一种测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，涉及一种快速测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的核磁共振波谱方法。本发明的分析方法，应用于化学合成法制备蔗糖月桂酸酯的质量控制。


背景技术：

2.蔗糖月桂酸酯为无色至微黄色稠厚凝胶、软质固体或白色至黄褐色粉末状。作为非离子型的表面活性剂，广泛应用于食品、药品、化妆品、洗涤剂及纺织行业中，是联合国粮农组织和卫生组织(who/hao)共同推荐使用的食品添加剂，欧美各国均已批准作为药用辅料和食品添加剂，我国也已于20世纪80年代批准使用。蔗糖酯已成为全球仅次于山梨醇酯、单甘油酯和丙二醇酯的第四大食品乳化剂品种；可替代传统的微晶纤维素、滑石粉、单甘酯等作为糖果压片润滑剂。
3.目前工业化生产蔗糖月桂酸酯主要采用化学法。蔗糖与月桂酸酯的酯化反应复杂，产物种类多样，化学合成伴随单酯、二酯、三酯和大量的同分异构体的生成。蔗糖酯中含有的醚键和多个羟基，为亲水基团，脂肪酸基团表现出一定的亲油性。通常蔗糖单酯的水溶性及亲水性最好，蔗糖酯结合的脂肪酸链越多，蔗糖酯的亲水性越弱。单酯化度高的蔗糖脂肪酸酯的亲油亲水平衡值(hlb)较高，乳化性较好，比较得知蔗糖脂肪酸单酯具有更加广泛的用途。蔗糖结构如下图所示，当蔗糖结构中的羟基氢原子被进一步取代时，能获得二酯、三酯甚至多酯。
[0004][0005]
色谱分析是定量分析各种酯含量的重要的分析方法之一，该方法可将产物中的单酯、双酯及三酯完全分开并检测出来。对于单酯为主的蔗糖月桂酸酯，有8个羟基位点可以发生酯化反应，不同酯化位置的蔗糖月桂酸酸单酯因其结构的差异而表现出不同的性质。据文献报道，三种伯醇亚甲基单酯具有相似的溶解性和hlb值、相近的表面张力和较高的热稳定性。但伯醇亚甲基单酯与仲醇单酯性质差别较大。
[0006]
本发明人经过多次实验发现，使用常规的色谱分析方法，在没有对照品的情况下，无法确定单酯脂肪酸酯化位点。为解决这一问题，发明人尝试使用核磁共振波谱法，意外发现核磁共振波谱法可以快速有效地确定蔗糖月桂酸酯的伯醇酯化度。


技术实现要素：

[0007]
本发明采用核磁共振波谱法，在特定的氘代溶剂中采集氢谱和h-c hsqc谱，可以快速有效地分析伯醇酯化度，并找出批次间差异。
[0008]
快速高效分析各种蔗糖月桂酸酯(如单酯、二酯、三酯等)的含量是实验后期的主要事项。对本发明来说，分析蔗糖月桂酸单酯伯醇酯化度，有非常重要的作用。
[0009]
本发明是通过以下技术方案实现的：
[0010]
一种测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，包括以下步骤：
[0011]
1)称取一定质量的蔗糖月桂酸酯样品，置离心管中；加入氘代溶剂，使样品溶解，配置成浓度为10mg/ml-20mg/ml的溶液；将溶解后的样品溶液转移到核磁管中，
[0012]
2)将核磁管放置于核磁共振谱仪中，检测得到核磁共振氢谱，其中所述核磁共振氢谱的分析条件为：脉冲序列为：zg或者zg30，
[0013]
3)分析采集到的核磁共振氢谱，指认月桂酸端甲基在氢谱中的共振信号、及蔗糖1位氢在氢谱中的共振信号，并确认蔗糖月桂酸酯样品的特征峰不受活泼氢干扰，然后对其采集带相位编辑的h-c hsqc图谱，
[0014]
4)分析采集到的h-c hsqc图谱，指认出酯化后伯醇亚甲基的共振信号，
[0015]
5)对步骤4)所指认出的酯化后伯醇亚甲基在氢谱中的一个或多个共振信号、以及步骤3)得到的月桂酸端甲基在氢谱中的共振信号、分别进行积分，比较相对积分值，计算得到伯醇酯化度。
[0016]
在一些优选的实施方式中，步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代甲醇、氘代二甲亚砜、重水、氘代氯仿之一或其任意混合。
[0017]
在一个优选的实施方式中，步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代甲醇。
[0018]
在另一个优选的实施方式中，步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代二甲亚砜与重水的体积比为10：1的混合溶剂。
[0019]
在一些优选的实施方式中，步骤1)中配置蔗糖月桂酸酯样品溶液的浓度为10mg/ml。
