抗CD228抗体和抗体-药物缀合物的制作方法

抗cd228抗体和抗体-药物缀合物相关申请的交叉引用1.本技术案主张2020年08月4日提交的美国临时专利申请第63/061,111号的优先权，其的内容全文以引用方式并入本文。提交ascii文本文件序列表2.下列提交的ascii文本文件的内容全文为以引用方式并入本文中：计算机可读形式(crf)的序列表(文件名：761682004340seqlist.txt，记录日期：2021年7月30日，大小：25kb)。
技术领域：
：3.本发明涉及新颖的抗cd228抗体和抗体-药物缀合物及使用该抗cd228抗体和抗体-药物缀合物以治疗癌症的方法。
背景技术：
：：4.cd228(也称为黑色素转铁蛋白、meltf、p97及mf12)是一种糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白，其最先被识别为恶性黑色素瘤细胞的97-kda细胞表面标记。cd228过度表达于大部分临床黑色素瘤分离物上，且亦在许多人类癌症观察到。已显示cd228在多种癌症中表达。cd228属于铁结合蛋白的转铁蛋白家族。5.黑色素瘤(也称为恶性黑色素瘤)是一种自黑色素细胞(含有色素的细胞)发展的癌症类型。黑色素瘤是最危险的皮肤癌类型。在2015年，310万人患有活动性疾病且黑色素瘤导致59,800起死亡。手术对于早期黑色素瘤可能是有效的，但对于已转移至远端器官的疾病则不属于治疗选项。黑色素瘤在扩散他处之前通常扩散至区域的淋巴结。通过手术移除淋巴结来改善存活的企图与许多并发症相关联，而无整体存活效益。免疫治疗、化学疗法及放射疗法皆被使用，但通常不具治愈性，特别是对于晚期黑色素瘤。当远端转移时，癌症通常被视为不可治愈。第iv期疾病的五年存活率为15至20％。因此，需要改进的黑色素瘤治疗。6.本文所引证的所有参考文献包括专利申请案、专利公开案及科学文献皆以引用方式完整并入本文中，如同每个个别的参考文献被具体且个别地指明以引用方式并入本文中。技术实现要素：7.本发明提供一种经分离的抗cd228抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区及轻链可变区，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:4的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列，其中轻链cdr的至少一个组氨酸残基经不同氨基酸取代。在一些实施方案中，该重链可变区包含与seqidno:7的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链可变区包含与seqidno:8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:9的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:10的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:22的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:11的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:12的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:13的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:25的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:14的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:26的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:15的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:17的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:18的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:28的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:19的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:20的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重链可变区包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变区包含seqidno:29的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段为抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段选自由fab、fab'、f(ab')2、fab'-sh、fv、双体抗体、线性抗体及单链抗体片段所组成的组。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段为全长抗体。在一些实施方案中，重链可变区为与重链恒定区融合且轻链可变区为与轻链恒定区融合。在一些实施方案中，重链恒定区为igg1同种型。在一些实施方案中，重链恒定区具有包含seqidno:30的氨基酸序列且轻链恒定区具有包含seqidno:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链恒定区为天然人恒定区的突变形式，其相较于天然人恒定区具有减少的与fcγ受体的结合。在一些实施方案中，重链恒定区具有包含seqidno:31(s239c)的氨基酸序列且轻链恒定区具有包含seqidno:32的氨基酸序列。8.本发明亦提供一种抗体-药物缀合物，其包含本发明提供的抗体或抗原结合片段缀合至细胞毒性剂或细胞静止剂。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段经由接头与细胞毒性剂或细胞静止剂缀合。在一些实施方案中，接头为mdpr-peg(12)-gluc接头。在一些实施方案中，细胞毒性剂或细胞静止剂为单甲基澳瑞他汀。在一些实施方案中，单甲基澳瑞他汀为单甲基澳瑞他汀e(mmae)，该接头附接至单甲基澳瑞他汀e以形成具有下式结构的抗体-药物缀合物：其中ab为该抗体或抗原结合片段，n为12，rpr为氢，r21为ch3且p表示1至16的数字。在一些实施方案中，在该抗体-药物缀合物族群中p的平均值为约8。9.本发明亦提供一种包含与cd228结合的抗原结合蛋白或其片段的抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物为由下式结构代表：或其药学上可接受的盐，其中：ab为抗原结合蛋白或其片段且p表示1至12的数字；下标nn为1至5的数字；下标a'为0，且a'为不存在；p1、p2及p3各为氨基酸，其中：氨基酸p1、p2或p3的第一者为带负电；氨基酸p1、p2或p3的第二者具有脂肪族侧链，其疏水性不大于亮氨酸；且氨基酸p1、p2或p3的第三者具有低于亮氨酸的疏水性，其中氨基酸p1、p2或p3的第一者对应p1、p2或p3中任一者，氨基酸p1、p2或p3的第二者对应二个剩余氨基酸p1、p2或p3之一者，且氨基酸p1、p2或p3的第三者对应最后一个剩余氨基酸p1、p2或p3，条件是-p3-p2-p1-不是-glu-val-cit-或-asp-val-cit-。在一些实施方案中，下标nn为2。在一些实施方案中，三肽的p3氨基酸为呈d-氨基酸构型；p2及p1氨基酸中一者具有疏水性低于亮氨酸的脂肪族侧链；且p2及p1氨基酸中另一者为带负电。在一些实施方案中，p3氨基酸为d-leu或d-ala。在一些实施方案中，p3氨基酸为d-leu或d-ala，p2氨基酸为ala、glu或asp，且p1氨基酸为ala、glu或asp。在一些实施方案中，-p3-p2-p1-为-d-leu-ala-asp-、-d-leu-ala-glu-、-d-ala-ala-asp-或-d-ala-ala-glu-。在一些实施方案中，-p3-p2-p1-为-d-leu-ala-glu-。10.本发明亦提供一种抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物为由下式结构代表：或其药学上可接受的盐，其中ab为该抗原结合蛋白或其片段且p表示1至12的数字。11.本发明亦提供一种核酸，其编码本文所述的抗体的重链可变区和/或轻链可变区。本发明亦提供一种载体，其包含本文提供的核酸。在一些实施方案中，载体为表达载体。本发明亦提供一种宿主细胞，其包含本文提供的核酸。在一些实施方案中，宿主细胞为中国仓鼠卵巢(cho)细胞。12.本发明亦提供一种生产本文提供的抗cd228抗体或抗原结合片段的方法，其包含在适于生产该抗cd228抗体或其抗原结合片段的条件下培养本文提供的宿主细胞。13.本发明亦提供一种生产本文提供的抗cd228抗体-药物缀合物的方法，其包含在适于生产抗cd228抗体的条件下培养本文提供的宿主细胞；分离该宿主细胞所生产的该抗cd228抗体；及将该抗cd228抗体与细胞毒性剂或细胞静止剂缀合。14.本发明亦提供一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用本文提供的抗体或抗原结合片段或本文提供的抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且对该治疗无反应，其中该一种或多种治疗剂不是抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且在该治疗之后复发，其中该一种或多种治疗剂不是抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且在治疗期间经历疾病进展，其中该一种或多种治疗剂不是抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，癌症为晚期癌症。在一些实施方案中，晚期癌症为第3期或第4期癌症。在一些实施方案中，晚期癌症为转移性癌症。在一些实施方案中，癌症为反复性癌症。在一些实施方案中，癌症为无法切除。在一些实施方案中，受试者曾接受癌症标准照护疗法的先前治疗且先前治疗失败。在一些实施方案中，癌症选自由黑色素瘤、胰腺癌、间皮瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、胆管癌、食道癌及头颈癌所组成的组。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，黑色素瘤为皮肤黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤选自由表浅扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、肢端小痣性黑色素瘤、小痣性恶性黑色素瘤及结缔组织增生性黑色素瘤所组成的组。在一些实施方案中，肢端小痣性黑色素瘤为甲下黑色素瘤。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，黑色素瘤为皮肤下黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤下黑色素瘤为眼黑色素瘤或黏膜黑色素瘤。在一些实施方案中，黑色素瘤为非皮肤黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为间皮瘤。在一些实施方案中，间皮瘤选自由胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、心包膜间皮瘤及睾丸间皮瘤所组成的组。在一些实施方案中，间皮瘤为胸膜间皮瘤。在一些实施方案中，受试者已经接受基于铂的疗法的先前疗法。在一些实施方案中，基于铂的疗法为顺铂(cisplatin)。在一些实施方案中，受试者曾接受培美曲塞(pemetrexed)的先前疗法。在一些实施方案中，肺癌为非小细胞肺癌。在一些实施方案中，非小细胞肺癌具有突变形式的表皮生长因子受体(egfr)。在一些实施方案中，非小细胞肺癌具有野生型egfr。在一些实施方案中，受试者已经接受基于铂的疗法的先前疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，乳腺癌选自由her2阳性、her2阴性、雌激素受体(er)阳性、er阴性、助孕素受体(pr)阳性、pr阴性及三阴性乳腺癌所组成的组。在一些实施方案中，乳腺癌为her2阴性乳腺癌。在一些实施方案中，受试者曾接受her2阴性乳腺癌的一种或多种先前线上疗法。在一些实施方案中，一种或多种先前线上疗法包含紫杉烷(taxane)的治疗。在一些实施方案中，受试者为荷尔蒙受体阳性。在一些实施方案中，受试者曾接受cdk4/6抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受荷尔蒙导向疗法的先前疗法。在一些实施方案中，结直肠癌选自由结直肠腺癌、胃肠道基质瘤、原发性结直肠淋巴瘤、胃肠道类癌肿瘤及平滑肌肉瘤所组成的组。在一些实施方案中，受试者曾接受结直肠癌的二种或超过二种先前线上疗法。在一些实施方案中，胰腺癌为外分泌癌或神经内分泌癌。在一些实施方案中，外分泌癌选自由胰腺癌、腺泡细胞癌、囊腺癌、胰母细胞瘤、腺鳞癌、戒环细胞癌、肝样癌、胶体癌、未分化癌及胰黏液性囊状肿瘤所组成的组。在一些实施方案中，胰腺癌为胰管腺癌。在一些实施方案中，受试者曾接受胰腺癌的一种或多种先前线上疗法。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段或抗体-药物缀合物为于药物组合物中，该药物组合物包含该抗体或抗原结合片段或抗体-药物缀合物及药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，受试者为人类。