一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法与流程

1.本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法。


背景技术：

2.谷精草药材来源于谷精草科植物谷精草(eriocaulon buergerianum koern)的干燥带花茎的头状花序。又名戴星草、文星草、流星草等，为谷精草科一年生草本植物。功能主治：疏散风热，明目退翳。用于风热目赤，肿痛羞明，眼生翳膜，风热头痛等。近代研究表明，谷精草具有抗菌、抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制、6-ohda诱导神经损伤保护等作用，且作为复方成分与其他中药配伍在眼科临床中广泛用于病毒性角膜炎、色素膜炎白内障、黑翳性视神经炎、结膜炎等疾病的治疗效率可达90％以上。因此它的药用价值日益受到人们重视。
3.目前谷精草主要成分包括以香草酸、原儿茶酸等有机酸类，芦丁、野鸢尾黄素等黄酮类，尿苷、鸟苷等核苷类。其中香草酸含量明显高于其他成分，并且香草酸具有抗炎，抗菌的作用，与谷精草药效相似。结合药典中未对谷精草成分进行含量测定，因此，现有含量测定基本以香草酸为谷精草含测指标。
4.目前各省均以香草酸成分对谷精草配方颗粒进行定量分析，检测时间较长。其中谷精草成分较多，但含量较低，会对谷精草香草酸峰纯度有轻微影响。
5.cn115825259a公开了一种谷精草中香草酸含量的测定方法。该方法采用外标法，通过高效液相色谱法测定谷精草供试品溶液中香草酸的含量。以乙腈为流动相a，以体积百分数为0.01～0.5％磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱35min；流动相的流速为0.1～0.5ml/min；色谱柱的柱温为25～35℃；进样体积为0.5～2μl；检测波长为250～280nm。
6.cn115825260a公开了一种谷精草配方颗粒特征图谱的构建方法和检测方法。将对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液分别经高效液相色谱法测定，标定共有峰，即得。其中，色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以体积百分数为0.01～0.5％的磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱35分钟。该针对谷精草配方颗粒与谷精草药材共有的特征成分进行研究，最终确认了7个共有特征峰。因此，构建的特征图谱及检测方法可全面实现对谷精草配方颗粒中多组分联合控制的目的，能够较好的表征药材原料到配方颗粒的物质传递，保证配方颗粒的质量。
7.针对现有技术中对于谷精草的检测时间较长、谷精草中各成分分离度较差的问题，开发一种高效、快速、更为准确、更为灵敏的检测方法，用以检测谷精草及其制剂中的香草酸含量是本领域的研究重点。


技术实现要素：

8.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法，可以更高效、准确的测定谷精草及其制剂中的香草酸含量。
9.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
10.第一方面，本发明提供一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法，所述测定方法包括：
11.(1)将待测谷精草及其制剂制备成供试品溶液；
12.(2)将所述供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，得到液相图谱，根据所述液相图谱得出香草酸的含量；
13.所述谷精草及其制剂包括谷精草药材、谷精草饮片、谷精草标准汤剂或谷精草配方颗粒。
14.现有技术中针对谷精草中香草酸含量的检测，分析时间长，仅梯度洗脱就需要耗费35min，所以，本发明建立一种可以高效检测谷精草中香草酸含量的测定方法，并且该方法适用于谷精草药材、谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒的测定，该方法稳定性高、精密度高、重现性好、检测限低，并且以香草酸为指标成分，可以全面对于谷精草及其制剂进行表征并且进行质量评价。
15.优选地，所述供试品溶液采用如下方法进行制备，所述方法包括：将所述谷精草及其制剂进行提取，得到所述供试品溶液。
16.优选地，所述提取包括超声提取和/或回流提取。
17.优选地，所述提取的时间为10-40min，例如可以为15min、18min、20min、22min、25min、28min、30min、33min、35min或38min等。
18.优选地，所述提取之后还包括过滤的步骤。
19.优选地，所述提取的提取剂为甲醇水溶液。
20.优选地，所述提取时，谷精草药材和谷精草饮片的提取剂为水。
21.优选地，所述谷精草药材和谷精草饮片采用回流方式进行提取。
22.优选地，所述提取时，谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒的提取剂为甲醇水溶液。
23.优选地，所述谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒采用超声方式进行提取。
24.优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的质量百分含量为40-60％，例如可以为45％、50％或55％等。
25.优选地，所述提取的料液比为1:(10-100)，例如可以为1:12、1:15、1:18、1:20、1:22、1:24、1:26、1:28、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80、1:90等。
26.上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
