一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物及其制备方法与应用

1.本发明属于有机化合物合成与医药应用技术领域，具体涉及一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物及其制备方法与应用。


背景技术：

2.艾滋病(acquired immune deficiency syndrome，aids)是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，hiv)引起的危害人类生命健康的重大传染性疾病。hiv病毒主要分为两个亚型，分别为hiv-1型和hiv-2型，其中hiv-1是引起全球艾滋病流行的主要亚型，而hiv-2主要在非洲等地流行。当前，临床应用的治疗艾滋病的药物依据作用靶标的不同，主要分为：侵入抑制剂、逆转录酶抑制剂、整合酶抑制剂以及蛋白酶抑制剂四类。为了减少病毒耐药性影响，提高治疗效力，将两种或两种以上抑制剂联合使用来治疗艾滋病，这种疗法被称为“高效抗逆转录病毒疗法”(highly active antiretroviral therapy，haart)。尽管haart在很大程度上延长了患者的生存时间，改善了患者的生活质量，但是耐药问题、药物毒副作用、潜伏感染以及长期服用药物的高额费用等问题大大降低了该疗法的功效，限制了该疗法的应用，进而迫使研究者研发新靶点、新机制、新结构的抗艾滋病药物。
3.hiv-1衣壳蛋白(capsid，ca)是组成一个感染性的成熟病毒颗粒所必需的结构蛋白，是由gag前体蛋白的一部分剪切得到衣壳蛋白单元以后组装形成的。hiv ca内部包裹有对病毒复制至关重要的遗传物质和关键酶。hiv-1ca在病毒复制的早期(脱壳、逆转录、入核、整合)和晚期(装配、成熟)阶段中均发挥着关键的调控作用。研究表明，若ca圆锥形晶格外壳的形成过程受到干扰，则新生的hiv-1颗粒丧失感染能力。ca的正常组装及结构稳定性对病毒的感染力至关重要，因此ca可以作为抗hiv-1药物研究的新靶标。
4.pfizer公司通过化合物库的高通量筛选并进一步优化后得到了新型hiv-1抑制剂pf74，构效关系和机制研究表明这类化合物通过结合hiv-1衣壳蛋白，进而干扰病毒的脱壳和形成感染颗粒的过程。尽管pf74结构新颖、机制独特、靶点明确，但是，pf74相对于目前已上市的抗hiv-1药物疗效较低，类药性质较差而且极易诱发耐药性。吉利德公司通过多轮优化获得了lenacapavir，成为首个上市的hiv-1衣壳抑制剂。
5.本发明根据pf74和lenacapavir与hiv-1衣壳蛋白结合位点的晶体结构特征，通过合理药物设计、化学合成、生物活性评价发现了全新结构的含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类hiv-1衣壳蛋白抑制剂，有望缓解现有hiv-1衣壳蛋白抑制剂类药性质差和耐药性问题。
6.

技术实现要素：

7.针对现有技术的不足，本发明提供了一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物及其制备方法，本发明还提供上述化合物作为hiv-1衣壳蛋白抑制剂的活性筛选结果及其应用。
8.本发明的技术方案如下：
9.1.一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物
10.一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物，或其药学上可接受的盐，具有通式i所示的结构：
[0011][0012]
其中，
[0013]
r1为c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、h、oh、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基或三氟甲氧基。
[0014]
r2为c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、h、oh、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基或三氟甲氧基。
[0015]
r3为c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、h、oh、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、或以下基团：
[0016][0017]
w为：氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、oh或以下基团：
[0018][0019]
其中，w1为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基。
[0020]
w2为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基。
[0021]
w3为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯
基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基。
[0022]
w4为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基。
[0023]
根据本发明优选的，
[0024]
r1为h、甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、环丙基磺酰基。
[0025]
r2为h、甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、环丙基磺酰基。
[0026]
r3为以下基团：
[0027][0028]
w为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基或以下基团：
[0029][0030]
其中，w1为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基；
[0031]
w2为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基；
[0032]
w3为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基；
[0033]
w4为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基。
[0034]
根据本发明进一步优选的，含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物是下列化合物之一：
[0035]
[0036]
[0037]
[0038]
[0039][0040]
本发明中所述的“药学上可接受的盐”是指在可靠的医药评价范围内，化合物的盐类适于与人或较低等动物的组织相接触而无不适当的毒性、刺激及过敏反应等，具有相当合理的收益与风险比例，通常是水或油可溶的或可分散的，并可有效地用于其预期的用途。包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐，在这里是可做预期的用途并与式i化合物的化学性质相容的。适宜的盐的列表参见s.m.birge等，j.pharm.sci.,1977,66,1-19页。
[0041]
2.一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物的制备方法
[0042]
含有4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物的制备方法如下：
[0043][0044]
试剂与条件：(i)水合肼，乙醇，室温；(ii)cf3ch2otf，碳酸铯，dmf，0℃至室温；(iii)不同取代的磺酰氯，4-二甲氨基吡啶，三乙胺，二氯甲烷，0℃；(iv)锌粉，氯化铵，四氢呋喃，水，室温；(v)boc-3,5-二氟-l-苯丙氨酸，亚磷酸二苯酯，不同取代的邻氨基苯甲酸，吡啶，75℃；(vi)三氟乙酸，二氯甲烷，0℃至室温；(vii)不同取代的乙酸，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，n,n-二异丙基乙胺，二氯甲烷，0℃至室温；(viii)不同取代的苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯，四(三苯基膦)钯，磷酸钾，甲苯，水，95℃；(iv)碳酸钾，n,n二甲基甲酰胺，水，75℃。
[0045]
根据本发明优选的，含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物的制备方法，具体步骤如下：
[0046]
(1)将2,6-二氯-3-硝基苯肼加入到茄形瓶中，用无水乙醇溶解，缓慢滴加50％水合肼，室温搅拌约3小时，期间有大量红色固体析出，tlc监测反应；反应结束后，向反应瓶中加入水，搅拌1小时后，过滤，滤饼用少量冷乙醇、正己烷：体积比1:1丙酮和水洗涤，干燥后得到中间体a-2。
[0047]
(2)冰浴下，将中间体a-2加入到茄形瓶中，用n,n-二甲基甲酰胺溶解，接着缓慢加入碳酸铯，加毕，缓慢滴加2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯，完毕后，撤去冰浴，室温反应约8小时，使用tlc监测反应；反应结束后，向反应瓶中缓慢滴加冰水，搅拌8小时后，过滤，滤饼用少量正己烷和水洗涤，干燥，得到中间体a-3。
[0048]
(3)冰浴下，将中间体a-3加入到茄形瓶中，用二氯甲烷溶解，接着依次加入三乙胺和4-二甲氨基吡啶，加毕，缓慢滴加不同取代的磺酰氯，冰浴反应约1小时使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入饱和氯化钠溶液，搅拌15分钟后转移到分液漏斗中，将下层有机相分离后，用二氯甲烷萃取水相，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物用甲醇重结晶，得到中间体a-4。
[0049]
(4)将氯化铵和锌粉加入茄形瓶中，加入水和thf，搅拌15分钟，用四氢呋喃溶解中间体4，缓慢滴入反应瓶中，室温反应约24小时，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入水和乙酸乙酯，搅拌15分钟后，过滤，滤液转移到分液漏斗中，将上层有机相分离后，弃去水相，有机相重新转移到分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液，分离有机相，再用乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体a-5。
[0050]
(5)将中间体a-5、n-boc-l-3,5-二氟苯丙氨酸、不同取代的邻氨基苯甲酸和亚磷
酸二苯酯加入茄形瓶中，加入吡啶，75℃反应约24小时，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入乙酸乙酯和0.5m柠檬酸溶液，搅拌15分钟后转移到分液漏斗中，将有机相分离后，弃去水相，有机相重新转移到分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液，分离有机相，再用乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物用200-300目硅胶进行快速柱色谱分离，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体a-6/id-1。
[0051]
(6)在冰浴下，将中间体a-6/id-1加入到茄形瓶中，加入二氯甲烷溶解，随后缓慢滴加三氟乙酸，加毕，转入室温反应，搅拌约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分溶剂，向反应瓶中加入二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液将溶液调节至中性，将混合溶液转移到分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液洗涤，将有机相分离后，再用二氯甲烷萃取水相，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体a-7/id-2。
[0052]
(7)冰浴下，将不同取代的乙酸和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯加入到茄形瓶中，加入二氯甲烷，冰浴搅拌30分钟，再加入中间体a-7/id-2和diea，加毕，撤去冰浴，室温反应约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用二氯甲烷萃取水相，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200-300目硅胶进行快速柱色谱分离，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物ia-1/ia-3/ib-1a/ic-1a/id-3(a-d)。
