α-氰基苯撑乙烯衍生物在检测人血清白蛋白中的用途

1.本发明具体涉及一种α-氰基苯撑乙烯衍生物及其制备方法和应用，包括所述α-氰基苯撑乙烯衍生物在制备比率荧光探针及人血清白蛋白（hsa）的现场可视化检测中的应用，属于生物检测技术领域。


背景技术：

2.人血清白蛋白（hsa）是一种与人体相关疾病密切相关的生物标志物。它是血浆中最丰富的蛋白质，对于维持人体的正常生理功能具有重要作用。hsa在血浆中的正常浓度范围为35-55 mg/ml，如果浓度过低，可能导致低蛋白血症，反映出人体营养不良，或者肝脏或肾脏功能受损等。hsa在尿液中的正常浓度不应超过30 mg/l，如果浓度过高，即为微量白蛋白尿，预示着糖尿病和高血压患者有心血管疾病和肾脏疾病的风险。
3.目前临床上常用的检测hsa的方法有比色溴甲酚绿（bcg）法和酶联免疫吸附测定法(elisa)。这两种方法都能够对hsa的检测给出可靠的结果。但是它们也存在一个共同的问题：从样品的预处理到测试再到数据分析，整个流程需要耗费较长的时间（例如elisa大约需要3 h），不利于现场快速检测。


技术实现要素：

4.本发明的主要目的在于提供一种α-氰基苯撑乙烯衍生物在检测人血清白蛋白中的用途，以克服现有技术中的不足。
5.为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：本发明的一个方面提供了一种α-氰基苯撑乙烯衍生物，其结构如式i所示，，其中，r1独立地选自c
1-4
烷基，r2为-o-c
3-12
烷基-y，x选自f、cl、br、i或cn，y选自吡啶鎓离子或铵离子。
6.在一个实施例中，r1选自甲基、乙基或正丙基。两个r1可以相同或不同。
7.在一个实施例中，所述铵离子可以包括三甲基铵离子、三乙基铵离子等，且不限于此。
8.本发明的另一个方面提供了一种制备所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的方法，其包括：
使式ii所示化合物与br(ch2)nbr反应，获得式iii所示化合物；使式iii所示化合物与式iv所示化合物反应，获得式v所示化合物；使式v所示化合物与有机碱反应，获得所述α-氰基苯撑乙烯衍生物；，其中的r1、r2、x与上文相同，此处不再赘述，n为3~12中的任一整数。
9.在一个实施例中，所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的制备方法包括如下步骤：s1、在保护性气氛中，将式ii所示化合物和氢化钠按2.0～10.0：1.0～2.5的质量比溶于超干极性有机溶剂（例如超干四氢呋喃）中，得到混合溶液1；s2、在常温搅拌条件下，将br(ch2)nbr分批加入所述混合溶液1，br(ch2)nbr与式ii所示化合物的质量比为1.0～2.5:1.0～1.5，得到混合溶液2；s3、使所述混合溶液2在70～105 ℃的温度条件下回流反应，并在反应结束后，从所获反应混合物中分离获得式iii所示化合物；s4、将式iii所示化合物和式iv所示化合物溶于极性有机溶剂中，并加入哌啶，使式iii所示化合物、式iv所示化合物和哌啶的质量比为3.0～10.0：1.0～6.0：1.0～5.0，室温下搅拌反应，在反应结束后，从所获反应混合物中分离获得式v所示化合物；s5、使式v所示化合物和过量的有机碱在50～150℃的温度条件下回流反应，并在反应结束后，从所获反应混合物中分离获得所述α-氰基苯撑乙烯衍生物。
10.较为优选的，步骤s1中式ii所示化合物和氢化钠的质量比为5.0～7.0：1.4～2.2。其中超干四氢呋喃的含水率在100ppm以下，优选在30ppm以下。
11.较为优选的，步骤s2中br(ch2)nbr与式ii所示化合物的质量比大于1:1但小于2.5:1。
