Diosmetin在制备治疗非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用的制作方法

diosmetin在制备治疗非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域，主要涉及diosmetin在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的应用。


背景技术：

2.非酒精性脂肪肝是一种高发性的代谢性疾病，这种慢性病影响了全球超过25％的人口，正在成为最流行的肝病。非酒精性脂肪肝是一种进行性疾病，可发展为非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化，甚至发展为肝硬化和肝癌。已有大量研究表明，非酒精性脂肪肝与肥胖及肥胖相关的代谢疾病密切相关，并且与2型糖尿病和心血管疾病的风险增加相关。尽管已经明确游离脂肪酸摄取增加、从头脂肪生成增加、脂肪氧化减少、肝脏极低密度脂蛋白分泌减少和自噬受损可能会导致非酒精性脂肪肝的发生，但其发病机制在很大程度上仍未完全明确。另外不幸的是，用于治疗非酒精性脂肪性脂肪肝的药物目前还未上市，而且非酒精性脂肪肝的患者对其需求十分迫切。因此，寻找有效的预防与治疗非酒精性脂肪肝的药物和靶标是当前研究的重点。
3.香叶木素(diosmetin)是一种来源于柑橘类水果中的天然黄酮类化合物(结构式如图11所示)，具有抗炎、抗纤维化、预防或治疗静脉疾病、抗损伤、改善糖代谢等作用。关于diosmetin的生物活性的研究报道较多，如公开号为cn106031723a的中国专利公开了diosmetin的抗炎活性及其制剂应用，从抑制自由基和脂类介质方面阐述diosmetin的抗炎活性。公开号为cn109806255a的中国专利描述了diosmetin对肺的纤维化有良好的功效，并且无不良反应，diosmetin的添加可减缓博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化，在防治肺纤维化疾病方面具有良好的应用前景。公开号为cn103830223a的中国专利阐述了diosmetin在制备治疗心血管疾病的药物中的应用，主要在心肌缺血中的应用公开号为cn101132788a的中国专利讲述了diosmetin衍生物用于预防或治疗静脉疾病。公开号为cn106822087a的中国专利讲述了diosmetin能显著改善2型糖尿病小鼠的糖代谢功能，显著提高小鼠的胰岛素水平，可以用于制备降糖药物的开发应用。公开号为cn113018294a的中国专利公开了diosmetin能够降低活体动物的脂肪含量，并且发现diosmetin具有预防和治疗饮食诱导的肥胖的作用。目前还未见diosmetin治疗非酒精性脂肪性肝病相关的专利报道。