[0053]
(8)将目标化合物ib-1a/ic-1a、不同取代的苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯、磷酸钾、四(三苯基膦)钯(0)加入到双颈瓶中，加入甲苯和水，置换氮气后，升温至95℃，氮气保护下回流反应约12小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分有机溶剂，残留物用乙酸乙酯复溶，转移至分液漏斗中，加入饱和氯化钠溶液萃取，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200-300目硅胶进行快速柱色谱分离，所得产品用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物ib-1(b-d)/ic-1(b-k)。
[0054]
(9)将目标化合物ia-1/ib-1(a-d)/ic-1(a-k)和碳酸钾加入到茄形瓶中，加入dmf和水，升温至75℃，回流反应约6小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯和饱和氯化钠溶液萃取，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200-300目硅胶进行快速柱色谱分离，所得产品用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物ia-2/ib-2(b-d)/ic-2(b-k)。
[0055]
3.一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物的应用
[0056]
本发明公开了一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物的抗hiv-1活性筛选结果及其作为hiv-1抑制剂的首次应用。通过实验证明本发明的含有4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物可作为hiv-1抑制剂用于制备抗艾滋病药物。本发明还提供上述化合物在制备抗hiv-1药物中的应用。
[0057]
目标化合物的抗hiv-1活性和毒性实验
[0058]
对按照上述方法合成的一种含有4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物进行了细胞水平的抗hiv-1活性和毒性测试，它们的抗hiv-1活性数据列于表1中，以文献报道的hiv-1衣壳抑制剂化合物pf74为阳性对照。
[0059]
本发明新合成的含有4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物呈现出显著的抗hiv-1活性。例如，目标化合物ic-2i的ec
50
为0.65nm，具有进一步研究的价值，可作为抗hiv-1先导化合物加以利用。
[0060]
本发明的一种4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物可作为hiv-1抑制剂应用。具体地说，作为hiv-1抑制剂用于制备抗艾滋病药物。
[0061]
一种抗hiv-1药物组合物，包括本发明的一种含有4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
[0062]
本发明提供了一种4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物及其制备方法，本发明还提供了部分化合物抗hiv-1活性筛选结果及其在抗病毒领域中的首次应用。经过试验证明，本发明的一种4-喹唑啉酮的苯丙氨酸衍生物可作为hiv-1抑制剂应用并具有很高的应用价值。具体地说，作为hiv-1抑制剂用于制备抗艾滋病药物。
附图说明
[0063]
图1代表化合物在人血浆代谢实验结果(n＝3)。
具体实施方式
[0064]
通过下述实施例有助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容，所述百分比数均为质量百分比。
[0065]
实施例1：ia-1的制备
[0066][0067]
(1)将2,6-二氯-3-硝基苯肼(10.00g，46.08mmol，1eq)加入到茄形瓶中，用400ml无水乙醇溶解，缓慢滴加50％水合肼(13.84g，138.25mmol，3eq)，室温搅拌约3小时，期间有大量红色固体析出，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入300ml水，搅拌1小时后，过滤，滤饼用少量冷乙醇、正己烷：丙酮(1:1)和水洗涤，干燥后得到中间体4-chloro-7-nitro-1h-indazol-3-amine(a-2)8.46g，红色固体，产率86％。ms:m/z212.90(m+h)
+
.c7h5cln4o2[212.01].
[0068]
(2)冰浴下，将中间体a-2(8.40g，39.51mmol，1eq)加入到茄形瓶中，用80ml n,n-二甲基甲酰胺溶解，接着缓慢加入碳酸铯(25.75g，79.02mmol，2eq)，加毕，缓慢滴加2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(10.09g，43.46mmol，1.1eq)，完毕后，撤去冰浴，室温反应约8小时，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中缓慢滴加冰水240ml，搅拌8小时后，过滤，滤饼用少量正己烷和水洗涤，干燥，得到中间体4-chloro-7-nitro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-3-amine(a-3)8.83g，深红色固体，产率96％。ms:m/z318.18(m+na)
+
.c9h6clf3n4o2[294.62].
[0069]
(3)冰浴下，将中间体a-3(8.80g，29.87mmol，1eq)加入到茄形瓶中，用200ml二氯
甲烷溶解，接着依次加入三乙胺(45.34g，448.04mmol，15eq)和4-二甲氨基吡啶(0.73g，5.97mmol，0.2eq)，加毕，缓慢滴加乙基磺酰氯(23.04g，179.21mmol，6eq)，冰浴反应约1小时使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入饱和氯化钠溶液200ml，搅拌15分钟后转移到分液漏斗中，将下层有机相分离后，用总共400ml二氯甲烷萃取水相2次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物用甲醇重结晶，得到中间体n-(4-chloro-7-nitro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-3-yl)-n-(ethylsulfonyl)ethanesulfonamide(a-4)12.18g，淡黄色固体，产率85％。ms:m/z 478.62(m+h)
+
.c
13h14
clf3n4o6s2[478.00].
[0070]
(4)将氯化铵(13.40g，250.60mmol，10eq)和锌粉(16.38g，250.60mmol，10eq)加入茄形瓶中，加入240ml水和120ml thf，搅拌15分钟，用240ml四氢呋喃溶解中间体a-4(12.00g，25.06mmol，1eq)，缓慢滴入反应瓶中，室温反应约24小时，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入120ml水和240ml乙酸乙酯，搅拌15分钟后，过滤，滤液转移到分液漏斗中，将上层有机相分离后，弃去水相，有机相重新转移到分液漏斗中，加入240ml饱和氯化钠溶液，分离有机相，再用总共400ml乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体n-(7-amino-4-chloro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-3-yl)-n-(ethylsulfonyl)ethanesulfonamide(a-5)10.23g，土黄色固体，产率91％。ms:m/z 470.70(m+na)
+
.c
13h16
clf3n4o4s2[448.03].
[0071]
(5)将中间体a-5(8.00g，17.82mmol，1eq)、n-boc-l-3,5-二氟苯丙氨酸(5.37g，17.82mmol，1eq)、2-氨基-4-溴苯甲酸(3.85g，17.82mmol，1eq)和亚磷酸二苯酯(16.70g，71.29mmol，4eq)加入茄形瓶中，加入80ml吡啶，75℃反应约24小时，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入200ml乙酸乙酯和300ml 0.5m柠檬酸溶液，搅拌15分钟后转移到分液漏斗中，将有机相分离后，弃去水相，有机相重新转移到分液漏斗中，加入240ml饱和氯化钠溶液，分离有机相，再用总共400ml乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚＝1:8)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体tert-butyl(s)-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)carbamate(a-6)4.25g，白色固体，产率26％。ms:m/z 912.15(m+h)
+
,934.54(m+na)
+
.c
34h33
brclf5n6o7s2[910.06].
[0072]
(6)在冰浴下，将中间体a-6(4.00g，4.39mmol，1eq)加入到茄形瓶中，加入30ml二氯甲烷溶解，随后缓慢滴加三氟乙酸(2.50g，21.93mmol，5eq)，加毕，转入室温反应，搅拌约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分溶剂，向反应瓶中加入20ml二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液将溶液调节至中性，将混合溶液转移到分液漏斗中，加入20ml饱和氯化钠溶液洗涤，将有机相分离后，再用总共40ml二氯甲烷萃取水相2次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体(s)-n-(7-(2-(1-amino-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-7-bromo-4-oxoquinazolin-3(4h)-yl)-4-chloro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-3-yl)-n-(ethylsulfonyl)ethanesulfonamide(a-7)3.40g，白色固体，产率96％。ms:m/z 812.61
(m+h)
+
,834.45(m+na)
+
.c
29h25
brclf5n6o5s2[810.01].
[0073]
(7)在冰浴下，将哌嗪-2-酮(1.00g，10.00mmol，1eq)加入到茄形瓶，加入30ml二氯甲烷溶解，缓慢加入三乙胺(2.02g，20.01mmol，2eq)，将中间体b-1(2.66g，12.00mmol，1.2eq)溶解于10ml二氯甲烷中，缓慢滴加进反应瓶中，加毕，转入室温反应，搅拌约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，有大量白色固体析出，减压过滤，用少量二氯甲烷和水洗涤滤饼，干燥后得到中间体4-((4-nitrophenyl)sulfonyl)piperazin-2-one(b-2)2.73g，白色固体，产率96％。ms:m/z 285.81(m+h)
+
.c
10h14
n3o5s[285.04].
[0074]
(8)在冰浴下，将b-2(2.70g，9.46mmol，1eq)加入到茄形瓶，加入30ml四氢呋喃溶解，缓慢加入氢化钠(0.68g，28.39mmol，3eq)，冰浴搅拌30min，缓慢滴加溴乙酸甲酯(1.74g，11.36mmol，1.2eq)，加毕，转入室温反应，搅拌约2小时，期间有大量灰绿色固体析出，使用tlc监测反应。反应结束后，减压过滤，用少量乙酸乙酯和水洗涤滤饼，干燥后得到中间体methyl 2-(4-((4-nitrophenyl)sulfonyl)-2-oxopiperazin-1-yl)acetate(b-3)3.16g，白色固体，产率93％。ms:m/z 357.83(m+h)
+
,379.94(m+na)
+
.c
13h15
n3o7s[357.06].
