一种喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物和应用与流程

1.本发明属于化药领域，具体涉及一种喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。


背景技术：

2.肿瘤是威胁人类健康的最主要疾病之一。研究表明，肿瘤的发生与发展不仅与基因突变和缺失有关，也与表观遗传调控的失衡有关。表观遗传修饰是指在dna序列不发生改变的情况下，基因表达发生的可遗传的改变，主要包括dna甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码rna的调控作用等。
3.dna甲基化是最早发现的，也是最重要的表观遗传修饰之一，参与调控基因表达，在多种生物学过程中发挥重要作用，如基因组稳定性、x染色体失活、基因印迹等。dna甲基化是在dna甲基转移酶（dnmts）催化下，以s-腺苷甲硫氨酸（sam）为甲基供体，将甲基基团转移到胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸（cpg）中的胞嘧啶5位碳原子上。dnmts主要包括dnmt1、dnmt2、dnmt3a、dnmt3b和dnmt3l五个成员。dnmt1含量最丰富，因其在dna复制时位于dna复制叉并对半甲基化的dna双链具高亲和性，故长久以来，dnmt1被认为是维持型dna甲基转移酶。此外，大量证据表明，dnmt1在dna从头甲基化中同样起到非常重要的作用。dnmt1还具有调节细胞周期和调控肿瘤抑制基因表达的能力，且在肿瘤的形成、进展、转移及不良预后等方面均与dnmt1表达水平有一定的相关性。
4.越来越多的实体肿瘤研究已将dnmt1确定为靶点，如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、肾癌、视网膜母细胞瘤、胶质瘤或弥漫性大b细胞淋巴瘤。异常的dna超甲基化也与白血病发生相关，急性髓性白血病（aml）和骨髓增生异常综合征（mds）均发现dnmt1过度表达。因此，靶向dnmt1是一种很有前途的aml和mds治疗方法。
5.美国食品和药物管理局（fda）目前已批准核苷类抑制剂阿扎胞苷和地西他滨治疗用于治疗mds和aml。但是核苷类抑制剂的高毒性、不稳定性等缺点限制了它们的临床应用；而非核苷类抑制剂大多数存在活性弱、选择性差等问题，目前没有一款非核苷类小分子进入临床研究阶段。因此，发现高活性、低毒性和确定选择性的dnmt1抑制剂不仅有助于dnmt1的功能研究，还对抗肿瘤药物研发具有重要意义。


技术实现要素：

6.本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物和应用，具体采用以下的技术方案：一种喹唑啉类化合物，其结构式如式i或式ii所示：式i，式ii，其中，式i和式ii中，r3选自
芳基、取代芳基、杂芳基、取代杂芳基、环状非芳香基团及取代环状非芳香基团中的任意一种；r4选自h、烷烃、芳基、环状及取代环状结构中的任意一种；式i中，x为n，r1、r2分别独立取自h、烷烃、环烷烃、取代环烷烃、芳基、取代芳基、烷基酰胺、芳基酰胺、环状及取代环状结构中的任意一种；式ii中，x为o或s，r1取自h、烷烃、芳基、取代芳基中的任意一种。
7.本发明的发明人在大量研究中发现，上述喹唑啉类化合物或其在药学上可接受的盐具有高效选择性抑制dnmt1蛋白的效果能够应用在制备治疗和/或预防癌药物中，可以作为治疗癌症的药物组合物的活性成分，该药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，上述药物组合物的剂型为药学上可接受的任一剂型，还可以应用在作为靶向dnmt1抑制剂中。
8.上述癌症包括：乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、肾癌、视网膜母细胞瘤、胶质瘤或弥漫性大b细胞淋巴瘤、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征或其他与dna甲基转移酶1（dnmt1）异常相关的疾病。优选用于骨髓增生异常综合征或其他与dna甲基转移酶1（dnmt1）异常相关的疾病的治疗。
9.作为进一步优选的实施方式，上述喹唑啉类化合物选自以下化合物1-12中的任意一种：。
10.作为进一步优选的实施方式，上述喹唑啉类化合物选自以下化合物中的任意一种：
、。
11.本发明的化合物1-12具有高效选择性抑制dnmt1蛋白酶活的效果，对两个白血病细胞（kasumi-1和skno-1）具有一定增殖抑制作用，且活性优于5-aza，尤其是上述两种化合物活性更优，有望缓解现有药物的毒副作用。
12.本发明还提供了一种上述喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其制备路线为路线一或路线二：路线一：；路线二：；其中，路线中原料a和不同原料在碱和溶剂存在下，合适温度下反应生成b、e系列中间体；再由得到的中间体b、e和不同原料如硼酸类化合物或硼酸酯类化合物在碱和催化剂存在下，在溶剂中高温条件下生成d、f系列中间体；最后由间体c、f和不同原料如醇和碱在溶剂中高温条件下生成d、g系列产物。
