一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于金属纳米材料、生物分子和生物传感检测技术领域，涉及一种用于检测缺氧标志物——腺苷的电化学适配体传感器，具体是指一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器及制备方法。


背景技术：

2.腺苷(adenosine，ad)是嘌呤核苷酸降解过程中产生的一种内源性嘌呤核苷，主要由5
′‑
核苷酸酶组成，它是合成三磷酸腺苷(atp)、腺嘌呤、腺苷酸和阿糖腺苷的重要中间体；同时也作为一种神经调节剂在心率调节、神经传递和呼吸系统的控制中扮演着重要的角色。此外，通过特殊酶(统称为外核苷酸酶)的作用，预先释放的腺苷三磷酸在细胞外空间生成腺苷。腺苷是一种潜在的细胞肿瘤标志物，在外周和中枢神经系统中发挥重要的信号功能。此外，腺苷对突触活动有抑制作用，可以减缓大脑的代谢活动，从而导致睡眠，这对帕金森病和其他脑病患者成功进行脑深部刺激至关重要。正常环境下，健康人体的腺苷浓度维持在一个较低的水平：健康人体血浆中腺苷的浓度应在20nm左右，血清中腺苷浓度低于1mm，尿样中腺苷浓度应于6.7μm左右。在缺氧环境下，机体atp的消耗大大提升，累积的单磷酸腺苷分解形成腺苷，机体中腺苷浓度将有明显的增加，并随着缺氧时长的增加而提升。而在非缺氧条件下，腺苷可调控机体能量(或氧气)的供求平衡，并与机体缺血、炎症、肺部疾病(如哮喘、特发性肺纤维化)等疾病息息相关。因此，开发高灵敏和高选择性的腺苷检测的新策略至关重要。
3.目前，传统的标准腺苷检测方法为hplc和酶标法：hplc检测法需要对样品预先进行简要的分离，并需要标准样品来确定保留时间或联用质谱来定性检测腺苷，相关试剂盒操作起来步骤冗长而繁琐；而酶标法检测成本相对较高，同时对检测人员的操作水平也提出了高要求。因此，开发一种低成本，简单，灵敏和选择性的检测方法至关重要。
4.电化学传感器具有能耗低、设备简单、易于小型化等优点而受到越来越多的关注。它已被广泛应用在许多领域，如医疗诊断、环境监测、食品安全监测等，本实验基于具有高亲和力的适配体以及所制备的性能优异的金属复合材料，制备了一种检测腺苷的电化学适配体传感器，并有望用于现场检测。


技术实现要素：

5.本发明为了解决上述技术问题，提供了一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器及制备方法，本发明所设计、构建的传感器可实现缺氧标志物腺苷的快捷检测，具有宽的检测范围、低的检测限以及良好的稳定性。
6.本发明的技术方案为：
7.一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器，采用丝网印刷技术制备的金电极，在其表面滴加有捕获适配体(ssdna 1)，再加入6-巯基己醇(mch)封闭可能的未结合的活性位
点，然后滴加腺苷适配体(ssdna 2)以及催化材料(pt-cu-mwcnts)构成的复合物，在电极表面与ssdna1通过碱基互补配对形成双链，通过加入待测物腺苷后，由于腺苷-腺苷适配体的结合要更稳定于腺苷适配体-捕获适配体，催化材料(pt-cu-mwcnts)随着腺苷-腺苷适配体复合物从电极表面释放，从而引起所制备的传感器对过氧化氢的催化响应变化实现对腺苷定量检测的目的。
8.本发明还包括一种用于检测缺氧标志物—腺苷的电化学适配体传感器，其制备步骤如下：
9.(1)丝网印刷金电极的制备及预处理；
10.(2)在处理后的金电极表面滴加10μl、4μm的ssdna1，并在4℃条件下孵育4h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的ssdna1。并在5mm[fe(cn)6]
3-/[fe(cn)6]
4-中测试其循环伏安图和阻抗谱；
[0011]
(3)滴加10μl、5mm 6-巯基己醇(mch)屏蔽可能的非特异性结合位点，37℃条件下封闭2h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的mch。并在5mm[fe(cn)6]
3-/[fe(cn)6]
4-中测试其循环伏安图和阻抗谱；
[0012]
(4)在滴加10μl pt-cu-mwcnts-ssdna2的复合物，4℃条件下孵育12h后，用超纯水对电极进行彻底的清洗，电化学适配体传感器制备完成。并在5mm[fe(cn)6]
3-/[fe(cn)6]