[0020]
上述最优浓度的确定方法为：在步骤3)分析采集到的核磁共振氢谱时，对不同浓度的样品分别进行氢谱采集并比较峰形，发现蔗糖月桂酸酯样品浓度为10mg/ml时，不受活泼氢影响，积分最准确，结果误差最小，谱图分辨率高，因此确定其为最优浓度。
[0021]
其中所述步骤2)中，在一些优选的实施方式中，其中所述核磁共振氢谱的分析条件为：采用bbo探头；探头温度：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：zg或者zg30；谱宽：8196hz；90度脉冲宽度：p1＝10μs；脉冲延迟时间：d1＝1s或者2s；发射中心：o1＝8.0ppm；累加次数：8或者16或者32。
[0022]
其中所述步骤3)中，在一些优选的实施方式中，其中所述采集带相位编辑的h-chsqc图谱的采集条件为：采用bbo探头；探头温度：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：hsqcdedtgpsisp2.3；采样点数：td(f1)＝256、td(f2)＝2048；谱宽：f1维＝21130hz、f2维＝2778hz；累加次数：64或者80；空扫次数：16；碳氢直接耦合常数：cnst2＝145hz。
[0023]
本发明的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，当步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代甲醇时，步骤4)中通过分析采集到的h-c hsqc图谱，确认化学位移在δ4.50～4.30ppm、δ4.25～4.15ppm这两处共振信号为亚甲基，并指认出这两处亚甲基是与月桂酸发生酯化反应的伯醇亚甲基ch2共振信号；确认氢谱中化学位移δ5.50～5.30ppm处的共振信号为最低场共振信号，并指认为蔗糖1位氢共振信号；确认氢谱中δ1.00～0.80ppm处的共振信号为t
峰，并指认为月桂酸端甲基共振信号。
[0024]
本发明所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其中步骤5)中所述计算的公式为：
[0025]
伯醇酯化度＝(3*a2)/(2*a3)；其中
[0026]
a2：酯化后伯醇亚甲基的共振信号在氢谱中的的相对积分值之和，
[0027]
a3：月桂酸端甲基共振信号在氢谱中的相对积分值。
[0028]
在本发明的一些优选的实施方式中，其中所述步骤5)还可以对蔗糖1位氢在氢谱中的共振信号、以及月桂酸端甲基在氢谱中的共振信号分别进行积分，比较相对积分值，计算得到蔗糖总酯化度，通过蔗糖总酯化度的计算结果，确认蔗糖月桂酸酯的主要存在形式是否以单酯形式存在，从而确认伯醇酯化度结果的准确性。其中所述蔗糖总酯化度的计算的公式为：
[0029]
蔗糖总酯化度＝(3*a1)/a3；
[0030]
其中
[0031]
a1：蔗糖1位氢共振信号在氢谱中的相对积分值，
[0032]
a3：月桂酸端甲基共振信号在氢谱中的相对积分值。
[0033]
本发明的有益效果如下：
[0034]
1、本发明的分析方法，首次分析时，需要采集分析h-c hsqc谱图，指认酯化后伯醇亚甲基的共振信号；后续分析蔗糖酯化度和伯醇酯化度时，仅需采集氢谱，无需再进行hsqc实验，分析时间短。
[0035]
2、本发明的分析方法，无需对照品或标准品；采用氘代甲醇作为溶剂；仅需采集氢谱，分析时间短；定性与定量同步完成。
[0036]
3、本发明在检测过程中无需使用大量的有机溶剂，绿色环保，快速高效，检测结果灵敏度高，重现性好。
附图说明
[0037]
图1为蔗糖月桂酸酯的重水溶解核磁图谱；
[0038]
图2为蔗糖月桂酸酯的氘代氯仿溶解核磁图谱；
[0039]
图3为蔗糖月桂酸酯的氘代二甲亚砜溶解核磁图谱；
[0040]
图4为蔗糖月桂酸酯的氘代甲醇溶解核磁图谱；
[0041]
图5为蔗糖月桂酸酯的氘代二甲亚砜与重水混合溶剂溶解核磁图谱；
[0042]
图6为蔗糖月桂酸酯的氘代甲醇溶解hsqc图谱；
[0043]
图7为蔗糖月桂酸酯的氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合溶剂溶解hsqc图谱。
具体实施方式
[0044]
