一种油橄榄来源的护肤组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及化妆品领域，主要涉及一种油橄榄来源的护肤组合物。


背景技术：

2.油橄榄(olea europaea l.)属木犀科、木犀榄属常绿乔木，原产于地中海沿岸，是世界著名的木本油料树种，栽培历史可上溯至四千年前。橄榄油是从油橄榄果实中采用冷榨工艺榨取的油，其中主要成分为包含多种不饱和脂肪酸的甘油三酯，此外还含有多种活性物质如橄榄多酚、角鲨烯、胡萝卜素、维生素e等，具有特殊的营养价值，有“液体黄金”美称。除了在饮食中的应用，橄榄油还被广泛地应用于医药和化妆品领域，研究显示橄榄油具有一定的抗癌、改善心血管系统、抗衰老、促进伤口愈合等功效。
3.除了果油之外，油橄榄叶中也含有丰富的活性成分，包括橄榄苦苷、羟基酪醇、黄酮类和多酚类等。研究发现油橄榄叶提取物有包括抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒等作用，在医药、保健食品和化妆品领域有广泛的应用前景。
4.人体皮肤角质层(sc,stratum corneum)是由角质形成细胞转化成死亡的角质细胞堆叠而成，细胞间填充脂质和天然保湿因子，形成皮肤屏障的“砖墙结构”。脂质的主要成分是神经酰胺、胆固醇和游离脂肪酸。神经酰胺的结构由两部分组成即长链脂肪酸通过酰胺键连接在鞘氨醇骨架上。人体皮肤角质层中含量最高的神经酰胺是np，n代表无羟基脂肪酸，p代表植物鞘氨醇。另外，人体角质层神经酰胺中有较为宽广的脂肪酸碳链分布，可以在角质层中形成多样的层状结构结晶域，有利于维持皮肤屏障的功能。植物油来源的神经酰胺同样拥有较为宽广的脂肪酸碳链分布，与人体角质层脂质有更好的相容性(oh,m.j.等人，novel phytoceramides containing fatty acids of diverse chain lengths are better than asingle c18-ceramide n-stearoyl phytosphingosine to improve the physiological properties of human stratum corneum.clin cosmet investig dermatol.2017；10:363-371)。补充角质层脂质有助于改善角质层结构，增加角质层中脂质含量，修复、增强皮肤屏障，降低皮肤的经皮失水量。


技术实现要素：

5.为了综合利用油橄榄来源的多种活性物质，本发明意外地发现，油橄榄来源的两种活性物质：油橄榄叶提取物以及橄榄油来源的神经酰胺np的组合物，能够维持皮肤屏障的稳定性，对紫外线诱导的皮肤损伤有一定的修护作用。
6.油橄榄叶提取物在化妆品中有比较广泛的应用，如专利cn111789799a提到了油橄榄叶提取物以及其组合物在抗炎舒缓方面的作用，专利cn114469820a提到了油橄榄叶提取物通过抑制酪氨酸酶活性实现美白功效。神经酰胺np也被广泛应用于化妆品中，修护皮肤屏障，如专利cn115006324a介绍了含神经酰胺np的滋养修护乳在修复皮肤屏障方面的作用，专利cn112402282a中应用的神经酰胺组合物可以减少刺激物质的渗透、增强角质层含水量和皮肤锁水能力。橄榄油来源神经酰胺有良好的舒缓、修护功效，但是暂时没有相关的
专利申请。两种物质对皮肤均有多种优良功效，但是暂时没有专利以二者的组合物为保护对象。
7.现有技术中，仅对橄榄油来源神经酰胺和油橄榄叶提取物的功效各自进行了研究，并没有将其二者组合进行研究，且对于橄榄油来源的神经酰胺在舒缓修护这方面的作用也没有具体阐述。
8.为了解决上述问题，本发明提出了一种油橄榄来源的护肤组合物，所述组合物中含有油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np。
9.进一步地，所述的油橄榄叶提取物中橄榄苦苷含量大于0.1％。
10.进一步地，组合物中油橄榄叶提取物可以通过浸提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、超临界二氧化碳萃取法等方法进行提取，对其提取方式不作特别限定。提取物可为溶液或固体，对其形式不作特别限定。用于提取的油橄榄叶中橄榄苦苷含量大于0.1％，储存于阴凉通风处以避免活性物质的降解。