12.较为优选的，步骤s3中是使所述混合溶液2在75～85 ℃的温度条件下进行所述的回流反应。
13.较为优选的，步骤s4中式iii所示化合物、式iv所示化合物和哌啶的质量比为5.0～6.0：3.8～4.6：1.7～3.5。
14.较为优选的，步骤s5中是使式v所示化合物和过量的有机碱在100～110 ℃的温度条件下进行所述的回流反应。
15.在一个实施例中，所述有机碱包括但不限于吡啶、三甲胺或三乙胺等。
16.在一个实施例中，所述极性有机溶剂包括但不限于甲醇或乙醇等。
17.在本发明中所述保护性气氛可以是氮气气氛、惰性气氛（如氩气气氛）或其混合气氛。
18.在一个实施例中，步骤s2具体可以包括：将br(ch2)nbr溶于超干thf中，并在常温搅拌条件下滴加到所述混合溶液1中，从而制得所述混合溶液2。
19.在一个实施例中，步骤s3具体可以包括：在反应结束后，将所获反应混合物用二氯甲烷/水体系萃取，之后干燥和减压蒸馏，得到粗产物，然后将粗产物进行硅胶柱层析，用石油醚和乙酸乙酯为淋洗剂，分离得到式iii所示化合物。
20.在一个实施例中，步骤s4具体可以包括：在反应结束后，对所获反应混合物进行过滤，并用冰乙醇清洗得到的固体，从而分离获得式v所示化合物。
21.在一个实施例中，步骤s5具体可以包括：将式v所示化合物溶于过量的有机碱中，得到混合溶液3，再使所述混合溶液3在100～110℃的温度条件下回流反应24～30h，并在反应结束后将所获反应混合物减压蒸馏，除去残留的有机碱，得到粗产物，然后用少量有机溶剂（例如二氯甲烷）将该粗产物溶解，之后滴加到大量乙醚中，使固体产物析出，进而分离得到目标产物，即所述α-氰基苯撑乙烯衍生物。
22.本发明的所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的发光波长在490～600 nm之间，其可以很好的克服现有苯撑乙烯衍生物存在的如下缺陷，例如：发光波长较短，荧光信号容易与生物体系的自体荧光相混合；发光强度较低，相应的检测限比较低。
23.同时，本发明的所述α-氰基苯撑乙烯衍生物为两亲性分子，其中r2为亲水性基团，苯并噻唑等为疏水结构单元，依靠疏水相互作用和分子间的π-π作用，使得所述α-氰基苯撑乙烯衍生物可在水中自组装形成胶束状的聚集体，该聚集体可在较长的波长处（550～750 nm）之间产生新的荧光峰。并且，该聚集体还与人血清白蛋白（hsa）有特异性的相互作用。具体而言，该聚集体在水相体系中与人血清白蛋白（hsa）接触时会解组装，使聚集体产生的荧光（峰值波长约630～670 nm）的强度减弱，同时使α-氰基苯撑乙烯衍生物单体的荧光（峰值波长约510～540 nm）的强度提高。通过检测这两种荧光信号的转变情况，即可实现对hsa的检测。
24.特别是，对于包含hsa和α-氰基苯撑乙烯衍生物的溶液来说，随着hsa浓度的增加，溶液的荧光会出现由红色到橙色到黄色，最终到绿色的可视化颜色变化。根据溶液的荧光颜色，便可以判断其中hsa的浓度范围，因此还可快速实现对于hsa的原位可视化检测。因此，利用所述α-氰基苯撑乙烯衍生物，可以设计出新型hsa比率荧光探针。
25.本发明还提供了所述α-氰基苯撑乙烯衍生物在制备荧光探针、人血清白蛋白检测试剂或人血清白蛋白可视化检测试剂盒中的用途。
26.由于所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的前述特性，利用其制备的荧光探针具有双荧光发射和高稳定性等优点。
27.本发明还提供了一种比率荧光探针，其包含所述α-氰基苯撑乙烯衍生物和/或所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的聚集体。所述探针可以用于检测人血清白蛋白，并具有高选择性和高灵敏度（约8.3 nmol/l）等优点。