[0075]
(9)b-3(2.00g，5.60mmol，1eq)加入到茄形瓶，加入20ml四氢呋喃和20ml水溶解，缓慢加入氢氧化锂(0.40g，16.79mmol，3eq)，室温搅拌约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分有机溶剂，用1m盐酸调节ph至2-3，析出大量白色固体后，减压过滤，用少量水洗涤滤饼，干燥后得到中间体2-(4-((4-nitrophenyl)sulfonyl)-2-oxopiperazin-1-yl)acetic acid(b-4)1.77g，白色固体，产率92％。ms:m/z 343.98(m+h)
+
,366.01(m+na)
+
.c
13h15
n3o7s[343.31].
[0076]
(10)冰浴下，将b-4(101.5mg，295.6μmol，1.2eq)和hatu(140.5mg，369.5μmol，1.5eq)加入到茄形瓶中，加入15ml二氯甲烷，冰浴搅拌30分钟，再加入a-7(200.0mg，246.3μmol，1eq)和diea(63.7mg，492.6μmol，2eq)，加毕，撤去冰浴，室温反应约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入20ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共60ml二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:4:5)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(4-((4-nitrophenyl)sulfonyl)-2-oxopiperazin-1-yl)acetamide(ia-1)0.1974g，白色固体，产率70％，熔点：147
–
150℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.71(d,j＝8.2hz,1h),8.44(d,j＝8.5hz,2h),8.09(dd,j＝8.6,4.0hz,3h),8.02(d,j＝1.9hz,1h),7.84(dd,j＝8.3,2.0hz,2h),7.71(d,j＝8.0hz,1h),7.00(tt,j＝9.5,2.3hz,1h),6.61(d,j＝6.9hz,2h),5.11(dq,j＝17.3,8.8hz,1h),4.57(td,j＝9.0,3.7hz,1h),4.39(dt,j＝16.6,8.3hz,1h),3.81(ttd,j＝28.4,14.3,7.3hz,6h),3.69
–
3.56(m,2h),3.44(d,j＝16.5hz,1h),3.29(dd,j＝13.4,6.5hz,2h),3.25
–
3.14(m,2h),2.97(dd,j＝14.1,10.0hz,1h),1.37(dt,j＝15.1,7.4hz,6h,ch3×
2).hrms found m/z 1136.0560[m+h]
+
,calculated for c
41h36
brclf5n9o
11
s3,[m+h]
+
:1136.0561.
[0077]
实施例2：ia-2的制备
[0078][0079]
将ia-1(100.00mg，87.93μmol，1eq)和碳酸钾(36.46mg，263.78μmol，3eq)加入到茄形瓶中，加入10ml dmf和1ml水，升温至75℃，回流反应约6小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯和30ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共60ml乙酸乙酯萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:4:5)，所得产品用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(4-((4-nitrophenyl)sulfonyl)-2-oxopiperazin-1-yl)acetamide(ia-2)0.0628g，白色固体，产率68％，熔点：146
–
149℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.06(s,1h),8.75(d,j＝8.4hz,1h),8.44
–
8.41(m,2h),8.09(d,j＝8.5hz,1h),8.08
–
8.05(m,2h),8.00(d,j＝1.9hz,1h),7.83(dd,j＝8.4,1.9hz,1h),7.74(d,j＝8.0hz,1h),7.55(d,j＝8.0hz,1h),6.99(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.63
–
6.58(m,2h),4.90(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),4.56
–
4.51(m,1h),4.22(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.83(d,j＝16.5hz,1h),3.66
–
3.57(m,2h),3.51(d,j＝16.5hz,1h),3.35(td,j＝12.7,11.2,7.3hz,3h),3.26(q,j＝6.1hz,2h),3.09(ddt,j＝33.6,11.7,5.4hz,2h),2.94(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 1144.0632[m+h]
+
,calculated for c
39h32
brclf5n9o9s3,[m+h]
+
:1144.0629.
[0080]
实施例3：ia-3的制备
[0081][0082]
(1)将锌粉(1.83g，27.98mmol，10eq)加入到茄形瓶中，加入10ml四氢呋喃,5ml水溶解使之悬浮，再加入1m盐酸调节ph至1-2，用5ml四氢呋喃溶解b-3(1.00g，2.80mmol，1eq)，并滴加入到反应瓶中，升温至75℃，回流反应约24小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分有机溶剂，用1m氢氧化钠溶液调节ph至有大量黄色固体析出，减压过滤，用少量水洗涤滤饼，干燥后得到中间体2-(4-((4-aminophenyl)sulfonyl)-2-oxopiperazin-1-yl)acetic acid(c-1)0.2386g，黄色固体，产率27％。ms:m/z 313.92(m+h)
+
,336.09(m+na)
+
,351.93(m+k)
+
.c
12h13
n3o7s[313.07].
[0083]
(2)冰浴下，将c-1(46.3mg，147.78μmol，1.2eq)和hatu(70.2mg，184.7μmol，1.5eq)加入到茄形瓶中，加入15ml二氯甲烷，冰浴搅拌30分钟，再加入a-7(100.0mg，123.15μmol，1eq)和diea(31.83mg，246.30μmol，2eq)，加毕，撤去冰浴，室温反应约2小时，使用tlc
监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入20ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共60ml二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:4:5)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-2-(4-((4-aminophenyl)sulfonyl)-2-oxopiperazin-1-yl)-n-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)acetamide(ia-3)0.0457g，白色固体，产率34％，熔点：188
–
191℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.61(d,j＝8.4hz,1h),8.08(d,j＝8.5hz,1h),8.02(d,j＝1.9hz,1h),7.86
–
7.80(m,2h),7.68(d,j＝8.0hz,1h),7.40(d,j＝8.7hz,2h),6.98(tt,j＝9.3,2.3hz,1h),6.68(d,j＝8.6hz,2h),6.63
–
6.58(m,2h),6.16(s,2h),5.12(dq,j＝17.2,8.7hz,1h),4.64(td,j＝9.0,4.0hz,1h),4.40(dq,j＝16.7,8.4hz,1h),3.92
–
3.69(m,6h),3.65
–
3.58(m,2h),3.14(dtt,j＝16.5,9.0,3.7hz,3h),3.01
–
2.91(m,3h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.35(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1106.0823[m+h]
+
,calculated for c
41h38
brclf5n9o9s3,[m+h]
+
:1106.0819.
[0084]
实施例4：ib-1a的制备
[0085][0086]
冰浴下，将3-三氟甲基-5-甲基-1-吡唑乙酸(307.6mg，1.48mmol，1.2eq)和hatu(702.4mg，1.85mmol，1.5eq)加入到茄形瓶中，加入30ml二氯甲烷，冰浴搅拌30分钟，再加入a-7(1.00g，1.23mmol，1eq)和diea(318.3mg，2.46mmol，2eq)，加毕，撤去冰浴，室温反应约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入30ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共90ml二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:6:5)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(5-methyl-3-(trifluoromethyl)-1h-pyrazol-1-yl)acetamide(ib-1a)0.9742g，白色固体，产率79％，熔点：97
–
99℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝8.0hz,1h),8.10(d,j＝8.5hz,1h),8.01(d,j＝1.9hz,1h),7.86(d,j＝7.9hz,1h),7.85(d,j＝8.5hz,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.02(tt,j＝9.3,2.3hz,1h),6.63
–
6.58(m,2h),6.44(s,1h),4.90(dq,j＝17.1,8.6hz,1h),4.72
–
4.56(m,2h),4.53(ddd,j＝10.0,8.0,3.7hz,1h),4.39(dq,j＝16.8,8.5hz,1h),3.90
–
3.67(m,4h),3.35(dd,j＝14.3,3.7hz,1h),3.00(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.05(s,3h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.32(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1001.0549[m+h]
+
,calculated for c
36h30
brclf8n8o6s2,[m+
h]
+
:1001.0547.