11.优选的，油橄榄叶提取物采用大孔树脂吸附法纯化。
12.进一步地，所述神经酰胺为橄榄油来源神经酰胺np，结构如式(1)所示。其中，r表示碳原子数为11-30的饱和或不饱和烷基。
[0013][0014]
具体的，橄榄油来源神经酰胺np中脂肪酸来源为橄榄油。
[0015]
具体的，橄榄油来源神经酰胺np指发酵得到的植物鞘氨醇与油橄榄油中的甘油三酯发生胺酯交换反应得到的终产物。
[0016]
优选地，油橄榄叶与橄榄油来源神经酰胺np中的脂肪酸供体橄榄油来自于同一产地。
[0017]
本发明提供的一种组合物中，油橄榄叶提取物中橄榄苦苷与橄榄油来源神经酰胺np的比例为(0.1-20):1。
[0018]
优选的，油橄榄叶提取物中橄榄苦苷与橄榄油来源神经酰胺np的比例为(0.5-2):1。
[0019]
本发明提供的上述组合物可以应用于化妆品中，包括但不限于乳、霜、水、精华。
[0020]
进一步地，所述组合物包括油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np。
[0021]
进一步地，所述组合物在化妆品中的应用，含量范围为0.01-30％。
[0022]
优选的，该组合物在化妆品中的含量范围为0.1-10％。
[0023]
本发明提供的组合物可用于化妆品中减轻炎症反应，维持皮肤屏障稳定，所述组合物包括油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np。
[0024]
进一步地，组合物促进vapb和micu1基因表达维持皮肤屏障内钙离子的稳态。
[0025]
进一步地，组合物促进cbr1基因表达减轻细胞炎症。
[0026]
进一步地，组合物抑制ifna7基因表达，减轻紫外诱导的炎症过程。
[0027]
进一步地，组合物抑制wif1基因表达，影响细胞的增殖与分化过程。
[0028]
进一步地，组合物抑制pmaip1基因表达，抑制紫外线诱导的细胞凋亡过程。
[0029]
本发明的显著优点：
[0030]
1.本发明提供的一种油橄榄来源的护肤组合物，包括油橄榄叶提取物及橄榄油来源神经酰胺np。
[0031]
2.本发明提供的一种油橄榄来源的护肤组合物，组合物中包括油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np，可通过促进屏障基因表达来维持细胞内钙离子稳态，减轻炎症反应，减少细胞凋亡来减少紫外线对皮肤的损伤，维护皮肤屏障的稳定性。
[0032]
3.本发明提供的一种油橄榄来源的护肤组合物，组合物中包括油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np，组合物可用于多种护肤品中，包括但不限于乳、霜、水、精华，应用了该组合物的护肤品具有维持皮肤屏障，修护紫外线诱导引起的皮肤损伤的作用。
附图说明：
[0033]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0034]
图1：甘肃陇南橄榄油来源神经酰胺np的hplc图谱
[0035]
图2：橄榄油来源神经酰胺np对sls刺激导致的表皮模型组织形态变化的影响图3：橄榄油来源神经酰胺np对sls刺激导致的表皮模型丝聚蛋白flg含量变化的影响
[0036]
图4：橄榄油来源神经酰胺np对sls刺激导致的表皮模型谷氨酰胺转氨酶tgm1含量变化的影响
[0037]
图5：橄榄油来源神经酰胺np的结构式
[0038]
图6：相比于阴性对照，施用组合物后表皮模型中表达上调基因的go富集分析图7：相比于阴性对照，施用组合物后表皮模型中表达下调基因的go富集分析具体实施案例
[0039]
下述实施例中，市售神经酰胺np，购自赢创特种化学有限公司，其特征为脂肪酸部分是硬脂酸；橄榄油来自于甘肃陇南，购于甘肃陇南祥宇油橄榄开发有限责任公司；发酵来源的植物鞘氨醇购于韩国索路思生物技术有限公司；油橄榄叶来自于甘肃陇南，油橄榄叶提取物采用大孔树脂吸附法纯化，提取物为粉末，其中橄榄苦苷含量为32％。油橄榄叶提取物的制备方法：将干燥的油橄榄叶粉碎后加入70％乙醇水溶液中加热回流3次，合并提取液后过滤得到浓缩提取液。提取液用大孔树脂柱吸附有效成分，吸附完毕后先用水洗涤树脂柱除去杂质，然后用70％乙醇水溶液解吸附。收集解吸附液，加入适量糊精后冻干，制成产物油橄榄叶提取物粉末。