27.优选地，所述高效液相色谱法检测的条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为甲酸水溶液，进行等度洗脱，流速为0.28-0.32ml/min，例如可以为0.29ml/min、0.3ml/min或0.31ml/min等；柱温30-35℃，例如可以为31℃、32℃、33℃、34℃等，检测波长为250-270nm，例如可以为255nm、260nm或265nm等。
28.优选地，所述等度洗脱时流动相a与流动相b的体积比为1:(8.5-9.5)，例如可以为1:8.8、1:9或1:9.3等。
29.优选地，所述甲酸水溶液中甲酸的质量百分含量为0.2-0.4％，例如可以为0.25％、0.3％或0.35％等。
30.上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
31.优选地，所述测定方法还包括制备对照品溶液的步骤，以及采用和供试品溶液相同的检测方法，检测对照品溶液得到液相图谱的步骤。
32.优选地，所述对照品溶液中的对照品包括香草酸。
33.优选地，所述测定方法包括：
34.(1)将谷精草及其制剂进行提取10-40min，过滤，得到所述供试品溶液；
35.所述谷精草及其制剂包括谷精草药材、谷精草饮片、谷精草标准汤剂或谷精草配方颗粒；
36.所述谷精草药材和谷精草饮片的提取剂为水；所述谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒的提取剂为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的质量百分含量为40-60％；所述提取的料液比为1:(10-100)；所述提取包括超声提取和/或回流提取；
37.(2)将所述供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，得到液相图谱，根据所述液相图谱得出香草酸的含量；
38.所述高效液相色谱法检测的条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为甲酸水溶液，流动相a与流动相b的体积比为1:(8.5-9.5)，进行等度洗脱，流速为0.28-0.32ml/min，柱温30-35℃，检测波长为250-270nm；
39.所述甲酸水溶液中甲酸的质量百分含量为0.2-0.4％。
40.第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的测定方法检测得到的液相图谱，所述液相图谱中香草酸的保留时间为7-8min，例如可以为7.2min、7.4min、7.6min或7.8min等。
41.上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
42.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
43.本发明提供一种可以高效检测谷精草中香草酸含量的测定方法，适用于谷精草药材、谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒的测定，该方法稳定性高、精密度高、重现性好、检测限低，检出限为0.077μg/ml，定量限为0.258μg/ml，可以全面对于谷精草及其制剂进行表征并且进行质量评价。
附图说明
44.图1为实施例1检测得到的液相图谱；
45.图2为实施例2检测得到的液相图谱；
46.图3为线性与范围考察得到的标准曲线图。
具体实施方式
47.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
48.本文所用术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，还可包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0049]“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
[0050]
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的
要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
[0051]
本发明所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例性地”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本文中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。
[0052]
以下实施例中试剂或仪器来源如下：
[0053]
分析天平：赛多利斯，sqp quintix224-1cn，德国产；
[0054]
waters高效液相色谱仪：配有tuv检测器、控温型柱温箱、控温型自动进样器，美国产；
[0055]
高速台式离心机：sigma，1-14，德国产；
[0056]
超声波清洗仪：天津奥特赛恩斯，as20500bt，中国产；
[0057]
谷精草药材、谷精草标准汤剂、谷精草配方颗粒：由北京康仁堂药业有限公司提供；
[0058]
香草酸：批号110776-201503，中国食品药品检定研究院；
[0059]
乙腈：天津渤化化学试剂有限公司，20210220，色谱纯；
[0060]
甲醇：天津渤化化学试剂有限公司，20210301，分析纯；
[0061]
甲酸：东京化成工业株式会社，3c7on-nj，色谱纯。
[0062]
制备例
[0063]
本制备例提供一种香草酸对照品溶液，所述对照品溶液制备方法如下：精密称取香草酸对照品，加50％甲醇制成20μg/ml的溶液，得到香草酸对照品溶液。
[0064]
测试例1
[0065]
不同浓度提取溶剂考察
[0066]
供试品溶液制备：取谷精草标准汤剂1.0g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、100％甲醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、100％乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率390w；频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