[0087]
实施例4：ib-1b至ib-1d的制备
[0088][0089]
将ib-1a(200mg，1eq)、3-氟-4-氰基苯硼酸频哪醇酯(59.17mg，1.2eq)、磷酸钾(127.09mg，3eq)、四(三苯基膦)钯(0)(46.12mg，0.2eq)加入到双颈瓶中，加入10ml甲苯和2ml水，置换氮气后，升温至95℃，氮气保护下回流反应约12小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分有机溶剂，残留物用20ml乙酸乙酯复溶，转移至分液漏斗中，加入20ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共60ml乙酸乙酯萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:6:5)，所得产品用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-7-(4-cyano-3-fluorophenyl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(5-methyl-3-(trifluoromethyl)-1h-pyrazol-1-yl)acetamide(ib-1b)141.6mg，白色固体，产率68％，熔点：124
–
128℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝8.0hz,1h),8.29(d,j＝8.3hz,1h),8.19(d,j＝1.8hz,1h),8.15
–
8.14(m,1h),8.13(d,j＝7.7hz,1h),8.08(dd,j＝8.4,1.9hz,1h),7.96(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.84(d,j＝8.0hz,1h),7.71(d,j＝8.2hz,1h),7.03(tt,j＝9.4,2.3hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),6.44(s,1h),4.93(dq,j＝17.0,8.5hz,1h),4.65(d,j＝16.7hz,1h),4.61(ddd,j＝9.8,8.1,3.8hz,1h),4.55(d,j＝16.7hz,1h),4.42(dq,j＝16.7,8.4hz,1h),3.90
–
3.68(m,4h),3.41(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.04(dd,j＝14.2,9.9hz,1h),2.03(s,3h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.31(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1042.1615[m+h]
+
,calculated for c
34h26
brclf8n8o4s,[m+h]
+
:1042.1613.
[0090][0091]
操作同上，所不同的是使用2,6-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯甲腈。
2-(5-methyl-3-(trifluoromethyl)-1h-pyrazol-1-yl)acetamide(ib-2a)0.0744g，白色固体，产率82％，熔点：95
–
97℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.04(s,1h),9.15(d,j＝8.3hz,1h),8.11(d,j＝8.5hz,1h),8.01(d,j＝1.5hz,1h),7.84(dd,j＝8.5,1.6hz,1h),7.78(d,j＝8.0hz,1h),7.58(d,j＝7.9hz,1h),7.00(tt,j＝9.3,2.4hz,1h),6.61(h,j＝4.6hz,2h),6.40(s,1h),4.77
–
4.64(m,3h),4.52(ddd,j＝10.0,8.3,3.5hz,1h),4.23(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.37
–
3.33(m,1h),3.32(d,j＝7.5hz,2h),2.99(dd,j＝14.2,10.2hz,1h),2.02(s,3h),1.32(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 909.0613[m+h]
+
,calculated for c
34h26
brclf8n8o4s,[m+h]
+
:909.0615.
[0099][0100]
操作同上，所不同的是使用ib-1b。
[0101]
白色固体，产率62％，熔点：93
–
96℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.05(s,1h),9.13(d,j＝8.4hz,1h),8.31(d,j＝8.2hz,1h),8.18(d,j＝1.8hz,1h),8.15
–
8.13(m,1h),8.12(d,j＝7.3hz,1h),8.08(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.95(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.57(d,j＝7.9hz,1h),7.00(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.67
–
6.61(m,2h),6.40(s,1h),4.77(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.66(s,2h),4.60(ddd,j＝10.2,8.4,3.6hz,1h),4.28(dq,j＝16.9,8.9hz,1h),3.40(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.36
–
3.31(m,2h),3.03(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.01(s,3h),1.32(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 950.1682[m+h]
+
,calculated for c
41h29
clf9n9o4s,[m+h]
+
:950.1681.
[0102][0103]
操作同上，所不同的是使用ib-1c。
[0104]
白色固体，产率76％，熔点：100
–
103℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.05(s,1h),9.11(d,j＝8.4hz,1h),8.31(d,j＝8.3hz,1h),8.22(d,j＝1.9hz,1h),8.10(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),8.07(d,j＝9.3hz,2h),7.76(d,j＝7.9hz,1h),7.57(d,j＝8.0hz,1h),7.00(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.62(m,2h),6.40(s,1h),4.78(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.65(s,2h),4.61(ddd,j＝10.1,8.3,3.7hz,1h),4.27(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.34(td,j＝7.2,1.9hz,2h),3.03(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.01(s,3h),1.32(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 968.1585[m+h]
+
,calculated for c
41h28
clf
10
n9o4s,[m+h]
+
:968.1587.
[0105][0106]
操作同上，所不同的是使用ib-1d。
[0107]
白色固体，产率84％，熔点：168
–
172℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.06(s,1h),9.16(d,j＝8.4hz,1h),8.41(d,j＝8.7hz,2h),8.33(d,j＝8.2hz,1h),8.18(d,j＝8.7hz,3h),8.08(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.78(d,j＝7.9hz,1h),7.59(d,j＝7.9hz,1h),7.01(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),6.40(s,1h),4.77(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.73
–
4.64(m,2h),4.60(ddd,j＝10.1,8.4,3.6hz,1h),4.29(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.40(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.33(q,j＝7.4hz,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.2hz,1h),2.02(s,3h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms foundm/z 952.1677[m+h]
+
,calculated for c
40h30
clf8n9o6s,[m+h]
+
:952.1673.
[0108]
实施例6：ic-1a的制备
[0109][0110]
冰浴下，将(3-三氟甲基-5,6-二氢-4h-环戊基-吡唑-1-基)-乙酸(0.97g，4.14mmol，1.2eq)和hatu(1.97g，5.17mmol，1.5eq)加入到茄形瓶中，加入30ml二氯甲烷，冰浴搅拌30分钟，再加入a-7(2.80g，3.45mmol，1eq)和diea(0.89g，6.90mmol，2eq)，加毕，撤去冰浴，室温反应约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入30ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共90ml二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:6:5)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(3-(trifluoromethyl)-5,6-dihydrocyclopenta[c]pyrazol-1(4h)-yl)acetamide(ic-1a)2.71g，白色固体，产率76％，熔点：121
–
123℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝8.0hz,1h),8.10(d,j＝8.5hz,1h),8.01(d,j＝1.9hz,1h),7.87(d,j＝8.0hz,1h),7.85(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.63
–
6.57(m,2h),4.98(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.58
–
4.44(m,3h),4.40(dq,j＝16.8,8.5hz,1h),3.82(dddt,j＝63.4,28.8,14.3,7.3hz,4h),3.36(dd,j＝14.3,3.6hz,1h),3.00(dd,j＝14.3,10.1hz,1h),2.57(t,j
＝6.7hz,2h),2.48
–
2.37(m,4h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1027.0706[m+h]
+
,calculated for c
38h32
brclf8n8o6s2,[m+h]
+
:1027.0703.
[0111]
实施例7：ic-1b至ic-1k的制备
[0112][0113]
将ic-1a(200mg，1eq)、苯硼酸频哪醇酯(47.64mg，1.2eq)、磷酸钾(123.87mg，3eq)、四(三苯基膦)钯(0)(44.96mg，0.2eq)加入到双颈瓶中，加入10ml甲苯和2ml水，置换氮气后，升温至95℃，氮气保护下回流反应约12小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分有机溶剂，残留物用20ml乙酸乙酯复溶，转移至分液漏斗中，加入20ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共60ml乙酸乙酯萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:6:5)，所得产品用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-7-phenyl-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(3-(trifluoromethyl)-5,6-dihydrocyclopenta[c]pyrazol-1(4h)-yl)acetamide(ic-1b)，白色固体，产率60％，熔点：131
–
134℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.07(d,j＝8.1hz,1h),8.26(d,j＝8.2hz,1h),8.06(d,j＝1.8hz,1h),8.00(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.91
–
7.87(m,3h),7.73(d,j＝7.9hz,1h),7.59(t,j＝7.6hz,2h),7.52(t,j＝7.3hz,1h),7.04(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.60(m,2h),5.01(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.61(ddd,j＝10.1,8.1,3.7hz,1h),4.57
–
4.40(m,3h),3.88(ddt,j＝27.1,14.8,7.4hz,2h),3.78(ddt,j＝30.8,14.2,7.3hz,2h),3.41(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.05(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.56(t,j＝6.8hz,2h),2.49
–
2.41(m,2h),2.40(t,j＝4.8hz,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1025.1909[m+h]
+
,calculated for c
44h37
clf8n8o6s2,[m+h]
+
:1025.1911.
[0114][0115]
操作同上，所不同的是使用对氰基苯硼酸。
[0116]
白色固体，产率64％，熔点：191
–
195℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.02(d,j＝
8.1hz,1h),8.29(d,j＝8.3hz,1h),8.12(d,j＝10.7hz,2h),8.07(d,j＝11.7hz,3h),8.04(d,j＝2.3hz,1h),7.86(d,j＝7.9hz,1h),7.72(d,j＝7.4hz,1h),7.02(t,j＝9.6hz,1h),6.63(d,j＝7.5hz,2h),4.99(dq,j＝17.0,8.5hz,1h),4.66
–
4.58(m,1h),4.55
–
4.36(m,3h),3.88(ddd,j＝19.5,13.4,7.4hz,2h),3.75(ddt,j＝21.4,14.5,7.5hz,2h),3.43
–
3.38(m,1h),3.04(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.54(d,j＝6.0hz,2h),2.45(d,j＝17.9hz,2h),2.40(d,j＝7.5hz,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.32(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1050.1861[m+h]
+
,calculated for c
45h36
clf8n9o6s2,[m+h]
+
:1050.1864.