15.本发明亦提供一种试剂盒，其包含：(a)本文提供的抗体或抗原结合片段或本文提供的抗体-药物缀合物；及(b)根据本文提供的方法使用抗体或抗原结合片段或抗体-药物缀合物的指示说明。16.本发明亦提供一种药物组合物，其包含本文提供的抗体或抗原结合片段或本文提供的抗体-药物缀合物及一种或多种选自由生理上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂及助剂所组成的组的剂。附图说明17.图1a至1i显示在ph值范围4.55至7.4下各种抗cd228抗体与cd228的结合。18.图2显示经不同浓度的各种抗cd228抗体-药物缀合物处理的a2058细胞系的存活细胞百分比。19.图3a至3f显示hl49、hl49_34ala及hl49_34tyr在结合及洗涤条件(图3a至3c)及连续暴露条件(图3d至3f)下随时间的内化作用。20.图4a至4c显示通过octet所测定的hl49(图4a)、hl49_34ala(图4b)及hl49_34tyr(图4c)的结合动力学。21.图5a至5d显示抗cd228抗体adc于a2058(图5a及5c)及a375(图5b及5d)异种移植模型中的体内活性。hl49-mdpr-at(8)、hl49-h34a-mdpr-at(8)及hl49-h34y-mdpr-at(8)显示于图5a及5b。hl49-mdpr-peg(12)-gluc-mmae(8)、hl49-h34a-mdpr-peg(12)-gluc-mmae(8)及hl49-h34y-mdpr-peg(12)-gluc-mmae(8)显示于图5c及5d。具体实施方式i.定义22.为了可更清楚地了解本公开，首先定义一些用语。如在本技术案中所使用，除了在本文中另外明示提供者，下列各用语应具有以下阐述的意义。额外定义阐述在整个申请案。23.在本文中使用的用语“和/或”应被视为特定揭露二个指明特征或组分的各者无论有或无的另一者。因此，当使用于本文诸如“a和/或b”的用词中，用语“和/或”意图包括“a及b”、“a或b”、“a”(单独)及“b”(单独)。同样地，当使用于本文诸如“a、b和/或c”的用词中，用语“和/或”意图包含下列方面的各者：a、b及c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a及c；a及b；b及c；a(单独)；b(单独)；及c(单独)。24.应理解本文所述的本发明的方面及实施方案包括“包含(comprising)”、“组成(consisting)”及“基本上由组成(consistingessentiallyof)”方面及实施方案。25.除非另行定义，此处所使用的所有技术及科学用语和本公开相关
技术领域：
：中具有通常知识者所通常了解的意义相同。例如，concisedictionaryofbiomedicineandmolecularbiology,juo,pei-show,2nded.,2002,crcpress；thedictionaryofcellandmolecularbiology,3rded.,1999,academicpress；及oxforddictionaryofbiochemistryandmolecularbiology,revised,2000,oxforduniversitypress提供给本领域技术人员在本公开中所使用的许多用语的一般字典。26.单位、前缀及符号表示为那些的国际单位制(si)接受形式。数值范围包含界定该范围的数值。在本文中提供的标题不是本公开的各种方面的限制，其可参照说明书作为整体提供。因此，其下定义的用语参照说明书整体将更完整定义。27.用语“cd228”、“p97”、“黑色素转铁蛋白”、“meltf”及“mf12”在本文中可互换使用，且除非另外指明，包括通常由细胞表达或表达在经cd228基因转染的细胞上的人cd228的任何变体、异构体及物种同源物。28.用语“免疫球蛋白(immunoglobulin)”是指一类结构相关的糖蛋白，所述糖蛋白为由二对多肽链所组成，即一对低分子量轻(l)链及一对重(h)链，所有四个链通过双硫键互相连接。免疫球蛋白的结构已有详细介绍。见例如fundamentalimmunologych.7(paul,w.,ed.,2nded.ravenpress,n.y.(1989))。简言之，各重链一般包含重链可变区(在本文中缩写为vh或vh)及重链恒定区(ch或ch)。重链恒定区一般包含三个结构域ch1、ch2及ch3。重链通常在所谓的“铰链区”经由双硫键互相连接。各轻链一般包含轻链可变区(在本文中缩写为vl或vl)及轻链恒定区(cl或cl)。轻链恒定区一般包含一个结构域cl。cl可为κ(kappa)或λ(lamba)同种型。用语“恒定结构域”及“恒定区”在本文中可互相交换使用。免疫球蛋白可衍生自任何公知同种型，包括但不限于iga、分泌性iga、igg及igm。igg亚型亦为本领域技术人员所广为周知及包括但不限于人igg1、igg2、igg3及igg4。“同种型”是指由重链恒定区基因所编码的抗体类型或亚型(例如，igm或igg1)。29.用语“可变区(variableregion)”或“可变结构域(variabledomain)”是指涉及抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链及轻链的可变区(分别为vh及vl)可进一步细分成穿插于较为保守的区域(称为架构区(fr))之间的超变异性区域(或超变异区，其在结构定义圈环的序列和/或形式上可为超变异)，又称为互补决定区(cdr)。用语“互补决定区(complementaritydeterminingregion)”及“cdr”与“超变异区(hypervariableregion)”或“hvr”同义，为本领域中已知且是指抗体可变区内授予抗原特异性和/或结合亲和性的非毗连氨基酸序列。一般来说，每个重链可变区中有三个cdr(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)及每个轻链可变区中有三个cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)。“架构区(frameworkregion)”及“fr”为本领域中已知，是指重链及轻链可变区的非cdr部分。一般来说，每个全长重链可变区中有四个fr(fr-h1、fr-h2、fr-h3及fr-h4)及每个全长轻链可变区中有四个fr(fr-l1、fr-l2、fr-l3及fr-l4)。在各vh及vl中，三个cdr及四个fr通常以下列顺序自氨基端至羧基端排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4(亦见chothiaandleskj.mot.biol.,195,901-917(1987))。30.在本发明的情况中的用语“抗体(antibody)”(ab)是指免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的片段或那些任一的衍生物，其具有在典型生理条件下以显著期间的半衰期与抗原特异性结合的能力，该半衰期诸如至少约30min、至少约45min、至少约一小时(h)、至少约二小时、至少约四小时、至少约八小时、至少约12小时(h)、约24小时或多于24小时、约48小时或多于48小时、约三、四、五、六、七或多于七天等或任何其他相关的功能定义期间(诸如足以诱导、促进、增强和/或调节与抗体结合抗原相关的生理反应的时间和/或足以供抗体招募效应物活性的时间)。免疫球蛋白分子的重链及轻链的可变区包含与抗原交互作用的结合结构域。抗体(ab)的恒定区可媒介免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)及补体系统的组分诸如c1q(补体活化典型途径中的第一组分)。抗体亦可为双特异性抗体、双体抗体、多特异性抗体或类似分子。31.本文中使用的用语“单克隆抗体(monoclonalantibody)”是指以单一一级氨基酸序列重组产生的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示对特定表位的单一结合特异性及亲和性。因此，用语“人单克隆抗体”是指显示单一结合特异性的抗体，其具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变及恒定区。人单克隆抗体可通过包括b细胞的杂交瘤产制，该b细胞获自具有包含人重链转殖基因及轻链转殖基因的基因组的转基因或染色体转殖非人动物(诸如转基因小鼠)并融合至永生化细胞。[0032]“经分离的抗体(isolatedantibody)”是指实质上不含其他具有不同抗原特异性的抗体的抗体(例如与cd228特异性结合的经分离的抗体实质上不含与cd228以外的抗原特异性结合的抗体)。然而，与cd228特异性结合的经分离的抗体可具有对其他抗原(诸如不同物种的cd228分子)的交叉反应性。此外，经分离的抗体可实质上不含其他细胞材料和/或化学物。在一实施方案中，经分离的抗体包括与另一药剂(例如小分子药物)附接的抗体缀合物。在一些实施方案中，经分离的抗cd228抗体包括抗cd228抗体与小分子药物(例如mmae或mmaf)的缀合物。[0033]“人抗体(humanantibody)”(humab)是指具有可变区且其中的fr及cdr皆源自人种系免疫球蛋白序列的抗体。另外，如果抗体含有恒定区，该恒定区亦衍生自人种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可包括非由人种系免疫球蛋白序列所编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或定点突变形成或通过体内体突变导入的突变)。然而，如本文中所使用的用语“人抗体(humanantibody)”无意包括其中衍生自另一哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的cdr序列被移植至人架构序列的抗体。用语“人抗体”及“全人抗体(fullyhumanantibody)”以同义使用。[0034]如本文中所使用的用语“人源化抗体(humanizedantibody)”是指经基因工程改造的非人抗体，其含有人抗体恒定结构域及经修饰以含有与人可变结构域具有高度序列同源性的非人可变结构域。此可通过将六个一起形成抗原结合部位的非人抗体互补决定区(cdr)移植至同源人受体架构区(fr)上达成(见wo92/22653及ep0629240)。为了完全重构亲代抗体的结合亲和性及特异性，可能需要将来自亲代抗体(即非人抗体)的架构残基取代成人架构区(回复突变)。结构同源性模型构建可能有助于识别架构区中对于抗体的结合性质为重要的氨基酸残基。因此，人源化抗体可包含非人cdr序列、主要是人架构区(可选地包含一个或多个氨基酸回复突变成非人氨基酸序列)及全人恒定区。可选地，可施用额外的氨基酸修饰(不一定是回复突变)以获得具有优选特征(诸如亲和性及生化性质)的人源化抗体。[0035]如本文中所使用的用语“嵌合抗体(chimericantibody)”是指其中可变区衍生自非人物种(例如衍生自啮齿动物)且恒定区衍生自不同物种(诸如人)的抗体。嵌合抗体可通过抗体工程改造来产制。“抗体工程改造(antibodyengineering)”为一通俗使用于不同种类的抗体修饰的用语，且其为技术人员广为周知的过程。具体而言，嵌合抗体可使用如sambrooketal.,1989,molecularcloning:alaboratorymanual,newyork:coldspringharborlaboratorypress,ch.15所述的标准dna技术产制。因此，嵌合抗体可为经基因或经酶催化工程改造的重组抗体。产制嵌合抗体为技术人员的知识范围以内，因此产制根据本发明的嵌合抗体可通过非本文所述的其他方法实施。开发用于治疗应用的嵌合单克隆抗体是为了减少抗体免疫原性。那些一般可含有非人(例如鼠)可变区(对受到关注的抗原具特异性)及人恒定抗体重链及轻链结构域。用于嵌合抗体的情况中的用语“可变区(variableregion)”或“可变结构域(variabledomain)”是指包含免疫球蛋白的重链及轻链两者的cdr及架构区的区域。[0036]“抗-抗原抗体(anti-antigenantibody)”是指与抗原结合的抗体。例如，抗cd228抗体为与抗原cd228结合的抗体。[0037]抗体的“抗原结合部分(antigen-bindingportion)”或“抗原结合片段(antigen-bindingfragment)”是指抗体的一个或多个片段，该一个或多个片段保留完整抗体与抗原特异性结合的结合能力。抗体片段(例如抗原结合片段)的实施例包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双价抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scfv)；及由抗体片段所形成的多特异性抗体。以木瓜酶消化抗体产生二个相同的各具有单一抗原结合部位的抗原结合片段(称为“fab”片段)及一个残余的“fc”片段(其名称反映其容易结晶的能力)。胃蛋白酶处理产生具有二个抗原结合部位且仍能够与抗原交联的f(ab')2片段。[0038]相对于参考多肽序列的“序列同一性百分比(percent(％)sequenceidentity)”定义为在排比序列及导入空位(若需要)以达成最大序列同一性百分比，且不考虑任何保守性取代作为序列同一性的一部分之后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为达判定氨基酸序列同一性百分比目的的排比可以本领域中的各种方式达成，例如使用提供给大众的计算机软件诸如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件。本领域技术人员可判定排比序列的适当参数，包括要达成比较序列全长的最大排比所需的任何算法。