[0040]
实施案例一：橄榄油来源的神经酰胺np的制备
[0041]
采用常规胺酯交换法制备神经酰胺。将3g植物鞘氨醇加入10g产地为甘肃陇南的橄榄油中，在氮气保护下搅拌加热至100℃，回流10小时至反应完全。撤去热源，在氮气氛围下冷却至室温，石油醚重结晶得到神经酰胺终产物，产率93％。hplc显示纯度超过92％，详
见说明书附图1。
[0042]
上述合成方法仅为可能性之一，胺酯交换反应可能采用酸、碱、催化剂或酶提高反应速率或降低副反应程度，反应可能在氮气、空气或真空条件下进行，本发明不对合成方式作具体限制。
[0043]
实施案例二：橄榄油来源神经酰胺np与原料橄榄油中脂肪酸链的碳链分布情况
[0044]
采用酯交换法对橄榄油来源神经酰胺np与原料橄榄油进行测定，对于橄榄油样品，精密称取约0.3g样品，加入5ml氢氧化钠-甲醇溶液摇匀，常温反应40min，加入5ml石油醚摇匀静置，再加入5ml蒸馏水。吸取上层有机相于离心管中，无水硫酸钠干燥，离心，过滤，稀释后用gc-ms分析，与数据库对比检索进行定性与定量分析。对于神经酰胺样品，精密称取约0.2g样品，加入5ml氢氧化钾-甲醇溶液摇匀，80℃水浴反应1小时，加入5ml bf3-甲醇溶液摇匀，80℃水浴反应1小时。加入20ml三氯甲烷，10ml 0.9％氯化钠溶液，振摇离心后取下层溶液用10ml甲醇和10ml 0.9％氯化钠溶液分别洗涤一次，无水硫酸钠干燥后用gc-ms检测并与数据库对比检索分析。实验结果如表一所示。
[0045]
表一：脂肪酸链的碳链分布情况对比
[0046]
原料橄榄油(％)橄榄油来源神经酰胺np(％)c16:012.0910.69c16:11.591.63c18:01.892.03c18:174.6975.37c18:27.928.13c18:30.790.80c20:00.340.32c20:10.300.29其它0.400.74
[0047]
由表一数据可知，原料橄榄油中c18:0、c18:1、c18:2三者含量分别是1.89％、74.69％和7.92％，橄榄油来源神经酰胺np中，三者的含量分别为2.03、75.37％和8.13％。对于c16:0和c16:1，原料橄榄油中的含量占比分别是12.09％和1.59％，橄榄油来源神经酰胺np中，三者的含量分别是10.69％和1.63％。即橄榄油来源神经酰胺np与原料橄榄油有相似的脂肪酸链分布，且不饱和脂肪酸含量较高，说明本发明方法制备的神经酰胺np中脂肪酸来源于橄榄油。
[0048]
实施案例三：橄榄油来源的神经酰胺np、其它植物油来源的神经酰胺np和市售神经酰胺np的舒缓效果对比
[0049]
测定了多种神经酰胺np对uvb刺激角质形成细胞的中炎症因子il-1α和炎症介质pge2含量的影响。其中样品组一为上述陇南橄榄油来源神经酰胺，样品组二为地中海橄榄油来源神经酰胺，样品组三为乳木果油来源神经酰胺，样品组四为混合植物油来源神经酰胺(植物油包括乳木果油、白池花籽油、辣木籽油和澳洲坚果籽油)，样品组五为市售硬脂酸来源神经酰胺。样品组中其它植物油来源的神经酰胺np以不同植物油为原料，采用与实施案例一相似的合成、纯化方式得到。样品组一至五的测试浓度为0.003％，阳性对照地塞米松浓度为0.01％，uvb刺激为300mj/cm2。实验结果如表二所示。
[0050]
表二：神经酰胺np对炎症因子il-1α和炎症介质pge2含量变化的影响
[0051][0052]
由表二数据可知，样品组一至样品组五的神经酰胺对uvb刺激导致的角质形成细胞炎症因子和炎症介质的含量均有抑制作用，其中抑制作用最强的是橄榄油来源神经酰胺样品，抑制作用最弱的是市售硬脂酸来源神经酰胺。对比样品组一、二和样品组三、四可知，不饱和脂肪酸含量较高的神经酰胺有更好的舒缓作用。对比样品组一和样品组二可知，陇南橄榄油来源神经酰胺的舒缓作用显著优于地中海橄榄油来源神经酰胺(p《0.01)。
[0053]
实施案例四：橄榄油来源神经酰胺np和市售硬脂酸来源神经酰胺np的抗炎效果对比
[0054]
