用于诊断精子常规体外受精结果的方法、应用、装置、计算机设备和存储介质

1.本技术涉及辅助生殖领域，特别涉及到一种用于诊断精子常规体外受精结果的方法、应用、装置、计算机设备和存储介质。


背景技术：

2.在哺乳动物中，受精是指卵母细胞与精子融合，以启动新个体的发育。成功受精也是人类辅助生殖技术(art)的重要组成部分。通过使用先进的设备和现代技术，常规体外受精(conventional in vitro fertilization,civf)实验室实现了接近70-80％的受精率。然而，受精率低，异常或失败的情况仍然存在，极大地降低了卵子利用率和可利用胚胎数，并对临床医生和胚胎学家提出了挑战。
3.受精的过程主要包括以下几点：(1)精子穿越卵丘：卵丘细胞中的复合糖蛋白物质有助于激发精子顶体反应的潜能，同时精子也会释放透明质酸酶等一系列酶有助于精子穿越卵丘颗粒细胞；(2)精子穿透透明带(zona pellucida，zp)并激活卵母细胞：精子与卵子zp上的精子受体蛋白分子zp2-n端结合，精子释放顶体酶，顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，激活卵母细胞中的钙释放系统，使细胞质中的钙浓度突然增加，从而激活卵母细胞。精子与卵母细胞融合后最重要的功能是激活卵母细胞，包括卵母细胞内一系列的早期生化事件：皮质颗粒胞吐，阻止多精子穿透；减数分裂的恢复和完成；以及随后的原核(pn)形成。
4.在常规体外受精中，有10％～25％的周期会发生受精率低于30％。其中男性及其相关因素至少占不孕不育夫妇病因的50％。目前临床实践中主要靠检测精子密度、活力和形态等指标的精液常规分析，来评价男性生育能力，但这些指标不能有效而全面的反映精子的功能，因此仅依靠精液常规来解释男性不育的原因和判断男性生育能力是远远不够的。由此，目前仍缺乏有效评估精子受精能力的方法。


技术实现要素：

5.基于此，本技术提供了一种用于诊断civf结果的方法，该方法可以用于分析civf低受精的原因、评价精子受精能力、诊断精子的体外受精结果，提前发现可能发生civf低受精的男性，为受精方案的制订提供依据，防止受精失败或低受精的发生。
6.本技术解决上述技术问题的技术方案如下：
7.本技术提供了一种用于诊断精子civf结果的方法，包括以下步骤：
8.检测和计算精子样本的plcζ阳性率，所述plcζ阳性率为所述精子样本中plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，所述plcζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子：顶体、赤道和顶体后区；及
9.根据所述plcζ阳性率，诊断civf结果。
10.上述用于诊断civf结果的方法，通过计算精子样本的plcζ阳性率诊断精子受精能
力，有助于ivf低受精的原因分析，对于拟行civf的精子的受精能力进行一个高效的预判，能够在短时间内发现可能发生civf低受精的精子，为受精方案的制订提供依据。
11.在其中一些实施例中，所述plcζ阳性率与常规体外受精总受精率和正常受精率正相关。
12.在其中一些实施例中，在所述plcζ阳性率低于56.7％时，所述精子样本为常规体外受精低受精样本；
13.其中，所述常规体外受精的总受精率低于30％为低受精。
14.在其中一些实施例中，所述检测和计算精子样本的plcζ阳性率的步骤包括：
15.通过plcζ抗体免疫荧光染色法检测所述精子样本中plcζ的表达和分布；
16.统计分析所述精子样本中200个以上的精子，得到精子总数；统计其中plcζ阳性精子的数量；及
17.根据所述plcζ阳性精子的数量占所述精子总数的比例，计算plcζ阳性率。
18.在其中一些实施例中，所述通过plcζ抗体免疫荧光染色法检测所述精子样本中plcζ的表达和分布的步骤包括：
19.采用固定剂固定所述精子样本；
20.将固定好的精子样本进行涂布，得到精子涂片；
21.将所述精子涂片滴加1％的tritonx-100进行孵育，得到孵育后的精子样品；
22.向所述孵育后的精子样品滴加封闭液进行封闭，得到封闭后的精子样品；
23.将所述封闭后的精子样品进行plcζ抗体孵育，得到结合有plcζ抗体的精子样品；
24.将所结合有plcζ抗体的精子样品与带有alexa fluor
tm
594标记物的二抗孵育，得到结合有二抗的精子样品；及
25.用4'，6'-二氨基-2-苯基吲哚复染所述二抗标记的精子样品，得到经免疫荧光染色的精子样品。
26.本技术还提供一种根据上述的方法在诊断精子常规体外受精结果中的应用。
27.一种用于诊断精子常规体外受精结果的装置，包括：