[0117][0118]
操作同上，所不同的是使用2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯甲腈。
[0119]
白色固体，产率54％，熔点：130
–
134℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝8.1hz,1h),8.30(d,j＝8.3hz,1h),8.20(d,j＝1.8hz,1h),8.14(d,j＝8.1hz,1h),8.13
–
8.12(m,1h),8.09(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.97(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.87(d,j＝8.0hz,1h),7.73(d,j＝8.0hz,1h),7.03(tt,j＝9.3,2.4hz,1h),6.67
–
6.62(m,2h),5.02(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.65(ddd,j＝10.0,8.1,3.8hz,1h),4.52
–
4.39(m,3h),3.88(ddd,j＝28.5,14.5,7.4hz,2h),3.77(ddt,j＝37.9,14.7,7.4hz,2h),3.42(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.05(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.56(d,j＝6.0hz,2h),2.49
–
2.41(m,2h),2.41
–
2.37(m,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1068.1769[m+h]
+
,calculated for c
45h35
clf9n9o6s2,[m+h]
+
:1068.1769.
[0120][0121]
操作同上，所不同的是使用2,6-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯甲腈。
[0122]
白色固体，产率77％，熔点：140
–
144℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝8.1hz,1h),8.30(d,j＝8.3hz,1h),8.25(d,j＝1.6hz,1h),8.12(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),8.10
–
8.07(m,2h),7.87(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.03(tt,j＝9.4,2.3hz,1h),6.67
–
6.62(m,2h),5.03(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.66(ddd,j＝9.9,8.1,3.8hz,1h),
4.50
–
4.39(m,3h),3.89(ddq,j＝21.9,14.8,7.4hz,2h),3.78(ddt,j＝30.7,14.2,7.3hz,2h),3.43(dd,j＝14.2,3.8hz,1h),3.05(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.56(d,j＝6.7hz,2h),2.49
–
2.41(m,2h),2.40(t,j＝4.3hz,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1086.1676[m+h]
+
,calculated for c
45h34
clf
10
n9o6s2,[m+h]
+
:1086.1675.
[0123][0124]
操作同上，所不同的是使用3,5-二氟苯硼酸频那醇酯。
[0125]
白色固体，产率83％，熔点：115
–
120℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝8.1hz,1h),8.26(d,j＝8.3hz,1h),8.14(d,j＝1.8hz,1h),8.05(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.87(d,j＝7.9hz,1h),7.73(d,j＝8.0hz,1h),7.71
–
7.65(m,2h),7.41(tt,j＝9.3,2.3hz,1h),7.03(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),5.02(dq,j＝17.1,8.6hz,1h),4.63(ddd,j＝10.0,8.1,3.8hz,1h),4.54
–
4.40(m,3h),3.89(ddq,j＝21.7,14.9,7.4hz,2h),3.77(ddq,j＝29.0,14.8,7.4hz,2h),3.42(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.04(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.56(t,j＝6.9hz,2h),2.49
–
2.41(m,2h),2.41
–
2.37(m,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1061.1721[m+h]
+
,calculated for c
44h35
clf
10
n8o6s2,[m+h]
+
:1061.1723.
[0126][0127]
操作同上，所不同的是使用3,4,5-三氟苯基硼酸频那醇酯。
[0128]
白色固体，产率85％，熔点：101
–
102℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.00(d,j＝8.1hz,1h),8.25(d,j＝8.3hz,1h),8.13(d,j＝1.2hz,1h),8.03(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.95(dd,j＝9.1,6.6hz,2h),7.85(d,j＝8.0hz,1h),7.71(d,j＝7.9hz,1h),7.02(tt,j＝9.3,2.3hz,1h),6.67
–
6.61(m,2h),5.00(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.64(ddd,j＝10.0,8.0,3.8hz,1h),4.52
–
4.38(m,3h),3.87(ddt,j＝19.5,14.8,7.4hz,2h),3.77(ddq,j＝29.0,14.6,7.4hz,2h),3.42(dd,j＝14.3,3.8hz,1h),3.04(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.57(d,j＝7.7hz,2h),2.48
–
2.41(m,2h),2.40(q,j＝4.9hz,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms foundm/z 1079.1630[m+h]
+
,calculated for c
44h34
clf
11
n8o6s2,[m+h
]
+
:1079.1628.
[0129][0130]
操作同上，所不同的是使用3-氟苯硼酸频哪醇酯。
[0131]
白色固体，产率79％，熔点：111
–
115℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.02(d,j＝8.1hz,1h),8.25(d,j＝8.2hz,1h),8.07(d,j＝1.8hz,1h),8.01(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.85(d,j＝7.9hz,1h),7.75
–
7.69(m,3h),7.61(td,j＝8.2,6.3hz,1h),7.34(td,j＝8.7,2.6hz,1h),7.00(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.61(dd,j＝8.1,2.0hz,2h),4.99(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.61(ddd,j＝9.9,8.1,3.7hz,1h),4.52(d,j＝16.2hz,1h),4.47
–
4.38(m,2h),3.81(dddt,j＝65.2,29.3,14.2,7.3hz,4h),3.39(dd,j＝14.2,3.8hz,1h),3.03(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.54(t,j＝6.6hz,2h),2.47
–
2.34(m,4h),1.38(t,j＝7.4hz,3h),1.31(t,j＝7.4hz,3h).hrms foundm/z 1043.1816[m+h]
+
,calculated for c
44h36
clf9n8o6s2,[m+h]
+
:1043.1817.
[0132][0133]
操作同上，所不同的是使用3-氟-4-甲酰基苯硼酸频那醇酯。
[0134]
白色固体，产率62％，熔点：197
–
200℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.31(s,1h)),9.04(d,j＝8.1hz,1h),8.30(d,j＝8.3hz,1h),8.19(d,j＝1.6hz,1h),8.10(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),8.03(t,j＝7.7hz,1h),8.00(dd,j＝11.8,1.1hz,1h),7.93(dd,j＝7.8,1.3hz,1h),7.88(d,j＝8.0hz,1h),7.73(d,j＝8.0hz,1h),7.03(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),5.02(dq,j＝17.0,8.5hz,1h),4.64(ddd,j＝9.9,8.1,3.7hz,1h),4.55
–
4.40(m,3h),3.88(ddt,j＝19.4,14.8,7.4hz,2h),3.77(ddq,j＝29.0,14.6,7.4hz,2h),3.42(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.05(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.56(t,j＝6.7hz,2h),2.48
–
2.41(m,2h),2.40(q,j＝6.6,5.1hz,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.5hz,3h).hrms found m/z 1071.1771[m+h]
+
,calculated for c
45h36
clf9n8o7s2,[m+h]
+
:1071.1766.
[0135][0136]
操作同上，所不同的是使用4-硝基苯硼酸频那醇酯。
[0137]
淡黄色固体，产率52％，熔点：229
–
231℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝8.1hz,1h),8.41(d,j＝8.8hz,2h),8.32(d,j＝8.2hz,1h),8.20
–
8.14(m,3h),8.08(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.86(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.02(tt,j＝9.3,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),4.99(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.64(ddd,j＝10.0,8.1,3.8hz,1h),4.55
–
4.40(m,3h),3.88(dp,j＝23.1,7.4hz,2h),3.77(ddt,j＝30.6,14.2,7.3hz,2h),3.41(dd,j＝14.3,3.8hz,1h),3.05(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.56(t,j＝6.8hz,2h),2.48
–
2.41(m,2h),2.41
–
2.37(m,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1070.1763[m+h]
+
,calculated for c
44h36
clf8n9o8s2,[m+h]
+
:1070.1762.
[0138][0139]
操作同上，所不同的是使用3-氟-4-硝基苯硼酸频那醇酯。
[0140]
淡黄色固体，产率67％，熔点：大于250℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.02(d,j＝8.1hz,1h),8.33(t,j＝8.3hz,1h),8.31(d,j＝8.2hz,1h),8.22(d,j＝1.8hz,1h),8.19(dd,j＝12.5,1.9hz,1h),8.11(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.98(dd,j＝8.5,1.4hz,1h),7.86(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝7.9hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.3hz,1h),6.67
–
6.62(m,2h),5.01(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.65(ddd,j＝9.9,8.0,3.7hz,1h),4.53
–
4.39(m,3h),3.88(ddq,j＝18.4,14.8,7.4hz,2h),3.77(ddq,j＝29.0,14.6,7.4hz,2h),3.45
–
3.40(m,1h),3.05(dd,j＝14.2,10.0hz,1h),2.56(d,j＝6.1hz,2h),2.49
–
2.42(m,2h),2.40(dd,j＝6.7,3.9hz,2h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 1088.1670[m+h]
+
,calculated for c
44h35
clf9n9o8s2,[m+h]
+
:1088.1668.