例如，给定氨基酸序列a与、和或相对于给定氨基酸序列b的序列同一性％(也可以表述为与、和或相对于给定氨基酸序列b具有或包含特定序列同一性％的给定氨基酸序列a)计算如下：100乘以分数x/y其中x为在a与b的程序排比中由序列评分为同一性匹配的氨基酸残基数，且其中y为b中氨基酸残基的总数。将了解，若氨基酸序列a的长度不等于氨基酸序列b的长度，则a相对于b的序列同一性％将不等于b相对于a的序列同一性％。[0039]如本文中所使用，用语“结合(binding、binds)”或“特异性结合(specificallybinds)”在抗体与预定抗原结合的情况中通常为具有对应当通过例如生物膜干涉术(bli)技术于octethtx仪器中使用抗体作为配体及抗原作为分析物所判定约10-6m或更小、例如10-7m或更小、诸如约10-8m或更小、诸如约10-9m或更小、约10-10m或更小或约10-11m或甚至更小的kd的亲和性的结合，且其中该抗体与预定抗原结合的亲和性所对应的kd相较于其与除了预定抗原或密切相关抗原以外的非特异性抗原(例如bsa、酪蛋白)结合的kd至少十倍较低、诸如至少100倍较低、例如至少1,000倍较低、诸如至少10,000倍较低、例如至少100,000倍较低。结合的kd所降低的量取决于抗体的kd，因此当抗体的kd非常低时，与抗原结合的kd低于与非特异性抗原结合的kd的量可为至少10,000倍(也就是抗体具高度特异性)。[0040]此处所使用的用语“kd”(m)是指特定抗体抗原交互作用的解离平衡常数。亲和性(如本文中所使用)及kd为呈倒数相关，也就是说较高亲和性意指较低kd而较低亲和性意指较高kd。[0041]用语“adc”是指抗体-药物缀合物，该用语在本发明的情况中是指与如本技术案所述的药物部份(moiety)(例如mmae或mmaf)偶合的抗cd228抗体。[0042]缩写“vc”及“val-cit”是指双肽缬氨酸-瓜氨酸。[0043]缩写“pab”是指自毁型间隔子：[0044]缩写“mc”是指延伸子顺丁烯二酰亚氨基己酰基：[0045]缩写“mp”是指延伸子顺丁烯二酰亚氨基丙酰基：[0046]“癌症(cancer)”是指一组广泛的各种疾病，其特征在于身体中异常细胞的不受控制生长。“癌症(cancer)”或“癌症组织(cancertissue)”可包括肿瘤。未经调节的细胞分裂及生长导致侵犯邻近组织的恶性肿瘤形成且亦可经由淋巴系统或血流转移至身体的远距部分。在转移之后，可称远程肿瘤为“衍生自(derivedfrom)”转移前肿瘤。[0047]用语“抗体依赖性细胞性细胞毒性”或adcc是一种用于诱导细胞死亡的机转，该机转取决于经抗体包覆的靶细胞与具有溶解活性的免疫细胞(也称为效应细胞)的交互作用。此类效应细胞包括自然杀伤细胞、单核球/巨噬细胞及嗜中性球。效应细胞附接至ig的fc效应结构域，该ig经由那些的抗原组合部位与靶细胞结合。经抗体包覆的靶细胞的死亡因为效应细胞活性而发生。[0048]用语“抗体依赖性细胞性吞噬作用”或adcp是指经抗体包覆的细胞被与ig的fc效应结构域结合的吞噬细胞性免疫细胞(例如巨噬细胞、嗜中性球及树突细胞)内化(不论整体或部分)的过程。[0049]用语“补体依赖性细胞毒性”或“cdc”是指一种诱导细胞死亡的机转，其中目标结合抗体的fc效应结构域活化一系列酶反应，最终在靶细胞膜上形成孔。一般而言，抗原-抗体复合体(诸如那些在抗体包覆靶细胞上的抗原-抗体复合体)结合并活化补体组分clq，其进而活化导致靶细胞死亡的补体级联。补体的活化亦可导致补体组分沉积在靶细胞表面上，其通过结合白血球上的补体受体(例如cr3)而促进adcc。[0050]“细胞静止效应”是指抑制细胞增生。“细胞静止剂”是指对细胞具有细胞静止效应的剂，藉以抑制特定细胞亚群的生长和/或扩张。细胞静止剂可与抗体缀合或与抗体组合施用。[0051]受试者的“治疗(treatment)”或“疗法(therapy)”是指出于反转、减轻、改善、抑制、推迟或预防与疾病相关的症状、并发症、病况或生化征象的开始、进展、发展、严重性或复发性的目的而在受试者执行的任何类型的介入或过程或向受试者施用活性剂。在一些实施方案中，该疾病为癌症。[0052]“受试者(subject)”包括任何人类或非人动物。用语“非人动物(non-humananimal)”包括但不限于脊椎动物诸如非人灵长动物、绵羊、犬及啮齿动物诸如小鼠、大鼠及天竺鼠。在一些实施方案中，受试者为人类。用语“受试者(subject)”及“患者(patient)”及“个体(individual)”在本文中可以互换使用。[0053]药物或治疗剂的“有效量(effectiveamount)”或“治疗有效量(therapeuticallyeffectiveamount)”或“治疗有效剂量(therapeuticallyeffectivedosage)”是指当单独使用或与另一治疗剂组合使用时，如降低疾病症状的严重性、增加疾病无症状期的频率及持续时间或预防因为罹患疾病造成的障碍或失能所示的保护受试者防止疾病开始或促进疾病消退的任何量的药物。治疗剂促进疾病消退的能力可使用技术人员已知的多种方法在诸如临床试验期间在人受试者中、在预测人疗效的动物模型系统中或通过测定药剂在体外测定的活性来评估。[0054]以肿瘤治疗为例，治疗有效量的抗癌剂在经治疗的受试者中(例如，一或多位经治疗的受试者)相对于未经治疗的受试者(例如，一或多位未治疗的受试者)抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、或至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的细胞生长或肿瘤生长。在一些实施方案中，治疗有效量的抗癌剂在经治疗的受试者中(例如，一或多位经治疗的受试者)相对于未经治疗的受试者(例如，一或多位未治疗的受试者)抑制100％的细胞生长或肿瘤生长。[0055]在本公开的其他实施方案中，肿瘤消退可观察及持续一段至少约20天、至少约30天、至少约40天、至少约50天或至少约60天的期间。[0056]治疗有效量的药物(例如抗cd228抗体或其抗原结合片段或抗cd228抗体-药物缀合物)包括“预防有效量(prophylacticallyeffectiveamount)”，预防有效量是指当单独或与抗癌剂组合施用至具有发展癌症风险的受试者(例如具有恶性前病况的受试者)或具有癌症复发风险的受试者时抑制癌症发展或复发的任何量的药物。在一些实施方案中，预防有效量完全预防癌症发展或复发。“抑制(inhibiting)”癌症的发展或复发是指减少癌症发展或复发的可能性或完全预防癌症的发展或复发。[0057]如本文中所使用，“亚治疗剂量(subtherapeuticdose)”是指治疗性化合物(例如抗cd228抗体或其抗原结合片段或抗cd228抗体-药物缀合物)的剂量低于该治疗性化合物单独施用用于治疗过度增生性疾病(例如癌症)时的平常或典型剂量。[0058]“免疫相关反应模式(immune-relatedresponsepattern)”是指通常在经通过诱导癌症特异性免疫反应或通过调节天然免疫过程来产生抗肿瘤效应的免疫治疗剂治疗的癌症患者中观察到的临床反应模式。此反应模式的特征为在初始肿瘤负荷增加或出现新病灶之后的有益治疗效应，在传统化学治疗剂的评估中，此反应模式将被归类为疾病进展且将与药物失败同义。因此，免疫治疗剂的适当评估需要长期监测这些药剂对于目标疾病的效应。[0059]举例来说，“抗癌剂(anti-canceragent)”促进受试者的癌症消退。在一些实施方案中，治疗有效量的药物促进癌症消退至清除癌症的程度。“促进癌症消退(promotingcancerregression)”是指单独或与抗癌剂组合施用有效量的药物导致肿瘤生长或大小减少、肿瘤坏死、至少一个疾病症状的严重性降低、增加无疾病症状期的频率及持续时间或预防因为罹患疾病造成的障碍或失能。此外，有关治疗的用语“有效(effective)”及“有效性(effectiveness)”包括药理有效性及生理安全性。药理有效性是指药物促进患者癌症消退的能力。生理安全性是指施用药物所导致的细胞性、器官和/或有机体层级上的毒性水平或其他不良生理效应(不良效应)。[0060]“持续反应(sustainedresponse)”是指停止治疗后减少肿瘤生长的持续效应。例如，肿瘤大小相较于施用期开始时的大小可维持相同或较小。在一些实施方案中，持续反应具有与治疗期间至少相同的期间或比治疗期间长至少1.5、2.0、2.5或3倍。[0061]如本文中所使用，“完全反应(completeresponse)”或“cr”是指所有目标病灶消失；“部分反应(partialresponse)”或“pr”是指目标病灶的最长直径总和(sld)参照基线sld降低至少30％；及“稳定疾病”或“sd”是指参照自从治疗开始的最小sld，目标病灶的缩小不足以符合pr，增加也不足以符合pd。[0062]如本文中所使用的“无进展存活期(progressionfreesurvival)”或“pfs”是指在治疗期间及治疗后所治疗的疾病(例如癌症)没有恶化的时间长度。无进展存活期可包括患者经历完全反应或部分反应的时间的量以及患者经历稳定疾病的时间的量。[0063]如本文中所使用，“整体反应率(overallresponserate)”或“orr”是指完全反应(cr)率及部分反应(pr)率的总和。[0064]如本文中所使用，“整体存活期(overallsurvival)”或“os”是指一组个体中在特定时间期间之后可能活着的百分比。[0065]用语“药学上可接受(pharmaceuticallyacceptable)”指示物质或组合物在化学和/或毒理学上必须与构成调配物的其他成分和/或其所治疗的哺乳动物兼容。[0066]如本文中所使用的用语“药学上可接受的盐(pharmaceuticallyacceptablesalt)”是指本发明的化合物的药学上可接受的有机或无机盐。例示性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、反丁烯二酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲烷磺酸盐“甲磺酸盐”、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐(即，4,4'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘酸盐))、碱金属(例如，钠及钾)盐、碱土金属(例如，镁)盐及铵盐。药学上可接受的盐可涉及包括另一分子，诸如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他相对离子。该相对离子可为使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机部份。另外，药学上可接受的盐的结构中可具有超过一个带电原子。多个带电原子为该药学上可接受的盐的一部分的情况可具有多重相对离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个相对离子。[0067]“施用(administering或administration)”是指使用本领域技术人员已知的任何各种方法及递送系统将治疗剂物理导入至受试者。抗cd228抗体-药物缀合物的例示性施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊椎或其他例如通过注射或输注的肠胃外施用途径(例如静脉输注)。如本文中所使用的用语“肠胃外施用(parenteraladministration)”是指除经肠及局部施用以外的通常通过注射的施用模式，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、脊椎鞘内、淋巴内、病灶内、囊内、眼眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下腔、脊椎内、硬膜外及胸骨内注射及输注，以及体内电穿孔。治疗剂可经由非肠胃外途径或口服施用。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或黏膜施用途径，例如鼻内、经阴道、经直肠、舌下或局部。施用亦可执行例如一次、复数次和/或在一个或多个延长的期间内执行。[0068]在本文中可互换使用的用语“基线(baseline)”或“基线值(baselinevalue)”可指施用疗法(例如，如本文所述的抗cd228抗体-药物缀合物)之前或开始施用疗法时症状的测量值或表征。基线值可与参考值比较以判定在本文中考虑的cd228相关疾病(例如癌症)的症状的减少或改善。在本文中可互换使用的用语“参考(reference)”或“参考值(referencevalue)”可指施用疗法(例如，如所述的抗cd228抗体-药物缀合物)之后症状的测量值或表征。参考值可在给药方案或治疗周期期间或完成给药方案或治疗周期时测量一或多次。“参考值”可为绝对值；相对值；具有上限和/或下限的值；一范围的值；平均值(averagevalue)；中位数值；平均值(meanvalue)；或相较于基线值的值。[0069]类似地，“基线值”可为绝对值；相对值；具有上限和/或下限的值；一范围的值；平均值；中位数值；平均值；或相较于参考值的值。参考值和/或基线值可获自一名个体、两名不同个体或一组个体(例如，一组二、三、四、五或超过五名个体)。[0070]如本文中所使用的用语“单一疗法(monotherapy)”是指抗cd228抗体或其抗原结合片段或抗cd228抗体-药物缀合物是在治疗周期期间唯一向受试者施用的抗癌剂。然而，可向受试者施用其他治疗剂。例如，向患有癌症的受试者施用以治疗与癌症相关但非实际癌症本身的症状(包括例如发炎、疼痛、体重减轻及全身不适)的抗发炎剂或其他剂可在单一疗法期间施用。[0071]如本文中所使用的“不良事件(adverseevent,ae)”为与医学治疗的使用相关的任何不利及通常非意图或非所欲征候(包括异常实验室结果)、症状或疾病。医学治疗可具有一个或多个相关ae且各ae可具有相同或不同程度的严重性。提及能够“改变不良事件(alteringadverseevents)”的方法是指一治疗方案降低与使用不同治疗方案相关的一个或多个ae的发生率和/或严重性。