28.本发明还提供了一种用于检测体液中人血清白蛋白的试剂，其包括所述α-氰基苯
撑乙烯衍生物或所述的比率荧光探针。
29.本发明还提供了一种体液人血清白蛋白检测试剂盒，其包括所述α-氰基苯撑乙烯衍生物或所述的比率荧光探针。
30.其中，所述体液包括但不限于血浆或尿液等。
31.利用所述用于检测体液中人血清白蛋白的试剂或试剂盒，可以实现对于血浆和尿液等样品中hsa的快速、准确地检测，特别是原位可视化检测，利于准确评估相关疾病的风险。
32.本发明还提供了一种人血清白蛋白检测方法，其包括：提供荧光探针水溶液，所述荧光探针水溶液包含所述比率荧光探针；将待检测样品与所述荧光探针水溶液混合，并通过观测所述荧光探针水溶液在与待检测样品混合前后的不同波长荧光的强度变化情况和/或荧光颜色变化情况，实现对待检测样品中人血清白蛋白的检测。该检测可以是定性或定量检测。
33.示例性的，举例来说，可以制备一系列不同浓度的hsa标准样品溶液和荧光探针水溶液，然后通过正交试验设计等方法，将不同hsa标准样品溶液与不同的荧光探针水溶液混合，并检测混合前后两种波长的荧光强度变化。这样可以确定该荧光探针能够检测的hsa浓度范围，并且建立hsa浓度与两种波长荧光强度变化的标准关系曲线。在检测待测样品时，根据测得的两种波长荧光强度变化和标准关系曲线，即可定量检测待测样品中的hsa含量。
34.其中，所述待测样品可以选自体液，例如血液、尿液、其他生物组织液或非天然来源的样品。
35.本发明还提供了一种人血清白蛋白的可视化检测方法，所述检测方法是非诊疗目的的，其包括：提供荧光探针水溶液，所述荧光探针水溶液包含所述比率荧光探针；将待检测样品与所述荧光探针水溶液混合，并至少通过观测所述荧光探针水溶液在与待检测样品混合前后的荧光颜色变化，实现对待检测样品中人血清白蛋白的检测。
36.相较于现有技术，本发明至少能产生如下有益效果：（1）本发明的所述α-氰基苯撑乙烯衍生物具有优异的光稳定性、ph稳定性和良好的水溶性，并具有发光波长较长和发光强度较高等优点，且能够在水溶液中进行自组装，表现出单体和聚集体两种形式的发光，即，能实现双荧光发射。
37.（2）本发明的所述α-氰基苯撑乙烯衍生物及其聚集体可以对hsa进行快速的比率荧光响应，且具有良好的选择性和优秀的抗干扰能力，可以用作hsa的比率荧光探针，在现场实现对hsa的原位可视化快速检测，具有响应速度快、灵敏度高、准确性好、操作简便等优势。
附图说明
38.图1是实施例1中一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）的1h nmr谱图；图2是实施例1中bcpx在不同浓度下的荧光发射光谱图；图3是实施例1中bcpx的ph值稳定性测试结果；图4是实施例1中bcpx的光稳定性测试结果；图5是实施例1中bcpx对于hsa的选择性识别能力的测试结果；
图6是实施例1中bcpx对于不同干扰物质的抗干扰能力的测试结果；图7是实施例1中bcpx在水溶液中对于不同浓度hsa的比率荧光响应光谱图；图8是实施例1中bcpx在水溶液中对于不同浓度hsa的荧光可视化传感照片；图9是实施例1中bcpx在血清中对于不同浓度hsa的原位可视化传感照片；图10是实施例1中bcpx在尿液中对于不同浓度hsa的原位可视化传感照片。
具体实施方式
39.下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案，以便本领域的技术人员更好理解和实施本发明的技术方案。本文中所揭示的特定功能细节不应解释为具有限制性，而是仅解释为权利要求书的基础且解释为用于教示所属领域的技术人员在事实上任何适当详细实施例中以不同方式采用本发明的代表性基础。另外，若非特别说明，则如下实施例所采用的原料、检测试剂、反应设备和检测设备均可以通过常规商业途径获得，所采用的检测方法等也是本领域习用的。