[0141]
实施例8：ic-2a至ic-1k的制备
[0142][0143]
将ic-1a(100.0mg，97.26μmol，1eq)和碳酸钾(40.3mg，291.78μmol，3eq)加入到茄形瓶中，加入10ml dmf和1ml水，升温至75℃，回流反应约6小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯和30ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共60ml乙酸乙酯萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:4:5)，所得产品用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物(s)-n-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-2-(3-(trifluoromethyl)-5,6-dihydrocyclopenta[c]pyrazol-1(4h)-yl)acetamide(ic-2a)0.0667g，白色固体，产率73％，熔点：121
–
125℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.11(s,1h),9.18(d,j＝8.3hz,1h),8.12(d,j＝8.5hz,1h),8.01(d,j＝1.9hz,1h),7.85(dd,j＝8.5,1.9hz,1h),7.79(d,j＝8.0hz,1h),7.59(d,j＝8.0hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.62(dd,j＝8.2,2.2hz,2h),4.77(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.62
–
4.55(m,2h),4.52(ddd,j＝10.3,8.3,3.4hz,1h),4.21(dq,j＝16.9,8.5hz,1h),3.34(dd,j＝7.2,2.7hz,3h),2.99(dd,j＝14.2,10.3hz,1h),2.56(t,j＝6.9hz,2h),2.47
–
2.37(m,4h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 935.0774[m+h]
+
,calculated for c
36h28
brclf8n8o4s,[m+h]
+
:935.0771.
[0144][0145]
操作同上，所不同的是使用ic-1b。
[0146]
白色固体，产率96％，熔点：120
–
124℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.14(d,j＝8.4hz,1h),8.27(d,j＝8.3hz,1h),8.05(d,j＝1.7hz,1h),7.99(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.88(d,j＝7.0hz,2h),7.78(d,j＝8.0hz,1h),7.61
–
7.56(m,3h),7.52(t,j＝7.4hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),4.78(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.62
–
4.55(m,3h),4.26(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.40(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.35(qd,j＝7.2,2.0hz,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.2hz,1h),2.55(t,j＝7.1hz,2h),2.47
–
2.44(m,2h),2.43
–
2.37(m,2h),1.34(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 933.1976[m+h]
+
,calculated for c
42h33
clf8n8o4s,[m+h]
+
:933.1979.
[0147][0148]
操作同上，所不同的是使用ic-1c。
[0149]
白色固体，产率70％，熔点：150
–
152℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.14(d,j＝8.3hz,1h),8.31(d,j＝8.2hz,1h),8.13(d,j＝1.3hz,1h),8.10(d,j＝8.4hz,2h),8.07
–
8.03(m,3h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.58(d,j＝7.9hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),4.79(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),4.60(ddd,j＝10.0,8.4,3.6hz,1h),4.57(s,2h),4.26(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.40(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.35(qd,j＝7.1,2.6hz,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.2hz,1h),2.55(t,j＝6.9hz,2h),2.48
–
2.43(m,2h),2.41(q,j＝6.3hz,2h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 958.1936[m+h]
+
,calculated for c
43h32
clf8n9o4s,[m+h]
+
:958.1932.
[0150][0151]
操作同上，所不同的是使用ic-1d。
[0152]
白色固体，产率41％，熔点：116
–
119℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.13(s,1h),8.31(d,j＝8.3hz,1h),8.18(d,j＝1.8hz,1h),8.15
–
8.12(m,1h),8.12
–
8.11(m,1h),8.08(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.96(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.58(d,j＝7.9hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.67
–
6.61(m,2h),4.80(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),4.61(ddd,j＝10.1,8.3,3.7hz,1h),4.55(d,j＝1.7hz,2h),4.26(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.35(qd,j＝7.1,2.7hz,2h),3.03(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.55(t,j＝7.0hz,2h),2.43(dq,j＝18.3,6.5hz,4h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms foundm/z 976.1834[m+h]
+
,calculated for c
43h31
clf9n9o4s,[m+h]
+
:976.1837.
[0153][0154]
操作同上，所不同的是使用ic-1e。
[0155]
白色固体，产率46％，熔点：107
–
108℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.10(d,j＝8.3hz,1h),8.31(d,j＝8.3hz,1h),8.22(d,j＝1.8hz,1h),8.10(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),8.07(d,j＝9.6hz,2h),7.76(d,j＝7.9hz,1h),7.57(d,j＝7.9hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.67
–
6.60(m,2h),4.81(dq,j＝16.9,8.7hz,1h),4.61(ddd,j＝10.0,8.3,3.7hz,1h),4.58
–
4.49(m,2h),4.25(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.34(qd,j＝7.1,3.4hz,2h),3.03(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.55(t,j＝6.8hz,2h),2.46
–
2.37(m,4h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 994.1748[m+h]
+
,calculated for c
43h30
clf
10
n9o4s,[m+h]
+
:994.1743.
[0156][0157]
操作同上，所不同的是使用ic-1f。
[0158]
白色固体，产率78％，熔点：110
–
114℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.11(d,j＝8.3hz,1h),8.27(d,j＝8.3hz,1h),8.11(d,j＝1.8hz,1h),8.04(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.70
–
7.65(m,2h),7.58(d,j＝7.9hz,1h),7.40(tt,j＝9.2,2.3hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.67
–
6.60(m,2h),4.80(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.59(ddd,j＝10.1,8.3,3.6hz,1h),4.56(s,2h),4.25(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.40(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.35(qd,j＝7.2,2.7hz,2h),3.03(dd,j＝14.2,10.2hz,1h),2.55(t,j＝7.1hz,2h),2.44(d,j＝6.0hz,2h),2.40(dt,j＝10.7,4.9hz,2h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms foundm/z 969.1793[m+h]
+
,calculated for c
42h31
clf
10
n8o4s,[m+h]
+
:969.1791.
[0159][0160]
操作同上，所不同的是使用ic-1g。
[0161]
白色固体，产率99％，熔点：112
–
115℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.11(d,j＝8.3hz,1h),8.27(d,j＝8.3hz,1h),8.12(d,j＝1.9hz,1h),8.03(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.95(dd,j＝9.0,6.6hz,2h),7.76(d,j＝7.9hz,1h),7.57(d,j＝7.9hz,1h),7.01(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.68
–
6.60(m,2h),4.80(dq,j＝16.8,8.5hz,1h),4.61(ddd,j＝10.1,8.3,3.7hz,1h),4.59
–
4.52(m,2h),4.25(dq,j＝16.8,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.7hz,1h),3.35(qd,j＝7.2,2.8hz,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.56(t,j＝6.9hz,2h),2.46(dd,j＝11.4,4.1hz,2h),2.41(dt,j＝10.5,4.8hz,2h),1.34(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 987.1700[m+h]
+
,calculated for c
42h30
clf
11
n8o4s,[m+h]
+
:987.1696.
[0162][0163]
操作同上，所不同的是使用ic-1h。
[0164]
白色固体，产率70％，熔点：115
–
118℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),9.13(d,j＝8.4hz,1h),8.27(d,j＝8.2hz,1h),8.08(d,j＝1.8hz,1h),8.02(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.76
–
7.72(m,2h),7.63(td,j＝8.1,6.1hz,1h),7.58(d,j＝7.9hz,1h),7.38
–
7.33(m,1h),7.02(tt,j＝9.3,2.3hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),4.79(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),4.61
–
4.58(m,1h),4.57(s,2h),4.26(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.40(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.35(qd,j＝7.2,2.3hz,2h),3.03(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),2.55(t,j＝7.0hz,2h),2.45(dt,j＝6.9,3.3hz,2h),2.40(dt,j＝10.1,4.8hz,2h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms foundm/z 951.1885[m+h]
+
,calculated for c
42h32
clf9n8o4s,[m+h]
+
:951.1885.
[0165][0166]
操作同上，所不同的是使用ic-1i。
[0167]
白色固体，产率77％，熔点：140
–
142℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.31(s,1h)),10.08(s,1h),9.13(d,j＝8.4hz,1h),8.31(d,j＝8.3hz,1h),8.18(d,j＝1.9hz,1h),8.09(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),8.03(t,j＝7.7hz,1h),7.99(dd,j＝11.8,1.7hz,1h),7.93(dd,j＝8.0,1.7hz,1h),7.77(d,j＝8.0hz,1h),7.58(d,j＝7.9hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.67
–
6.62(m,2h),4.80(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),4.60(ddd,j＝10.3,8.3,3.6hz,1h),4.57(s,2h),4.26(dq,j＝16.9,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.6hz,1h),3.35(qd,j＝7.2,2.6hz,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.2hz,1h),2.55(t,j＝7.0hz,2h),2.47
–
2.43(m,2h),2.43
–
2.37(m,2h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 979.1833[m+h]
+
,calculated for c
43h32
clf9n8o5s,[m+h]
+
:979.1834.