13.上述制备路线中base（碱）取自tea、dipea、dabco、dbu、k3po4、k2co3、cs2co3、ko
t
bu、na2co3中的一种；cat.（催化剂）取自pd2(dba)3、pd(oac)2、pd(pph3)4、pd(pph3)2cl2、pd(dppf)cl2中的一种；sol（溶剂）取自dioxane、h2o、thf、dmf、dmso、dcm、mecn、toluene中的一种或两种。
14.本发明还提供了一种药物组合物，药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，上述赋形剂包括碳水化合物、聚合物、脂质或矿物中的至少一种。
15.本发明的有益效果为：本发明制备过程简单易行，制备得到的喹唑啉类化合物或其在药学上可接受的盐具有高效选择性抑制dnmt1蛋白的效果，能够应用在制备治疗和/或预防癌药物中，可以作为治疗癌症的药物组合物的活性成分，还可以应用在作为靶向dnmt1抑制剂中。
具体实施方式
16.以下将结合实施例对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本发明的目的、方案和效果。
17.实施例1
喹唑啉类化合物的制备（1）化合物1的制备：化合物1的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物（1-1）的制备：化合物（1-1）结构如下：；将（1-甲基-4-哌啶-）甲胺（266 mg, 2.07 mmol）溶于thf（3 ml）中，加6滴三乙胺（tea）室温搅拌10分钟，随后将2，4-二氯-7-氟喹唑啉（300 mg，1.38 mmol）溶于thf（5 ml）中，将所得溶液滴加至上述体系，室温搅拌4 h，反应完毕后，浓缩反应液，用硅胶柱色谱层析法（dcm : meoh = 20 : 1至10 : 1）纯化，得到化合物（1-1）（白色固体, 345 mg, 81.2％）。
18.化合物（1-1）的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, dmso-d6)δ 9.14 (t,j= 5.8 hz, 1h), 8.51 (dd,j= 9.2, 5.9 hz, 1h), 7.45(td,j= 8.8, 2.6 hz, 1h), 7.39 (dd,j= 10.1, 2.6 hz, 1h), 3.42(t,j= 6.4 hz, 2h), 3.29 (d,j= 12.0 hz, 2h), 2.81 (t,j= 12.3 hz, 2h), 2.63 (s, 3h), 1.98
ꢀ–ꢀ
1.93 (m, 1h), 1.86 (d,j= 13.8 hz,2h), 1.52 (q,j= 11.0 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, dmso-d6)δ 165.0 (d,j
f-c
= 250.7 hz), 161.0, 158.2, 152.3 (d,j
f-c
= 13.3 hz), 126.6 (d,j
f-c
= 10.9 hz), 115.2 (d,j
f-c
= 24.1 hz), 111.0 (d,j
f-c
= 21.6 hz), 110.7, 53., 45.6,43.9, 33.1, 28.0.
19
f nmr (376 mhz, dmso-d6) δ-105.1. hrms (esi) calculated for c
15h19
clfn
4+
[m+h]
+
:309.1277, found: 309.1279。
[0019]
步骤2：化合物（1-2）的制备：化合物（1-2）结构如下：；将化合物（1-1）（200 mg，0.65 mmol）、苯硼酸（181 mg，1.48 mmol）、碳酸钾（268 mg，1.94 mmol）置于干燥反应瓶中，氩气换气三次，随后快速开盖加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯（pdcl2(dppf)）（47 mg，0.065 mmol），再换气三次，最后注入4 ml 1,4-二氧六环（dioxane）和1ml 水，90 ℃反应4 h，dcm : meoh = 9 : 1监测。反应完毕，过滤掉不溶
物，乙酸乙酯萃取三次（10 ml
ꢀ×ꢀ
3），中性三氧化二铝dcm : meoh = 100 : 1柱层析，得到化合物（1-2）（棕色固体，200 mg，88.2％）。
[0020]
化合物（1-2）的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 8.52
ꢀ–ꢀ
8.46 (m, 2h), 8.31 (dd,j= 9.1, 5.8 hz, 1h), 7.67
ꢀ–ꢀ
7.63 (m,1h), 7.48 (d,j= 2.8 hz, 1h), 7.47
ꢀ–ꢀ
7.42 (m, 3h), 7.14 (td,j=8.6, 2.7 hz, 1h), 3.69 (t,j= 6.3 hz, 2h), 3.41 (d,j= 11.5 hz,2h), 2.67 (s, 3h), 2.62 (d,j= 9.4 hz, 2h), 2.32
ꢀ–ꢀ
2.18 (m, 1h), 2.10(d,j= 13.6 hz, 2h), 2.02
ꢀ–ꢀ
1.82 (m, 2h).