下面通过多组具体实施例来进一步说明本发明。应当理解为：本发明的实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的限制。在本发明技术方案基础上对本发明进行简单的修改或采用惯用手段或活性成分进行等同替换而得到的技术方案均属于本发明的保护范围。
[0045]
仪器和设备
[0046]
实验设备包括：avance neo 400m核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司)，9.4t超导磁体，5mm双核z-梯度探头及topspin 4.0.9试验控制及数据处理软件；5mm核磁共振样品管；kq-250db型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；msa6.6s分析天平(赛多利斯，德国公司)。
[0047]
实验溶剂包括：氘代水(氘代度为99.9％，又名重水)购于西格玛公司；氘代氯仿(氘代度为99.8％)购于西格玛公司；氘代二甲亚砜(氘代度为99.9％)购于西格玛公司；氘代甲醇(氘代度为99.8％)购于西格玛公司。
[0048]
实施例1氘代试剂的筛选
[0049]
1.1样品的处理
[0050]
分别称取蔗糖月桂酸酯样品多份，各约10mg，置离心管中；分别加入重水、氘代氯仿、氘代二甲亚砜、氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)的混合溶剂、氘代甲醇各0.6ml，振摇、超声使样品溶解；将溶解后的样品转移到核磁管中，采集氢谱。
[0051]
1.2核磁指纹图谱数据库的建立
[0052]
调整好核磁共振波谱仪，并把核磁管放置于核磁共振波谱仪中，进行氢谱测试，得到样品的核磁共振信号；采用bbo探头；测定温度(探头温度)：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：zg或者zg30；谱宽：8196hz；90度脉冲宽度：p1＝10μs；脉冲延迟时间：d1＝1s或者2s；发射中心：o1＝8.0ppm；累加次数：8或者16或者32。
[0053]
1.3谱图预处理
[0054]
用核磁共振波谱仪自带的数据处理软件对所得的核磁共振信号进行傅里叶变换，变换点数为65536，指数线宽因子为0.3hz，得到样品的核磁氢谱图。
[0055]
用topspin软件(topspin软件中各参数设置如下：pulprog＝zg30或者zg，aq_mod＝dqd，td＝64k，ns＝8*n，ds＝2，td0＝1，sw＝8196hz，d1＝1s，de＝6.5μs)将获得的原始指纹图谱进行预处理，包括谱峰对齐，基线校正和相位调整。以氘代试剂的化学位移(重水为4.70ppm、氘代氯仿为7.28ppm、氘代二甲亚砜为2.50ppm、氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合溶剂为2.50ppm、氘代甲醇为3.33ppm)进行谱峰对齐；基线校正选择bc_mod＝quad拟合方式；相位调整选择ph_mod＝pk算法自动优化。所得不同氘代试剂溶剂的核磁氢谱图见图1～图5。
[0056]
1.4核磁共振图谱的分析
[0057]
通过对不同溶剂溶解的核磁氢谱图进行比较分析，发现用重水、氘代氯仿、氘代二甲亚砜溶解的样品图谱，谱图分辨率和信噪比均不满足要求，无法进行进一步分析；而用氘代甲醇或氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合溶剂溶解的样品图谱，谱图分辨率和信噪比均可以达到分析要求。
[0058]
以氘代甲醇作为溶剂，对样品进行二维核磁共振分析，可指认出被酯化的伯醇亚甲基ch2共振信号，进而计算伯醇酯化度。
[0059]
实施例2以氘代甲醇为溶剂的二维核磁共振研究
[0060]
2.1样品的处理
[0061]
称取蔗糖月桂酸酯样品约20mg，置离心管中；加入氘代甲醇0.6ml，振摇、超声使样品溶解；将溶解后的样品转移到核磁管中，采集hsqc谱图(碳氢直接相关谱)。
[0062]
2.2核磁指纹图谱数据库的建立
[0063]
调整好核磁共振波谱仪，并把核磁管放置于核磁共振波谱仪中，进行hsqc测试，得到样品的核磁共振信号；采用bbo探头；测定温度(探头温度)：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：hsqcdedtgpsisp2.3；采样点数：td(f1)＝256、td(f2)＝2048；谱宽：f1维＝21130hz、f2维＝2778hz；累加次数：64或者80；空扫次数：16；碳氢直接耦合常数：cnst2＝145hz。
