一种保护较高ALV阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法与流程

一种保护较高alv阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法
技术领域
1.本发明涉及家禽养殖技术领域，特别是涉及一种保护较高alv阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法。


背景技术：

2.鸡禽白血病是由禽白血病病毒(alv)和禽肉瘤病毒(asv)引起的多种肿瘤疾病的总称。在自然界中，只有鸡才能感染禽白血病。不同品种或品系的鸡对病毒感染和肿瘤发生的抗性有很大差异。母鸡的易感性高于公鸡，主要发生在18周龄以上，死亡率为5％～6％。alv可进行垂直和水平传播，会造成致瘤、免疫下降、生产性能下降等。因此，较高alv阳性率可以导致群体有效量降低，近交系数增加，会造成地方鸡保种群遗传多样性丢失。
3.我国有117个地方鸡品种，这些地方鸡品种是经过成百上千年的自然选择和人工选择形成的，每个地方鸡品种代表着当地的人文地理特色，是我国珍稀的地方鸡种质资源。随着国家对种质资源的越来越重视，越来越多的地方鸡品种被纳入基因库、保种场进行保护，随着第三次资源普查的进行，将会有新发现的鸡禽资源列入保护名录，禽白血病在地方鸡品种的流行，给我国地方鸡种质资源保护带来严重的威胁，业界认为当鸡群禽白血病阳性率＞30％没有净化的必要，然而我国地方鸡保种采用的是小群保种方法，集群数量少，且各基因库、保种场的资金、技术力量有限，如果阳性率出现较高的水平，怎样保证地方鸡保种群群体遗传性状不丢失，是本领域研究人员亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种保护较高alv阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法，以解决上述现有技术存在的问题，经过4个世代的自繁，即可实现将禽白血病病毒的阳性率由为30～60％，降为6％以下，从而能够最大限度地保留地方鸡保种群群体遗传多样。
5.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
6.本发明提供一种保护较高alv阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法，包括以下步骤：
7.(1)剔除待净化群体中不产蛋，以及老弱病残的个体，得到f0世代育种群；
8.(2)所述f0世代育种群经过四个世代的自繁，获得f3世代；
9.在步骤(2)中，所述自繁采用输混精的方式进行，即选取alv阴性的公鸡，获得混精，之后利用所述混精分别对alv阴性母鸡和alv阳性母鸡进行输精；
10.所述待净化群体的alv阳性率为30～60％。
11.进一步地，在步骤(2)中，所述alv阴性母鸡和所述alv阳性母鸡生产的种蛋分开孵化。
12.进一步地，在步骤(2)中，所述自繁得到的alv阴性雏鸡和alv阳性雏鸡分开饲养，
并接种alv疫苗。
13.本发明公开了以下技术效果：
14.本发明研究发现，alv直接影响地方鸡保种群个体的产蛋率、死亡率、受精率和孵化率，但直接淘汰其中的阳性个体，会降低群体有效含量，并提高近交增量，不利于鸡群保种。本发明提供方法，经过4个世代的自繁，即可实现将alv的阳性率由30～60％，降为6％以下，从而能够最大限度地保留地方鸡保种群群体遗传多样。
具体实施方式
15.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
16.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
17.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
18.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
19.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
20.以下实施例中，alv病毒的p27抗原检测采用elisa试剂盒进行。
21.alv病毒的pcr检测：针对env基因设计并合成一对通用引物，用于扩增alv囊膜蛋白env基因约2.6kb片段(上游引物5
′‑
cgagagtggctcgcgagatgg-3
′
；下游引物5
′‑
acactacatttccccctccctat-3
′
)。以病毒基因cdna为模板进行pcr扩增alv囊膜蛋白env基因，片段大小约2.6kb。阴性对照为df-1细胞dna，阳性对照为alv-jnx0101株(山东农业大学催治中团队馈赠)。反应条件为：96℃预变性7min；95℃变性50s，58℃退火50s，72℃延伸2min，32个循环，72℃延伸7min。
22.实施例1
23.一、材料和方法
24.1.试验群体
25.某地方品种群体a、b和c，总群体均为500只。
26.2.方法
27.2.1分别对待净化种群进行随机抽检，抽检量为群体20％，进行血液病毒p27抗原检测，评估种群alv阳性率。
28.2.2根据步骤2.1的各群体的检测结果，选择抽样检测阳性率分别为30％、40％和50％的群体，分别对净化群体公母鸡数量进行净化前后群体有效含量和近交系数增量(净化后指的是淘汰alv阳性鸡)统计，结果见表1，计算公式为：
29.1/ne＝1/4ns+1/4nd；
30.ne＝4ns
×
nd/(ns+nd)；
31.af＝1/2ne＝1/8ns+1/8nd。
32.ne：代表群体有效含量；ns：代表公畜数量；
33.nd：代表母畜数量；af：代表近交速率，亦即每代近交系数增量。
34.表1不同阳性率群体净化前后的ne和af
35.项目neaf净化前3200.16％阳性率30％群体净化后2240.22％阳性率40％群体净化后1920.26％阳性率50％群体净化后1600.31％
36.由表2可知，阳性率越高，群体有效含量越低，近交增量越高。而在实际饲养情况下，一般地方鸡核心群为30个家系，每个家系10只母鸡，当群体阳性率较高时，容易造成母鸡群体数量不够。
37.实施例2
38.1.试验群体
39.某地方品种群体d，总群体400只，其中公鸡80，母鸡320只。
40.2.方法
41.2.1对该地方鸡群体进行alv血液病毒p27抗原检测，计算种群alv阳性率。计算净化前后群体有效含量，确定alv阳性鸡的淘汰方式及自繁方法，进行世代间净化。
42.2.2采用世代间净化方法，确保群体遗产多样性
43.2.2.1净化时间节点：f0世代扩繁，f1-f3世代自繁留种前280天进行血液病毒p27抗原检测。
44.2.2.2净化：对alv检测阳性率为30～60％的群体，剔除不产蛋、老弱病残的个体，对待净化群个体进行编号，并与个体笼号一一对应。对每个笼的个体进行翅静脉采血，进行alv病毒p27抗原检测。
45.2.2.3自繁方法的确立：待净化群个体，不进行组建家系自繁，采取输混精的方式进行自繁，获得f0代。具体方法是，选取血液病毒分离p27抗原与pcr检测共同阴性的公鸡，分别对阴性母鸡和阳性母鸡输精繁殖。获得的种蛋做好标记，分别存放孵化。
46.2.2.4切断净化群水平传播途径的方法
47.(1)种蛋的孵化及出雏。
48.优先对阴性母鸡的种蛋进行孵化。阳性母鸡的种蛋需单独孵化箱孵化，人工控制阳性母鸡的种蛋的孵化时间比阴性母鸡种蛋晚1-2天。
49.(2)育雏期饲养管理。
50.a)阴性鸡与阳性鸡分开饲养；阴性鸡后代正常饲养，阳性鸡要求单笼专人饲养，笼与笼之间用塑料板隔开。
51.b)免疫。疫苗免疫阳性鸡用单独注射器免疫，每只鸡更换针头。
52.c)消毒。每周一、三、五定期对鸡群进行带鸡消毒。
53.d)所有购买的疫苗使用前要进行alv检测，阴性方可使用。
54.f)饲养人员进入阳性鸡舍工作后要做好器具、衣服、鞋等消毒。
55.f1、f2、f3世代重复上述工作，经4个世代的繁殖。
56.3.结果
57.3.1抽检样品检测结果显示群体c的alv阳性率为60％。
58.3.2按照2.2的方法，经4个世代净化，avl阳性率下降到5.3％，同时保证了群体的遗传多样性。
59.综上所述，如果将初始群体c的阳性公、母鸡全部淘汰，将会造成群体有效含量的降低(淘汰前后群体有效含量分别为256和102.4)，可能造成群体遗传多样性的丢失，且会造成近交几率的增加。利用本发明的方法进行avl净化，经4个世代净化阳性率即可降低至5.8％，此方法能够最大限度地保留地方鸡的遗传多样。
60.以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