19
f nmr (376 mhz,cdcl3) δ
ꢀ‑
108.0. hrms (esi) calculated for c
21h24
fn
4+
[m+h]
+
: 351.1980, found: 351.1981。
[0021]
步骤3：化合物1的制备将化合物3-(4-吗啉)-1-丙醇（166 mg，1.14 mmol）溶于1.5 ml n-甲基吡咯烷酮（nmp）中，于0 ℃下加入氢化钠（46 mg，1.14 mmol）搅拌1 h，之后将化合物（1-2）（100 mg，0.29 mmol）溶于1.5 ml nmp中，滴加入上述反应体系，随后将反应置于120 ℃油浴锅中，反应过夜，tlc监测反应（dcm : meoh = 9 : 1），待反应完毕后，反应体系加入10 ml水淬灭，用饱和氯化钠溶液（15 ml）洗，乙酸乙酯（10 ml
ꢀ×ꢀ
3）萃取，有机相干燥浓缩，用中性氧化铝柱色谱层析法（dcm : meoh = 80 : 1）纯化，得到化合物1（淡黄色固体70 mg，51.4％）。
[0022]
化合物1的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 8.09
–
7.70(m, 3h), 7.45 (d,j= 8.1 hz, 1h), 7.41 (dd,j= 8.8, 2.5 hz,1h), 7.35
–
7.28 (m, 1h), 6.80 (d,j= 8.7 hz, 1h), 5.53 (s, 2h), 3.85 (s,3h), 3.80 (s, 2h), 3.47 (s, 2h), 2.56
–
2.44 (m, 4h), 2.32 (s, 3h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 169.8 , 156.1, 146.8,135.1, 132.9, 132.6, 131.9, 127.6, 125.5, 124.9, 120.4, 112.8, 112.5, 55.8,55.1, 54.6, 48.5, 47.6, 46.0, 42.0.hrms (esi) calculated forc
22h24
brn5nao
2+
:492.1011, found492.1013。
[0023]
（2）化合物2的制备：化合物2的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物（2-1）的制备：化合物（2-1）结构如下：；具体制备方法为：与化合物（1-2）的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为4-甲氧基苯硼酸，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸。
[0024]
化合物（2-1）的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz,cdcl3) δ 8.50
ꢀ–ꢀ
8.44 (m,2h), 7.69 (dd,j= 9.0, 5.7 hz, 1h), 7.46 (dd,j= 10.2, 2.6 hz,1h), 7.06 (td,j= 8.5, 2.6 hz, 1h), 7.01
ꢀ–ꢀ
6.94 (m, 2h), 5.97 (t,j= 5.9 hz, 1h), 3.86 (s, 3h), 3.65 (d,j= 5.9 hz, 2h), 2.89 (d,j= 13.1 hz, 2h), 2.27 (s, 3h), 1.94 (t,j= 11.8 hz, 2h), 1.79 (d,j= 9.6 hz,21h), 1.77
ꢀ–ꢀ
1.70 (m, 1h), 1.47 (td,j= 12.4, 11.8, 4.1 hz,2h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ165.2 (d,j
f-c
= 251.8 hz), 161.7, 161.4, 159.5, 152.8 (d,j
f-c
= 13.4 hz), 131.4, 130.2, 123.1 (d,j
f-c
=10.3 hz), 114.4 (d,j
f-c
= 25.0 hz), 113.7, 112.6 (d,j
f-c
= 20.2 hz), 110.5, 55.5, 55.4, 46.6, 46.3, 35.4, 30.2.
19
fnmr (376 mhz, cdcl3) δ
ꢀ‑
106.5. hrms (esi)calculated for c
22h25
fn4o
+
[m+h]
+
:381.2085, found: 381.2086.步骤2：化合物2的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为化合物（2-1），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0025]
化合物2的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 8.46 (d,j= 8.6 hz, 2h), 7.75 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.23 (d,j= 2.5 hz, 1h), 7.07
ꢀ–ꢀ
6.89 (m, 3h), 6.30 (s, 1h), 4.15 (t,j= 6.3 hz,2h), 3.87 (s, 3h), 3.73 (t,j= 4.8 hz, 4h), 3.69 (t,j= 6.2 hz,2h), 3.21 (d,j= 11.4 hz, 2h), 2.54 (t,j= 7.2 hz, 2h), 2.51(s, 3h), 2.47 (m, 4h), 2.35 (t,j= 11.8 hz, 2h), 2.01 (dd,j=13.9, 7.0 hz, 4h), 1.95 (m, 1h), 1.77 (q,j= 14.8, 13.1 hz, 2h).
13
cnmr (100 mhz, cdcl3) δ 162.6, 161.6, 160.7, 159.5, 152.7, 131.6,130.0, 122.6, 117.3, 113.7, 107.9, 107.8, 67.1, 66.6, 55.6, 55.5, 55.2, 53.9,45.1, 34.3, 29.8, 28.8, 26.4. hrms (esi) calculated forc
23h24
fn4o
3+
[m+h]
+
:423.1826, found: 423.1828.（3）化合物3的制备：化合物3的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物（3-1）的制备：化合物（3-1）结构如下：；具体制备方法为：与化合物（1-2）的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为
4-三氟甲基苯硼酸，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸。
[0026]
化合物（3-1）的核磁测试结果为：1hnmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.63 (d,j= 8.1 hz, 2h), 7.72 (dd,j= 8.6, 4.2 hz, 3h), 7.53 (dd,j= 10.0, 2.6 hz, 1h), 7.18 (td,j= 8.5, 2.6 hz, 1h), 5.89 (d,j= 6.0 hz, 1h), 3.72 (t,j= 6.0hz, 2h), 2.91 (d,j= 11.2 hz, 2h), 2.29 (s, 3h), 1.96 (t,j=11.4 hz, 2h), 1.84 (d,j= 15.1 hz, 2h), 1.81
ꢀ–ꢀ
1.75 (m, 1h), 1.51 (t,j= 10.1 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3)δ 165.3 (d,j
f-c
= 252.8 hz), 160.3,159.8, 152.6 (d,j
f-c
= 13.7 hz), 142.2, 132.1, 128.8, 125.25 (q,j
f-c
= 14.4 hz), 123.1, 123.0,115.5 (d,j
f-c
= 24.9 hz), 113.3 (d,j
f-c
= 20.6 hz), 110.8, 55.6,46.9, 46.5, 35.6, 30.4.
19
f nmr (376 mhz, cdcl3) δ
ꢀ‑
62.5,
ꢀ‑
105.7. hrms (esi) calculated forc
22h23
f4n
4+
[m+h]
+
:419.1853, found: 419.1851。
[0027]
步骤2：化合物3的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为化合物（3-1），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0028]
化合物3的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 8.60 (d,j= 8.1 hz, 2h), 7.99 (d,j= 9.1 hz, 1h), 7.72 (d,j= 8.2 hz, 2h), 7.23 (d,j= 2.6 hz, 1h), 7.05 (dd,j= 9.0, 2.5hz, 1h), 6.96 (d,j= 6.1 hz, 1h), 4.15 (t,j= 6.4 hz, 2h), 3.72(q,j= 6.0, 5.3 hz, 6h), 3.39 (d,j= 11.6 hz, 2h), 2.65 (s,3h), 2.54 (m, 4h), 2.48 (t,j= 4.7 hz, 4h), 2.15 (m,1h), 2.10
ꢀ–ꢀ
1.99(m, 4h), 1.95 (t,j= 14.1 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3)δ 162.7, 159.8, 159.6, 152.7, 142.7, 131.7, 131.4, 128.6, 125.3, 123.3, 118.2,108.4, 108.2, 67.1, 66.6, 55.5, 55.1, 53.8, 44.5, 33.5, 29.8, 28.1, 26.3.