[0168][0169]
操作同上，所不同的是使用ic-1j。
[0170]
淡黄色固体，产率70％，熔点：152
–
154℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.12(s,1h),9.18(d,j＝8.4hz,1h),8.43
–
8.39(m,2h),8.33(d,j＝8.3hz,1h),8.19
–
8.17(m,2h),8.17(d,j＝1.7hz,1h),8.09(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.80(d,j＝8.0hz,1h),7.59(d,j＝8.0hz,1h),7.03(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),4.80(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.63
–
4.58(m,1h),4.57(s,2h),4.26(dq,j＝16.8,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.4hz,1h),3.35
–
3.32(m,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.3hz,1h),2.55(t,j＝7.0hz,2h),2.46
–
2.39(m,4h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 978.1829[m+h]
+
,calculated for c
42h32
clf8n9o6s,[m+h]
+
:978.1830.
[0171][0172]
操作同上，所不同的是使用ic-1k。
[0173]
黄色固体，产率41％，熔点：131
–
134℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.12(s,1h),9.18(d,j＝8.4hz,1h),8.43
–
8.39(m,2h),8.33(d,j＝8.3hz,1h),8.19
–
8.17(m,2h),8.17(d,j＝1.7hz,1h),8.09(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.80(d,j＝8.0hz,1h),7.59(d,j＝8.0hz,1h),7.03(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.66
–
6.61(m,2h),4.80(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.63
–
4.58(m,1h),4.57(s,2h),4.26(dq,j＝16.8,8.6hz,1h),3.41(dd,j＝14.2,3.4hz,1h),3.35
–
3.32(m,2h),3.04(dd,j＝14.2,10.3hz,1h),2.55(t,j＝7.0hz,2h),2.46
–
2.39(m,4h),1.33(t,j＝7.3hz,3h).hrms found m/z 996.1739[m+h]
+
,calculated for c
42h32
clf8n9o6s,[m+h]
+
:996.1736.
[0174]
实施例9：id-3a至id-3d的制备
[0175][0176]
(1)将中间体a-5(3.00g，6.68mmol，1eq)、n-boc-l-3,5-二氟苯丙氨酸(2.01g，6.68mmol，1eq)、2-氨基-4-氟苯甲酸(1.04g，6.68mmol，1eq)和亚磷酸二苯酯(6.26g，26.73mmol，4eq)加入茄形瓶中，加入30ml吡啶，75℃反应约24小时，使用tlc监测反应。反应结束后，向反应瓶中加入100ml乙酸乙酯和100ml 0.5m柠檬酸溶液，搅拌15分钟后转移到分液漏斗中，将有机相分离后，弃去水相，有机相重新转移到分液漏斗中，加入100ml饱和氯化钠溶液，分离有机相，再用总共300ml乙酸乙酯萃取水相3次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚＝1:8)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体tert-butyl(s)-(1-(7-bromo-3-(4-chloro-3-(n-(ethylsulfonyl)ethylsulfonamido)-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-7-yl)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)carbamate(id-1)1.33g，白色固体，产率23％。ms:m/z 850.67(m+h)
+
.c
34h33
clf6n6o7s2[850.14].
[0177]
(2)在冰浴下，将中间体id-1(1.30g，1.53mmol，1eq)加入到茄形瓶中，加入30ml二氯甲烷溶解，随后缓慢滴加三氟乙酸(0.87g，7.64mmol，5eq)，加毕，转入室温反应，搅拌约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，减压蒸除大部分溶剂，向反应瓶中加入20ml二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液将溶液调节至中性，将混合溶液转移到分液漏斗中，加入20ml饱和氯化钠溶液洗涤，将有机相分离后，再用总共40ml二氯甲烷萃取水相2次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥。过滤，随后减压蒸除滤液的有机溶剂，残留物乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到中间体(s)-n-(7-(2-(1-amino-2-(3,5-difluorophenyl)ethyl)-7-fluoro-4-oxoquinazolin-3(4h)-yl)-4-chloro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1h-indazol-3-yl)-n-(ethylsulfonyl)ethanesulfonamide(id-2)0.97g，白色固体，产率85％。ms:m/z 750.98(m+h)
+
.c
29h25
clf6n6o5s2[750.09].
[0178]
(3)冰浴下，将[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酸(33.25mg，1.2eq)和hatu
(75.93mg，1.5eq)加入到茄形瓶中，加入30ml二氯甲烷，冰浴搅拌30分钟，再加入id-2(100mg，1eq)和diea(33.25mg，2eq)，加毕，撤去冰浴，室温反应约2小时，使用tlc监测反应。反应结束后，将反应液转移至分液漏斗中，加入30ml饱和氯化钠溶液，分离有机相后再用总共90ml二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，用适量无水硫酸钠干燥，静置后过滤，减压蒸除有机溶剂，残留物用200
–
300目硅胶进行快速柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚：二氯甲烷＝1:6:5)，所得产品再用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到目标化合物id-3a。淡黄色固体，产率83％，熔点：97
–
101℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.10(d,j＝8.0hz,1h),8.26(dd,j＝8.8,6.1hz,1h),7.85(d,j＝7.9hz,1h),7.72(d,j＝6.0hz,1h),7.60(dd,j＝9.6,2.6hz,1h),7.55(td,j＝8.7,2.6hz,1h),7.02(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.65
–
6.59(m,2h),6.43(s,1h),4.88(dq,j＝17.0,8.7hz,1h),4.70
–
4.56(m,2h),4.56
–
4.53(m,1h),4.38(dq,j＝16.7,8.4hz,1h),3.90
–
3.81(m,2h),3.81
–
3.67(m,2h),3.37(dd,j＝14.3,3.7hz,1h),3.01(dd,j＝14.3,10.1hz,1h),2.04(s,3h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.32(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 941.1350[m+h]
+
,calculated for c
36h30
clf9n8o6s2,[m+h]
+
:941.1347.
[0179][0180]
操作同上，所不同的是使用[3-(三氟甲基)-5,6-二氢-4h-环戊并[2,1-c]吡唑-1-基]乙酸。
[0181]
淡黄色固体，产率73％，熔点：95
–
98℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ9.07(d,j＝8.1hz,1h),8.26(dd,j＝8.8,6.1hz,1h),7.87(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.60(dd,j＝9.5,2.5hz,1h),7.55(td,j＝8.7,2.6hz,1h),7.01(tt,j＝9.4,2.3hz,1h),6.65
–
6.59(m,2h),4.95(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.58(ddd,j＝9.9,8.2,3.5hz,1h),4.55
–
4.44(m,2h),4.38(dq,j＝16.8,8.5hz,1h),3.87(tq,j＝14.8,7.4hz,2h),3.76(ddq,j＝29.0,14.6,7.4hz,2h),3.37(dd,j＝14.3,3.6hz,1h),3.01(dd,j＝14.1,10.2hz,1h),2.59
–
2.55(m,2h),2.47
–
2.39(m,4h),1.40(t,j＝7.4hz,3h),1.33(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 967.1508[m+h]
+
,calculated for c
38h32
clf9n8o6s2,[m+h]
+
:967.1504.
[0182][0183]
操作同上，所不同的是使用(5-氟-1h-吲哚-3-基)乙酸。
[0184]
淡黄色固体，产率63％，熔点：120
–
125℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.90(d,j＝2.5hz,1h),8.79(d,j＝8.1hz,1h),8.24(dd,j＝8.8,6.0hz,1h),7.93(d,j＝8.0hz,1h),
7.73(d,j＝8.0hz,1h),7.52(td,j＝8.6,2.5hz,1h),7.48(dd,j＝9.6,2.6hz,1h),7.27(dd,j＝8.8,4.5hz,1h),7.11(dd,j＝10.0,2.6hz,1h),7.04(d,j＝2.4hz,1h),6.88(tt,j＝9.4,2.4hz,1h),6.83(td,j＝9.1,2.6hz,1h),6.55
–
6.50(m,2h),4.94(dq,j＝17.1,8.6hz,1h),4.52(ddd,j＝10.1,8.2,3.5hz,1h),4.42(dt,j＝16.8,8.4hz,1h),3.91
–
3.72(m,4h),3.30(d,j＝3.7hz,1h),3.28
–
3.20(m,2h),2.96(dd,j＝14.2,10.1hz,1h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.35(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 926.1429[m+h]
+
,calculated for c
39h31
clf7n7o6s2,[m+h]
+
:926.1427.