4-中测试其循环伏安图和阻抗谱，以及在pbs(ph＝7.4，10mm)的缓冲溶液中测试其催化h2o2的计时电流响应。
[0013]
进一步，所述的丝网印刷金电极的制备及预处理，具体方法如下：
[0014]
(1)将裁剪的聚酯基片(pet膜)板用无水乙醇擦拭干净并干燥，固定于丝网印刷机上，先印刷导电银层，120℃固化40min；随后印刷绝缘油墨层，80℃固化10min；在印刷好的pet板上适当位置固定一层带有直径为3mm的小孔的塑料掩膜，使蒸镀的金颗粒固定在这个位置；进行真空蒸镀时的电流强度为40ma，蒸镀时间为300s，得到丝网印刷金电极；
[0015]
(2)将上述制备的丝网印刷金电极(spge)用循环伏安法进行预处理，在0.5m h2so4溶液中cv扫描15圈，电压范围为-0.2v～1.5v，扫描速率为0.1v/s，经处理后的电极干燥后用超纯水洗涤后干燥待用。
[0016]
作为改进，所述的pt-cu-mwcnts-ssdna2复合标记物，制备方法如下：
[0017]
(1)pt-cu-mwcnts的合成；
[0018]
(2)称取0.4mg pt-cu-mwcnts，加入200μl、4μm活化后的ssdna2溶液，8℃及1300rpm条件下涡流孵育过夜；
[0019]
(3)之后用pbs缓冲液清洗3次，出去未结合的ssdna2，再加入50μl、5mm mch遮蔽非特异性结合位点，继续孵育1h后，用pbs缓冲液(ph＝7.4,10mm)离心清洗4次，产物分散在200μl pbs缓冲液(ph＝7.4，10mm)中，于4℃保存备用。
[0020]
作为改进，所述的pt-cu-mwcnts金属复合材料，制备方法如下：
[0021]
a.取50mg商品化的酸化后的多壁碳纳米管(mwcnts)，超声溶于100ml超纯水中；
[0022]
b.向该分散液中添加2.9ml 0.1m cu(no3)2·
3h2o和4.36ml 0.0243mh2ptcl6·
6h2o，磁力搅拌20min；
[0023]
c.向反应混合物中逐滴加入25ml、0.79m新鲜制备的硼氢化钠溶液，并在室温下搅拌数小时；
[0024]
d.将沉淀物离心并用蒸馏水洗涤数次，以去除未反应的原料，所得产品在60℃下真空干燥。
[0025]
作为改进，所述的步骤(2)中的ssdna1的碱基序列为：5
′‑
cccaggttctc-(ch2)
6-sh-3
′
。
[0026]
作为改进，所述的步骤(4)中的ssdna2的碱基序列为：5-agagaacctgggggagtattgcggaggaaggtt-(ch2)
6-sh-3
′
。
[0027]
本发明还提供一种检测腺苷的电化学适配体传感器检测腺苷的方法，其包括以下步骤：在所述电化学适配体传感器的制备方法的步骤(4)中修饰电极上在滴加一定浓度的目标物腺苷，37℃孵育45min后，用超纯水洗涤，晾干，将此电极作为工作电极，ag/agcl为参比电极和铂丝对电极构成三电极体系，在pbs缓冲溶液中采用计时电流法测试对加入腺苷前后传感器对h2o2的电催化信号大小，得出所述电化学适体传感器对腺苷的标准曲线。
[0028]
采用以上结构后，本发明具有以下优点：
[0029]
1.本发明提供了一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器，具有检测范围宽、成本低、操作简便以及现场适用性等优势，对于生命体中腺苷的检测以及相关生理疾病的即时诊断有一定的实际应用前景。为生命体缺氧标志物以及相关生理疾病的检测提供了新的思路与方法。
[0030]
2.本发明采用的基底电极为丝网印刷金电极，制备过程简单且可实现大批量生产，同时可制备为一次性电极，在现场检测领域极具适用性。
[0031]
3.本发明采用使用selex系统从随机序列核酸库中选择的寡核苷酸(dna或rna)即适配体代替传统抗体与待测物结合，具有体积小、化学简单、易于储存、特异性结合能力强、易于进一步固定化等显著优势。
[0032]
4.本发明采用一锅法合成了pt-cu-mwcnts金属复合材料，并将其作为电化学适配体传感器的标记物，pt、cu纳米粒子不仅可以固定适配体，与大表面积、高导电性的多壁碳纳米管复合后更能放大催化h2o2的电化学信号，在一定程度上提高了检测灵敏度。
附图说明：
[0033]
图1是本发明制备流程示意图。
[0034]
图2是制备的pt-cu-mwcnts的表征图，包括sem、tem、xrd图谱。
[0035]
图3制备的电化学适配体传感器修饰步骤的循环伏安图和电化学阻抗谱。