28.计算模块，用于检测和计算精子样本的plcζ阳性率，所述plcζ阳性率为所述精子样本中plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，所述plcζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子：顶体、赤道和顶体后区；及
29.数据模块，用于向所述计算模块提供所述精子样本的精子总数和plcζ阳性精子的数量。
30.在其中一些实施例中，所述装置还包括检测模块，所述检测模块与所述数据模块通讯连接，所述数据模块能够从所述检测模块获取所述精子样本的精子总数和plcζ阳性精子的数量；
31.所述检测模块包括精子数量单元和plcζ阳性单元，所述精子数量单元用于检测所述精子样本中精子并计数，所述plcζ阳性单元用于检测所述精子样本中每个精子的plcζ的分布情况并统计plcζ阳性精子的数量。
32.一种计算机设备，包括存储器和处理器，所述存储器存储有计算机程序，所述处理器执行所述计算机程序时实现上述的方法的步骤。
33.一种计算机可读存储介质，存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时
实现上述的方法的步骤。
附图说明
34.图1为实施例1中精子plcζ免疫荧光染色结果；
35.图2为实施例1中正常受精组和低受精组男性的精子plcζ阳性率和不同定位模式的比较图，以及精子plcζ阳性率预测civf低受精的roc曲线分析图。
具体实施方式
36.为使本技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本技术的具体实施方式做详细的说明，并给出了本技术的较佳实施例。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本技术。但是本技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本技术内涵的情况下做类似改进，因此本技术不受下面公开的具体实施例的限制。
37.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本技术的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本文所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
38.在人类和小鼠精子中，plcζ主要位于核周鞘的顶体、赤道和顶体后区域，这是一种位于顶体下方的特殊结构，围绕着精子头的细胞核。该蛋白具有四个主要的结构域：ef-hand区域，x和y催化结构域，x-y连接子和c2结构域，其在精子进入卵母细胞后被释放并激活卵母细胞恢复减数分裂。civf是一种将卵母细胞与数十万精子在体外受精体系中共孵育的授精方法，与卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection，icsi)方案不同的是，civf方案包含了几个特有的关键事件，例如精子结合和穿越透明带。plcζ缺陷(plcζ蛋白表达水平降低、缺失或定位异常)是否以及如何影响人类civf结局仍不清楚。基于此，本技术的技术人员打破现有技术的禁锢，创造性地将精子plcζ与civf的受精结局结合起来，并成为一种评价精子的受精能力，从而得到诊断civf结局的生物指标。
39.本技术一实施方式提供了一种用于诊断civf结果的方法，该方法包括步骤s100和步骤s200。具体地：
40.步骤s100：检测和计算精子样本的plcζ阳性率。
41.plcζ阳性率为精子样本中plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，plcζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子：顶体区、赤道区和顶体后区。
42.具体地，计算plcζ阳性率的步骤包括步骤s110、步骤s120和步骤s130。
43.步骤s110：统计精子样本中精子的数量，得到精子总数。
44.具体地，男性精子样本中精子的数量为多个。在一些实施例中，统计分析的男性精子样本的总数量在200个以上。例如，男性精子样本的数量为200、500或1000。可以理解的是，男性精子样本中统计分析的精子数量越大，通过上述方法计算的受试精液样本的plcζ阳性率越准确。也即是，可以不断地通过增加样本量来不断地修正plcζ阳性率，从而使得plcζ阳性率诊断civf结果的准确性更高。在本文中，“多个”是指数量大于1；“以上”与数字