采用3d皮肤模型(购自广东博溪生物科技有限公司)研究了神经酰胺对sls(十二烷基硫酸钠，sodium lauryl sulfate)刺激皮肤屏障损伤的作用，并将橄榄油来源神经酰胺np和市售神经酰胺np进行功效对比。
[0055]
将皮肤模型分为空白对照、阴性对照、阳性对照和样品组，每组包含3个平行实验。空白对照组不作任何处理，阴性对照组表面添加25μl 0.2％sls溶液，阳性对照组表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl 0.01％地塞米松，样品组一表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl 0.05％橄榄油来源神经酰胺np，样品组二表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl0.1％橄榄油来源神经酰胺np，样品组三表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl0.1％市售神经酰胺np
[0056]
给药完成后，将皮肤模型置于培养箱中孵育24小时，结束后用无菌pbs溶液清洗模型表面残留的受试物，用无菌棉签拭去模型内、外的残留液体。孵育完成后，收集表皮皮肤模型培养液于离心管中，采用elisa试剂盒测定炎症因子il-1α和炎症介质pge2含量。实验结果如表三所示。
[0057]
表三：炎症因子il-1α和炎症介质pge2的含量变化
[0058][0059]
由表三数据可知，对比阴性对照组和空白对照组，sls刺激导致炎症因子il-1α和炎症介质pge2含量增加。而相比于阴性对照组，橄榄油来源神经酰胺np可以显著降低炎症因子il-1α和炎症介质pge2的含量，p值均小于0.01。0.05％橄榄油来源神经酰胺np对il-1α和pge2的抑制率分别为24.67％和33.01％，0.1％的橄榄油来源神经酰胺np对il-1α和pge2的抑制率分别为40.71％和34.39％。市售神经酰胺np对炎症因子il-1α有显著抑制作用，抑制率为21.47％，但是对炎症介质pge2没有显著作用。橄榄油来源神经酰胺np对炎症因子il-1α和炎症介质pge2的抑制作用相比于市售神经酰胺np均显著增强，对于炎症因子il-1α，样品组二对比样品组三，p值为0.045《0.05；对于炎症介质pge2，样品组二对比样品组三，p值为0.002《0.01.
[0060]
本组实验数据中，橄榄油来源神经酰胺np与市售神经酰胺np对炎症因子il-1α和炎症介质pge2的抑制效果呈显著性差异。
[0061]
实施案例五：橄榄油来源神经酰胺np、市售神经酰胺np的修护屏障效果对比
[0062]
采用3d皮肤模型(购自广东博溪生物科技有限公司)研究了神经酰胺对sls(十二烷基硫酸钠，sodium lauryl sulfate)刺激皮肤屏障损伤的作用，并将橄榄油来源神经酰胺np和市售神经酰胺np进行功效对比。
[0063]
将皮肤模型分为空白对照、阴性对照、阳性对照和样品组，每组包含3个平行实验。空白对照组不作任何处理，阴性对照组表面添加25μl 0.2％sls溶液，阳性对照组表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl50μm ppar激动剂wy14643，样品组一表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl0.05％橄榄油来源神经酰胺np，样品组二表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl0.1％橄榄油来源神经酰胺np，样品组三表面添加12.5μl 0.4％sls溶液和12.5μl 0.1％市售神经酰胺np。
[0064]
丝聚蛋白(filaggrin,flg)在与角蛋白纤维相互作用形成致密的角蛋白纤维束，
在谷氨酰胺转氨酶的作用下与兜甲蛋白(loricrin,lor)等连接形成不溶于水的稳定的角质包膜(cornified envelope,ce)，成为皮肤屏障的基础。此外，丝聚蛋白在角质形成细胞的分化末期逐渐被caspase-14等蛋白酶降解为天然保湿因子等小分子活性物质，维持皮肤水合作用。寻常性鱼鳞病和特应性皮炎等多种皮肤病症可能和丝聚蛋白功能异常导致的皮肤屏障受损有关。谷氨酰胺转氨酶1(transglutaminase-1,tgm1)主要在表皮细胞中表达，参与角质包膜形成过程中ε-(γ-谷氨酰)赖氨酸异肽键交联的形成，这种交联非常稳定，是角质形成细胞终末分化组成角质包膜的关键步骤。因此flg和tgm1酶的含量是表征皮肤屏障功能的关键指标之一。