40.如下实施例中α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）可以通过如下合成路线制备：，其中r1相同或不同，并可选自c
1-4
烷基，优选自甲基、乙基或正丙基；r2为-o-c
3-12
烷基-y，x选自f、cl、br、i或cn，y可选自吡啶鎓离子或铵离子，例如三甲基铵离子、三乙基铵离子等，n为3~12中的任一整数。
41.实施例1本实施例的一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）的结构式如下：。
42.该bcpx的合成方法包括如下具体步骤：（1）在氮气保护下，将500 mg 4-(二乙基氨基) 水杨醛和140 mg nah (60%)溶解于80 ml超干thf中，得到混合溶液1，并在常温下搅拌。然后，将1.2 g 1,12-二溴十二烷溶于5 ml超干thf中，用干净的注射器将其滴加到上述混合溶液1中，常温搅拌，得到混合溶液2。将该混合溶液2在80 ℃回流反应3天。反应完成后，将反应混合物减压蒸馏进行浓缩。之
后使用二氯甲烷/水（体积比约1:1）萃取3次，收集有机相并加入适量无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏得到粗产物，将粗产物进行硅胶柱层析（用石油醚和乙酸乙酯为淋洗剂），得到式iii所示的中间产物1。
43.（2）取500 mg中间产物1，380 mg 2-溴苯并噻唑-2-乙腈溶解于30 ml乙醇中，加入1.5 ml哌啶，室温下搅拌过夜，对所获反应混合物进行过滤，用冰乙醇清洗得到的粗产物，然后将粗产物用乙醇重结晶两次，得到式v所示的中间产物2。
44.（3）取600 mg中间产物2溶解于30 ml吡啶中，得到混合溶液3，将该混合溶液3在100℃条件下回流过夜，所获反应混合物经减压蒸馏除去吡啶后，将粗产物用少量二氯甲烷溶解，并滴加到大量乙醚中沉降，该过程进行3次，再经离心分离后，得到目标产物bcpx，其1h nmr谱图如图1所示。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 9.07 吡啶 a位 (d, j = 5.6 hz, 2h), 8.60 吡啶g位(t, j = 7.7 hz, 1h), 8.44 α-氰基乙烯基(s,1h), 8.24苯并噻唑(d, j = 9.2 hz, 1h), 8.16 吡啶b位(t, j = 6.9 hz, 2h), 8.04 苯并噻唑(d, j = 7.9 hz, 1h), 7.92二乙胺基苯 (d, j = 8.0 hz, 1h), 7.50苯并噻唑 (t, j = 7.5 hz, 1h), 7.40 苯并噻唑 (t, j = 7.5 hz, 1h), 6.54二乙胺基苯 (d, j = 9.2 hz, 1h), 6.23二乙胺基苯 (s, 1h), 4.55 吡啶a位-ch2(t, j = 7.4 hz, 2h), 4.14苯醚a位-ch
2 (t, j = 5.4 hz, 2h), 3.50 胺基a位-ch
2 (q, j = 7.0 hz, 4h), 1.91
ꢀ‑ꢀ
1.73吡啶b位-ch
2 (m, 4h), 1.58
ꢀ‑ꢀ
1.44苯醚b位-ch
2 (m, 2h), 1.38 苯醚g位-ch
2 (s, 2h), 1.32
ꢀ‑ꢀ
1.03 剩余烷基区-ch
2 (m, 20h)。
45.将本实施例合成的bcpx溶于超纯水中形成不同浓度的bcpx水溶液，通过观察期荧光光谱，可以发现随着浓度的提升，bcpx可能会在水中自组装，从而出现荧光光谱峰的红移。请参阅图2示出了cmc以上（50.0μmol/l）和cmc以下（10.0μmol/l）的bcpx的归一化荧光发射光谱图。