[0072]如本文中所使用的“严重不良事件(seriousadverseevent)”或“sae”为符合下列标准之一的不良事件：·致死或危及生命(在严重不良事件的定义中所使用的“危及生命(life-threatening)”是指患者在事件发生时有死亡风险的事件；不是指如果更为严重理论上可能造成死亡的事件。·导致持续或显著失能/无能力·造成先天异常/先天缺陷·具医学显著性，即定义为危害患者或可能需要医学或手术介入以防止上列结果之一的事件。必须进行医学及科学判断以决定ae是否具“医学显著性”·需要住院或延长目前的住院或，但排除下列：1)非与任何病况恶化相关的例行治疗或监测实际疾病；2)与研究适应症不相关且在签署知情同意书之后未恶化的既有病况的选择性或预先计划的治疗；及3)在患者整体病况没有任何恶化下的社会原因及喘息照顾。[0073]使用替代物(例如，“或”)应理解为表示替代物的任一者、两者或那些的任何组合。如本文中所使用的不定冠词“一(a或an)”应理解是指称“一个或多个”所引述或列举的任何组分。[0074]用语“约(about)”或“基本上包含(comprisingessentiallyof)”是指在如本领域技术人员所判定的特定值或组成的可接受误差范围内，该可接受误差范围将部分取决于该值或组成是如何测量或判定的，即测量系统的限制。例如，“约”或“基本上包含”根据本领域的实务可指在1个标准偏差的内或超过1个标准偏差。替代地，“约”或“基本上包含”可指至多20％的范围。另外，特别是关于生物系统或过程，该用语可指至多一个量级或至多5倍的值。当本技术案及请求项提供特定值或组成时，除非另行说明，否则“约”或“基本上包含”的意义应被假设为在该特定值或组成的可接受误差范围内。[0075]在本文中指涉“约”某数值或参数时，其包括(且描述)与该数值或参数本身相关的实施方案。举例来说，提及“约x”的用语包括“x”的用语。[0076]如本文所述，任何浓度范围、百分比范围、比例范围或整数范围应理解为包括所引述的范围内的任何整数及(若适当)其分数(诸如整数的十分之一及百分之一)的值，除非另行指示。[0077]本公开的各种方面于下列子节进一步详细描述。ii.一般性[0078]本发明提供与cd228特异性结合的抗体。已显示cd228表达在多种癌症，包括黑色素瘤、甲状腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、头颈癌、胃癌、结直肠癌、尿路癌、乳腺癌及子宫颈癌。iii.目标分子[0079]除非另外说明，否则cd228是指人cd228。例示性人蛋白序列指定为uniprot识别号p08582。iv.本发明的抗体[0080]本发明提供衍生自人源化抗体hl49的抗体(诸如人源化抗体)。hl49为衍生自小鼠抗体l49。l49为针对cd228的鼠免疫球蛋白g1(igg1)单克隆抗体，其为衍生自经肺癌及黑色素瘤细胞系免疫的balb/c小鼠(siemersetal.，1997，bioconiug.chem.8：510-9)。抗体hl49(也称为hl49halc)为描述于pct/us2020/016381及美国专利申请案号16/780,711(那些全文以引用方式并入本文中)。本发明提供其中hl49的轻链cdr的一个或多个组氨酸残基经不同氨基酸取代的抗体。在一些实施方案中，hl49的轻链cdr的一个组氨酸残基经不同氨基酸取代。在一些实施方案中，hl49的轻链cdr的二个组氨酸残基经不同氨基酸取代。在一些实施方案中，hl49的轻链cdr的所有三个组氨酸残基经不同氨基酸取代。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49改善性质的抗体。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49以较强亲和力与cd228结合的抗体。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49具有较高细胞毒性的抗体。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49具有较快结合缔合速率的抗体。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49具有较快结合解离速率的抗体。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49具有较慢结合缔合速率的抗体。在一些实施方案中，本发明提供相较于hl49具有较慢结合解离速率的抗体。在一些实施方案中，本发明提供比起hl49更快被细胞内化的抗体。在一些实施方案中，本发明提供比起hl49更高程度被细胞内化的抗体。[0081]抗体hl49包含重链cdr序列，该重链cdr序列包含下列：a)cdr-h1：b)cdr-h2：及c)cdr-h3：[0082]抗体hl49包含轻链cdr序列，该轻链cdr序列包含下列：a)cdr-l1：b)cdr-l2：及c)cdr-l3：[0083]抗体hl49包含抗体hl49包含的重链可变区序列及的重链可变区序列及的轻链可变区序列。[0084]本发明的优选抗体抑制癌症（例如细胞生长、转移和/或对有机体的致死性)，如在培养中增殖的癌性细胞、在动物模型或临床试验中所示。动物模型可通过将cd228表达性人肿瘤细胞系植入适当的免疫缺陷鼠品系中形成，例如无胸腺裸鼠或scid小鼠。这些肿瘤细胞系可通过皮下注射为实质肿瘤或通过静脉注射为散播型肿瘤于免疫缺陷鼠宿主建立。[0085]一旦在宿主体内建立后，这些肿瘤模型可被用于评估该抗cd228抗体或那些的缀合形式的治疗疗效，如实施方案中所述。[0086]大致上，本公开的抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物与cd228（例如人cd228)结合，且对恶性细胞((诸如癌细胞)发挥细胞静止及细胞毒性效应。本公开的抗cd228抗体优选地为单克隆且可为多特异性、人、人源化或嵌合抗体、单链抗体、fab片段、f(ab')片段、由fab表达库产生的片段及上述任一者的cd228结合片段。在一些实施方案中，本公开的抗cd228抗体与cd228特异性结合。本公开的免疫球蛋白分子可为任何种类(例如igg、ige、igm、igd、iga及igy)、类型(例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1及iga2)或亚型的免疫球蛋白分子。[0087]在本公开的某些实施方案中，抗cd228抗体为如本文所述的抗原结合片段(例如，人抗原结合片段)且包括但不限于fab、fab'及f(ab')2、fd、单链fv(scfv)、单链抗体、双硫键连接的fv(sdfv)及包含vl或vh结构域的片段。抗原结合片段(包括单链抗体)可包含单独的或与下列全部或一部分组合的可变区：铰链区、ch1、ch2、ch3及cl结构域。本公开亦包括包含可变区与铰链区、ch1、ch2、ch3及cl结构域的任何组合的抗原结合片段。在一些实施方案中，抗cd228抗体或其抗原结合片段为人、鼠(例如小鼠及大鼠)、驴、绵羊、兔、山羊、天竺鼠、骆驼、马或鸡。[0088]本公开的抗cd228抗体可为单特异性、双特异性、三特异性或高于三的多特异性。多特异性抗体可对cd228的不同表位具特异性或可对cd228以及异源性蛋白质具特异性。见例如pct公开案wo93/17715；wo92/08802；wo91/00360；wo92/05793；tutt,etal.,1991,j.immunol.147:6069；美国专利号4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,573,920；5,601,819；kostelnyetal.,1992,j.immunol.148:15471553。[0089]本公开的抗cd228抗体可就它们所包含的具体cdr方面描述或指明。给定cdr或fr的精确氨基酸序列边界可使用一些广为周知的任一方案轻易判定，包括那些如下所述者：kabatetal.(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md(“kabat”编号方案)；al-lazikanietal.,(1997)jmb273,927-948(“chothia”编号方案)；maccallumetal.,j.mol.biol.262:732-745(1996),“antibody-antigeninteractions:contactanalysisandbindingsitetopography,”j.mol.biol.262,732-745.”(“contact”编号方案)；lefrancmpetal.,“imgtuniquenumberingforimmunoglobulinandtcellreceptorvariabledomainsandigsuperfamilyv-likedomains,”devcompimmunol,2003jan；27(1):55-77(“imgt”编号方案)；honeggeraandplückthuna,“yetanothernumberingschemeforimmunoglobulinvariabledomains:anautomaticmodelingandanalysistool,”jmolbiol,2001jun8；309(3):657-70(“aho”编号方案)；及martinetal.,“modelingantibodyhypervariableloops:acombinedalgorithm,”pnas,1989,86(23):9268-9272(“abm”编号方案)。给定cdr的边界可取决于用于识别的方案而变化。在一些实施方案中，给定抗体或其区域(例如其可变区)的“cdr”或“互补决定区(complementaritydeterminingregion)”或个别指明的cdr(例如cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)应理解为涵盖前述任一方案所定义的(特定)cdr。例如，当说明具体cdr(例如cdr-h3)含有给定vh或vl区氨基酸序列中对应cdr的氨基酸序列时，应理解该cdr具有可变区内如前述任一方案所定义的对应cdr(例如cdr-h3)的序列。可指明识别具体cdr或cdr的方案，诸如通过kabat、chothia、abm或imgt方法所定义的cdr。[0090]本文所述的抗cd228抗体及抗cd228抗体-药物缀合物的cdr序列根据描述于kabatetal.(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md中的kabat编号方案。[0091]本文所述的抗cd228抗体可包含任何合适架构可变结构域序列，前提是抗体保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。如本文中所使用，重链架构区被定名为“hc-fr1-fr4”且轻链架构区被定名为“lc-fr1-fr4”。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:33、34、35及36的重链可变结构域架构序列(分别为hc-fr1、hc-fr2、hc-fr3及hc-fr4)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:37、38、39及40的轻链可变结构域架构序列(分别为lc-fr1、lc-fr2、lc-fr3及lc-fr4)。[0092]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体，其包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含与seqidno:7的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。在某些实施方案中，包含与seqidno:7的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的重链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:7中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:7的重链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0093]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:9的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0094]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:21的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:21的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:21中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:21的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:9的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。