[0185][0186]
操作同上，所不同的是使用(5-氯-1h-吲哚-3-基)乙酸。
[0187]
淡黄色固体，产率55％，熔点：126
–
129℃。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.00(d,j＝2.6hz,1h),8.76(d,j＝8.2hz,1h),8.24(dd,j＝8.9,6.0hz,1h),7.92(d,j＝8.0hz,1h),7.73(d,j＝8.0hz,1h),7.52(td,j＝8.6,2.6hz,1h),7.47(dd,j＝9.6,2.5hz,1h),7.41(d,j＝2.1hz,1h),7.30(d,j＝8.5hz,1h),7.02(d,j＝2.3hz,1h),7.00(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),6.87(td,j＝9.3,4.6hz,1h),6.53
–
6.48(m,2h),4.99(dq,j＝17.0,8.6hz,1h),4.56
–
4.50(m,1h),4.46(dq,j＝17.1,8.6hz,1h),3.86(ddq,j＝21.8,14.8,7.4hz,2h),3.76(tq,j＝14.5,7.3hz,2h),3.30(d,j＝3.5hz,1h),3.22(q,j＝14.9hz,2h),2.95(dd,j＝14.4,10.0hz,1h),1.39(t,j＝7.4hz,3h),1.35(t,j＝7.4hz,3h).hrms found m/z 942.1131[m+h]
+
,calculated for c
39h31
cl2f6n7o6s2,[m+h]
+
:942.1131.
[0188]
实施例10：目标化合物对hiv-1的抑制实验和细胞毒性实验
[0189]
实验原理：
[0190]
在pnl4-3质粒(genbank：af324493.2)上的not i和xho i限制酶位点插入pnl1.3[secnluc](promega cat#:n1021)的secnluc序列，使之代替pnl4-3质粒上的nef序列，从而获得了可以生产报告病毒hiv-1nl4-3 nanoluc sec的质粒。这种报告病毒可以实现在宿主细胞内的多轮复制，同时可以表达萤光素酶，萤光素酶的表达与hiv的感染成正比，因此可以利用萤光素酶检测试剂盒检测荧光强度以测试化合物的抗hiv-1活性。
[0191]
实验方法：
[0192]
使用50倍tcid
50
的hiv-1nl4-3 nanoluc sec病毒感染mt-4细胞(1
×
105个/ml)，加入不同浓度的目标化合物。感染细胞后第3天，吸取上清液，用nano-glo萤光素酶检测试剂盒(promega)测试萤光素酶活性。化合物的抗病毒活性被定义为将萤光素酶活性降低50％的化合物浓度(ec
50
)。
[0193]
用cytotox-gl细胞毒性测试系统(promega)来测试目标化合物的细胞毒性。mt-4细胞在加入不同浓度的化合物后培养3天。化合物的细胞毒性是按照试剂盒提供的方案来确定的。50％的细胞毒性浓度(cc
50
)被定义为导致细胞活力下降50％的浓度。实验结果见表
1。
[0194]
表1代表化合物的体外抗hiv-1活性和细胞毒性
[0195][0196][0197]
实验结论分析：
[0198]
本发明新合成的含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类化合物巨大多数呈现出显著的hiv-1抑制活性，其中ic-2a、ic-2b、ic-2c、ic-2d、ic-2e、ic-2f、ic-2g、ic-2h、ic-2i、ic-2j、ic-2k、id-3a、id-3b、id-3c、id-3d活性尤为突出，远超阳性药物pf74。因此，含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类化合物具有进一步研发的价值。
[0199]
实施例11：目标化合物在人血浆的代谢稳定性
[0200]
实验方法：
[0201]
将合并的冷冻血浆在37℃水浴中解冻，然后以4000rpm离心5分钟，除去血浆中的凝块，并将ph值调整至7.4
±
0.1。使用apricot自动化移液工作站，将98μl/孔的空白血浆加入到96孔反应板中(空白、t0、t10、t30、t60和t120)。使用自动化移液工作站将2μl/孔待测化合物的工作溶液(100μm)加入到除空白外的所有反应板中(t0、t10、t30、t60和t120)。然后将反应板在37℃水浴中孵育，并启动计时器，孵育结束时，加入500μl停止溶液(200ng/ml甲苯磺丁脲和200ng/ml拉贝洛尔的乙腈溶液)充分混合，使蛋白质沉淀。随后将反应板密封并摇动20分钟，然后在4℃下4000rpm离心20分钟。离心后，使用apricot自动化移液工作站将150μl上清液从每个反应板转移到相应的生物分析板中，密封振摇10分钟以混匀，再进行lc-ms/ms分析。以lenacapavir和pf74作为对照化合物，propantheline bromide(溴丙胺太林)作为阳性对照。
[0202]
实验结果如表2和图1所示：
[0203]
表2代表化合物的人血浆代谢数据
[0204][0205]a当最大孵育时间(本研究中为120分钟)的剩余值高于75％时，被认为在可接受的实验变化范围内。因此，报告了相应的t
1/2
＞289.1分钟。
[0206]bpropantheline bromide(溴丙胺太林)作为阳性对照。
[0207]
实验结论分析：
[0208]
ic-2i表现出极高的血浆稳定性，在最大孵育时间(120分钟)时仍保持几乎未被分解。表现出相较上市药物lenacapavir更强的血浆代谢稳定性。

技术特征：
1.一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物，或其药学上可接受的盐，其特征在于具有通式i所示的结构：其中，r1为c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、h、oh、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基或三氟甲氧基；r2为c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、h、oh、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基或三氟甲氧基；r3为c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、h、oh、卤素、硝基、氨基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、或以下基团：
w为：氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基、oh或以下基团：其中，w1为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基；w2为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基；w3为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、
c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基；w4为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙氧基、硼酸基、c
1-c6烷基磺酰基、c
1-c6烷基、oc
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
3-c6环烷基、oc
3-c6环烷基。2.如权利要求1所述的一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物，其特征在于，r1为h、甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、环丙基磺酰基；r2为h、甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、环丙基磺酰基；r3为以下基团：w为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基或以下基团：其中，w1为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基；w2为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基；w3为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基；w4为氢、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、醛基、乙酰基、甲氧基、三氟甲基、氨基、乙氧基、硼酸基。3.如权利要求1或2所述的一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物，其特征在于，是具
有下列结构的化合物之一：
二甲基甲酰胺中与2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯发生亲核反应得到中间体a-3；在二氯甲烷中，中间体a-3与不同的磺酰氯发生亲核取代得到中间体a-4；然后在锌粉和氯化铵存在的条件下发生还原反应得到中间体a-5；通过三组分反应将a-5、不同取代的邻氨基苯甲酸和n-boc-l-3,5-二氟苯丙氨酸缩合得到中间体a-6/id-1，在二氯甲烷中脱掉boc基团得到关键中间体a-7/id-2；然后通过缩合反应与不同取代的乙酸反应获得ia-1/ia-3/ib-1a/ic-1a/id-3(a-d)；通过铃木反应获得ib-1(b-d)/ic-1(b-k)；再在碳酸钾的作用下发生水解反应获得ia-2/ib-2(b-d)/ic-2(b-k)；合成路线如下：试剂与条件：(i)水合肼，乙醇，室温；(ii)cf3ch2otf，碳酸铯，dmf，0℃至室温；(iii)不同取代的磺酰氯，4-二甲氨基吡啶，三乙胺，二氯甲烷，0℃；(iv)锌粉，氯化铵，四氢呋喃，水，室温；(v)boc-3,5-二氟-l-苯丙氨酸，亚磷酸二苯酯，不同取代的邻氨基苯甲酸，吡啶，75℃；(vi)三氟乙酸，二氯甲烷，0℃至室温；(vii)不同取代的乙酸，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，n,n-二异丙基乙胺，二氯甲烷，0℃至室温；(viii)不同取代的苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯，四(三苯基膦)钯，磷酸钾，甲苯，水，95℃；(iv)碳酸钾，n,n二甲基甲酰胺，水，75℃；其中，w、r1、r2、r3如上述权利要求1中通式i中所述；所述的室温为20-30℃。5.权利要求1-3任一项所述的含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物在制备抗hiv-1的药物中的应用。6.一种抗hiv-1药物组合物，包含权利要求1-3任一项所述含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。

技术总结
本发明提供了一种含4-喹唑啉酮的苯丙氨酸类衍生物及其制备方法与应用。所述衍生物具有如下通式I所示的结构。本发明还涉及该类衍生物的制备方法及其作为HIV-1抑制剂在制备抗艾滋病药物中的应用。艾滋病药物中的应用。艾滋病药物中的应用。


技术研发人员：展鹏 张续杰 刘新泳 孙林 徐淑静 丁当
受保护的技术使用者：山东大学
技术研发日：2023.04.07
技术公布日：2023/7/22