46.将本实施例合成的bcpx溶于超纯水中形成浓度约50.0μmol/l的bcpx水溶液，通过添加盐酸、烧碱等方式调整溶液的ph值，以测试bcpx在不同ph值下的稳定性，结果如图3所示。同时，将浓度约50.0μmol/l的bcpx水溶液在可见光下放置不同时间，以测试bcpx的光稳定性，结果如图4所示。
47.非常令人惊喜的是，本实施例合成的bcpx及其聚集体对hsa有快速的比率荧光响应，为测试这种效应是否具有特异性，本实施例中配置了浓度约50.0μmol/l的hsa水溶液，同时配置了一系列干扰物质的水溶液，这些干扰物质水溶液的浓度也均为约50.0μmol/l。这些干扰物质分别为谷胱甘肽（glutathione）、l-丝氨酸（l-cysteine）、l-赖氨酸（l-lysine）、dl-丝氨酸（dl-serine）、l-谷氨酸（l-glutamic acid）、葡萄糖（glucose）、抗坏血酸（ascorbic acid）、溶菌酶（lysozyme）、脂肪酶（lipase），γ-球蛋白（γ-globulin），钠离子（na
+
），钾离子（k
+
）， 钙离子（ca
2+
），碳酸根（co
32
−
），硫酸根（so
42
−ꢀ
）等。再分别向这些hsa水溶液和干扰物质水溶液中添加bcpx，至其浓度为约50.0μmol/l，然后分别对其荧光光谱进行测试，结果如图5所示，证明bcpx对于hsa具有很好的选择性。另外向hsa水溶液分别添加不同干扰物质，再分别添加bcpx，然后分别对其荧光光谱进行测试，结果如图6所示，证明bcpx在用于检测hsa时，对于不同干扰物质均有很好的抗干扰能力。
48.将本实施例合成的bcpx溶于超纯水中，得到浓度约400.0 mmol/l的bcpx水溶液。另行配置一系列不同浓度的hsa标准溶液，其浓度分别为0g/l、0.2g/l、0.3g/l、0.7g/l、
1.0g/l、1.7g/l、3.3g/l、5.0g/l、6.7g/l、13.3g/l、26.6g/l、53.2 g/l。将该一系列hsa标准溶液分别加入该bcpx水溶液中，并加入超纯水，至形成的各混合溶液中的bcpx终浓度为50.0 mmol/l，反应2 min 后进行荧光发射光谱测试，并记录其荧光光谱和荧光照片，如图7-图8所示。可以看到，利用本实施例的bcpx作为比率荧光探针，可以实现对于hsa的可视化检测。
49.再以人血清做基质，并加入本实施例的bcpx和hsa，控制bcpx的终浓度为50.0 mmol/l，hsa的终浓度分别为0g/l、0.2g/l、0.3g/l、0.7g/l、1.0g/l、1.7g/l、3.3g/l、5.0g/l、6.7g/l、13.3g/l、26.6g/l、53.2 g/l，观察加入有不同浓度hsa的人血清样品的荧光照片（如图9所示），可以看到，利用本实施例的bcpx作为比率荧光探针，可以实现对于人血清中hsa的原位可视化检测。
50.另外以尿液做基质，并加入本实施例的bcpx和hsa，控制bcpx的终浓度为50.0 mmol/l，hsa的终浓度分别为0 g/l、0.2 g/l、0.3 g/l、0.7 g/l、1.0 g/l、1.7 g/l、3.3 g/l、5.0 g/l、6.7 g/l，观察加入有不同浓度hsa的尿液样品的荧光照片（如图10所示），可以看到，利用本实施例的bcpx作为比率荧光探针，可以实现对于尿液中hsa的原位可视化检测。
51.由图7-图10可知，无论是在水中，还是血清、尿液中，本实施例的bcpx作为比率荧光探针均表现出与hsa浓度相关的荧光变化，即，由红色到橙色到黄色，最终到绿色的明显的颜色梯度变化，显示了其对于hsa很好的选择性、抗干扰性和分辨力。