联用于表示数量范围时包括本数，例如200个以上包括200个。
45.步骤s120：通过plcζ抗体免疫荧光染色法检测精子样本中plcζ的分布，统计plcζ阳性精子的数量。
46.在一些实施例中，上述检测包括采用plcζ抗体免疫荧光染色法检测精子样本中plcζ的分布的步骤。
47.可选地，采用免疫荧光染色检测精子样本中plcζ的分布的步骤包括步骤a、步骤b、步骤c、步骤d、步骤e、步骤f。
48.步骤a：将固定好的精子样本进行涂布，得到精子涂片。
49.步骤b：滴加1％的tritonx-100进行孵育，得到孵育后的精子样品。
50.步骤c：向孵育后的精子样品滴加封闭液进行封闭，得到封闭后的精子样品。
51.步骤d：将封闭后的精子样品进行plcζ抗体孵育，得到结合有plcζ抗体的精子样品。
52.步骤e：将所结合有plcζ抗体的精子样品与带有alexa fluor
tm
594标记物的二抗孵育，得到结合有二抗的精子样品。
53.步骤f：用4'，6'-二氨基-2-苯基吲哚复染二抗标记的精子样品，得到经免疫荧光染色的精子样品。
54.在一些实施例中，固定剂为4％多聚甲醛。
55.在一些实施例中，在plcζ抗体孵育步骤之后、二抗孵育步骤之后及复染步骤之后还包括进行pbst洗涤步骤。
56.在一些实施例中，plcζ分布类型分为顶体区、赤道区、顶体后区、无信号区四种模式。plcζ阳性精子为精子头部的顶体区、赤道区和顶体后区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子。
57.步骤s130：根据plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，计算plcζ阳性率。
58.步骤s200：根据plcζ阳性率，诊断civf结果。
59.上述用于诊断civf结果的方法，通过计算精子样本的plcζ阳性率诊断精子受精能力，有助于ivf低受精的原因分析，对于拟行civf的精子的受精能力进行一个高效的预判，能够在短时间内发现可能发生civf低受精的精子，为受精方案的制订提供依据。
60.在一些实施例中，plcζ阳性率与常规体外受精总受精率和正常受精率正相关。
61.在一些实施例中，根据plcζ阳性率的阈值，诊断精子样本的civf结果。
62.可以理解，阈值是根据多个正常精子样本和多个低受精样本的plcζ阳性率分析得到，其中分析方法包括相关性分析、回归分析及roc曲线分析。
63.在一些实施例中，阈值为56.7％。即在精子样本的plcζ阳性率低于56.7％时，可以判断该精子样本为civf低受精样本，其中，所述civf的总受精率低于30％为低受精。
64.可以理解的是，总受精率是指civf后形成原核的卵数占总civf卵数的百分比，civf的总受精率低于30％为低受精，当此精子样本用于civf时，受精率低于30％的风险高。
65.上述确定plcζ阳性率阈值的方法，通过动态采集男性精液，不断修正检测男性精液plcζ阳性率，通过plcζ抗体免疫荧光染色检测精子样本的每个精子中plcζ的分布，统计plcζ阳性精子的数量；根据plcζ阳性精子的数量和总精子数，计算plcζ阳性率，从而对于已行或拟行civf的精子的受精能力进行一个高效的判断，能够在短时间内为经历低受精或受
精失败的患者明确原因，或者发现可能发生civf低受精或受精失败的精子，为受精方案的制订提供依据，防止受精失败或低受精的发生。
66.本技术一实施方式还提供了一种根据上述的方法在诊断精子civf结果中的应用。
67.此外，本技术一实施方式还提供了一种用于诊断精子civf结果的装置，该装置包括计算模块和数据模块。
68.具体地，计算模块用于计算精子样本的plcζ阳性率，plcζ阳性率为精子样本中plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，plcζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子：顶体、赤道和顶体后区。
69.具体地，计算模块用于向计算模块提供精子样本的精子总数和plcζ阳性精子的数量。
70.在一些实施例中，上述装置还包括检测模块，检测模块与数据模块通讯连接，数据模块能够从检测模块获取精子样本的精子总数和plcζ阳性精子的数量。
71.具体地，检测模块包括精子数量单元和plcζ阳性单元，精子数量单元用于检测精子样本中精子并计数，plcζ阳性单元用于检测精子样本中每个精子的plcζ的分布情况并统计plcζ阳性精子的数量。