[0036]
图4是加入目标物腺苷前后传感器对h2o2的计时电流响应。
[0037]
图5.是制备的电化学适体型传感器对不同浓度腺苷的标准曲线。
具体实施方式：
[0038]
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明。
[0039]
结合附图1，一种用于检测缺氧标志物—腺苷的电化学适配体传感器，包括采用丝网印刷技术制备的金电极，在其表面滴加有捕获适配体(ssdna1)，再加入mch封闭未结合的活性位点，然后滴加腺苷适配体(ssdna2)以及pt-cu-mwcnts催化材料构成的复合物，在电极表面与ssdna1配对形成双链结构。
[0040]
一种用于检测缺氧标志物—腺苷的电化学适配体传感器，其制备步骤如下：
[0041]
(1)丝网印刷金电极的制备及预处理；
[0042]
(2)在处理后的金电极表面滴加10μl 4μm的ssdna1，并在4℃条件下孵育4h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的ssdna1；
[0043]
(3)滴加10μl 5mm 6-巯基己醇(mch)屏蔽可能的非特异性结合位点，37℃条件下封闭2h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的mch；
[0044]
(4)在滴加10μl pt-cu-mwcnts-ssdna2的复合物，4℃条件下孵育12h后，用超纯水对电极进行彻底的清洗，电化学适配体传感器制备完成。
[0045]
结合附图2，所述的丝网印刷金电极的制备以及预处理方法如下：
[0046]
(1)将裁剪的pet板用无水乙醇擦拭干净并干燥，固定于丝网印刷机上，先印刷导电银层，120℃固化40min；随后印刷绝缘油墨层，80℃固化10min。在印刷好的pet板上适当位置固定一层带有直径为3mm的小孔塑料掩膜，使蒸镀的金颗粒固定在这个位置。进行真空蒸镀时的电流强度为40ma，蒸镀时间为300s；蒸镀完成后，在100℃下老化1h，得到丝网印刷金膜电极。
[0047]
(2)将上述制备的spge用循环伏安法(cyclic voltammetry,cv)进行预处理，在0.5m h2so4溶液中cv扫描15圈，电压范围为-0.2v-1.5v，扫描速率为0.1v/s，经处理后的电极干燥后用超纯水洗涤后干燥待用。
[0048]
所述的pt-cu-mwcnts金属复合材料，具体制备方法如下：
[0049]
a.取50mg商品化的酸化后的多壁碳纳米管(mwcnts)，超声溶于100ml超纯水中；
[0050]
b.该分散液中添加2.9ml 0.1m cu(no3)2·
3h2o和4.36ml 0.0243mh2ptcl6·
6h2o，室温搅拌20min；
[0051]
c.向反应混合物中逐滴添加25ml 0.79m新鲜制备的硼氢化钠溶液，并在室温下搅拌数小时；
[0052]
d.将沉淀物离心并用蒸馏水洗涤数次，以去除未反应的原料，所得产品在60℃下真空干燥。
[0053]
所述的10μl pt-cu-mwcnts-ssdna2复合标记物，其制备方法如下：
[0054]
a.称取0.4mg pt-cu-mwcnts，加入200μl、4μm的ssdna2溶液，8℃及1300rpm条件下涡流孵育过夜；
[0055]
b.之后用pbs缓冲液清洗3次，出去未结合的ssdna2，再加入50μl、5mm mch遮蔽非特异性结合位点，继续孵育1h；
[0056]
c.用pbs缓冲液(ph＝7.4,10mm)离心清洗4次，产物分散在200μlpbs缓冲液(ph＝7.4，10mm)中，于4℃保存备用。
[0057]
一种检测腺苷的电化学适配体传感器检测腺苷的方法，包括以下步骤：在(4)中修饰电极上在滴加一定浓度的目标物腺苷，37℃孵育45min后，用超纯水洗涤，晾干，将此电极作为工作电极，ag/agcl为参比电极和铂丝对电极构成三电极体系，在pbs缓冲溶液中采用计时电流法测试对加入腺苷前后传感器对h2o2的电催化信号大小，得出所述电化学适体传感器对腺苷的标准曲线。
[0058]
实验例一
[0059]
(1)pt-cu-mwcnt-ssdna2复合标记物的合成
[0060]
取50mg商品化的酸化后的多壁碳纳米管(mwcnts)，超声溶于100ml超纯水中。该分
散液中添加2.9ml 0.1m cu(no3)2·
3h2o和4.36ml0.0243m h2ptcl6
·
