新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用

1.本技术涉及医学药物研制技术领域，具体而言，涉及新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用。


背景技术：

2.肺动脉高压(pulmonary hypertension，ph)是严重危害人类健康的疾病，是一种恶性程度仅次于冠心病和高血压的第三类常见心血管疾病，大部分患者将在2～3年内死于心力衰竭。典型症状为肺动脉阻力进行性增高、肺血管重塑，肺浸润增加，血管横截面积减少、血管阻力增加、右心室肥大和衰竭为特征的慢性进展性疾病。细胞表现为内皮功能损伤、平滑肌细胞不合理增殖、肺浸润性增加和各种血管舒缩因子平衡失调等。
3.在正常生理状态下肺血管壁由内皮细胞、内弹性膜、平滑肌层和外弹性膜等构成且血管的收缩和舒张维持在一个平衡状态，当肺组织长时间的处于低氧等状态时，患者体内的炎症反应便会启动，表现为肺组织的通透性增高，炎症细胞的浸润以及不同细胞因子、趋化因子、黏附因子的表达和分泌显著增加。从而导致肺组织内皮细胞损伤，血管内膜增厚、平滑肌细胞不合理的增殖、肺浸润性增加和各种血管舒缩因子平衡失调等。长期的肺循环阻力增高导致右心室负荷不断加重、右心室肥厚，最终导致右心衰竭和死亡。
4.由于其发病机制尚未完全清楚且在发展的过程中症状出现较晚，使得患者病情达到临床治疗标准时没能及时诊治，导致后期即使治疗，病情也无大的改善。而患者体内炎症也是肺动脉高压的主要病理原因之一，靶向针对肺动脉高压引起的炎症的药物研究目前还较为罕见，因此，目前开发出一种新颖、安全、有效的靶向肺动脉高压引起的炎症的药物对于ph的早期治疗将起到重大作用。