[0065]
给药完成后，将皮肤模型置于培养箱中孵育24小时，结束后用无菌pbs溶液清洗模型表面残留的受试物，用无菌棉签拭去模型内、外的残留液体。取用于检测的模型，用4％多聚甲醛固定24小时后，用免疫荧光法测定丝聚蛋白和谷氨酰胺转氨酶i的含量，h&e染色后分析组织形态变化。实验结果如表四和说明书附图2-4所示。
[0066]
表四：flg和tgm1酶的含量变化
[0067][0068]
由图2可知，对比空白对照和阴性对照组，sls刺激导致皮肤模型出现组织形态损伤，具体表现为活细胞层数减少，出现空泡。橄榄油来源神经酰胺np对组织形态损伤存在一定的修复作用，0.05％的橄榄油来源神经酰胺np减少了空泡的数量和体积，0.1％的橄榄油来源神经酰胺np使空泡减少，活细胞层排列紧凑，活细胞受损现象明显改善。但市售神经酰胺np对组织中的空泡以及活细胞层均无改善作用。
[0069]
由表四和图3可得知，对比空白对照和阴性对照组，sls刺激导致皮肤模型中绿色荧光部分面积减少(图像上半，角质层颜色较浅部分)，即丝聚蛋白含量下降。橄榄油来源神经酰胺np和市售神经酰胺np均使皮肤模型中丝聚蛋白含量显著增加，0.05％、0.1％的橄榄
油来源神经酰胺np和0.1％的市售神经酰胺np对丝聚蛋白含量的促进作用分别是225.58％、281.40％、262.79％。同浓度的橄榄油来源神经酰胺np对丝聚蛋白含量增加的作用显著优于市售神经酰胺np，p值为0.041《0.05。
[0070]
由表四和图4可知，sls刺激导致皮肤模型中绿色荧光部分面积减少(图像上半，角质层颜色较浅部分)，即tgm1含量下降。橄榄油来源神经酰胺np和市售神经酰胺np均使皮肤模型中tgm1含量显著增加，0.05％、0.1％的橄榄油来源神经酰胺np和0.1％的市售神经酰胺np对丝聚蛋白含量的促进作用分别是491.67％、558.33％和366.67％。同浓度的橄榄油来源神经酰胺np对tgm1含量增加的作用显著优于市售神经酰胺np，p值为0.012《0.05。
[0071]
本组实验数据中，橄榄油来源神经酰胺np和市售神经酰胺np对丝聚蛋白flg和谷氨酰胺转氨酶1(tgm1)的促进效果呈显著性差异。
[0072]
上述实验结论说明橄榄油来源神经酰胺np对sls刺激导致的表皮皮肤模型炎症反应以及皮肤屏障损伤均有显著的影响，降低炎症因子和炎症介质的含量说明橄榄油来源神经酰胺np表现出良好的舒缓效果，修护皮肤组织结构、提升屏障相关蛋白含量说明橄榄油来源神经酰胺np表现出良好的皮肤屏障修护作用。与市售神经酰胺np对照，可以发现橄榄油来源神经酰胺np在舒缓和修护功效上都有更突出的效果。
[0073]
实施案例六：一种油橄榄来源的护肤组合物
[0074]
本发明提供了一种油橄榄来源的护肤组合物，采用来自甘肃陇南的油橄榄叶，通过大孔树脂纯化技术得到粉末形式的油橄榄叶提取物，其中的橄榄苦苷含量为32％。采用来自甘肃陇南的橄榄油制备神经酰胺np，将发酵来源的植物鞘氨醇与橄榄油混合加热，使植物鞘氨醇与甘油三酯发生酯交换反应得到产物橄榄油来源的神经酰胺np。利用基因微阵列测序法，测试油橄榄叶提取物、橄榄油来源神经酰胺np和组合物(油橄榄叶提取物+橄榄油来源神经酰胺np)对紫外线(uvb)辐照皮肤模型的影响，验证单一成分及组合物对紫外线导致皮肤损伤的舒缓和修护作用。
[0075]
实施案例七：施用组合物的表皮模型基因表达的go富集分析
[0076]
将全厚表皮重建模型epidermft(购自美国mattek公司)分为5组，即空白对照(无处理)、阴性对照(仅uvb处理)、油橄榄叶提取物(0.2％)、橄榄油来源神经酰胺np(0.05％)、本发明制备的组合物(油橄榄叶提取物0.2％+橄榄油来源神经酰胺np 0.05％)，每组包括3个平行实验。采用基因微阵列测序法，将表皮模型用200μl对应的受试物处理4小时，uvb辐照(280-340nm,200mj/cm2)后再用对应的受试物处理24小时，孵育完成后用无菌pbs溶液清洗模型表面残留的受试物，用无菌棉签拭去模型内、外残留液体。提取总rna用于微阵列分析(affymetrix human clariom s,共21448个基因)。筛选组合物实验组相比于阴性对照组p值小于0.05(显著性变化)的基因进行go富集分析，结果如图6、7所示。