[0095]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0096]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:10的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0097]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:22的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:22的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的no:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0103]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:24的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:24的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:24中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:24的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:12的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。[0104]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0105]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:13的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0106]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:25的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:25的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:25中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:25的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:13的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。[0107]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:25的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0108]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:14的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0109]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:26的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:26的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:26中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:26的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:14的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:6的氨基酸序列。[0110]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:26的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0111]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:15的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:16的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0112]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:27的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:27的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:27中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:27的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:15的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:16的氨基酸序列。[0113]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0114]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:17的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:18的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0115]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:28的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:28的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:28中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:28的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:17的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:18的氨基酸序列。[0116]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:28的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0117]在一方面中，本文提供包含重链可变区及轻链可变区的抗cd228抗体，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seqidno:1的氨基酸序列、(ii)cdr-h2，其包含seqidno:2的氨基酸序列、及(iii)cdr-h3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；且/或其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seqidno:19的氨基酸序列、(ii)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列、及(iii)cdr-l3，其包含seqidno:20的氨基酸序列，其中抗cd228抗体的cdr由kabat编号方案定义。[0118]在一些实施方案中，本文提供抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物，其包含轻链可变结构域，该结构域包含与seqidno:29的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，包含与seqidno:29的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域相对于参考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或删除且保留与cd228(例如人cd228)结合的能力。在某些实施方案中，seqidno:29中总共1至10个氨基酸经取代、插入和/或删除。在某些实施方案中，取代、插入或删除(例如1、2、3、4或5个氨基酸)发生在cdr以外的区域(即在fr中)。在一些实施方案中，抗cd228抗体包含seqidno:29的轻链可变结构域序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施方案中，轻链可变结构域包含选自下列之一、二或三个cdr：(a)cdr-l1，其包含seqidno:19的氨基酸序列、(b)cdr-l2，其包含seqidno:5的氨基酸序列及(c)cdr-l3，其包含seqidno:20的氨基酸序列。[0119]在一方面中，本文提供包含重链可变结构域及包含轻链可变结构域的抗cd228抗体，该重链可变结构域包含seqidno:7的氨基酸序列，且该轻链可变结构域包含seqidno:29的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变结构域的n端谷氨酰胺为经环化以形成焦谷氨酸。[0120]在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为27d-ala，也称为hl49_27d_ala。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为27d-gln，也称为hl49_27d_gln。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为27d-tyr，也称为hl49_27d_tyr。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为34-ala，也称为hl49_34_ala。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为34-gln，也称为hl49_34_gln。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为34-tyr，也称为hl49_34_tyr。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为3x-ala，也称为hl49_3x_ala。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为3x-gln，也称为hl49_3x_gln。在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为3x-tyr，也称为hl49_3x_tyr。[0121]在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物的抗cd228抗体为单克隆抗体。[0122]本发明的抗cd228抗体亦可就那些与cd228(例如人cd228)的结合亲和力方面描述或指明。优选结合亲和力包括那些解离常数或kd小于5x10-2m、10-2m、5x10-3m、10-3m、5x10-4m、10-4m、5x10-5m、10-5m、5x10-6m、10-6m、5x10-7m、10-7m、5x10-8m、10-8m、5x10-9m、10-9m、5x10-10m、10-10m、5x10-11m、10-11m、5x10-12m、10-12m、5x10-13m、10-13m、5x10-14m、10-14m、5x10-15m或10-15m者。[0123]在一些实施方案中，本发明的抗cd228抗体的结合具ph依赖性，以使抗体在ph梯度中展示差异性结合。在一些实施方案中，抗cd228抗体在ph约5.6与ph约7.4之间展示最大结合。在一些实施方案中，抗cd228抗体在ph约5.6下展示最大结合。在一些实施方案中，抗cd228抗体在ph约6.3下展示最大结合。在一些实施方案中，抗cd228抗体在ph约7.4下展示最小结合。[0124]免疫球蛋白有五种类型：iga、igd、ige、igg及igm，分别具有定名为α、β、ε、γ及μ的重链。γ及α类型进一步分成亚型，例如人类表达下列亚型：igg1、igg2、igg3、igg4、iga1及iga2。igg1抗体可存在多种称为同种异型的多形性变体(在jefferisandlefranc2009.mabsvol1issue41-7中回顾)，其任一者皆适于本文中的一些实施方案。人族群中常见的同种异型变体为那些以字母a、f、n、z或那些的组合定名者。在本文中的任何实施方案中，抗体可包含重链fc区，该重链fc区包含人iggfc区。在进一步实施方案中，人iggfc区包含人igg1。[0125]在一些实施方案中，抗cd228抗体和/或抗cd228抗体-药物缀合物包含如以上提供的任一实施方案中的重链可变结构域及如以上提供的任一实施方案中的轻链可变结构域。在一实施方案中，抗体包含重链恒定区及轻链恒定区，该重链恒定区包含该重链恒定区包含的氨基酸序列，该轻链恒定区包含的氨基酸序列，包括那些序列的翻译后修饰。在另一实施方案中，抗体包含重链恒定区及轻链恒定区，该重链恒定区包含该重链恒定区包含的氨基酸序列，该轻链恒定区包含的氨基酸序列，包括那些序列的翻译后修饰。seqidno:31包含人igg1同种型的氨基酸位置239的丝氨酸至半胱氨酸取代。额外半胱氨酸残基的存在允许链间双硫键形成。此类链间双硫键形成可造成空间位阻，由此减少fc区-fcγr结合交互作用的亲和力。经导入或靠近igg恒定区的fc区中的半胱氨酸残基亦可作为与治疗剂缀合的位点(即使用硫醇特异性试剂诸如药物的顺丁烯二酰亚胺衍生物缀合细胞毒性药物)。治疗剂的存在造成空间位阻，由此进一步减少fc区-fcγr结合交互作用的亲和力。在位置234、235、236和/或237中任一者的其他取代减少对fcγ受体的亲和力，特别是fcγri受体(见例如us6,624,821、us5,624,821)。