19
fnmr (376 mhz, cdcl3) δ
ꢀ‑
62.53. hrms (esi) calculated for c
29h37
f3n5o
2+
[m+h]
+
: 544.2894, found:544.2896。
[0029]
（4）化合物4的制备：化合物4的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物（4-1）的制备：化合物（4-1）结构如下：；
具体制备方法为：与化合物（1-2）的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为4-氰基苯硼酸，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸。
[0030]
化合物（4-1）的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 8.58 (d,j= 8.0 hz,2h), 8.54 (t,j= 5.1 hz, 1h), 8.46
ꢀ–ꢀ
8.34 (m, 1h), 7.96 (d,j=8.0 hz, 2h), 7.50 (d,j= 9.6 hz, 1h), 7.42(t,j= 9.5 hz, 1h), 3.57 (t,j= 5.8 hz,2h), 2.75 (d,j=10.2 hz, 2h), 2.12 (s, 3h), 1.81 (t,j= 10.8 hz, 2h), 1.72 (m, 3h),1.30 (q,j= 10.0 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, dmso-d6)δ 164.6 (d,j
f-c
= 250.2 hz), 159.8, 158.7, 151.8 (d,j
f-c
= 12.6 hz), 142.6, 132.4, 128.4, 126.0 (d,j
f-c
= 10.3 hz), 118.9, 115.1 (d,j
f-c
= 23.9 hz), 112.5,111.9 (d,j
f-c
= 20.0 hz), 111.1, 55.1, 46.1, 39.1, 34.9.
19
f nmr (376 mhz, dmso-d6) δ
ꢀ‑
105.4. hrms (esi) calculated for c
25h26
fn
4+
[m+h]
+
: 401.2136, found: 401.2135。
[0031]
步骤2：化合物4的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为化合物（4-1），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0032]
化合物4的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cd3od) δ8.50 (d, j = 8.1 hz, 1h), 8.04 (d, j = 9.0 hz, 1h), 7.99 (d, j = 8.1 hz, 2h),7.25 (d, j = 2.4 hz, 1h), 7.11 (dd, j = 8.9, 2.4 hz, 1h), 4.22 (t, j = 6.1 hz,2h), 3.74 (q, j = 5.1 hz, 6h), 3.43 (d, j = 12.2 hz, 2h), 2.89 (t, j = 12.4 hz,2h), 2.76 (s, 3h), 2.68
ꢀ–ꢀ
2.62 (m, 2h), 2.57 (t, j = 4.7 hz, 4h), 2.19 (m, 1h),2.08 (dd, j = 13.2, 3.8 hz, 4h), 1.65 (q, j = 12.4 hz, 2h).
13
c nmr(100 mhz, cd3o) δ 172.0, 164.2, 161.8, 161.6, 153.5, 143.6, 136.2, 129.5,128.7, 124.8, 118.6, 109.4, 108.4, 67.6, 67.5, 56.6, 55.5, 54.8, 46.3, 44.1,35.0, 29.1, 27.0. hrms (esi) calculated for c29h37n6o+ [m+h]+: 501.2973,found:501.2976。
[0033]
（5）化合物5的制备：化合物5的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物（5-1）的制备：化合物（5-1）结构如下：；
具体制备方法为：与化合物（1-2）的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为1-萘硼酸，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸。
[0034]
化合物（5-1）的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, dmso-d6)δ 8.81 (d,j= 9.3 hz, 1h), 8.75 (t,j= 5.9 hz, 1h), 8.53 (dd,j= 9.1, 6.0 hz, 1h), 8.09 (d,j= 7.1 hz, 1h), 8.03 (d,j= 8.2hz, 1h), 8.01
ꢀ–ꢀ
7.97 (m, 1h), 7.62 (t,j= 7.7 hz, 1h), 7.55 (dq,j= 5.9, 2.8 hz, 2h), 7.47 (ddd,j= 17.6, 8.9, 2.5 hz, 2h), 3.51 (t,j= 6.3 hz, 2h), 3.20 (d,j= 11.5 hz, 2h), 2.64 (t,j= 12.1 hz,2h), 2.54 (s, 3h), 1.98 (q,j= 9.5, 8.6 hz, 1h), 1.85 (d,j=11.7 hz, 2h), 1.53 (t,j= 11.8 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz,dmso-d6) δ 164.6 (d,j
f-c
= 241.9 hz),163.4, 159.5, 151.9 (d,j
f-c
=13.3 hz), 137.0, 133.6, 130.8, 129.6, 128.6, 128.3, 126.4, 126.2, 126.1, 125.7,125.2, 114.8 (d,j
f-c
= 24.2 hz), 111.6 (d,j
f-c
= 20.0 hz), 110.5, 53.3, 45.2, 43.2, 33.2, 27.5.