72.上述用于诊断精子的civf结果的装置中的各个模块可全部或部分通过软件、硬件及其组合来实现。上述各模块可以硬件形式内嵌于或独立于计算机设备中的处理器中，也可以以软件形式存储于计算机设备中的存储器中，以便于处理器调用执行以上各个模块对应的操作。
73.此外，本技术一实施方式还提供了一种计算机设备，包括存储器和处理器，存储器存储有计算机程序，处理器执行计算机程序时实现上述任一实施例的用于诊断civf结果的方法的步骤。
74.可以理解的是，上述的计算机设备可以是终端。该计算机设备包括通过系统总线连接的处理器、存储器、通信接口、显示屏和输入装置。其中：该计算机设备的处理器用于提供计算和控制能力。该计算机设备的存储器包括非易失性存储介质、内存储器。该非易失性存储介质存储有操作系统和计算机程序。该内存储器为非易失性存储介质中的操作系统和计算机程序的运行提供环境。该计算机设备的通信接口用于与外部的终端进行有线或无线方式的通信。无线方式可通过wifi、移动蜂窝网络、nfc(近场通信)或其他技术实现。该计算机程序被处理器执行时以实现一种用于诊断civf结果的方法。该计算机设备的显示屏可以是液晶显示屏或者电子墨水显示屏，该计算机设备的输入装置可以是显示屏上覆盖的触摸层，也可以是计算机设备外壳上设置的按键、轨迹球或触控板，还可以是外接的键盘、触控板或鼠标等。
75.此外，本技术一实施方式还提供了一种计算机可读存储介质，存储有计算机程序，计算机程序被处理器执行时实现上述任一实施例的用于诊断civf结果的方法的步骤。
76.此外，本技术一实施方式还提供了一种计算机程序产品或计算机程序，该计算机程序产品或计算机程序包括计算机指令，该计算机指令存储在计算机可读存储介质中。计算机设备的处理器从计算机可读存储介质读取该计算机指令，处理器执行该计算机指令，使得该计算机设备执行上述任一实施例的用于诊断civf结果的方法的步骤。
77.具体实施方式
78.以下结合具体实施例进行详细说明。以下实施例如未特殊说明，则不包括除不可避免的杂质外的其他组分。实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者生产厂家推荐的方法实现。
79.实施例1
80.一、civf授精
81.1.精子制备
82.收集了进行civf助孕的49例患者的精液样本(排除严重少弱畸形精子症患者和手术取精患者，所有civf周期的获卵数≥3枚)，患者在禁欲2-7天后排精，37℃液化30min，然后进行密度梯度离心处理，处理前后分别计数精子总密度和前向运动精子数。
83.2.授精
84.取密度梯度离心处理后的精子，加入放有卵-冠-丘复合体的civf培养基中，前向运动精子的终密度为1
×
105/ml，在37℃、6％ co2的培养箱中过夜受精。
85.3.受精评估
86.civf受精16-18h后，去除颗粒细胞，在倒置显微镜下观察第二极体以及卵胞浆内原核(pn)，形成两个极体及雌雄双原核的为正常受精。
87.正常受精率＝正常受精(2pn)卵数/civf卵数
88.总受精率＝形成原核卵数/civf卵数。
89.4.结果
90.根据受精结局分为2组：(1)正常受精组(nf)31名，正常受精率≥50％,1pn+多pn《30％，(2)低受精组(lf)18名，总受精率≤30％。
91.二、人类精子免疫荧光染色
92.对每个精子样本进行精子免疫荧光染色，其中每个样本中进行计数分析的精子总量为200个及以上，免疫荧光染色具体步骤如下：
93.(1)固定：将上游法或密度梯度离心法处理后的精子样本与4％多聚甲醛(4％pfa)共孵育，室温固定30min；
94.(2)将固定后的精子样本涂片后室温干燥；
95.(3)透膜：滴加1％的tritonx-100，室温孵育15min；
96.(4)移去透膜液，用dpbs洗2次，每次5min；
97.(5)封闭：滴加封闭液(含有5％驴血清、2％ bsa、0.1m的甘氨酸和0.01％triton x-100的pbs)，室温封闭1h或4℃过夜；
98.(6)一抗孵育：将兔抗人plcζ抗体(1:100；covalab，pab0367-p)用封闭液稀释配制，4℃孵育过夜；
99.(7)小心移去一抗，用pbst(含0.05％ tween 20)洗3次，每次15min；
100.(8)二抗孵育：将alexa fluor
tm
594驴抗兔二抗(1：800；a21207，invitrogen)用pbst稀释配制，避光室温孵育1h；
101.(9)pbst洗2次，每次10min；
102.(10)dapi复染10min；
103.(11)pbst洗2次，每次10min；
104.(12)封片：滴加15μl防淬灭封片剂至载玻片上，轻轻盖上盖玻片；
105.(13)37℃温箱烤片15min；