52.实施例2本实施例的一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）的结构式如下：。
53.该bcpx的合成方法包括如下具体步骤：（1）在氮气保护下，将500毫克4-(二乙基氨基)水杨醛和140毫克60% nah溶解于80毫升超干thf中，得到混合溶液1，并在常温下搅拌。然后，将890毫克1,5-二溴戊烷溶解于5毫升超干thf中，用干净的注射器将其滴加到上述混合溶液1中，常温搅拌，得到混合溶液2。将该混合溶液2在80℃回流反应2天。反应完成后，将反应混合物减压蒸馏进行浓缩。之后使用二氯甲烷/水（体积比约1:5）萃取3次，收集有机相并加入适量无水硫酸镁进行干燥，最后进行减压蒸馏得到粗产物，将粗产物进行硅胶柱层析（用石油醚和乙酸乙酯为淋洗剂）得到式iii所示的中间产物1。
54.（2）取600毫克中间产物1和460毫克2-碘苯并噻唑-2-乙腈溶解于40毫升乙醇中，并加入1.8毫升哌啶，室温下搅拌过夜，对所获反应混合物进行过滤，用冰乙醇清洗得到的粗产物，然后将粗产物用乙醇重结晶两次，得到式v所示的中间产物2。
55.（3）取500毫克中间产物2溶解于30毫升三乙胺中，得到混合溶液3，将该混合溶液3
在100℃条件下回流过夜，所获反应混合物经减压蒸馏除去三乙胺后，将粗产物用少量二氯甲烷溶解，并滴加在大量乙醚中沉降，该过程进行3次，再经离心分离后，得到目标产物bcpx。
56.参照实施例1的方法对本实施例合成的bcpx的各项性能进行测试，结果显示，本实施例的bcpx也能作为比率荧光探针，实现对水、血清、尿液中的hsa的原位可视化检测，且对hsa也体现出优秀的选择性、抗干扰性和分辨力。
57.实施例3本实施例的一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）的结构如式i所示，其中r1=甲基，r2为-o-十二烷基-吡啶鎓离子，x=cl。该bcpx的合成方法包括如下具体步骤：（1）在氮气保护下，将700毫克4-(二甲基氨基)水杨醛和220毫克nah (60%)溶解在盛装于圆底瓶中的90毫升超干thf内，得到混合溶液1，并在常温下搅拌。然后，将1200毫克1,12-二溴十二烷溶解于5毫升超干thf中，再用干净的注射器将其滴加到上述混合溶液1中，常温搅拌，得到混合溶液2。将该混合溶液2在80℃回流反应2天。反应完成后，将反应混合物减压蒸馏进行浓缩。之后使用二氯甲烷/水萃取3次，收集有机相并加入适量无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏得到粗产物。将粗产物进行硅胶柱层析（用石油醚和乙酸乙酯为淋洗剂）得到中间产物1。
58.（2）取500毫克中间产物1，450毫克2-氯苯并噻唑-2-乙腈溶解于30毫升乙醇中，加入1.5毫升哌啶，室温下搅拌过夜。对所获反应混合物进行过滤，用冰乙醇清洗得到的粗产物，然后将粗产物用乙醇重结晶两次，得到式v所示的中间产物2。
59.（3）取600毫克中间产物2溶解于30毫升吡啶中，得到混合溶液3，将该混合溶液3在100℃条件下回流过夜，所获反应混合物经减压蒸馏除去吡啶后，将粗产物用少量二氯甲烷溶解，并滴加在大量乙醚中沉降，该过程进行3次，再经离心分离后，得到目标产物bcpx。
60.参照实施例1的方法对本实施例合成的bcpx的各项性能进行测试，结果显示，本实施例的bcpx也能作为比率荧光探针，实现对水、血清、尿液中的hsa的原位可视化检测，且对hsa也体现出优秀的选择性、抗干扰性和分辨力。