19
f nmr (376 mhz,dmso-d6)) δ
ꢀ‑
106.6. hrms (esi) calculated for c
25h26
fn
4+
[m+h]
+
: 401.2136, found: 401.2135。
[0035]
步骤2：化合物5的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为化合物（5-1），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0036]
化合物5的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 8.78
ꢀ–ꢀ
8.66 (m, 1h), 8.05 (d,j= 7.2 hz, 1h), 8.00 (d,j= 9.1hz, 1h), 7.89 (t,j= 9.1 hz, 2h), 7.56 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.46(d,j= 7.2 hz, 2h), 7.28 (s, 1h), 7.08 (d,j= 8.7 hz, 1h), 6.87(s, 1h), 4.25
ꢀ–ꢀ
4.06 (t,j= 6.6 hz, 2h), 3.71 (d,j= 4.7 hz,4h), 3.62 (t,j= 6.6 hz, 2h), 3.22 (d,j= 11.3 hz, 2h), 2.55 (m,1h), 2.53 (s, 3h), 2.46 (t,j= 10.0 hz 6h), 2.12
ꢀ–ꢀ
1.88 (m, 6h), 1.79 (q,j= 9.4 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 163.7,162.6, 159.6, 152.6, 138.0, 134.3, 131.5, 129.7, 128.6, 128.5, 126.8, 126.1,125.7, 125.5, 123.1, 118.1, 108.1, 107.8, 67.1, 66.6, 55.6, 54.8, 53.9, 45.8,44.5, 33.6, 28.0, 26.3. hrms (esi) calculated for c
32h40
n5o
2+
[m+h]
+
: 526.3177, found: 526.3176。
[0037]
（6）化合物6的制备：化合物6的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物（6-1）的制备：化合物（6-1）结构如下：
；具体制备方法为：与化合物1-2的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为4-甲基-1-萘硼酸，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸。
[0038]
化合物6-1的核磁测试结果为：1h nmr (400mhz, dmso-d6) δ 8.88
ꢀ–ꢀ
8.80 (m,1h), 8.73 (t,j= 6.0 hz, 1h), 8.52 (dd,j= 9.2, 6.1 hz, 1h),8.14
ꢀ–ꢀ
8.05 (m, 1h), 7.98 (d,j= 7.3 hz, 1h), 7.68
ꢀ–ꢀ
7.55 (m, 2h), 7.54
–ꢀ
7.39 (m, 3h), 3.50 (t,j= 6.4 hz, 2h), 3.24 (d,j= 11.6 hz,2h), 2.72 (s, 3h), 2.68 (m, 2h), 2.57 (s, 3h), 2.00 (m, 1h), 1.85 (d,j= 13.5 hz, 2h), 1.53 (q,j= 12.7 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz,dmso-d6) δ 164.7 (d,j
f-c
= 222.5 hz),163.4, 159.4, 152.0 (d,j
f-c
= 13.2 hz), 135.7, 135.5,132.4, 130.9, 128.3, 127.0, 126.1 (d,j
f-c
= 10.2 hz), 126.0,125.7 (d,j
f-c
= 16.2 hz), 124.3, 115.2, 114.6 (d,j
f-c
= 24.0 hz), 111.6 (d,j
f-c
= 20.0 hz), 110.5,53.2, 45.2, 42.9, 33.0, 27.3, 19.4.
19
f nmr (376 mhz, dmso-d6)δ
ꢀ‑
106.7. hrms (esi) calculated for c
25h26
fn
4+
[m+h]
+
: 415.2293, found: 415.2295。
[0039]
步骤2：化合物6的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为化合物（6-1），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0040]
化合物6的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cd3od)δ 8.36 (d,j= 8.4 hz, 1h), 8.13 (dd,j= 8.8, 3.5 hz, 2h), 7.75(d,j= 7.2 hz, 1h), 7.63
ꢀ–ꢀ
7.51 (m, 2h), 7.46 (d,j= 7.3 hz,1h), 7.17 (m, 2h), 4.21 (t,j= 6.1 hz, 2h), 3.73 (t,j= 4.7 hz,4h), 3.64 (d,j= 7.0 hz, 2h), 3.38 (d,j= 12.2 hz, 2h), 2.87(t,j= 11.9 hz, 2h), 2.77 (s, 3h), 2.72 (s, 3h), 2.68
ꢀ–ꢀ
2.62 (m, 2h),2.58 (t,j= 4.6 hz, 4h), 2.09 (m, 3h), 2.00 (d,j= 14.0 hz,2h), 1.56 (t,j= 12.5 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, cd3od)δ 165.5, 164.3, 161.5, 151.7, 137.5, 137.3, 134.2, 132.7, 128.5, 127.8, 127.0,127.0, 126.9, 125.4, 125.0, 118.8, 108.8, 107.5, 67.5, 56.6, 55.4, 54.7, 46.3,44.0, 34.8, 30.7, 28.7, 26.9, 19.8. hrms (esi) calculated for c
33h42
n5o
2+
[m+h]
+
: 540.3333, found:540.3336。
[0041]
（7）化合物7的制备：化合物7的结构如下：
，其制备过程如下：步骤1：化合物（7-1）的制备：化合物（7-1）结构如下：；具体制备方法为：与化合物（1-2）的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为二苯并呋喃-4-硼酸，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸。
[0042]
化合物（7-1）的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 8.88 (t,j= 5.8 hz,1h), 8.82
ꢀ–ꢀ
8.78 (m, 1h), 8.77 (d,j= 7.4 hz, 1h), 8.65 (d,j=7.6 hz, 1h), 8.58 (d,j= 7.6 hz, 1h), 8.11 (d,j= 8.2 hz, 1h),7.98
ꢀ–ꢀ
7.88 (m, 3h), 7.85
ꢀ–ꢀ
7.77 (m, 2h), 4.05 (t,j= 6.2 hz, 2h), 3.14(d,j= 10.9 hz, 2h), 2.87 (s, 3h), 2.21 (t,j= 10.7 hz, 3h),2.13 (d,j= 13.4 hz, 2h), 1.73 (dt,j= 12.1, 6.0 hz, 2h).
