑卒中的治疗提供新的药物来源，具有潜在的重大经济效应和社会效益。具有潜在的重大经济效应和社会效益。


技术研发人员：何亚荣 曹钰
受保护的技术使用者：四川大学华西医院
技术研发日：2023.05.29
技术公布日：2023/7/12