61.实施例4本实施例的一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）的结构如式i所示，其中r1=甲基，r2为-o-丙烷基-三甲基铵离子，x=br。该bcpx的合成方法包括如下具体步骤：（1）在氮气保护下，将700毫克4-(二甲基氨基)水杨醛和220毫克60% nah溶解于120毫升超干thf中，得到混合溶液1，并在常温下搅拌。然后，将1.3克1,3-二溴丙烷溶解于8毫升超干thf中，用干净的注射器将其滴加到上述混合溶液1中，常温搅拌，得到混合溶液2。将该混合溶液2在85℃回流反应2天。反应完成后，将反应混合物减压蒸馏进行浓缩。之后使用二氯甲烷/水（体积比约1:3）萃取3次，收集有机相并加入适量无水硫酸镁进行干燥，最后进行减压蒸馏得到粗产物，将粗产物进行硅胶柱层析（用石油醚和乙酸乙酯为淋洗剂）得到式iii所示的中间产物1。
62.（2）取600毫克中间产物1和460毫克2-溴苯并噻唑-2-乙腈溶解于40毫升乙醇中，并加入1.8毫升哌啶，室温下搅拌过夜，对所获反应混合物进行过滤，用冰乙醇清洗得到的粗产物，然后将粗产物用乙醇重结晶两次，得到式v所示的中间产物2。
63.（3）取500毫克中间产物2溶解于40毫升三甲胺中，得到混合溶液3，将该混合溶液3
在110℃条件下回流30h，所获反应混合物经减压蒸馏除去三甲胺后，将粗产物用少量二氯甲烷溶解，并滴加在大量乙醚中沉降，该过程进行3次，再经离心分离后，得到目标产物bcpx。
64.参照实施例1的方法对本实施例合成的bcpx的各项性能进行测试，结果显示，本实施例的bcpx也能作为比率荧光探针，实现对水、血清、尿液中的hsa的原位可视化检测，且对hsa也体现出优秀的选择性、抗干扰性和分辨力。
65.实施例5本实施例的一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）与实施例3相同，其合成方法也与实施例3基本相同，区别在于：步骤（1）中4-(二甲基氨基)水杨醛和nah的质量比约为5:1。混合溶液2是在75℃回流反应约3天。
66.步骤（2）中中间产物1、2-氯苯并噻唑-2-乙腈、哌啶的质量比约为6：3.8：1.7。
67.步骤（3）中混合溶液3是在110℃条件下回流约24h。
68.本实施例中bcpx的产率比实施例3高约3%。
69.实施例6本实施例的一种α-氰基苯撑乙烯衍生物（bcpx）与实施例3相同，其合成方法也与实施例3基本相同，区别在于：步骤（1）中4-(二甲基氨基)水杨醛和nah的质量比约为2.3:1。
70.步骤（2）中中间产物1、2-氯苯并噻唑-2-乙腈、哌啶的质量比约为1.4：1.2：1。
71.本实施例中bcpx的产率与实施例3接近。
72.本发明的各方面、实施例、特征及实例应视为在所有方面为说明性的且不打算限制本发明，本发明的范围仅由权利要求书界定。在不背离所主张的本发明的精神及范围的情况下，所属领域的技术人员将明了其它实施例、修改及使用。
73.此外，本案发明人还参照前述实施例，以本说明书述及的其它原料、工艺操作、工艺条件进行了试验，并均获得了较为理想的结果。
74.尽管已参考说明性实施例描述了本发明，但所属领域的技术人员将理解，在不背离本发明的精神及范围的情况下可做出各种其它改变、省略及/ 或添加且可用实质等效物替代所述实施例的元件。另外，可在不背离本发明的范围的情况下做出许多修改以使特定情形或材料适应本发明的教示。因此，本文并不打算将本发明限制于用于执行本发明的所揭示特定实施例，而是打算使本发明将包含归属于所附权利要求书的范围内的所有实施例。

技术特征：
1.一种α-氰基苯撑乙烯衍生物在制备人血清白蛋白检测试剂中的用途，其特征在于：所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的结构如式i所示，，其中，r1独立地选自c
1-4
烷基，r2为-o-c
3-12