[0067]
含量测定：分别精密吸取制备例得到的对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长150mm，内径2.1mm，粒径1.7μm)；以乙腈为流动相a，以0.3％甲酸溶液为流动相b，按乙腈：0.3％甲酸(10:90)进行等度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温33℃；检测波长为260nm。理论板数按香草酸峰计算应不低于5000。测定结果如表1所示。
[0068]
表1
[0069]
[0070][0071]
根据表格数据可知，溶剂为50％甲醇时，香草酸提取效率较高且较为节约成本，故优选为50％甲醇作为提取溶剂。
[0072]
测试例2
[0073]
溶剂体积考察
[0074]
供试品溶液制备：取谷精草标准汤剂1.0g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入10ml、25ml、50ml、100ml的50％甲醇，密塞，称定重量，超声处理(功率390w；频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
[0075]
含量测定方法与测试例1相同，测定结果如表2所示。
[0076]
表2
[0077]
提取剂体积香草酸含量(％)10ml0.04925ml0.04850ml0.051100ml0.051rsd(％)3.02
[0078]
结果表明，不同体积的50％甲醇水溶液作为提取剂时，香草酸含量结果rsd＜5％，不同体积溶剂对对香草酸无明显区别，25ml体积对香草酸浓度适中，而且较为节约溶剂，故选择25ml作为最优提取溶剂体积。
[0079]
测试例3
[0080]
提取时间考察
[0081]
供试品溶液制备：取谷精草标准汤剂1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入25ml的50％甲醇，密塞，称定重量，分别超声处理(功率390w；频率40khz)10min、20min、30min、40min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
[0082]
含量测定方法与测试例1相同，测定结果如表3所示。
[0083]
表3
[0084]
超声时间香草酸含量(％)10min0.04320min0.04230min0.04440min0.043rsd(％)1.9
[0085]
结果表明，不同提取时间对香草酸提取效率无明显差异，香草酸含量结果rsd小于
5％，提取30min较为节约时间，确定最优提取时间为30min。
[0086]
测试例4
[0087]
提取方式考察
[0088]
称取谷精草药材粉末2份，每份1g，分别置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，一份回流提取30分钟，一份超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，取出，放冷，称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，得到供试品溶液。
[0089]
含量测定方法与测试例1相同，考察结果表4所示。
[0090]
表4
[0091][0092]
根据检测得到的液相图谱和数据分析可知，对于谷精草药材香草酸含量，加热回流和超声提取的含量无明显区别，结合特征图谱峰面积，选择加热回流作为提取方式更为合理。
[0093]
测试例5
[0094]
提取溶剂的考察
[0095]
供试品溶液制备：取谷精草药材粉末9份，分别1.0g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、100％甲醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、100％乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率390w；频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
[0096]
含量测定方法与测试例1相同，考察结果表5所示。
[0097]
表5
[0098]
提取溶剂种类香草酸含量(mg/g)30％甲醇0.05950％甲醇0.05470％甲醇0.051100％甲醇0.05930％乙醇0.06050％乙醇0.04770％乙醇0.026100％乙醇0水0.069
[0099]
通过测试结果和表格数据分析，在相同供试品处理条件下，改变提取溶剂种类测定谷精草含量，谷精草含量差异较大，综合考虑，选择水作为谷精草药材、谷精草饮片的主要提取溶剂比较合理。
[0100]
实施例1
[0101]
本实施例提供一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法，所述测定方法如下：
[0102]
供试品溶液制备：取谷精草标准汤剂1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇
25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率390w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
[0103]
含量测定：分别精密吸取制备例得到的对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长150mm，内径2.1mm，粒径1.7μm)；以乙腈为流动相a，以0.3％甲酸溶液为流动相b，按乙腈：0.3％甲酸(10:90)进行等度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温33℃；检测波长为260nm。理论板数按香草酸峰计算应不低于5000。所得液相图谱如图1所示。由图可知，图中上方为供试品溶液谱图，下方为对照品溶液谱图，结果表明，谷精草在香草酸对照位置处无干扰峰，含量测定专属性良好。