[0077]
结果显示：施用油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np的组合物后，表达上调基因与包括铜离子解毒、调控外源性凋亡相关信号通路、负调控凋亡过程中的半胱氨酸内肽酶活性、线粒体膜等过程相关。施用油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np的组合物后，表达下调基因与包括与dna损伤位点、双链rna响应、细胞-基质黏附、调控dna损伤刺激响应等过程相关。
[0078]
实施案例八：组合物促进表皮模型中屏障相关基因的表达
[0079]
钙离子对维持皮肤屏障的结构与稳定性有重要的作用。在正常的表皮结构中存在
钙离子浓度梯度，角质层中钙离子浓度最高，随着皮肤深度增加而逐渐降低，基底层中钙离子浓度最低。较低的钙离子浓度促进角质形成细胞增殖，较高的钙离子浓度促进角质形成细胞的分化和分层。细胞内和细胞外的钙离子浓度互相影响，共同维持屏障的作用。紫外线辐照导致的ros升高会影响细胞内质网中钙离子浓度，造成内质网应激(endoplasmic reticulum stress)，从而影响皮肤屏障功能。vapb编码囊泡相关膜蛋白结合蛋白(vesicle-associated membrane protein-binding protein b)，位于内质网膜表面，与线粒体蛋白ptpip51相互作用，调节钙离子浓度。vapb的缺失会影响内质网释放的钙离子被线粒体摄取的过程(de vos,k.j.等人，vapb interacts with the mitochondrial protein ptpip51 to regulate calcium homeostasis.hum.mol.genet 21,1299
–
1311(2012))。micu1调控线粒体钙转运蛋白mcu(antony,a.n.等人，micu1 regulation of mitochondrial ca(2+)uptake dictates survival and tissue regeneration.nat.commun 7,10955(2012))，影响线粒体对钙离子的摄取。micu1的缺失会导致线粒体摄入过量浓度钙离子，诱导细胞死亡过程，影响伤口的愈合。以上两种基因的表达量影响细胞内的钙离子稳态，同样可能对皮肤角质层中钙离子浓度产生影响，导致皮肤屏障功能变化。cbr1编码一种nadph依赖性的羰基还原酶carbonyl reductase-1，催化包括前列腺素等多种羰基化合物的还原，可以减少氧化应激导致的炎症反应。ifna7编码干扰素α7，是巨噬细胞在免疫过程中产生的一种低分子量糖蛋白，参与jak/stat信号通路，影响免疫调节功能。wif1编码wnt抑制因子1，抑制抗炎的经典wnt信号通路，抑制角质形成细胞的增殖与分化(schl
ü
ter,h.等人，wif1 is expressed by stem cells of the human interfollicular epidermis and acts to suppress keratinocyte proliferation.j invest dermatol 133,1669-1673(2013))。pmaip1编码一种属于bcl-2蛋白家族的促凋亡蛋白，也被称作noxa，参与p53介导的细胞凋亡过程。
[0080]
相关基因表达的变化率见表六。
[0081]
表六：基因表达变化率
[0082][0083]
在uvb辐照后相比于未辐照的空白对照组，vapb、micu1和cbr1表达量下降，而ifna7、wif1和pmaip1表达量上升，即皮肤屏障中钙离子稳态被破坏(vapb、micu1)、皮肤炎症加剧(cbr1、ifna7)、细胞分化和凋亡过程受到影响(wif1、pmaip1)。施用油橄榄叶提取