106.(14)使用蔡斯公司的cell discoverer 7荧光显微镜和adobe photoshop软件获取荧光信号，并计数200个及以上的精子。
107.结果及分析
108.对每个样本进行观察，如图1所示，每个样本中精子plcζ定位区域可以分为四种模式：(1)顶体区(aceq)域：顶体区域或同时伴有赤道/顶体后区域；(2)赤道区(eq)域；(3)顶体后区(pa)域：顶体后区域或同时伴有赤道区域；(4)无信号(none)。其中，顶体、赤道和顶体后为正常定位模式，而无信号为异常模式。
109.三、计算得到plcζ阳性率
110.通过统计精子样本中精子的数量，并统计其中plcζ阳性精子数量，plcζ阳性精子为精子头部的顶体区、赤道区和顶体后区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子，根据plcζ阳性精子的数量和总精子数比例，计算得到plcζ阳性率，具体如表1所示。
111.表1
[0112][0113]
四、正常受精组和低受精组精子plcζ阳性率和不同定位模式的比较
[0114]
为探讨精子plcζ的阳性率、不同定位模式与civf受精结局的关系，对两组患者的精子进行了plcζ染色分析，如表2和图2中的(a)所示，通过中位数比较发现，civf低受精组
男性精子的plcζ阳性率显著低于正常受精组(64.1％(95％ci，46.8-84.3)vs 82.2％(73.1-87.7)，p＝0.0176)。如表2和图2中的(b)～(d)所示，通过中位值的比较发现，无论是哪种plcζ定位模式，低受精组与正常受精组的精子比例均不存在显著差异(p＞0.05)。
[0115]
表2
[0116][0117]ap＝0.0176(低受精组vs.正常受精组)。
[0118]
五、精子plcζ阳性率、不同定位模式和civf受精率的相关性分析
[0119]
为了探讨精子plcζ的阳性率、不同定位模式对civf受精结果的影响，使用pearson系数进行了相关性分析，如表3所示：精子plcζ阳性率与2pn率(r＝0.459，p＝0.0005)、总受精率(r＝0.438，p＝0.0008)均呈显著正相关，虽然plcζ顶体后定位模式与总受精率(r＝0.247，p＝0.044)呈统计学意义的正相关，但是相关系数较低。
[0120]
表3
[0121][0122]a基于正常受精组和低受精组数据；bp＝0.0005,cp＝0.0008,dp＝0.044。
[0123]
六、低受精人群的识别
[0124]
为了探讨plcζ阳性率对civf低受精(总受精率≤30％)人群的预测价值，选取了两组间存在显著差异的和与受精率显著相关的plcζ阳性率作为指标，基于正常受精组和低受精组共计49名男性的数据，绘制了roc曲线，如图2(e)所示，civf低受精相关的plcζ阳性率的最佳临界值为56.7％(敏感性为44.4％，特异性为100％)，曲线下面积(auc)为0.705(95％ ci，0.538-0.872)。结果显示，使用56.7％的阈值使79.6％的患者获得了正确的预测，以上结果表明精子plcζ阳性率可以作为一个指标来诊断civf低受精人群。
[0125]
七、临床样本的检测结果
[0126]
表4
[0127][0128]a阳性指精子样本的plcζ阳性率低于56.7％阈值；b阴性指精子样本的plcζ阳性率高于56.7％阈值。
[0129]
由上述表4结果可知，本技术的plcζ阳性率阈值用于诊断精子civf结果，适用于civf低受精样本的检测，对于拟行civf的精子的受精能力进行一个高效的预判，能够在短时间内发现可能因plcζ缺陷而发生civf低受精的精子，应建议患者在进行辅助生殖治疗时改行卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection，icsi)并进行补救卵母细胞辅助激活(assisted oocyte activation，aoa)的受精方式以期改善治疗结局。
[0130]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0131]
以上所述实施例仅表达了本技术的几种实施方式，便于具体和详细地理解本技术的技术方案，但并不能因此而理解为对申请专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本技术的保护范围。应当理解的是，在本领域技术人员在本技术提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或有限的试验得到的技术方案，均在本技术所附权利要求的保护范围内。因此，本技术专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