6h2o。搅拌20min后，向反应混合物中逐滴添加25ml0.79m硼氢化钠，并在室温下搅拌数小时。将沉淀物过滤并用蒸馏水洗涤数次，以去除未反应的内容物，所得产品在60℃下干燥。称取0.4mg pt-cu-mwcnts，加入200μl、4μm的ssdna2溶液，8℃及1300rpm条件下涡流孵育过夜，之后加入50μl、5mm mch遮蔽非特异性结合位点，继续孵育1h后，用pbs缓冲液(ph＝7.4,10mm)离心清洗4次，产物分散在200μl pbs缓冲液中，于4℃保存备用。
[0061]
制备得到的产品的表征图见图2。xrd图谱中分别出现了mwcnts
[0062]
(002)、pt(111)、cu(110)、cu(200)、cu(220)的晶面吸收，表明了pt、cu粒子在mwcnts上的成功负载。sem、tem图谱结果也显示pt、cu粒子良好的负载碳纳米管上，表明材料的成功合成。
[0063]
(2)spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2修饰电极的制备
[0064]
在处理后的金电极表面滴加10μl 4μm的ssdna1，并在4℃条件下孵育4h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的ssdna1。再滴加10μl6-巯基己醇(mch)屏蔽可能的非特异性结合位点，37℃条件下封闭2h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的mch。再在滴加10μlpt-cu-mwcnt-ssdna2的复合物，4℃条件下孵育12h后，用超纯水对电极进行彻底的清洗，即可得spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2修饰电极。
[0065]
(3)传感器修饰步骤的测定
[0066]
使用循环伏安法以及电化学阻抗法对实验例(2)中的spge、spge/ssdna1、spge/ssdna1/mch、spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2以及加入目标物后的spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2/ad修饰电极进行电化学测试，测试溶液为5mm[fe(cn)6]
3-/[fe(cn)6]
4-溶液，测试结果如图3所示。在spge上组装ssdna1后，由于适配体层的形成，氧化还原峰值电流(曲线b)相对于裸spge(曲线a)有所降低。同样，由于mch对电子转移的严重抑制，随着mch(曲线c)、标记材料(pt-cu-mwcnts-ssdna2)涂覆在电极表面上，峰值电流持续降低。然而，在加入目标物腺苷后，氧化还原峰值电流增加(曲线e)，这是由于腺苷与ssdna2形成复合物从电极表面释放所致。
[0067]
阻抗值可以由eis频谱高频中半圆的直径表示。直径越大，阻抗值越大，相应的电导率越差。与曲线a的阻抗值相比，spge/ssdna1修饰电极(曲线b)、spge/ssdna1/mch修饰电极(曲线c)的阻抗值有所增加，表明ssdna1、mch在电极表面的成功连接。spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2修饰电极(曲线d)的阻抗值略有增大，表明标记材料(pt-cu-mwcnts-ssdna2)的成功连接。加入ad后，腺苷与ssdna2形成复合物从电极表面释放，使得修饰电极的阻抗值(曲线e)有所减小。电化学阻抗谱的结果与循环伏安图的结果一致，表明修饰电极的传感器已成功制备。
[0068]
(4)目标物腺苷的测定
[0069]
在(2)中修饰电极上在滴加一定浓度的目标物腺苷，37℃孵育45min后，用超纯水洗涤，晾干。将此电极工作电极，ag/agcl为参比电极和铂丝对电极构成三电极体系，在pbs缓冲溶液中采用计时电流法对加入腺苷前后的传感器进行催化h2o2的电化学测试，i-t响应的测试结果如图4所示。
[0070]
结果显示在加入100nm的腺苷后，制备的传感器对h2o2的i-t催化响应有显著的降低，表明在加入目标物腺苷后，由于腺苷-腺苷适配体的结合要稳定与腺苷适配体-捕获适
配体，电极表面的催化材料从电极释放从而导致传感器对h2o2的催化减小，实验结果与预期结果一致，实现了对腺苷的定量检测。
[0071]
(5)标准曲线的测定
[0072]