13
cnmr (100 mhz, dmso-d6) δ 165.8, 163.3, 159.9, 159.7, 155.8,154.0, 152.0 (d,j
f-c
= 13.5 hz), 128.5, 127.8, 125.9 (d,j
f-c
= 10.6 hz), 125.1, 124.5, 123.3, 123.1, 122.7 (d,j
f-c
= 9.3hz), 121.1, 114.7 (d,j
f-c
= 24.5 hz), 111.7 (d,j
f-c
= 20.4 hz), 111.5, 110.7, 55.1, 46.1, 46.1, 35.0, 29.9.
19
f nmr (376mhz, dmso-d6) δ
ꢀ‑
106.7. hrms (esi)calculated for c
27h26
fn4o
+
[m+h]
+
:441.2085, found: 441.2086。
[0043]
步骤2：化合物7的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为化合物（7-1），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0044]
化合物7的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 8.43 (d,j= 7.7 hz, 1h), 8.05 (dd,j= 8.2, 6.2 hz, 2h), 7.97(d,j= 7.6 hz, 1h), 7.64 (d,j= 8.2 hz, 1h), 7.46 (td,j= 7.8, 3.2 hz, 2h), 7.38
ꢀ–ꢀ
7.30 (m, 2h), 7.06 (dd,j= 8.9, 2.6 hz, 2h),4.14 (t,j= 6.4 hz, 2h), 3.79
ꢀ–ꢀ
3.74 (t,j= 4.8 hz, 2h), 3.71(t,j= 4.7 hz, 4h), 3.30 (d,j= 10.9 hz, 3h), 2.55 (s, 3h),2.52 (d,j= 7.2 hz, 4h), 2.47 (d,j= 4.8 hz, 4h), 2.22
ꢀ–ꢀ
2.09(m, 1h), 2.08
ꢀ–ꢀ
1.97 (m, 2h), 1.89 (q,j= 13.1 hz, 2h).
13
cnmr (100 mhz, cdcl3) δ 162.6, 160.1, 159.8, 156.6, 154.7, 152.7,128.9, 127.3, 125.8, 125.1, 124.0, 123.3, 122.9, 122.2, 120.7, 118.1, 112.1,108.2, 108.0, 67.1, 66.6, 55.5, 54.8, 53.8, 45.9, 44.5, 33.5, 28.1, 26.3. hrms(esi) calculated for c
34h40
n5o
3+
[m+h]
+
: 566.3126, found: 566.3128。
165.7 (d,j
f-c
= 184.2 hz), 164.1, 157.6, 155.6 (d,j
f-c
= 13.5 hz), 127.8(d,j
f-c
= 9.9 hz), 115.2 (d,j
f-c
= 24.9hz), 112.3 (d,j
f-c
= 21.0 hz), 111.6, 59.6, 54.3, 49.9,49.1, 44.8, 26.6.
19
f nmr (376 mhz, cdcl3) δ
ꢀ‑
103.5. hrms(esi) calculated for c
18h24
clfn
5+
[m+h]
+
:364.1699, found: 364.1698。
[0057]
步骤2：化合物（10-2）的制备：化合物（10-2）结构如下：；具体制备方法为：与化合物（1-2）的制备方法类似，不同的是所使用的原料之一为2-甲基呋喃-5-硼酸频哪醇酯，等摩尔代替化合物（1-2）的制备方法中的苯硼酸；所使用的另一原料为（10-1），等摩尔替代化合物（1-1）。
[0058]
化合物（10-2）的核磁测试结果为：1hnmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.85
ꢀ–ꢀ
7.76 (t,j= 9.0 hz 1h), 7.57(d,j= 10.2 hz, 1h), 7.22 (s, 1h), 7.08 (d,j= 8.8 hz, 1h),6.15 (s, 1h), 3.78 (t,j= 4.8 hz, 4h), 3.20 (d,j= 10.3 hz,2h), 2.75 (t,j= 5.0 hz, 4h), 2.52 (s, 3h), 2.47 (m, 2h), 2.45 (s, 3h),2.07
ꢀ–ꢀ
1.87 (m, 4h).
13
c nmr (101 mhz, cdcl3) δ 165.0 (d,j
f-c
= 253.7 hz), 164.4, 155.9, 154.7 (d,j
f-c
= 13.2 hz), 153.9, 151.4, 127.4 (d,j
f-c
= 10.0 hz), 115.5,114.3 (d,j
f-c
= 24.9 hz), 112.9 (d,j
f-c
=20.6 hz), 112.3, 108.7, 59.7, 54.2, 50.0, 49.1, 44.8, 26.6, 14.4.
19
fnmr (376 mhz, cdcl3) δ
ꢀ‑
105.8. hrms (esi) calculated for c
23h29
fn5o
+
[m+h]
+
: 410.2351, found: 410.2352。
[0059]
步骤3：化合物10的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，所使用的原料之一为化合物（10-2），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0060]
化合物10的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 7.71 (d,j= 9.1 hz, 1h), 7.31 (d,j= 2.5 hz, 1h), 7.20 (d,j= 3.1 hz, 1h), 6.95 (dd,j= 9.1, 2.4 hz, 1h), 6.14 (d,j= 3.1hz, 1h), 4.15 (t,j= 6.4 hz, 2h), 3.77 (t,j= 4.9 hz, 4h), 3.72(t,j= 4.6 hz, 4h), 3.06 (d,j= 10.8 hz, 2h), 2.76 (t,j= 4.8 hz, 4h), 2.61 (m, 1h), 2.53 (t,j= 7.2 hz, 2h), 2.48 (m, 4h),2.45 (s, 3h), 2.40 (s, 3h), 2.28
ꢀ–ꢀ
2.15 (m, 2h), 2.02 (p,j= 6.7 hz,2h), 1.91 (d,j= 11.0 hz, 2h), 1.82 (t,j= 11.4 hz, 2h).