技术特征：
1.一种用于诊断精子常规体外受精结果的方法，其特征在于，包括以下步骤：检测和计算精子样本的plcζ阳性率，所述plcζ阳性率为所述精子样本中plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，所述plcζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子：顶体区、赤道区和顶体后区；及根据所述plcζ阳性率，诊断常规体外受精结果。2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述plcζ阳性率与常规体外受精总受精率和正常受精率正相关。3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，在所述plcζ阳性率低于56.7％时，所述精子样本为常规体外受精低受精样本；其中，所述常规体外受精的总受精率低于30％为低受精。4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述检测和计算精子样本的plcζ阳性率的步骤包括：通过plcζ抗体免疫荧光染色法检测所述精子样本中plcζ的表达和分布；统计分析所述精子样本中200个以上的精子，得到精子总数；统计其中所述plcζ阳性精子的数量；及根据所述plcζ阳性精子的数量占所述精子总数的比例，计算plcζ阳性率。5.根据权利要求4中所述的方法，其特征在于，所述通过plcζ抗体免疫荧光染色法检测所述精子样本中plcζ的表达和分布的步骤包括：采用固定剂固定所述精子样本；将固定好的精子样本进行涂布，得到精子涂片；将所述精子涂片滴加1％的tritonx-100进行孵育，得到孵育后的精子样品；向所述孵育后的精子样品滴加封闭液进行封闭，得到封闭后的精子样品；将所述封闭后的精子样品进行plcζ抗体孵育，得到结合有plcζ抗体的精子样品；将所结合有plcζ抗体的精子样品与带有alexa fluor
tm
594标记物的二抗孵育，得到结合有二抗的精子样品；及用4'，6'-二氨基-2-苯基吲哚复染所述二抗标记的精子样品，得到经免疫荧光染色的精子样品。6.权利要求1～5任一项所述的方法在诊断精子常规体外受精结果中的应用。7.一种用于诊断精子常规体外受精结果的装置，其特征在于，包括：计算模块，用于检测和计算精子样本的plcζ阳性率，所述plcζ阳性率为所述精子样本中plcζ阳性精子的数量占精子总数的比例，所述plcζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到plcζ的精子：顶体、赤道和顶体后区；及数据模块，用于向所述计算模块提供所述精子样本的精子总数和plcζ阳性精子的数量。8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述装置还包括检测模块，所述检测模块与所述数据模块通讯连接，所述数据模块能够从所述检测模块获取所述精子样本的精子总数和plcζ阳性精子的数量；所述检测模块包括精子数量单元和plcζ阳性单元，所述精子数量单元用于检测所述精子样本中精子并计数，所述plcζ阳性单元用于检测所述精子样本中每个精子的plcζ的分布
情况并统计plcζ阳性精子的数量。9.一种计算机设备，包括存储器和处理器，所述存储器存储有计算机程序，其特征在于，所述处理器执行所述计算机程序时实现权利要求1～6中任一项所述的方法的步骤。10.一种计算机可读存储介质，存储有计算机程序，其特征在于，所述计算机程序被处理器执行时实现权利要求1～6中任一项所述的方法的步骤。

技术总结
本申请涉及一种用于诊断精子常规体外受精结果的方法、装置、计算机设备和存储介质。该诊断和预测常规体外受精结果的方法包括以下步骤：计算精子样本的PLCζ阳性率，PLCζ阳性率为精子样本中PLCζ阳性精子的数量占精子总数的比例，PLCζ阳性精子为以下精子头部区域中的至少一个中能检测到PLCζ的精子：顶体、赤道和顶体后区；及根据PLCζ阳性率，诊断常规体外受精的受精结果。该方法对于已行或拟行常规体外受精的精子的受精能力进行一个高效的判断，发现可能因PLCζ缺陷而发生常规体外受精低受精或受精失败的精子，为受精方案的制订提供依据，防止受精失败或低受精的发生。防止受精失败或低受精的发生。防止受精失败或低受精的发生。


技术研发人员：戴灿 车建芳 戴菁 林戈
受保护的技术使用者：湖南师范大学
技术研发日：2023.04.06
技术公布日：2023/7/28