[0104]
实施例2
[0105]
本实施例提供一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法，所述测定方法如下：
[0106]
供试品溶液制备：取谷精草药材1.0g，破碎后置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
[0107]
采用和实施例1相同的含量测定方法，所得液相图谱如图2所示。
[0108]
测试例6
[0109]
方法学考察：
[0110]
1、系统适用性
[0111]
精密吸取制备例的对照品溶液，采用实施例1的含量测定方法进行高效液相色谱检测，重复进样5次，根据得到的液相图谱计算香草酸峰面积相对标准偏差，如果如表6所示。
[0112]
表6
[0113][0114]
结果表明，香草酸进样峰面积rsd值为0.11％，表明仪器精密度良好，符合药品质量标准分析方法验证指导原则(《中国药典》2020年版四部通则9101)要求。
[0115]
2、重复性
[0116]
取谷精草标准汤剂适量，按实施例1中供试品溶液制备的方法配制平行供试品溶液6份，分别采用实施例1中的含量测定的方法进行高效液相色谱检测，测定结果如表7所示。
[0117]
表7
[0118]
编号香草酸含量(％)10.047
20.04630.04640.04650.04760.047rsd(％)1.22
[0119]
结果表明，6份供试品中香草酸含量rsd值为1.22％，重复性良好，符合药品质量标准分析方法验证指导原则(《中国药典》2020年版四部通则9101)要求。
[0120]
3、准确度
[0121]
准确度指采用本发明提供的检测方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率(％)表示。取谷精草样品，按对照品量与所取供试品中待测定成分量之比为在0.5:1，1:1，1:1.5分别加入对照品进行加样(n＝9)，制备供试品，具体称样量、供试品中香草酸含量和对照品量如表8所示，采用实施例1中的含量测定的方法进行高效液相色谱检测，试验结果取平均值，检测结果如表8所示。
[0122]
表8
[0123][0124]
结果表明，加样回收试验，香草酸平均回收率为105.79％，rsd为3.9％，符合药品质量标准分析方法验证指导原则(《中国药典》2020年版四部通则9101)要求。
[0125]
4、线性与范围
[0126]
取香草酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含香草酸100μg的对照品溶液。
[0127]
精密吸取对照品溶液，分别稀释成浓度为对照品溶液浓度的6.25％、12.5％、25％、50％的香草酸标准溶液，采用实施例1中的含量测定的方法进行高效液相色谱检测，得到的标准曲线如图3所示，以峰面积为横坐标x，浓度为纵坐标y，拟合香草酸标准曲线为：y＝22557.7747x+14750.8333，r2＝0.9999。结果表明，香草酸在5.642-90.269ng范围内线性关系良好。
[0128]
5、耐用性
[0129]
(1)稳定性
[0130]
将实施例1制备的供试品溶液分别于0h、3h、6h、9h、12h、24h，采用实施例1中的含量测定的方法进行高效液相色谱检测，将峰面积作为指标，考察样品在24小时内稳定性，测定结果如表9所示。
[0131]
表9
[0132]
时间(h)香草酸峰面积-03970203393804639197193916571240284024401574rsd(％)1.22
[0133]
结果表明，对于香草酸含量测定，供试品24h内峰面积rsd为1.22％，稳定性良好。
[0134]
(2)不同柱温的考察
[0135]
与实施例1的区别仅在于，含量测定时，分别于不同柱温(31℃、33℃及35℃)进行高效液相色谱检测，其他原料、用量及方法均与实施例1相同，测定结果如表10所示。
[0136]
表10
[0137][0138][0139]
结果表明：不同柱温下获得的色谱图，香草酸峰的理论板数、分离度等均符合系统适用性要求；测得香草酸的含量rsd值为6.7％，符合系统适用性要求。表明该方法对柱温耐用性较好。
[0140]
(3)不同流速的考察
[0141]
与实施例1的区别仅在于，含量测定时，分别采用不同流速(0.28ml/min、0.30ml/min及0.32ml/min)进行高效液相色谱检测，其他原料、用量及方法均与实施例1相同，测定结果如表11所示。
[0142]
表11
[0143]
流速(ml/min)香草酸含量(％)0.280.0460.300.0460.320.047rsd(％)1.25
[0144]
结果表明：采用不同流速获得的色谱图，香草酸峰的理论板数、分离度等均符合系统适用性要求；测得香草酸的含量rsd值为1.25％，符合系统适用性要求。表明该方法对流速耐用性较好。
[0145]
(4)不同色谱柱的考察
[0146]
与实施例1的区别仅在于，含量测定时，采用不同型号色谱柱进行进行高效液相色谱检测：
[0147]
色谱柱1：acquity uplc beh rp18(2.1mm
×
150mm，1.7μm)；
[0148]
色谱柱2：acquity hss t3(2.1*150mm，1.8μm)；
[0149]
色谱柱3：cortecs uplc t3(2.1*150mm，1.6μm)；其他原料、用量及方法均与实施例1相同，测定结果如表12所示。
[0150]
表12
[0151]
色谱柱香草酸含量(％)柱10.046柱20.046柱30.051rsd(％)6.06
[0152]
结果表明：采用不同色谱柱获得的色谱图，香草酸峰的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求；采用不同色谱柱测得香草酸的含量rsd值为6.06％，表明该方法对不同色谱柱有较好的耐用性。
[0153]
测试例7
[0154]
检出限和定量限
[0155]