配制浓度分别为10nm、20nm、50nm、100nm、500nm、1μm的腺苷标准溶液，4℃保存备用。
[0073]
以spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2修饰电极为工作电极，该工作电极先分别与不同浓度的腺苷标准溶液在37℃下孵育45分钟，形成spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2/ad修饰电极，然后该工作电极与铂丝电极(对电极)和ag/agcl(参比电极)搭配构建三电极体系，以pbs溶液作为检测液，构建电化学适配体型传感器。
[0074]
以计时电流法得到电流信号。其原理是：在spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2修饰电极表面孵育ad，ad与ssdna2更强的特异性结合使得pt-cu-mwcnts-ssdna2/ad复合物从电极表面释放，使得传感器对h2o2的催化电流信号变小，而且电流信号的降低强度在一定范围内与腺苷浓度成正比。
[0075]
在37℃条件下，利用构建的传感器检测不同浓度的腺苷获得电流信号。以spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2修饰电极的电流信号值为空白值，以spge/ssdna1/mch/pt-cu-mwcnts-ssdna2/ad修饰电极的电流信号值为检测值，计算空白值与检测值的差值(δi)，以腺苷浓度的对数为横坐标，以该电流差值为纵坐标，作图得到标准曲线(见图5)。
[0076]
由标准曲线可知，在10nm至1μm的腺苷浓度范围内，所制备的传感器反应出电流信号的差值与腺苷浓度的对数成正比，其线性回归方程为δi＝19.07lgc
ad-9.25(r2＝0.9994)。对空白值进行多次测定，计算空白值的相对标准偏差，根据公式：检测限＝3
×
空白的标准偏差/标准曲线的斜率，计算得出该电化学免疫传感器的检测限为0.4nm(s/n＝3)。
[0077]
(6)实际样的测定
[0078]
通过使用标准加入法测量人健康血清样本中的腺苷浓度来检验所制备的电化学适配传感器的适用性。此前有报道称，正常人血液中的腺苷浓度在50nm到100nm之间。实验测得加入血清样品后，其δi为26.25μa(n＝3)，带入线性回归方程得其腺苷浓度约为72.6nm。
[0079]
此外，为了评估所制备的传感器在实际样品中检测腺苷的准确性，我们基于加标回收法，将不同浓度的腺苷(20nm、100nm)加标到稀释10倍后的健康人血清样品中。之后使用所构建的电化学适体传感器分别与上述样品进行孵育，彻底清洗后使用计时电流法进行测试。结果如表1所示，对于不同浓度样品的回收率位于98.4％～99.85％范围内，同时相对标准偏差均低于3％，以上结果表明所构建的夹心型腺苷电化学适体传感器在用于测定血清样本中的腺苷具有可行性。
[0080]
表1制备的腺苷电化学适体传感器在实际样品中的分析
[0081][0082]
以上对本发明及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性，附图中所示的也只是本发明的实施方式之一，实际的结构并不局限于此。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器，其特征在于，包括采用丝网印刷技术制备的金电极，在其表面连接有捕获适配体(ssdna1)，再加入6-巯基己醇封闭未结合的活性位点，然后滴加腺苷适配体(ssdna2)与催化材料(pt-cu-mwcnts)构成的复合物，从而在电极表面与ssdna1通过碱基互补配对形成稳定的双链结构，通过加入待测物腺苷后，由于腺苷-腺苷适配体的结合要稳定与腺苷适配体-捕获适配体，使得电极表面的催化材料从电极释放，从而引起所制备的传感器对过氧化氢的催化响应变化来实现对腺苷定量检测目的。2.根据权利要求1所述的用于检测腺苷的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)丝网印刷金电极的制备及预处理；(2)在处理后的金电极表面滴加捕获适配体ssdna1，并在4℃条件下孵育4h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的ssdna1；(3)在步骤(2)所获得的电极表面滴加10μl、5mm6-巯基己醇(mch)屏蔽可能的非特异性结合位点，37℃条件下封闭2h后，用超纯水对电极进行清洗，除去多余的mch；(4)在步骤(3)所获得的电极表面滴加10μlpt-cu-mwcnts-ssdna2的复合物，4℃条件下孵育12h后，用超纯水对电极进行彻底的清洗，电化学适配体传感器制备完成。