[0126]抗体亦包括经修饰的衍生物，即通过共价附接任何类型的分子至抗体，以使共价附接不防止抗体与cd228结合或在hd细胞上发挥细胞静止或细胞毒性效应。例如(但不限于此)，抗体衍生物包括经例如糖化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化(phosphylation)、酰胺化、通过已知保护/阻断基衍生化、蛋白分解切割、与细胞性配体或其他蛋白质键联等修饰的抗体。许多化学修饰中任一者可通过已知技术进行，包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、代谢合成衣霉素等。此外，衍生物可含有一个或多个非典型氨基酸。恒定区的选择[0127]人源化抗体的重链及轻链可变区可与至少一部份的人恒定区连接。恒定区的选择部分取决于是否希望具备抗体依赖性细胞媒介性细胞毒性、抗体依赖性细胞性吞噬作用和/或补体依赖性细胞毒性。举例来说，人同种型iggl及igg3具有强烈的补体依赖性细胞毒性，人同种型igg2具有微弱的补体依赖性细胞毒性及人igg4缺乏补体依赖性细胞毒性。人iggl及igg3相较于人igg2及igg4亦诱导更强的细胞媒介性效应功能。轻链恒定区可为λ或κ。抗体可被表达为含有二条轻链及二条重链的四聚体、分开的重链、分开的轻链、fab、fab'、f(ab')2、fv、或其中重链及轻链可变区结构域为透过间隔子连接的单链抗体。[0128]人恒定区显示在不同个体间的同种异型(allotypic)变异及同种型同种异型(isoallotypic)变异，也就是不同个体的恒定区的一个或多个多形性位置可不同。同种型同种异型与同种异型的不同之处在于，辨识一同种型同种异型的血清与一种或多种其他同种型的非多形性区域结合。[0129]在轻链和/或重链的氨基或羧基端之一或数个氨基酸(诸如重链的c端赖氨酸)可在一部分或所有分子中遗失或衍生化。取代可发生在恒定区以减少或增加效应功能诸如补体媒介性细胞毒性或adcc(见例如winteretal.,uspatentno.5,624,821；tsoetal.,uspatentno.5,834,597；及lazaretal.,proc.natl.acad.sci.usa103:4005,2006)或延长在人体中的半衰期(见例如hintonetal.,j.biol.chem.279:6213,2004)。[0130]例示性取代包括将天然氨基酸取代成半胱氨酸残基的氨基酸取代被导入氨基酸位置234、235、237、239、267、298、299、326、330或332，优选地在人iggl同种型中的s239c突变(us20100158909)。额外半胱氨酸残基的存在允许链间双硫键形成。此类链间双硫键形成可造成空间位阻，由此减少fc区-fcγr结合交互作用的亲和力。经导入或靠近igg恒定区的fc区中的半胱氨酸残基亦可作为与治疗剂缀合的位点(即使用硫醇特异性试剂诸如药物的顺丁烯二酰亚胺衍生物缀合细胞毒性药物)。治疗剂的存在造成空间位阻，由此进一步减少fc区-fcγr结合交互作用的亲和力。在位置234、235、236和/或237中任一者的其他取代减少对fcγ受体的亲和力，特别是fcγri受体(见例如us6,624,821、us5,624,821)。[0131]抗体的体内半衰期亦可影响彼的效应功能。可增加或降低抗体的半衰期以调整彼的治疗活性。fcrn为结构类似mhc第一型抗原且与β2-微球蛋白非共价缔合的的受体。fcrn调节igg的分解代谢及那些在组织间的胞移作用(ghetieandward,2000,annu.rev.immunol.18:739-766；ghetieandward,2002,immunol.res.25:97-113)。igg-fcrn交互作用发生在ph6.0(胞内囊泡的ph)但不发生在ph7.4(血液的ph)；此交互作用使得igg能被再循环回到循环中(ghetieandward,2000,ann.rev.immunol.18:739-766；ghetieandward,2002,immunol.res.25:97-113)。已定位人iggl中涉及fcrn结合的区域(shieldsetal,2001,j.biol.chem.276:6591-604)。在人iggl的位置pro238、thr256、thr307、gln311、asp312、glu380、glu382或asn434的丙氨酸取代增强fcrn结合(shieldsetal,2001,j.biol.chem.276:6591-604)。获得这些取代的iggl分子具有较长的血清半衰期。因此，这些经修饰的igg1分子可能可以执行那些的效应功能，因而相较于未经修饰的igg1在较长时期发挥那些的治疗疗效。其他用于增加与fcrn结合的例示性取代包括位置250的gln和/或位置428的leu。eu编号用于恒定区的所有位置。[0132]共价附接至保守性asn297的寡糖涉及igg的fc区与fcγr结合的能力(lundetal,1996,j.immunol.157:4963-69；wrightandmorrison,1997,trendsbiotechnol.15:26-32)。工程改造此糖化形式的igg可显著改善igg媒介性adcc。添加平分型n-乙酰葡萄糖胺修饰(umanaetal,1999,nat.biotechnol.17:176-180；daviesetal,2001,biotech.bioeng.74:288-94)至此糖化形式或自此糖化形式移除岩藻糖(shieldsetal,2002,j.biol.chem.277:26733-40；shinkawaetal,2003,j.biol.chem.278:6591-604；niwaeta/.,2004,cancerres.64:2127-33)为二种改善iggfc与fcγr之间的结合的iggfc工程改造实施例，由此增强ig媒介性adcc活性。在一些实施方案中，本文所述的抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体具有附接至恒定区的保守性asn297残基的聚糖，其中恒定区的氨基酸残基的编号为根据描述于kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1991)中的eu索引。在一些实施方案中，聚糖为双触角。在一些实施方案中，聚糖为核心岩藻糖基化。在一些实施方案中，聚糖具有零个末端半乳糖残基。在一些实施方案中，聚糖为双触角及核心岩藻糖基化。在一些实施方案中，聚糖为双触角且具有零个末端半乳糖残基。在一些实施方案中，聚糖为核心岩藻糖基化且具有零个末端半乳糖残基。在一些实施方案中，聚糖为双触角、核心岩藻糖基化且具有零个半乳糖残基。在一些实施方案中，在本文所述的抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的抗cd228抗体族群中，恒定区的保守性asn297残基(其中恒定区的氨基酸残基的编号为根据描述于kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1991)中的eu索引)主要被具有零个末端半乳糖残基的双触角、核心岩藻糖基化聚糖占据。[0133]系统性取代人igg1fc区的溶剂暴露氨基酸产生具有改变fcγr结合亲和力的igg变体(shieldsetal,2001,j.biol.chem.276:6591-604)。当与亲代igg1比较时，这些涉及thr256/ser298、ser298/glu333、ser298/lys334或ser298/glu333lys334至ala的取代的变体亚群显示对fcγr的结合亲和力及adcc活性增加(shieldsetal,2001,j.biol.chem.276:6591-604；okazakietal,2004,j.mol.biol.336:1239-49)。[0134]抗体的补体固定活性(clq结合及cdc活性二者)可通过lys326及glu333的取代来改善(idusogieetal.,2001,j.immunol.166:2571-2575)。在人igg2主链上的相同取代可将与clq结合不良且严重缺乏补体活化活性的抗体同种型转换成可与clq结合且媒介cdc的抗体同种型(idusogieetal,2001,j.immunol.166:2571-75)。一些其他方法亦可被用于改善抗体的补体固定活性。举例来说，将igm的18个氨基酸羧基端尾片段植入igg的羧基端大幅增强那些的cdc活性。此甚至可在igg4中观察到，其通常不具有可检测的cdc活性(smithetal,1995,j.immunol.154:2226-36)。同样地，以cys取代位于靠近igg1重链的羧基端的ser444诱导igg1的尾对尾二聚化，其cdc活性比起单体igg1增加200倍(shopesetal,1992,j.immunol.148:2918-22)。此外，对clq具特异性的双特异性双体抗体建构体亦授予cdc活性(kontermanneta/.,1997,nat.biotech.15:629-31)。[0135]补体活性可通过使重链的氨基酸残基318、320及322中的至少一者突变成具有不同侧链的残基(诸如ala)来减少。以其他经烷基取代的非离子性残基(诸如gly、he、leu或val)或芳香族非极性残基(诸如phe、tyr、trp及pro)取代三个残基中的任一者亦减少或阻断clq结合。ser、thr、cys及met可用于残基320及322(但非318)以减少或阻断clq结合活性。[0136]以极性残基取代318(glu)残基可修饰但不阻断clq结合活性。以ala取代残基297(asn)导致去除裂解活性，但仅轻微减少(约弱三倍)对clq的亲和力。此改变破坏糖基化位点及补体活化所需的碳水化合物的存在。任何在此位点的其他取代亦破坏糖基化位点。下列突变及那些的任何组合亦减少clq结合：d270a、k322a、p329a及p31is(见wo06/036291)。[0137]所谓的人恒定区包括具有任何天然同种异型或具有占据天然同种异型的多形性位置的残基的任何排列组合的恒定区。同样地，多达1、2、5或10个突变可存在于天然人恒定区，诸如那些如上所述的可减少fcγ受体结合或增加与fcrn结合者。[0138]在一些实施方案中，本文所述的抗cd228和/或抗cd228抗体-药物缀合物抗体包含重链恒定区，其包含seqidno:30的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗cd228和/或抗cd228抗体-药物缀合物抗体包含轻链恒定区，其包含seqidno:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗cd228和/或抗cd228抗体-药物缀合物抗体包含重链恒定区及轻链恒定区，该重链恒定区包含seqidno:30的氨基酸序列，该轻链恒定区包含seqidno:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗cd228和/或抗cd228抗体-药物缀合物抗体包含重链恒定区，其包含seqidno:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗cd228和/或抗cd228抗体-药物缀合物抗体包含重链恒定区及轻链恒定区，该重链恒定区包含seqidno:31的氨基酸序列，该轻链恒定区包含seqidno:32的氨基酸序列。v.重组抗体的表达[0139]在一些实施方案中，本文所述的抗cd228抗体通过重组表达生产。重组多核苷酸建构体通常包括与抗体链的编码序列可操作地连接的表达控制序列，包括天然缔合或异源性启动子区。优选地，表达控制序列为能够转形或转染真核宿主细胞的载体中的真核启动子系统。一旦载体并入适当宿主中之后，将宿主维持在适合高度表达核苷酸序列的条件下并收集及纯化交叉反应抗体。[0140]哺乳动物细胞是用于表达编码免疫球蛋白或其片段的核苷酸区段的优选宿主。见winnacker,fromgenestoclones,(vchpublishers,ny,1987)。一些能够分泌完整异源性蛋白的合适宿主细胞系已在该领域中发展，包括cho细胞系(例如dg44)、各种cos细胞系、hela细胞、hek293细胞、l细胞及非抗体生产骨髓瘤(包括sp2/0及ns0)。优选地，细胞系非人细胞。用于这些细胞的表达载体可包括表达控制序列，诸如复制起点、启动子、增强子(queenetal.,immunol.rev.89:49(1986))及必要处理信息位点，诸如核糖体结合位点、rna剪接位点、聚腺苷酸化位点及转录终止子序列。优选的表达控制序列为衍生自内源性基因、巨细胞病毒、sv40、腺病毒、牛乳头状瘤病毒及类似物的启动子。见coetal.,conjugatesinradioimageryandtherapyofcancer(c.w.vogeled.,oxfordu.press,1987。亦见美国专利第4,880,935号。)[0153]接头亦可为丙二酸酯接头(johnsonetal,1995,anticancerres.15:1387-93)、顺丁烯二酰亚氨基苯甲酰基接头(lauetal,1995,bioorg-med-chem.3(10):1299-1304)或3'-n-酰胺类似物(lauetal,1995,bioorg-med-chem.3(10):1305-12)。接头亦可为丙二酸酯接头(johnsonetal,1995,anticancerres.15:1387-93)、顺丁烯二酰亚氨基苯甲酰基接头(lauetal,1995,bioorg-med-chem.3(10):1299-1304)或3'-n-酰胺类似物(lauetal,1995,bioorg-med-chem.3(10):1305-12)。[0154]接头亦可为不可切割的接头，诸如与治疗剂(例如药物)直接连接的顺丁烯二酰亚氨基-伸烷基-或顺丁烯二酰亚胺-芳基接头。活性药物-接头通过降解抗体时释放。[0155]一般而言，接头对胞外环境实质上不敏感，表示当adc存在于胞外环境(例如血浆)中时，adc样本中不超过约20％、通常不超过约15％、更常不超过约10％、甚至更常不超过约5％、不超过约3％或不超过约1％的接头为经切割。