[0064]
2.3谱图预处理
[0065]
用核磁共振波谱仪自带的数据处理软件对所得的核磁共振信号进行傅里叶变换，得到样品的核磁hsqc谱图。
[0066]
用topspin软件(topspin软件中各参数设置如下：pulprog＝hsqcedetgpsisp2.3，aq_mod＝dqd，td(f1)＝256，td(f2)＝2048，ns＝16*n，ds＝16，td0＝1，d1＝1.5s，de＝6.5μs)将获得的原始图谱进行预处理，包括谱峰对齐，基线校正和相位调整。基线校正选择bc_mod＝quad拟合方式；相位调整选择ph_mod＝pk算法自动优化。所得h-c hsqc谱图见图6。
[0067]
2.4核磁共振图谱的分析
[0068]
通过分析hsqc谱图，发现化学位移在δ4.50～4.30ppm、δ4.25～4.15ppm处的共振信号相位为负，表明这两处共振信号为亚甲基；同时，这两处的化学位移与其它亚甲基共振信号相比，明显向低场位移，说明与这两处亚甲基相连的羟基与月桂酸发生酯化反应，从而指认出与月桂酸发生酯化反应的伯醇亚甲基ch2共振信号；氢谱中化学位移δ5.50～5.30ppm处的共振信号为最低场共振信号，指认为蔗糖1位氢共振信号。氢谱中δ1.00～0.80ppm处的共振信号为t峰，指认为月桂酸端甲基共振信号。
[0069]
实施例3样品浓度的筛选
[0070]
分别称取三份蔗糖月桂酸酯样品，用氘代甲醇溶解，配置成浓度为5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml的样品溶液，采集氢谱，比较化学位移δ5.50～5.30ppm处的峰形。通过对比分析发现，样品浓度为5mg/ml时，蔗糖1位氢共振信号信噪比降低，相对积分值偏小，影响计算酯化度；样品浓度为20mg/ml时，部分蔗糖的羟基活泼氢没有被完成氘代，5ppm附近的活泼氢会使蔗糖1位氢共振信号相对积分值偏大，影响计算酯化度。因此，最终确定的优选样品浓度为10mg/ml。
[0071]
实施例4以氘代甲醇为溶剂的实际样品检测
[0072]
用氘代甲醇为溶剂建立的快速测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法对不同工艺生产的样品进行检测，将样品按照1.1-1.3的步骤进行操作，获得样品的核磁共振氢谱图；对氢谱中化学位移δ5.50～5.30ppm、δ4.50～4.30ppm、δ4.25～4.15ppm和δ1.00～0.80ppm处的峰分别进行积分，根据酯化度的计算公式进行计算。经分析，不同的生产工艺/不同批次产品，酯化度和伯醇酯化度结果见表1。
[0073]
本发明中酯化度的计算公式如下：
[0074]
蔗糖总酯化度＝(3*a1)/a3
[0075]
伯醇酯化度＝(3*a2)/(2*a3)
[0076]
a1：δ5.50～5.30ppm处的相对积分值；
[0077]
a2：δ4.50～4.30ppm和δ4.25～4.15ppm处的相对积分值之和；
[0078]
a3：δ1.00～0.80ppm处的相对积分值。
[0079]
表1
[0080]
不同批次产品蔗糖总酯化度伯醇酯化度批次11.090.75批次20.900.75批次30.910.82批次40.850.77批次51.010.75批次60.940.61批次70.950.58
[0081]
伯醇酯化度不同，蔗糖月桂酸酯性能不同。本发明人通过上述分析方法能够快速找到伯醇酯化度符合要求的蔗糖月桂酸酯产品批次。既可以根据该批次产品的生产工艺对其他批次产品进行工艺优化，从而在优化工艺的基础上进行后续放大生产，得到高质量的蔗糖月桂酸酯；也可以使用本发明的上述分析方法，作为判断不同批次蔗糖月桂酸酯质量的合格标准，等等。
[0082]
实施例5以氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合溶剂进行二维核磁共振研究
[0083]
5.1样品的处理
[0084]
称取蔗糖月桂酸酯样品约20mg，置离心管中；氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合溶剂0.6ml，振摇、超声使样品溶解；将溶解后的样品转移到核磁管中，采集hsqc谱图(碳氢直接相关谱)。