技术实现要素：

5.本技术的目的在于提供新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用，新对叶百部碱能够作为一种靶向肺动脉高压引起的炎症的药物进行应用，具有安全高效的特点。
6.本技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
7.本技术实施例提供新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用。
8.在本技术的研究中：细胞试验下，缺氧条件下使用新对叶百部碱(neotuberostemonine，nts)，可以减少小鼠肺血管内皮细胞细胞因子的分泌，巨噬细胞的趋化减弱，即炎性细胞向血管聚集减少。小鼠模型中，使用了nts后可以明显减轻小鼠肺动脉高压模型中肺动脉高压右心室肥厚和右心室收缩压、缓解肺动脉血管中层增厚、减轻肺组织炎症反应的情况，并且小鼠体重与对照组相比也未发生改变，具有良好治愈效果的同时，尚未发现副作用，这些结果均反应了新对叶百部碱能够作为一种安全有效的药物应用于靶向治疗肺动脉高压引起的炎症及相关症状。
9.相对于现有技术，本技术的实施例至少具有如下优点或有益效果：
10.在现有技术中，针对肺动脉高压临床疗法比较单一，仍以血管扩张药为主，常用药有前列环素类(pgi2)，pgi2是花生四烯酸代谢的生理产物，主要由血管内皮合成，它扩张肺血管；还有5型磷酸二酯酶抑制剂(pde5)选择性抑制pde5(在肺脏大量表达)，增加平滑肌细胞内的cgmp浓度，舒张血管平滑肌，扩张肺动脉，降低肺血管阻力，从而降低肺动脉压。也有从一氧化氮-环鸟苷磷酸途径和内皮素途径机理上入手，但这些角度开发的药物疗效有限，导致肺动脉高压无法治愈，而患者体内炎症也是肺动脉高压的主要病理原因之一，靶向针对肺动脉高压引起的炎症的药物研究目前还较为罕见，本技术的小鼠试验证实使用了新对叶百部碱对肺动脉高压所引起的炎症具有良好治愈效果的同时，尚未发现副作用，对正常的细胞和组织也是几乎没有毒性，这反应了新对叶百部碱能够作为一种安全有效的药物应用于靶向治疗肺动脉高压引起的炎症及相关症状。
附图说明
11.为了更清楚地说明本技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
12.图1为本技术实施例elisa法检测小鼠血管内皮细胞细胞因子表达结果图；
13.图2为本技术实施例transwell小室迁移实验检测巨噬细胞趋化功能结果图；
14.图3为本技术实施例使用新对叶百部碱对小鼠体重无影响的结果图；
15.图4为本技术实施例使用新对叶百部碱后对小鼠右心室影响的结果图；
16.图5为本技术实施例使用新对叶百部碱后对小鼠左心室收缩压影响的结果图；
17.图6为本技术实施例使用新对叶百部碱后对小鼠肺部炎症因子影响的结果图；
18.图7为本技术实施例使用新对叶百部碱后小鼠肺组织形态学影响的结果图。
19.注：其中数据上方标注星号(*)符号代表的是对应试验组与nor组相比较；井号(#)符号代表的是对应试验组与hyp组相比较。
具体实施方式
20.为使本技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
21.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本技术。
22.本技术实施例提供新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用。
23.在本技术的研究中：细胞试验下，缺氧条件下使用新对叶百部碱(nts)，可以减少小鼠肺血管内皮细胞细胞因子的分泌，巨噬细胞的趋化减弱，即炎性细胞向血管聚集减少。小鼠模型中，使用了nts后可以明显减轻小鼠肺动脉高压模型中肺动脉高压右心室肥厚和右心室收缩压、缓解肺动脉血管中层增厚、减轻肺组织炎症反应的情况，并且小鼠体重与对照组相比也未发生改变，具有良好治愈效果的同时，尚未发现副作用，这些结果均反应了新
对叶百部碱能够作为一种安全有效的药物应用于靶向治疗肺动脉高压引起的炎症及相关症状。
24.在本技术的实施例中，上述新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用，其特征在于，所述药物以新对叶百部碱为活性成分。
25.新对叶百部碱分子式为c
22h33
no，分子量为375.5，在本技术研究阶段发现其对于正常的细胞和组织几乎没有毒性，直接灌胃处理用于治疗缺氧导致的肺动脉高压小鼠模型，结果证明其能够有效抑制炎症发生，缓解相关症状，因此，将其作为药物的活性成分应用到制备治疗肺动脉高压的药物中，能够使得药物具有良好治疗效果的同时，不会对机体造成伤害。
26.在本技术的实施例中，新对叶百部碱抑制肺部炎症因子il-6、tnf-α、il-1β的表达。
27.本技术研究中发现灌胃处理肺动脉高压小鼠模型组后，通过elisa检测小鼠肺组织中炎症因子tnfα、il6、il1β表达，这些炎症因子均表现出显著的降低，表明新对叶百部碱能够抑制肺部炎症因子il-6、tnf-α、il-1β的表达。
28.在本技术的实施例中，上述药物为片剂、颗粒剂、喷雾剂、口服剂或注射剂。
29.药物采用多种形式制备可以方便满足不同病人的需求。
30.以下结合实施例对本技术的特征和性能作进一步的详细描述。
31.实施例1
32.本实施例在细胞水平下对新对叶百部碱对小鼠肺血管内皮细胞的影响进行了试验验证。(显著性标示：**，p《0.01；##，p《0.01，下同。)
33.1、elisa法检测小鼠血管内皮细胞细胞因子表达
34.小鼠肺血管内皮细胞(pulmonary artery endothelial cells,paec)分为常氧组、缺氧组、缺氧加药组。加药组nts浓度为10μmol/l。将细胞分别置于含有5％ co2的常氧环境与缺氧环境(5％ co2、5％ o2、90％ n2)中分别培养24h。利用elisa方法检测paec上清液中细胞因子il-6、il-1β、cxcl-10的表达。
35.2、transwell小室迁移实验检测巨噬细胞趋化功能
36.将巨噬细胞raw 264.7和小鼠paec都分为常氧组、缺氧组、缺氧加药组。将细胞分别置于含有5％ co2的常氧环境与缺氧环境(5％ co2、5％o2、90％ n2)中分别培养24h。加药组nts浓度为10μmol/l。利用paec上清液作为transwell小室的下层，raw 264.7细胞作为transwell小室的上层。24小时后，将transwell小室取出，pbs清洗2次后无水乙醇固定，固定后的细胞用甲苯胺蓝染色，倒置显微镜观察并进行细胞计数，取5个视野于倒置显微镜下成像。计数raw 264.7发生迁移的细胞数量。
37.最后elisa结果如图1所示，与对照组相比，缺氧条件下小鼠肺血管内皮细胞il-6、il-1β分泌增加，趋化因子10(cxcl10)分泌增加，说明炎症细胞相关因子分泌增加，在体内表现为增加炎症反应；而缺氧条件下使用新对叶百部碱(nts)，可以减少小鼠肺血管内皮细胞中上述细胞因子的分泌。transwell小室迁移试验的结果如图2所示，在缺氧条件下，巨噬细胞趋化功能增强，而缺氧条件下使用nts后，巨噬细胞的趋化减弱，即炎性细胞向血管聚集减少，减缓了炎症发生。
38.实施例2
39.本实施例构建了缺氧小鼠ph模型，并试验分析了新对叶百部碱对小鼠ph的影响。
40.1、缺氧小鼠ph模型构建
41.采用慢性缺氧的方法，将六周左右的雄性c57bl/6小鼠(每只重约25g)随机分为如下三组：
42.常氧组(nor)：将随机选取的小鼠置于环境温度为22-24℃，相对湿度为50％，氧分压为21％，明暗循环为12小时，自由进食和饮水的清洁环境中饲养28天。
43.缺氧组(hyp)：将随机选取的小鼠置于境温度为22-24℃的可以持续自动通入氮气调节和监控氧气浓度的缺氧箱，使缺氧箱内氧分压保持在9-10％，明暗循环为12小时，以及自由进食和饮水的受控环境中饲养28天，同时，将适量的无水氯化钙、氧化钙和硼酸置于缺氧箱中，以便吸收缺氧箱内小鼠排出的水蒸气、二氧化碳和氨气，维持缺氧箱内的环境稳定。自由进食和饮水的受控环境中饲养3周后，继续在正常环境下饲养2周后进行实验。
44.第三组为缺氧+nts组(hyp+nts)，在造模条件和方法和第二组相同的情况下，我们从第1至21天采用20mg/kg
·
d剂量nts灌胃。每周称量小鼠体重，并记录一般情况。
45.2、右心室收缩压(rvsp)和心功的检测和分析。
46.通过注射戊巴比妥麻醉小鼠，通过手术在右颈静脉插入millar导管(spr-836f)，同时使用power lab监测设备监测rvsp的变化情况。待示数稳定后读取数值，随后立即使用手术剪迅速剪开小鼠的胸腔，取出心脏和肺组织，将心脏与肺叶分离，用手术剪剪尖沿心室隔膜缓慢地分离右心室，分别称重评估右心肥厚的程度。同时将小鼠肺叶置于1
×
pbs缓冲液中清洗至无血液流出，再进行后续处理。
47.3、肺组织炎性因子检测
48.取肺组织，根据组织量加入9倍体积的pbs，匀浆器打碎组织，液氮反复冻融三次。12000rpm离心10min，上清为实验所需蛋白样品。通过elisa方法检测小鼠肺组织中炎症因子tnfα、il-6、il-1β表达。
49.4、病理学观察
50.在小鼠麻醉状态取下整肺后，切取边长为5mm立方块左肺上叶，4％多聚甲醛固定，包埋，用于肺组织病理学观察。小鼠肺血管重构观察采用h&e染色，倒置显微镜拍照，每张片子随机拍摄5个视野。
51.上述试验结果显示，在缺氧条件下添加nts不会影响小鼠的正常体重(图3)。在缺氧条件下添加nts后可以明显缓解缺氧诱导的小鼠右心室肥厚(图4)，在缺氧条件下添加nts后可以明显缓解右心室收缩压增高(rvsp，图5)。肺组织炎性因子检测结果显示，小鼠肺组织中炎症因子tnfα、il6、il1β均在缺氧条件下添加nts后出现显著降低的现象(图6)，小鼠肺组织形态学分析显示，缺氧条件下在缺氧条件下添加nts后，可以明显缓解肺动脉血管中层增厚(图7)。
52.综合以上结果，可以发现，在缺氧条件下添加nts后可以明显减轻肺动脉高压右心室肥厚和右心室收缩压、缓解肺动脉血管中层增厚、减轻肺组织炎症反应，同时不会影响小鼠的正常生理状态，具有良好治愈效果的同时，尚未发现副作用。
53.综上所述，本技术实施例通过在体外试验和体内试验均验证发现，新对叶百部碱对于肺动脉高压引起的炎症、巨噬细胞趋化、心肺功能改变上均具有改善作用，因此新对叶百部碱能够作为一种安全高效且靶向肺动脉高压相关疾病的药物进行应用，其具有极大应
用前景和应用价值。
54.以上所描述的实施例是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。本技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本技术的范围，而是仅仅表示本技术的选定实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。