检出限指的是样品中可被定性检测，但并不需要准确定量的最低含量(浓度)。在色谱分析中，一般使用信噪比(s/n)来对检出限进行定义，信噪比是样品中目标物的响应值与基线噪声的比值，一般认为信噪比大于等于3可用于定性，信噪比大于等于10可用于定量。
[0156]
当样品组分的响应值大于等于基线噪声的3倍时，即s/n≥3时，该样品的浓度即为仪器对该目标化合物的最低定性检出限，当样品组分的响应值大于等于基线噪声的10倍时，即s/n≥10时，该样品的浓度即为仪器对该目标化合物的最低定量限。
[0157]
将制备例的对照品溶液进行逐级稀释，采用实施例1的含量测定方法进行高效液相色谱检测，测定得到的检出限和定量限结果如表13所示。
[0158]
表13
[0159][0160]
根据表格数据可知，本发明提供的检测方法检出限为0.077μg/ml，定量限为0.258μg/ml。
[0161]
测试例8
[0162]
将不同批次的谷精草药材、谷精草标准汤剂和谷精草标准汤剂采用实施例1的方
法进行制备供试品溶液和进行高效液相色谱检测，得到的检测结果如表14所示。
[0163]
表14
[0164][0165]
根据表格数据可知，本发明提供的测定谷精草及其制剂中的香草酸的测定方法可以适用于检测谷精草药材、谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒。
[0166]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括：(1)将待测谷精草及其制剂制备成供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，得到液相图谱，根据所述液相图谱得出香草酸的含量；所述谷精草及其制剂包括谷精草药材、谷精草饮片、谷精草标准汤剂或谷精草配方颗粒。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述供试品溶液采用如下方法进行制备，所述方法包括：将所述谷精草及其制剂进行提取，得到所述供试品溶液。3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述提取包括超声提取和/或回流提取；优选地，所述提取的时间为10-40min；优选地，所述提取之后还包括过滤的步骤。4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述提取时，谷精草药材和谷精草饮片的提取剂为水；优选地，所述提取时，谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒的提取剂为甲醇水溶液；优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的质量百分含量为40-60％。5.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述提取的料液比为1:(10-100)。6.根据权利要求1-5任一项所述的测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测的条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为甲酸水溶液，进行等度洗脱，流速为0.28-0.32ml/min，柱温30-35℃，检测波长为250-270nm。7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，所述等度洗脱时流动相a与流动相b的体积比为1:(8.5-9.5)；优选地，所述甲酸水溶液中甲酸的质量百分含量为0.2-0.4％。8.根据权利要求1-7任一项所述的测定方法，其特征在于，所述测定方法还包括制备对照品溶液的步骤，以及采用和供试品溶液相同的检测方法，检测对照品溶液得到液相图谱的步骤；优选地，所述对照品溶液中的对照品包括香草酸。9.根据权利要求1-8任一项所述的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括：(1)将谷精草及其制剂进行提取10-40min，过滤，得到所述供试品溶液；所述谷精草及其制剂包括谷精草药材、谷精草饮片、谷精草标准汤剂或谷精草配方颗粒；所述谷精草药材和谷精草饮片的提取剂为水；所述谷精草标准汤剂和谷精草配方颗粒的提取剂为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的质量百分含量为40-60％；所述提取的料液比为1:(10-100)；所述提取包括超声提取和/或回流提取；(2)将所述供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，得到液相图谱，根据所述液相图谱得出香草酸的含量；所述高效液相色谱法检测的条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为甲酸水溶液，流动相a与流动相b的体积比为1:(8.5-9.5)，进行等度洗脱，流速为0.28-0.32ml/min，柱温30-35℃，检测波长为250-270nm；
所述甲酸水溶液中甲酸的质量百分含量为0.2-0.4％。10.一种如权利要求1-9任一项所述的测定方法检测得到的液相图谱，其特征在于，所述液相图谱中香草酸的保留时间为7-8min。

技术总结
本发明提供一种谷精草及其制剂中香草酸含量的测定方法，所述测定方法包括：(1)将待测谷精草及其制剂制备成供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，得到液相图谱，根据所述液相图谱得出香草酸的含量；所述谷精草及其制剂包括谷精草药材、谷精草饮片、谷精草标准汤剂或谷精草配方颗粒。该方法稳定性高、精密度高、重现性好、检测限低，检出限为0.077μg/mL，定量限为0.258μg/mL，可以全面准确地对于谷精草及其制剂进行表征并且进行质量评价。进行质量评价。进行质量评价。


技术研发人员：张志强 李泽龙 孙海涛 周永康 张翔 蒋东钱
受保护的技术使用者：北京康仁堂药业有限公司
技术研发日：2023.05.04
技术公布日：2023/8/6