13
cnmr (100 mhz, cdcl3) δ 164.4, 162.3, 155.4, 154.9, 153.6, 151.8,126.3, 117.1, 114.7, 109.8, 108.5, 108.1, 67.1, 67.0, 66.6, 55.5, 54.9, 53.9,50.0, 49.2, 45.5, 27.4, 26.3, 14.4. hrms (esi) calculated for c
30h43
n6o
3+
[m+h]
+
: 535.3391, found: 535.3393。
[0061]
（11）化合物11的制备：
2h), 3.30 (d,j= 11.8 hz, 2h), 2.59 (s, 3h), 2.53
ꢀ–ꢀ
2.47 (m, 2h),2.45 (s, 3h), 2.13
ꢀ–ꢀ
2.03 (m, 1h), 1.99 (d,j= 4.8 hz, 4h).
13
cnmr (100 mhz, cdcl3) δ 166.2, 166.1 (d,j
f-c
=253.4 hz), 156.4, 154.2, 153.7 (d,j
f-c
= 13.8 hz), 150.8,126.2 (d,j
f-c
= 10.7 hz), 116.4, 116.0 (d,j
f-c
= 24.6 hz), 112.2 (d,j
f-c
= 21.4 hz), 112.0, 108.9, 70.1,54.7, 44.8, 34.0, 27.2, 14.4.
19
f nmr (376 mhz, cdcl3) δ-100.7. hrms (esi) calculated for c
18h20
fn4o
+
[m+h]
+
: 356.1769 found:356.1768。
[0065]
步骤3：化合物11的制备具体制备方法为：与化合物1的制备方法类似，所使用的原料之一为化合物（11-2），等摩尔代替化合物1的制备方法中的（1-2）。
[0066]
化合物11的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 7.95 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.33 (d,j= 2.4 hz, 1h), 7.24 (d,j= 3.2 hz, 1h), 7.04 (dd,j= 9.0, 2.4 hz, 1h), 6.17 (d,j= 3.2hz, 1h), 4.66 (t,j= 6.4 hz, 2h), 4.15 (t,j= 6.3 hz, 2h), 3.74(t,j= 4.7 hz, 8h), 2.58 (dt,j= 14.4, 7.3 hz, 4h), 2.50 (s,7h), 2.47 (s, 3h), 2.43 (m, 1h), 2.11 (q,j= 6.9 hz, 2h), 2.05 (d,j= 7.3 hz, 2h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 166.3, 163.4,155.9, 154.1, 153.9, 151.3, 124.8, 118.5, 115.4, 109.5, 108.7, 107.4, 67.0,66.6, 65.0, 55.8, 55.5, 53.8, 53.8, 29.8, 26.2, 26.1, 14.4. hrms (esi) calculated for c
27h37
n4o
4+
[m+h]
+
: 481.2809, found: 481.2808。
[0067]
（12）化合物12的制备：化合物12的结构如下：，其制备过程如下：具体制备方法为：与化合物8的制备方法类似，所使用的原料之一1-(3-羟丙基)吡咯烷，等摩尔代替化合物8制备方法中的3-(4-吗啉)-1-丙醇。
[0068]
化合物12的核磁测试结果为：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 7.55 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.25 (s, 1h), 7.19 (d,j= 3.2 hz,1h), 6.95 (dd,j= 8.9, 2.5 hz, 1h), 6.13 (d,j= 3.2 hz, 1h),5.73 (t,j= 5.9 hz, 1h), 4.11 (t,j= 6.2 hz, 2h), 3.60 (t,j= 6.0 hz, 2h), 2.89 (d,j= 11.1 hz, 2h), 2.67 (t,j= 7.6 hz,2h), 2.58 (t,j= 6.0 hz, 4h), 2.43 (s, 3h), 2.28 (s, 3h), 2.06 (dd,j= 14.7, 7.5 hz, 2h), 2.01
ꢀ–ꢀ
1.90 (t,j= 8.5 hz, 2h), 1.80 (m, 8h), 1.76
–ꢀ
1.68 (m, 1h), 1.53
ꢀ–ꢀ
1.38 (m, 2h).