烷基-y，x选自f、cl、br、i或cn，y选自吡啶鎓离子、三甲基铵离子或三乙基铵离子。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：r1选自甲基、乙基或正丙基。3.如权利要求1-2中任一项所述的用途，其特征在于，所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的制备方法包括：使式ii所示化合物与br(ch2)
n
br反应，获得式iii所示化合物；使式iii所示化合物与式iv所示化合物反应，获得式v所示化合物；使式v所示化合物与有机碱反应，获得所述α-氰基苯撑乙烯衍生物，所述有机碱选自吡啶、三甲胺或三乙胺；，其中，n为3~12中的任一整数。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的制备方法具体包括：s1、在保护性气氛中，将式ii所示化合物和氢化钠按2.0～10.0：1.0～2.5的质量比溶于超干四氢呋喃中，得到混合溶液1；s2、在常温搅拌条件下，将br(ch2)
n
br分批加入所述混合溶液1，br(ch2)
n
br与式ii所示化合物的质量比为1.0～2.5:1.0～1.5，得到混合溶液2；
s3、使所述混合溶液2在70～105 ℃的温度条件下回流反应，并在反应结束后，从所获反应混合物中分离获得式iii所示化合物；s4、将式iii所示化合物和式iv所示化合物溶于极性有机溶剂中，并加入哌啶，使式iii所示化合物、式iv所示化合物和哌啶的质量比为3.0～10.0：1.0～6.0：1.0～5.0，室温下搅拌反应，在反应结束后，从所获反应混合物中分离获得式v所示化合物；s5、使式v所示化合物和过量的有机碱在50～150℃的温度条件下回流反应，并在反应结束后，从所获反应混合物中分离获得所述α-氰基苯撑乙烯衍生物。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述超干四氢呋喃的含水率在100ppm以下。6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述极性有机溶剂包括甲醇或乙醇。7.一种α-氰基苯撑乙烯衍生物在制备人血清白蛋白可视化检测试剂盒中的用途，其特征在于：所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的结构如式i所示，，其中，r1独立地选自c
1-4
烷基，r2为-o-c
3-12
烷基-y，x选自f、cl、br、i或cn，y选自吡啶鎓离子、三甲基铵离子或三乙基铵离子。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：r1选自甲基、乙基或正丙基。9.一种人血清白蛋白的可视化检测方法，所述检测方法是非诊疗目的的，其特征在于，所述检测方法包括：提供荧光探针水溶液，所述荧光探针水溶液包含α-氰基苯撑乙烯衍生物和水；将待检测样品与所述荧光探针水溶液混合，并至少通过观测所述荧光探针水溶液在与待检测样品混合前后的荧光颜色变化，实现对待检测样品中人血清白蛋白的检测；其中，所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的结构如式i所示，，其中，r1独立地选自c
1-4
烷基，r2为-o-c
3-12
烷基-y，x选自f、cl、br、i或cn，y选自吡啶鎓离子、三甲基铵离子或三乙基铵离子。10.根据权利要求9所述的人血清白蛋白的可视化检测方法，其特征在于：r1选自甲基、乙基或正丙基。

技术总结
本发明提供了一种α-氰基苯撑乙烯衍生物在检测人血清白蛋白中的用途。所述α-氰基苯撑乙烯衍生物的结构式如下：其中，R1选自C


技术研发人员：苏敏 宋波 周亚峰 张卫国 黄煜伦
受保护的技术使用者：苏州市独墅湖医院（苏州大学附属独墅湖医院）
技术研发日：2023.06.12
技术公布日：2023/7/18