3.根据权利要求2所述的用于检测腺苷的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述的丝网印刷金电极的制备及预处理，具体方法如下：(1)将裁剪的pet板用无水乙醇擦拭干净并干燥，固定于丝网印刷机上，先印刷导电银层，120℃固化40min；随后印刷绝缘油墨层，80℃固化10min；在印刷好的pet板上适当位置固定一层带有直径为3mm的小孔的塑料掩膜，使蒸镀的金颗粒固定在这个位置；进行真空蒸镀时的电流强度为40ma，蒸镀时间为300s，得到丝网印刷金电极；(2)将上述制备的spge用循环伏安法进行预处理，在0.5mh2so4溶液中cv扫描15圈，电压范围为-0.2v～1.5v，扫描速率为0.1v/s，经处理后的电极干燥后用超纯水洗涤后干燥待用。4.根据权利要求2所述的用于检测腺苷的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述的pt-cu-mwcnts-ssdna2复合标记物，具体制备方法如下：(1)pt-cu-mwcnts的合成；(2)称取0.4mgpt-cu-mwcnts，加入200μl、4μm活化后的ssdna2溶液，8℃及1300rpm条件下涡流孵育过夜；(3)之后用pbs缓冲液清洗3次，出去未结合的ssdna2，再加入50μl、5mmmch遮蔽非特异性结合位点，继续孵育1h后，用pbs缓冲液(ph＝7.4,10mm)离心清洗4次，产物分散在200μlpbs缓冲液(ph＝7.4，10mm)中，并于4℃保存备用。5.根据权利要求4所述的用于检测腺苷的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述的pt-cu-mwcnts金属复合材料，具体制备方法如下：a.取50mg商品化的酸化后的多壁碳纳米管(mwcnts)，超声溶于100ml超纯水中；b.向该分散液中添加2.9ml、0.1mcu(no3)2·
3h2o和4.36ml、0.0243mh2ptcl6·
6h2o，磁力搅拌20min；c.向反应混合物中逐滴加入25ml0.79m新鲜制备的硼氢化钠溶液，室温搅拌数小时；d.将沉淀物离心并用蒸馏水洗涤数次，以去除未反应的原料，所得产品在60℃下真空
干燥。6.根据权利要求2所述的检测腺苷的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述的ssdna1序列为5
′‑
cccaggttctc-(ch2)
6-sh-3
′
，ssdna2序列为5
′‑
agagaacctgggggagtattgcggaggaaggtt-(ch2)
6-sh-3
′
。7.一种权利要求1所述的一种检测腺苷的电化学适配体传感器或权利要求1-6任一项所述用于检测腺苷的电化学适配体传感器的制备方法制备的电化学适配体传感器的应用，其特征在于，包括以下步骤：在所述权利要求2的步骤(4)中修饰电极上再滴加一定浓度的目标物腺苷，37℃孵育45min后，用超纯水洗涤，晾干，将此电极作为工作电极，ag/agcl为参比电极和铂丝对电极构成三电极体系，在pbs缓冲溶液中采用计时电流法对加入腺苷前后传感器对h2o2的催化电信号变化大小来实现对腺苷的定量检测。

技术总结
本发明提供了一种用于检测腺苷的电化学适配体传感器及其制备方法和应用，用于检测腺苷的电化学适配体传感器包括采用丝网印刷技术制备的金电极，在其表面滴加有捕获适配体(ssDNA1)，再加入6-巯基己醇(MCH)封闭未结合的活性位点，接着滴加能够特异性结合腺苷的腺苷适配体(ssDNA2)与催化材料(Pt-Cu-MWCNTs)构成的复合物，由于腺苷—ssDNA2的结合要更稳定于ssDNA1—ssDNA2，双链结构被破坏，催化材料随着腺苷—腺苷适配体复合物从电极表面释放从而引起传感器对过氧化氢的催化响应变化来实现定量检测腺苷的目的。本发明电化学适配体传感器具有宽检测范围、低检测限、良好的现场实用性等优点。场实用性等优点。场实用性等优点。


技术研发人员：赵红莉 曹诗达 蓝闽波 陈开茶 薛亚波 张硕
受保护的技术使用者：上海前瞻创新研究院有限公司
技术研发日：2022.10.13
技术公布日：2023/7/31