13
c nmr (101 mhz, cdcl3)δ 162.4, 159.4, 155.2, 154.5, 152.6, 152.1, 121.9, 117.2, 114.6, 108.5, 108.4,107.9, 66.7, 55.6, 54.3, 53.2, 46.6, 46.4, 35.5, 30.2, 28.5, 23.6, 14.4. hrms (esi) calculated for c
27h38
n5o
2+
[m+h]
+
: 464.3020, found: 464.3022。
[0069]
实施例2细胞活性测试：使用cck-8法，对上述实施例1中1-12的化合物进行白血病细胞增
殖检测，以阿扎胞苷（5-aza）作为阳性对照，具体实验步骤如下：（1）取生长状态良好的各组细胞用0.25%胰酶消化后，细胞计数。
[0070]
（2）将细胞种到96孔板中，密度为7000个细胞/孔。
[0071]
（3）各组细胞在检测时间点时，每孔加1/10体积cck-8，在37℃、5％co2培养箱中培养2小时。
[0072]
（4）选择450 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，od值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
[0073]
（5）通过graphpad软件计算并绘制细胞增殖曲线图。
[0074]
为了直观的比较化合物的细胞增殖抑制差异，将ic
50
分为四类： 10 μm《ic
50
《20 μm (+)，1 μm《ic
50
《10 μm (++)，500 nm《ic
50
《1 μm(+++)，ic
50
《500 nm (++++)。检测结果见下表：表1 细胞活性测试结果化合物kasumi-1ic50（μm）skno-1ic50（μm）1++++++2+++++3++++++4++++++5+++++++6++++++7+++++8+++++++9+++++10++++++11++++++12++++++++5-aza++++++酶活测试：使用了mtase-glo
™ꢀ
assay检测系统对上述实施例1中1-12的化合物进行酶活检测，通过监测反应产物s-腺苷高半胱氨酸（sah）的形成，进而监测多种甲基转移酶（dnmt1、dnmt3a、dnmt3b）活性，具体测试流程如下：a）取测试化合物储备溶液6 ul，加入54 ul dmso，稀释10倍。
[0075]
b）然后取40 nl化合物溶液转移到384板中，1000 rpm离心，每个化合物包含2个复孔。
[0076]
c）将2
ꢀµ
l dnmt1/dnmt3a/dnmt3b工作溶液加入384测定板中，然后1000 rpm离心15分钟。
[0077]
d）将2μl poly(d(i-c))&sam工作溶液加入384孔测定板中，1000 rpm 离心1分钟。
[0078]
e）在25℃下培养3小时f）将1μl 5x mtase glo
™
试剂添加到每个测定孔中，平板以1000 rpm离心1min，然后在25℃下再孵育30min。
[0079]
g）将5μl mtase glo
™ꢀ
检测溶液添加到每个分析孔中，板以1000 rpm离心1min，
然后在25℃下再孵育30min。
[0080]
h）用平板读数光度计测量发光。
[0081]
i）绘制化合物的抑制曲线并利用非线性拟合公式来得到化合物的ic
50
（半数抑制浓度）。
[0082]
为了较为直观比较化合物酶活差异，将ic
50
分为四类：1 μm《ic
50
《10 μm (+)，500 nm《ic
50
《1 μm(++)，50 nm《ic
50
《500 nm (+++)，ic
50
《50 nm (++++)。检测结果见下表：表2 酶活测试结果化合物dnmt1ic50dnmt3aic50dnmt3bic501+++++2+++++3+++++4+++++5++++6+++++7+++++++8++++++++9++++++10+++++11+++12++++++从上述表1、表2中的数据可以看出，本发明的化合物1-12具有高效选择性抑制dnmt1蛋白酶活的效果，对两个白血病细胞（kasumi-1和skno-1）具有一定增殖抑制作用，且活性由于5-aza，尤其是化合物8和12活性更优，有望缓解现有药物的毒副作用。
[0083]
以上所述，只是本发明的较佳实施例而已，本发明并不局限于上述实施方式，只要其以相同的手段达到本发明的技术效果，都应属于本发明的保护范围。在本发明的保护范围内其技术方案和/或实施方式可以有各种不同的修改和变化。

技术特征：
1.一种喹唑啉类化合物，其特征在于，其结构式如式i或式ii所示：式i，式ii，其中，式i和式ii中，r3选自芳基、取代芳基、杂芳基、取代杂芳基、环状非芳香基团及取代环状非芳香基团中的任意一种；r4选自h、烷烃、芳基、环状及取代环状结构中的任意一种；式i中，x为n，r1、r2分别独立取自h、烷烃、环烷烃、取代环烷烃、芳基、取代芳基、烷基酰胺、芳基酰胺、环状及取代环状结构中的任意一种；式ii中，x为nh、o或s，r1取自h、烷烃、芳基、取代芳基中的任意一种。2.根据权利要求1所述的喹唑啉类化合物，其特征在于，所述喹唑啉类化合物的结构如以下化合物1-12中的任意一种：。3.根据权利要求2所述的喹唑啉类化合物，其特征在于，所述喹唑啉类化合物的结构如以下化合物中的任意一种：、。
4.一种权利要求1-3任一项所述的喹唑啉类化合物的制备方法，其特征在于，其制备路线为路线一或路线二：路线一：；路线二：。5.一种权利要求1-3任一项所述的喹唑啉类化合物或其在药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，癌症为乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、肾癌、白血病或者骨髓异常综合征。7.一种权利要求1-3任一项所述的喹唑啉化合物在制备作为靶向dnmt1抑制剂中的应用。8.一种药物组合物，其特征在于，以权利要求1-3任一项所述的喹唑啉类化合物或其在药学上可接受的盐为主要活性成分。9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述赋形剂包括碳水化合物、聚合物、脂质或矿物中的至少一种。

技术总结
本发明属于化药领域，具体涉及一种喹唑啉类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。该喹唑啉类化合物结构式如式I或式II所示，本发明制备过程简单易行，制备得到的喹唑啉类化合物或其在药学上可接受的盐具有高效选择性抑制DNMT1蛋白的效果，能够应用在制备治疗和/或预防癌药物中，可以作为治疗癌症的药物组合物的活性成分，还可以应用在作为靶向DNMT1抑制剂中。式I，式II。式II。


技术研发人员：李金岭 杨光 李金波 魏明明 赵芮 张坤
受保护的技术使用者：河北康泰药业有限公司
技术研发日：2023.04.07
技术公布日：2023/8/4