技术特征：
1.新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用，其特征在于，所述药物以新对叶百部碱为活性成分。3.根据权利要求1或2所述的新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用，其特征在于，新对叶百部碱抑制肺部炎症因子il-6、tnf-α、il-1β的表达。4.根据权利要求1或2所述的新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用，其特征在于，所述药物为片剂、颗粒剂、喷雾剂、口服剂或注射剂。

技术总结
本申请提出了新对叶百部碱在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用，涉及医学药物研制技术领域。本申请的试验证实了使用新对叶百部碱的小鼠肺动脉高压模型可以明显减轻肺动脉高压右心室肥厚和右心室收缩压、缓解肺动脉血管中层增厚、减轻肺组织炎症反应的情况，并且小鼠体重与对照组相比也未发生改变，具有良好治愈效果的同时，尚未发现副作用，这反应了新对叶百部碱能够作为一种安全有效的药物应用于靶向治疗肺动脉高压引起的炎症及相关症状。靶向治疗肺动脉高压引起的炎症及相关症状。靶向治疗肺动脉高压引起的炎症及相关症状。


技术研发人员：宋思远 张祎 曹明月 马翠 姜丹 陈英利 张立新 王晓颖 陈嘉嘉 李姝睿 陈秋楠 李武燮 柯皓之 李淼
受保护的技术使用者：哈尔滨医科大学大庆分校
技术研发日：2023.05.12
技术公布日：2023/8/6