[0085]
5.2核磁指纹图谱数据库的建立
[0086]
调整好核磁共振波谱仪，并把核磁管放置于核磁共振波谱仪中，进行hsqc测试，得到样品的核磁共振信号；采用bbo探头；测定温度(探头温度)：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：hsqcdedtgpsisp2.3；采样点数：td(f1)＝256、td(f2)＝2048；谱宽：f1维＝21130hz、f2维＝2778hz；累加次数：64或者80；空扫次数：16；碳氢直接耦合常数：cnst2＝145hz。
[0087]
5.3谱图预处理
[0088]
用核磁共振波谱仪自带的数据处理软件对所得的核磁共振信号进行傅里叶变换，得到样品的核磁hsqc图。
[0089]
用topspin软件(topspin软件中各参数设置如下：pulprog＝hsqcedetgpsisp2.3，aq_mod＝dqd，td(f1)＝256，td(f2)＝2048，ns＝16*n，ds＝16，td0＝1，d1＝1.5s，de＝6.5μs)将获得的原始图谱进行预处理，包括谱峰对齐，基线校正和相位调整。基线校正选择bc_mod＝quad拟合方式；相位调整选择ph_mod＝pk算法自动优化。所得h-c hsqc谱图见图7。
[0090]
5.4核磁共振图谱的分析
[0091]
通过分析hsqc谱图，发现化学位移在δ4.35～3.95ppm处的共振信号相位为负，表明该处共振信号为亚甲基；同时，该处的化学位移与其它亚甲基峰相比，明显向低场位移，说明与该处亚甲基相连的羟基与月桂酸发生酯化反应，从而指认出与月桂酸发生酯化反应的伯醇亚甲基ch2共振信号；氢谱中化学位移δ5.25～5.05ppm处的共振信号为最低场共振信号，指认为蔗糖1位氢共振信号。氢谱中δ1.00～0.80ppm处的共振信号为t峰，指认为月桂酸端甲基共振信号。
[0092]
实施例6以氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合物作溶剂的实际样品检测
[0093]
运用建立的快速测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法对不同工艺生产的样品进行检测，将样品按照1.1-1.3的步骤进行操作，获得样品的核磁共振氢谱图；对氢谱中化学位移δ5.25～5.05ppm、δ4.35～3.95ppm和δ1.00～0.80ppm处的峰分别进行积分，根据酯化度的计算公式进行计算。经分析，以氘代甲醇为溶剂与以氘代二甲亚砜重水(10：1体积比)混合物作溶剂，酯化度和伯醇酯化度结果见表2。
[0094]
本发明中酯化度的计算公式如下：
[0095]
蔗糖总酯化度＝(3*a1)/a3
[0096]
伯醇酯化度＝(3*a2)/(2*a3)
[0097]
a1：δ5.25～5.05ppm处的相对积分值
[0098]
a2：δ4.35～3.95ppm处的相对积分值之和
[0099]
a3：δ1.00～0.80ppm处的相对积分值
[0100]
表2
[0101][0102]
通过对比不同氘代溶剂进行试验测得结果表明，使用本发明选择的不同氘代溶剂、测得的总酯化度和伯醇酯化度数据基本一致，即：本发明的分析方法对于不同氘代溶剂的耐用性较好，结果具有一致性。

技术特征：
1.一种测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，包括以下步骤：1)称取一定质量的蔗糖月桂酸酯样品，置离心管中；加入氘代溶剂，使样品溶解，配置成浓度为10mg/ml-20mg/ml的溶液；将溶解后的样品溶液转移到核磁管中，2)将核磁管放置于核磁共振谱仪中，检测得到核磁共振氢谱，其中所述核磁共振氢谱的分析条件为：脉冲序列为：zg或者zg30，3)分析采集到的核磁共振氢谱，指认月桂酸端甲基在氢谱中的共振信号、及蔗糖1位氢在氢谱中的共振信号，并确认蔗糖月桂酸酯样品的特征峰不受活泼氢干扰，然后对其采集带相位编辑的h-c hsqc图谱，4)分析采集到的h-c hsqc图谱，指认出酯化后伯醇亚甲基的共振信号，5)对步骤4)所指认出的酯化后伯醇亚甲基在氢谱中的一个或多个共振信号、以及步骤3)指认的月桂酸端甲基在氢谱中的共振信号、分别进行积分，比较相对积分值，计算得到伯醇酯化度。2.