技术实现要素：

4.本发明的主要目的是提供diosmetin的新的医药用途，将diosmetin用于防治非酒精性脂肪性肝的药物，拓宽了diosmetin的用途范围。
5.为达到上述目的，本发明采用以下技术方案进行。
6.本发明第一方面提供一种diosmetin在制备预防或治疗脂肪性肝病的药物中的应用。
7.本发明一些实施方案中，所述脂肪肝病为非酒精性脂肪肝病。
8.本发明一些实施方案中，所述非酒精性脂肪肝病是由高脂饮食引起的。
9.本发明一些实施方案中，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝病患者体重的升高。
10.本发明一些实施方案中，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝患者肝脏的重量的增长。
11.本发明一些实施方案中，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝患者肝脏中的脂质沉积。
12.本发明一些实施方案中，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝病患者的血脂水平的升高。
13.本发明一些技术方案中，所述药物为片剂、颗粒剂、胶囊剂或注射剂。
14.本发明一些技术方案中，所述药物为以diosmetin作为单一成分的药物。
15.本发明一些技术方案中，所述药物包括diosmetin和其他药学上可接受的辅料。
16.本发明第二方面还提供如本发明第一方面所述的diosmetin在制备预防非酒精性脂肪肝病的保健品中的应用。
17.本发明的有益效果如下：本发明公开了diosmetin在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的应用，研究发现在不影响小鼠采食量的前提下diosmetin能够显著降低高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病小鼠的体重和肝脏的重量，并且diosmetin能够显著降低高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病小鼠的血脂水平和肝脏的脂质沉积。因此表明，diosmetin是有效的治疗非酒精性脂肪性肝病的天然化合物。本发明拓宽了diosmetin的用途范围，以上新用途为非酒精性脂肪肝病的治疗提供新策略，具有重要的临床治疗意义，为日后将其开发成非酒精性脂肪性肝病治疗药物提供科学依据。
附图说明
18.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，下面描述中的附图仅仅是本发明的其中12幅，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
19.图1是本发明diosmetin对正常饮食饲喂和高脂饮食诱导的小鼠体重的影响。
20.图2是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠体况。
21.图3是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠采食量的对比。
22.图4是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠肝脏外观的影响。
23.图5是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠肝脏重量的影响。
24.图6是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠血浆中甘油三酯含量的影响。
25.图7是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠血浆中总胆固醇含量的影响。
26.图8是本发明diosmetin处理正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠肝脏组织切片的h&e染色结果。
27.图9是本发明diosmetin处理正常饮食和高脂饮食饲喂的小鼠肝脏组织切片的油红o染色结果。
28.图10是本发明diosmetin对正常饮食和高脂饮食饲喂小鼠肝脏组织切片的油红o染色结果的统计。
29.图11是本发明diosmetin的化学结构式。
30.图12是本发明diosmetin对高脂饮食小鼠的影响示意图。
具体实施方式
31.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.一、实验材料
33.香叶木素(diosmetin)属于天然黄酮类化合物，富含于柑橘类水果，本发明的研究中选用的diosmetin是来自柠檬提取的(sd8390，北京索莱宝科技有限公司)，hplc≥98％。
34.二、实验动物
35.实验动物为spf级的7周龄大的c57bl/6雄性小鼠，体重为18～20g，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司。
36.实施例1：diosmetin对高脂诱导非酒精性脂肪性肝病小鼠的影响
37.c57bl/6j雄性小鼠放入中科产业控股(深圳)有限公司的实验动物房内喂养，按照6只/笼进行饲养，在缓冲间中适应三天后转运至spf级小鼠房。然后进行分组饲养：将其随机分为4组，每组10只。
38.高脂日粮饲喂c57bl/6j雄性小鼠适应1周后，即在c57bl/6j雄性小鼠8周龄左右开始试验，实验分组如下：
39.正常日粮+对照组(normaldiet+control,nc+con)：饲喂正常饲料，每天灌胃98％生理盐水+2％二甲基亚砜(dmso)，自由摄取纯净水。
40.正常日粮+diosmetin(highfatdiet+diosmetin,hfd+dio)处理组：饲喂正常饲料，将diosmetin标准品溶于dmso中，然后加98％的生理盐水，diosmetin每天的灌胃剂量为50mg
·
kg-1
，自由摄取纯净水。
41.高脂日粮+对照组(highfatdiet+control,hfd+con)：饲喂含60％脂肪的高脂饲料，每天灌胃98％生理盐水+2％dmso，自由摄取纯净水。
42.高脂日粮+diosmetin(highfatdiet+diosmetin,hfd+dio)处理组：饲喂含60％脂肪的高脂饲料，将diosmetin标准品溶于dmso中，然后加98％的生理盐水，diosmetin每天的灌胃剂量为50mg
·
kg-1
，自由摄取纯净水。
43.实验内容：
44.(1)生长曲线及采食量测定
45.在试验处理的12周期间，每天固定时间给小鼠饲喂高脂饲料并记录饲料重量，第二天称剩余饲料重量，相减的数值为小鼠的采食量，以此方式记录每笼小鼠每天的采食量变化。小鼠的体重每周一次进行记录，每次称重前禁食4h。
46.(2)血脂指标检测
47.将实验小鼠禁食16h后，从c57bl/6j小鼠的尾静脉采集血浆样品，用抗凝管进行收
集，然后在4℃离心机下，3000转，离心20分钟得到血浆。再进行检测，使用生化自动分析仪(hitachi7180自动分析仪，东京，日本)按标准程序测定。测定的指标包括甘油三酯(triglyceride,tg)和总胆固醇(total cholesterol,tc)。
48.(3)组织形态学检测肝脏脂质的沉积程度
49.组织学分析各个组织脂质沉积情况：取实验小鼠的肝脏切成小块，然后进行包埋，连续切片，切片厚度为5μm。对病变面积的微观定量分别进行苏木精伊红(hematoxylinandeosin,h&e)染色和油红o染色，使用nikonds-ri1数码相机连接的nikoneclipse80i光学显微镜采集图片，应用winroofv 6.5图像分析软件分析肝脏中的脂质沉积情况。
50.实验结果：
51.根据附图1-10的实验结果所示，hfd+con组和nd+con相比，表明高脂诱导非酒精性脂肪性肝病模型成功建立(如图1所示)。通过hfd+dio组和hfd+con组对比，diosmetin能够显著降低高脂饮食诱导小鼠的体重，通过外观的代表性图片也可以清晰的看出其体况差异(如图2所示)。通过对其采食量进行统计，发现diosmetin的添加不影响小鼠的采食量(如图3所示)。通过肝脏组织的图片及重量可看出，diosmetin能够显著降低高脂饮食诱导小鼠肝脏的重量(如图4，图5所示)。并且通过血脂水平和肝脏脂质沉积的结果发现，diosmetin能够显著降低高脂饮食诱导小鼠的血脂水平和肝脏的脂质沉积(如图6-10所示)。因此表明，在不影响小鼠采食量的前提下diosmetin可以抵抗高脂饮食诱导的小鼠体重，并且能降低其血脂水平和肝脏组织的脂质沉积(如图12所示)，对治疗高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病有良好的功效，在治疗非酒精性脂肪肝病方面具有良好的应用前景。
52.申请人声明，本发明通过上述试验来说明本发明的diosmetin在制备预防和治疗非酒精性脂肪性肝病药物中的应用，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.diosmetin在制备预防或治疗脂肪性肝病的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪肝病为非酒精性脂肪肝病。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述非酒精性脂肪肝病是由高脂饮食引起的。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝病患者体重的升高。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝患者肝脏的重量的增长；所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝患者肝脏中的脂质沉积。6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述diosmetin用于抑制非酒精性脂肪肝病患者的血脂水平的升高。7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为片剂、颗粒剂、胶囊剂或注射剂。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物为以diosmetin作为单一成分的药物。9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物包括diosmetin和其他药学上可接受的辅料。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及Diosmetin在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的应用。本发明发现在不影响小鼠采食量的前提下，Diosmetin可以抵抗高脂饮食诱导的小鼠体重，并且能够降低其血脂水平和肝脏组织的脂质沉积，有望成为非酒精性脂肪肝病的治疗药物。本发明拓宽了Diosmetin的用途范围，为非酒精性脂肪肝病的治疗提供新策略，具有重要的临床治疗意义，为日后将其开发成非酒精性脂肪性肝病治疗药物提供科学依据。肝病治疗药物提供科学依据。肝病治疗药物提供科学依据。


技术研发人员：陈实 谢宝财
受保护的技术使用者：深圳市第二人民医院（深圳市转化医学研究院）
技术研发日：2023.06.02
技术公布日：2023/7/22