物、橄榄油来源神经酰胺np以及二者的组合物后，相比于仅有uvb辐照处理的阴性对照组，vapb、micu1和cbr1表达量上升，而ifna7、wif1和pmaip1表达量下降，即皮肤屏障损伤、皮肤炎症和细胞分化凋亡均得到一定的缓解。并且组合物组相比于单一原料组，基因表达有更加显著的变化，具有明显的协同增效作用。以上基因表达变化说明油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np的组合物具有良好的修护的舒缓作用，可以减轻uvb辐照对皮肤组织造成的损伤。
[0084]
上述皮肤模型微阵列测序结果显示油橄榄叶提取物与橄榄油来源神经酰胺np的组合物对维持皮肤屏障功能有显著作用。促进vapb和micu1基因表达维持皮肤屏障内钙离子的稳态，促进cbr1基因表达减少炎症的产生。抑制ifna7基因表达，减轻紫外诱导的炎症过程；抑制wif1基因表达，减少对抗炎wnt通路的影响，调节细胞的增殖和分化过程；抑制pmaip1基因表达，抑制紫外线诱导的细胞凋亡过程。组合物通过调节相关基因的表达起到舒缓修护、维护皮肤屏障的作用，所以应用该组合物的护肤品同样具有舒缓修护、维护皮肤屏障的作用。
[0085]
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了说明，后续还将进行工艺、配方及应用方面的进一步研究，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
[0086]
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

技术特征：
1.一种护肤组合物，其特征在于，组合物中含有油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的油橄榄叶提取物中橄榄苦苷的含量大于0.1％。3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，组合物中的橄榄油来源神经酰胺np由植物鞘氨醇和橄榄油中的脂肪酸通过酰胺键连接而成。4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，组合物中的橄榄油来源神经酰胺np由发酵来源的手性植物鞘氨醇((2s,3s,4r)-2-氨基-1,3,4-十八烷三醇)与甘油三酯之间发生胺酯交换反应制备而成。5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，组合物中的橄榄油来源神经酰胺np的结构可以用式(1)描述，r为碳原子数为11-30的饱和或不饱和烷基。6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，油橄榄叶提取物中橄榄苦苷与橄榄油来源神经酰胺np的比例按照重量计为(0.1-20):1。7.一种组合物用于制备通过减轻炎症反应、维持细胞内钙离子的稳态、减轻紫外线对于皮肤的损伤来维持皮肤屏障稳定的护肤制剂的用途。8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述组合物为油橄榄叶提取物和橄榄油来源神经酰胺np。9.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述组合物通过调控vapb和micu1基因表达，维持皮肤屏障中钙离子稳态；调控cbr1和ifna7基因表达，减轻皮肤中炎症反应；调控wif1和pmaip1基因表达，影响细胞分化和凋亡过程。10.如权利要求7所述的用途，其特征在于所述组合物在护肤制剂中的含量范围为0.01-30％。

技术总结
本发明提供了一种油橄榄来源的护肤组合物及其应用，将油橄榄叶提取物与油橄榄油来源神经酰胺NP相结合，维持细胞内钙离子稳态、减轻炎症反应、减轻紫外线对于皮肤的损伤，应用该组合物的化妆品具有维持皮肤屏障稳定的作用，解决了皮肤的一系列问题，效果高效显著，具有良好的应用前景。有良好的应用前景。有良好的应用前景。


技术研发人员：黄虎 陶侃 王静一 郭莉莉 黄云霞
受保护的技术使用者：上海中翊日化有限公司
技术研发日：2023.03.20
技术公布日：2023/8/5