根据权利要求1所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代甲醇、氘代二甲亚砜、重水、氘代氯仿之一或其任意混合。3.根据权利要求1所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代甲醇。4.根据权利要求1所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，步骤1)中所述氘代溶剂选自氘代二甲亚砜与重水体积比为10：1的混合溶剂。5.根据权利要求1所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，步骤1)中配置蔗糖月桂酸酯样品溶液的浓度为10mg/ml。6.根据权利要求1所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述核磁共振氢谱的分析条件为：采用bbo探头；探头温度：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：zg或者zg30；谱宽：8196hz；90度脉冲宽度：p1＝10μs；脉冲延迟时间：d1＝1s或者2s；发射中心：o1＝8.0ppm；累加次数：8或者16或者32。7.根据权利要求1所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述采集带相位编辑的h-c hsqc图谱的采集条件为：采用bbo探头；探头温度：室温20-25℃；环境湿度：30-65％；观察频率400mhz；脉冲序列为：hsqcdedtgpsisp2.3；采样点数：td(f1)＝256、td(f2)＝2048；谱宽：f1维＝21130hz、f2维＝2778hz；累加次数：64或者80；空扫次数：16；碳氢直接耦合常数：cnst2＝145hz。8.根据权利要求3所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，步骤4)中通过分析采集到的h-c hsqc图谱，确认化学位移在δ4.50～4.30ppm、δ4.25～4.15ppm这两处共振信号为亚甲基，并指认出这两处亚甲基是与月桂酸发生酯化反应的伯醇亚甲基ch2共振信号；确认氢谱中化学位移δ5.50～5.30ppm处的共振信号为最低场共振信号，并指认为蔗糖1位氢共振信号；确认氢谱中δ1.00～0.80ppm处的共振信号为t峰，并指认为月桂酸端甲基共振信号。9.根据权利要求1-8中任一项所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，步骤5)中所述计算的公式为：伯醇酯化度＝(3*a2)/(2*a3)；其中a2：酯化后伯醇亚甲基的共振信号在氢谱中的的相对积分值之和，
a3：月桂酸端甲基共振信号在氢谱中的相对积分值。10.根据权利要求1中所述的测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，其特征在于，所述步骤5)还可以对蔗糖1位氢在氢谱中的共振信号、以及月桂酸端甲基在氢谱中的共振信号分别进行积分，比较相对积分值，计算得到蔗糖总酯化度，通过蔗糖总酯化度的计算结果，确认蔗糖月桂酸酯的主要存在形式是否以单酯形式存在，从而确认伯醇酯化度结果的准确性，其中所述蔗糖总酯化度的计算的公式为：蔗糖总酯化度＝(3*a1)/a3；其中a1：蔗糖1位氢共振信号在氢谱中的相对积分值，a3：月桂酸端甲基共振信号在氢谱中的相对积分值。

技术总结
本发明涉及一种测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的方法，属于药物分析技术领域。具体公开了一种快速测定蔗糖月桂酸酯中伯醇酯化度的核磁共振波谱方法，取蔗糖月桂酸酯适量，用氘代溶剂溶解，配置成样品溶液，将样品溶液加入到核磁管中，采集核磁共振氢谱；对蔗糖1位氢共振信号、酯化后的伯醇亚甲基共振信号和月桂酸端甲基共振信号进行分析，并分别计算出蔗糖总酯化度和伯醇亚甲基位置酯化度。本发明在检测过程中无需使用大量的有机溶剂，绿色环保，快速高效，检测结果灵敏度高，重现性好。重现性好。重现性好。


技术研发人员：顾志成 周勇 高飞鹏 张峰 王坚 齐文学
受保护的技术使用者：齐鲁制药有限公司
技术研发日：2023.04.28
技术公布日：2023/8/9