[0156]接头是否对胞外环境实质上不敏感可通过例如以下判定：使血浆与(a)adc(“adc样本”)及(b)等摩尔量的未缀合抗体或治疗剂(“对照样本”)独立培育一段预定时间(例如，2、4、8、16或24小时)，接着比较通过例如高效液相色谱测量的存在于adc样本及存在于对照样本中的未经缀合的抗体或治疗剂的量。[0157]接头亦可促进细胞性内化作用。当与治疗剂缀合时，接头可促进细胞性内化作用(即，在如本文所述的adc或adc衍生物的接头-治疗剂部份环境中)。或者，当与治疗剂及抗cd228抗体二者缀合时，接头可促进细胞性内化作用(即，在如本文所述的adc环境中)。[0158]抗cd228抗体可经由抗体的杂原子与接头缀合。这些杂原子可以其天然状态存在于抗体上或可导入抗体中。在一些方面中，抗cd228抗体将经由赖氨酸残基的氮原子缀合至接头。在其他方面中，抗cd228抗体将经由半胱氨酸残基的硫原子缀合至接头。半胱氨酸残基可为天然存在或为经工程改造至抗体中者。将接头及药物-接头经由赖氨酸及半胱氨酸残基缀合至抗体的方法为本领域中已知。[0159]例示性抗体-药物缀合物包括基于澳瑞他汀的抗体-药物缀合物(即该药物组分为澳瑞他汀药物)。澳瑞他汀与微管蛋白结合，已经显示干扰微管动力学、核分裂及细胞分裂，且具有抗癌活性。一般而言，基于澳瑞他汀的抗体-药物缀合物包含在澳瑞他汀药物与抗cd228抗体之间的接头。接头可为例如可切割接头(例如肽基接头、碳水化合物接头)或不可切割接头(例如通过降解抗体释放的接头)。澳瑞他汀包括澳瑞他汀t、mmaf及mmae。示范性澳瑞他汀的合成及结构为描述于美国专利公开号7,659,241、7,498,298、2009-0111756、2009-0018086及7,968,687号，各以参照方式整体纳入此处以符合所有目的。[0160]其他例示性抗体-药物缀合物包括类美坦素(maytansinoid)抗体-药物缀合物(即药物组分为类美坦素药物)及苯并二氮杂卓抗体-药物缀合物(即药物组分为苯并二氮杂卓(例如吡咯并[l,4]苯并二氮杂卓二聚体(pbd二聚体)、吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体及唑啶基苯并二氮杂卓二聚体))。[0161]在一些实施方案中，用于本发明的pbd二聚体为由下式i代表。pbd二聚体的优选立体化学为如下式ia所示：或药物上的盐、溶剂合物或盐的溶剂合物；其中下标n为1或3。[0162]式(i)及(ia)的溶剂合物一般为自添加水或醇为溶剂穿过一或两个pbd单体的亚胺官能基形成，以形成甲醇胺和/或甲醇胺醚。例如，在n10-c11位置，可有亚胺(n＝c)、甲醇胺(nh-ch(oh))或甲醇胺醚(nh-ch(ome))，如下式i'及ia'代表：其中：(a)r10为h，且r11为oh或ora，其中ra为饱和c1-4烷基(优选地甲基)；或(b)r10及r11在它们所结合的氮与碳原子之间形成氮-碳双键；或(c)r10之一为h，且r11为oh或ora，其中ra为饱和c1-4烷基(优选地甲基)；且另一r10及r11在它们所结合的氮与碳原子之间形成氮-碳双键。[0163]式i或la的pbd二聚体(或药物上的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物)一般经由接头单元lu连接至抗体。接头单元在目标位置(例如在癌细胞内)作用以释放式i或la的pbd二聚体(或药物上的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物)。用于本发明的pbd药物-接头化合物为通过下式ii(优选立体化学如ila所示)代表，其中lu为接头单元。接头单元可为例如可切割肽接头单元(例如包含缬氨酸-丙氨酸肽的接头)或可切割二硫化物接头单元：或药物上的盐、溶剂合物或盐的溶剂合物；其中下标n为1或3。[0164]用于本发明的优选pbd药物-接头化合物为由下式iii代表：或药物上的盐、溶剂合物或盐的溶剂合物；其中下标n为1或3且下标m为2至5的整数。[0165]pbd药物-接头为与抗cd228抗体缀合以生产靶向cd228的抗体-药物缀合物。例如，抗体可与式ii或式iii的药物-接头缀合。例示性靶向c228的抗体-药物缀合物显示于下式iv、iva及ivb：或药物上的盐、溶剂合物或盐的溶剂合物；其中下标n为1或3；下标m为2至5的整数；且下标p为1至4。[0166]例示性药物-接头包括mmae药物-接头。本发明人发现，将聚乙二醇聚合物作为侧链并入至可切割β-葡萄糖醛酸苷mmae药物-接头中提供相较于非聚乙二醇化对照在异种移植模型中具有降低血浆廓清及增加抗肿瘤活性的抗体药物-缀合物。因此，用于附接至本发明的抗体的特别有利药物-接头为如下式v：或其药学上可接受的盐。[0167]此类药物-接头的优选立体化学显示于下式va：或其药学上可接受的盐，其中以式v及va而言，z代表具有能够与抗体的官能基反应以形成与其共价附接的反应性位点的有机部份，n从8至36不等且最佳的是从8至14不等(最佳的是12)，r21为聚乙二醇部份的加盖单元，优选为-ch3或-ch2ch2co2h。[0168]优选z部份为含顺丁烯二酰亚氨基部份。特别优选的z部份显示于以下的药物-接头：或其药学上可接受的盐。[0169]此类药物-接头的优选立体化学显示于下：或其药学上可接受的盐，其中以式vi、via、vii及viia而言，n从8至36不等且最佳的是从8至14不等(最佳的是12)，rpr为氢或保护基，例如酸不稳定保护基，例如boc，r21为聚乙二醇部份的加盖单元，优选为-ch3或-ch2ch2co2h。[0170]如上所述，rpr可为氢或保护基。如本文中所使用的保护基是指选择性地暂时或永久阻断多官能性化合物的反应性部位的基团。当保护基在致效分子他处所欲化学转变所需的反应条件下及在当需要时纯化新形成分子期间能够预防或避免非所要副反应或过早丧失保护基，且在不会不良影响该新形成分子结构或立体化学完整性的条件下可经移除时，该保护基为合适保护基。合适胺保护基包括酸不稳定氮保护基，包括那些由isidro-llobeletal.“aminoacid-protectinggroups”chem.rev.(2009)109:2455-2504所提供者。一般而言，酸不稳定氮保护基将一级或二级氨基转变成其对应胺甲酸酯且包括叔丁基、烯丙基及苄基胺甲酸酯。[0171]如上所述，r21为聚乙二醇部份的加盖单元。如本领域技术人员所将会理解的，聚乙二醇单元可经广泛多样的有机部份末端加盖，一般为那些相对不具反应性者。烷基及经取代的烷基为优选。[0172]通常，各抗体附接1至16个药物-接头。[0173]例示性基于澳瑞他汀的抗体-药物缀合物包括如下所示的mp-dlae-pabc-mmae(在本文中也称为dlae-mmae或mp-dlae-mmae或7092)抗体-药物缀合物，其中ab为abp(例如本文所述的抗cd228抗体)且val-cit(vc)代表缬氨酸-瓜氨酸双肽，且dlae代表d-亮氨酸-丙氨酸-谷氨酸三肽：或其药学上可接受的盐。药物装载为由p代表，即每抗体的药物-接头分子的数量。根据上下文，p可代表抗体组合物中每抗体的药物-接头分子的平均数量，也称为平均药物装载。p为介于1至20，且优选为1至8。在一些优选实施方案中，当p代表平均药物装载时，p为介于约2至约5。在一些实施方案中，p为约2、约3、约4、或约5。在制剂中每抗体的药物的平均数量可由常规手段诸如质谱分析、hic、elisa测定及hplc表征。在一些方面中，abp(例如抗cd228抗体)为经由抗体的半胱氨酸残基附接至药物-接头。在一些实施方案中，半胱氨酸残基为经工程改造至抗体中的残基。在其他方面中，半胱氨酸残基为链间双硫半胱氨酸残基。[0174]参照靶向cd228的抗体-药物缀合物，下标p代表药物装载，且取决于上下文可代表附接至个别抗体分子的药物-接头分子的分子数量且因这是整数值，或可代表平均药物装载且因此可为整数或非整数值，但一般为非整数值。平均药物装载代表族群中每抗体的药物-接头分子的平均数量。通常(但非总是)，当我们提及抗体例如单克隆抗体时，我们指的是抗体分子族群。在包含抗体-药物缀合物分子族群的组合物中，平均药物装载为重要质量属性，因为其决定可递送至靶细胞的药物的量。组合物中未缀合抗体分子的百分比为包括于平均药物装载值中。[0175]在本发明的优选方面中，当提及包含抗体-药物缀合物化合物族群的组合物时，平均药物装载为1至约16、优选地约2至约14、更优选的是约2至约10。以pbd抗体-药物缀合物诸如那些本文例示者而言，特别优选的平均药物装载为约2。在一些方面中，在抗体-药物缀合物化合物族群中个别抗体分子的实际药物装载为1至4、1至3或1至2，其中优势药物装载为2。在优选方面中，平均药物装载2为经由定点缀合技术达成(例如将经工程改造的半胱氨酸导入至抗体包括根据eu索引编号系统的位置239)。[0176]以mmae聚乙二醇化adc诸如那些本文例示者而言，特别优选的平均药物装载为约8。在例示性实施方案中，药物-接头为缀合至经还原的链间二硫化物的半胱氨酸残基。在一些方面中，在抗体-药物缀合物化合物族群中个别抗体分子的实际药物装载为1至10(或6至10或6至8)，其中优势药物装载为8。可达成较高药物装载，例如除了链间二硫化物之外，药物-接头为缀合至经导入的半胱氨酸残基(诸如半胱氨酸残基导入根据eu索引的位置239)。[0177]例示性adc包括下列：或其药学上可接受的盐，其中n从8至36不等且最佳的是从8至14不等(最佳的是12)，rpr为氢或保护基，例如酸不稳定保护基例如boc，r21为聚乙二醇部份的加盖单元，优选为-ch3或-ch2ch2co2h，ab代表抗cd228抗体，且当提及个别抗体分子时p代表从1至16不等的整数(优选为1至14、6至12、6至10或8至10)，或当提及抗体分子族群时代表约4或约6至约14(优选约8)的平均药物装载。[0178]如上所述，药物接头的peg(聚乙二醇)部分可从8至36不等，然而已发现具有12个环氧乙烷单元的peg特别优选。已发现较长peg链可导致较慢廓清，然而较短peg链可导致活性减损。因此，在所有上述实施方案中，下标n优选地为8至14、8至12、10至12或10至14且最佳的是12。[0179]多分散peg、单分散peg及离散peg可用于制造本发明的聚乙二醇化抗体-药物缀合物。多分散peg为大小及分子量的异质性混合物，然而单分散peg一般为自异质性混合物纯化且因此提供单链长度及分子量。优选peg单元为离散peg，其为以逐步方式而非经由聚合过程合成的化合物。离散peg提供具有经定义及指明链长度的单一分子。如同下标“p”，当提及抗体-药物缀合物族群时，下标“n”的值可为平均数量且可为整数或非整数。[0180]在优选实施方案中，将抗体共价附接至药物-接头为透过抗体的巯基官能基与药物接头的顺丁烯二酰亚胺官能基交互作用以形成经硫基取代的琥珀酰亚胺来完成。巯基官能基可存在于配体天然状态的配体单元上，例如在天然存在残基(链间二硫化物残基)中，或可经由化学修饰或通过生物工程改造或两者的组合导入至配体中。将理解的是抗体-经取代的琥珀酰亚胺可以经水解的形式存在。例如在优选实施方案中，adc包含当与抗体结合时为由下式结构代表的琥珀酰亚胺部份：或包含当与抗体结合时为由下式结构代表的其对应酸-酰胺部份：波浪线指示键联至药物-接头的其余部分。[0181]可用于与抗cd228抗体缀合的细胞毒性剂类型包括例如抗微管蛋白剂、dna次要凹槽结合剂、dna复制抑制剂、化学治疗致敏剂或该类似物。其他例示性细胞毒性剂类型包括蒽环类、澳瑞他汀、喜树碱、双联霉素(duocarmycin)、依扥泊苷(etoposide)、类美坦素(maytansinoid)及长春花生物碱。一些例示性细胞毒性剂包括澳瑞他汀(例如，澳瑞他汀t、澳瑞他汀e、afp、单甲基澳瑞他汀f(mmaf)、亲脂性单甲基澳瑞他汀f、单甲基澳瑞他汀e(mmae))、dna次要凹槽结合剂(例如，烯二炔及莱克西托素(lexitropsin))、双联霉素、紫杉烷(例如，太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多西紫杉醇(docetaxel))、长春花生物碱、烟碱酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂(nampti)、微管溶素m(tubulysinm)、多柔比星(doxorubicin)、吗啉基-多柔比星及氰基吗啉基-多柔比星。[0182]细胞毒性剂可为化学治疗剂诸如举例来说多柔比星、太平洋紫杉醇、美法仑(melphalan)、长春花生物碱、甲胺喋呤(methotrexate)、丝裂霉素c或依扥泊苷。该剂亦可为cc-1065类似物、卡利奇霉素(calicheamicin)、美坦素(maytansine)、海兔毒素10(dolastatin10)的类似物、利索新(rhizoxin)或沙海葵毒素(palytoxin)。[0183]细胞毒性剂亦可为澳瑞他汀。澳瑞他汀可为澳瑞他汀e衍生物，例如澳瑞他汀e与酮酸之间形成的酯。举例来说，澳瑞他汀e可分别与对乙酰基苯甲酸或苯甲酰戊酸反应以产生aeb及aevb。其他典型澳瑞他汀包括澳瑞他汀t、afp、mmaf及mmae。各种澳瑞他汀的合成及结构为描述于例如us2005-0238649及us2006-0074008。[0184]细胞毒性剂可为dna次要凹槽结合剂。(见例如美国专利第6,130,237号。)举例来说，次要凹槽结合剂可为cbi化合物或烯二炔(例如，卡利奇霉素)。[0185]细胞毒性或细胞静止剂可为抗微管蛋白剂。抗微管蛋白剂的例子包括紫杉烷类(例如，(太平洋紫杉醇(paclitaxel))、(多西紫杉醇(docetaxel))、t67(tularik)、长春花生物碱(例如，长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)及长春瑞滨(vinorelbine))及澳瑞他汀(例如，澳瑞他汀e、afp、mmaf、mmae、aeb、aevb)。其他适当的抗微管蛋白剂包括例如，浆果赤霉素(baccatin)衍生物、紫杉烷类似物(例如埃博霉素(epothilone)a及b)、噻氨酯哒唑(nocodazole)、秋水仙碱(colchicine)及秋水仙酰胺(colcimid)、雌二醇氮芥(estramustine)、念珠藻素(cryptophysin)、西马多丁(cemadotin)、类美坦素、考布他丁(combretastatin)、圆皮海绵内酯(discodermoide)、及艾榴塞洛素(eleuthrobin)。