技术特征：
1.一种保护较高alv阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)剔除待净化群体中不产蛋，以及老弱病残的个体，得到f0世代育种群；(2)所述f0世代育种群经过四个世代的自繁，获得f3世代；在步骤(2)中，所述自繁采用输混精的方式进行，即选取alv阴性的公鸡，获得混精，之后利用所述混精分别对alv阴性母鸡和alv阳性母鸡进行输精；所述待净化群体的alv阳性率为30～60％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述alv阴性母鸡和所述alv阳性母鸡生产的种蛋分开孵化。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述自繁得到的alv阴性雏鸡和alv阳性雏鸡分开饲养。

技术总结
本发明公开了一种保护较高ALV阳性率的地方鸡保种群群体遗传多样性的方法，涉及家禽养殖技术领域。所述方法包括以下步骤：(1)剔除待净化群体中不产蛋，以及老弱病残的个体，得到F0世代育种群；(2)所述F0世代育种群经过四个世代的自繁，获得F3世代；在步骤(2)中，所述自繁采用输混精的方式进行，即选取ALV阴性的公鸡，获得混精，之后利用所述混精分别对ALV阴性母鸡和ALV阳性母鸡进行输精。本发明提供的方法，经过4个世代的自繁，即可实现将禽白血病病毒的阳性率由为30～60％，降为6％以下，从而能够最大限度地保留地方鸡保种群群体遗传多样。够最大限度地保留地方鸡保种群群体遗传多样。


技术研发人员：张会永 韩威 李国辉 殷建玫 薛倩 周成浩 蒋一秀 朱云芬 俞燕
受保护的技术使用者：江苏省家禽科学研究所
技术研发日：2023.05.25
技术公布日：2023/7/21