[0186]细胞毒性剂可为另一组抗微管蛋白剂类美坦素(例如dm1、dm2、dm3、dm4)。举例来说，类美坦素可为美坦素或含美坦素的药物接头诸如dm-1或dm-4(immunogen,inc.；亦见charietal.,1992,cancerres.)。[0187]在一些实施方案中，本发明的抗cd228抗体为经由mdpr-peg(12)-gluc接头缀合至单甲基澳瑞他汀e以形成具有下式结构的抗体-药物缀合物：或其药学上可接受的盐，其中n从8至36不等且最佳的是从8至14不等(最佳的是12)，rpr为氢或保护基，例如酸不稳定保护基例如boc，r21为聚乙二醇部份的加盖单元，优选为-ch3或-ch2ch2co2h，ab代表抗cd228抗体，且当提及个别抗体分子时p代表从1至16不等的整数(优选为1至14、6至12、6至10或8至10)，或当提及抗体分子族群时代表约4或约6至约14(优选约8)的平均药物装载。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_27d-ala且所得抗体-药物缀合物为hl49_27d-ala-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_27d-gln且所得抗体-药物缀合物为hl49_27d-gln-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_27d-tyr且所得抗体-药物缀合物为hl49_27d-tyr-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_34-ala且所得抗体-药物缀合物为hl49_34-ala-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_34-gln且所得抗体-药物缀合物为hl49_34-gln-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_34-tyr且所得抗体-药物缀合物为hl49_34-tyr-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_3x-ala且所得抗体-药物缀合物为hl49_3x-ala-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_3x-gln且所得抗体-药物缀合物为hl49_3x-gln-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。在一些实施方案中，抗cd228抗体为hl49_3x-tyr且所得抗体-药物缀合物为hl49_3x-tyr-mdpr-peg(12)-gluc-mmae。viii.治疗性应用[0188]本发明的抗体(单独或作为其抗cd228抗体-药物缀合物)可用于治疗受试者的癌症。一些此类癌症显示以蛋白(例如通过使用例示性抗体之一者的免疫测定)或mrna水平测量的可检测量的cd228。一些此类癌症显示相对于相同类型的非癌性组织(优选地来自相同患者)上升量的cd228。应接受治疗的癌细胞的cd228例示量为每细胞5000至500000个cd228分子，虽然可治疗更高或更低的量。可任意选择地，癌症的cd228的量于实施治疗前测量。在一些实施方案中，受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且对该治疗无反应，其中该一种或多种治疗剂不是抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且在该治疗之后复发，其中该一种或多种治疗剂不是抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且在治疗期间经历疾病进展，其中该一种或多种治疗剂不是抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，癌症为晚期癌症。在一些实施方案中，晚期癌症为第3期或第4期癌症。在一些实施方案中，晚期癌症为转移性癌症。在一些实施方案中，癌症为反复性癌症。在一些实施方案中，受试者曾接受癌症标准照护疗法的先前治疗且先前治疗失败。在一些实施方案中，受试者为人类。[0189]与cd228表达相关联且适于治疗的癌症实施例包括黑色素瘤及其他癌，包括胰腺癌、肺癌诸如非小肺癌、甲状腺癌、食道癌、头颈癌、乳腺癌诸如三阴性乳腺癌、结直肠癌、间皮瘤及胆管癌。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的黑色素瘤的方法。在一些实施方案中，黑色素瘤为皮肤黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤选自由表浅扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、肢端小痣性黑色素瘤、小痣性恶性黑色素瘤及结缔组织增生性黑色素瘤所组成的组。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤为表浅扩散性黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤为结节性黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤为肢端小痣性黑色素瘤。在一些实施方案中，肢端小痣性黑色素瘤为甲下黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤为小痣性恶性黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤黑色素瘤为结缔组织增生性黑色素瘤。在一些实施方案中，受试者曾接受皮肤黑色素瘤的pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂先前疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，pd-1的抑制剂选自由尼沃鲁单抗(bms-936558或mdx-1106)、派姆单抗(mk-3475)、匹利珠单抗(ct-011)及西米匹单抗(cemiplimab)(regn2810)所组成的组。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-l1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，pd-l1抑制剂选自由阿特珠单抗(atezolizumab)(mpdl3280a)、艾维路单抗(avelumab)德瓦鲁单抗(durvalumab)及bms-936559所组成的组。在一些实施方案中，黑色素瘤为皮肤下黑色素瘤。在一些实施方案中，皮肤下黑色素瘤为眼黑色素瘤或黏膜黑色素瘤。在一些实施方案中，黑色素瘤为非皮肤黑色素瘤。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的胰腺癌的方法。在一些实施方案中，胰腺癌为外分泌癌或神经内分泌癌。在一些实施方案中，胰腺癌为外分泌癌症。在一些实施方案中，外分泌胰腺癌选自由胰腺癌、腺泡细胞癌、囊腺癌、胰母细胞瘤、腺鳞癌、戒环细胞癌、肝样癌、胶体癌、未分化癌及胰黏液性囊状肿瘤所组成的组。在一些实施方案中，受试者曾接受外分泌胰腺癌的一种或多种先前线上疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受外分泌胰腺癌之一种先前线上疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受外分泌胰腺癌的超过一种先前线上疗法。在一些实施方案中，胰腺癌为胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌为胰管腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌为腺泡细胞癌。在一些实施方案中，胰腺癌为囊腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌为胰母细胞瘤。在一些实施方案中，胰腺癌为腺鳞癌。在一些实施方案中，胰腺癌为戒环细胞癌。在一些实施方案中，胰腺癌为肝样癌。在一些实施方案中，胰腺癌为胶体癌。在一些实施方案中，胰腺癌为未分化癌。在一些实施方案中，胰腺癌为胰黏液性囊状肿瘤。在一些实施方案中，胰腺癌为神经内分泌癌。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的肺癌的方法。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的非小细胞肺癌的方法。在一些实施方案中，非小细胞肺癌具有突变形式的表皮生长因子受体(egfr)。在一些实施方案中，非小细胞肺癌具有野生型egfr。在一些实施方案中，受试者已经接受非小细胞肺癌的基于铂的疗法的先前疗法。在一些实施方案中，基于铂的疗法选自由下列所组成的组：卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、奈达铂(nedaplatin)、四硝酸三铂、菲铂(phenanthriplatin)、吡铂(picoplatin)及沙铂(satraplatin)。在一些实施方案中，基于铂的疗法为卡铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为顺铂(cisplatin)。在一些实施方案中，基于铂的疗法为奥沙利铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为奈达铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为四硝酸三铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为菲铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为吡铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为沙铂。在一些实施方案中，受试者曾接受非小细胞肺癌的pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂先前疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，pd-1抑制剂选自由尼沃鲁单抗(bms-936558或mdx-1106)、派姆单抗(mk-3475)、匹利珠单抗(ct-011)及西米匹单抗(cemiplimab)(regn2810)所组成的组。在一些实施方案中，受试者曾接受pd-l1抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，pd-l1抑制剂选自由阿特珠单抗(atezolizumab)(mpdl3280a)、艾维路单抗(avelumab)德瓦鲁单抗(durvalumab)及bms-936559所组成的组。在一些实施方案中，受试者已经接受非小细胞肺癌的基于铂的疗法及pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂先前疗法。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的甲状腺癌的方法。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的食道癌的方法。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的头颈癌的方法。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的乳腺癌的方法。在一些实施方案中，乳腺癌选自由her2阳性、her2阴性、雌激素受体(er)阳性、er阴性、助孕素受体(pr)阳性、pr阴性及三阴性乳腺癌所组成的组。在一些实施方案中，乳腺癌为her2阳性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为her2阴性乳腺癌。在一些实施方案中，受试者曾接受her2阴性乳腺癌的一种或多种先前线上疗法。在一些实施方案中，一种或多种先前线上疗法包含紫杉烷(taxane)的治疗。在一些实施方案中，紫杉烷选自由太平洋紫杉醇、多西紫杉醇及卡巴西紫杉醇(cabazitaxel)所组成的组。在一些实施方案中，紫杉烷为太平洋紫杉醇。在一些实施方案中，紫杉烷为多西紫杉醇。在一些实施方案中，紫杉烷为卡巴西紫杉醇。在一些实施方案中，her2阴性乳腺癌受试者为荷尔蒙受体阳性。在一些实施方案中，her2阴性、荷尔蒙受体阳性乳腺癌受试者曾接受cdk4/6抑制剂的先前疗法。在一些实施方案中，her2阴性、荷尔蒙受体阳性乳腺癌受试者曾接受荷尔蒙导向疗法的先前疗法。在一些实施方案中，乳腺癌为er阳性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为er阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为pr阳性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为pr阴性乳腺癌。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的三阴性乳腺癌的方法。三阴性乳腺癌是一种癌的术语，其是指缺乏可检测的雌激素受体及助孕素受体，并缺乏her2/neu过度表达的乳腺癌。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者的结直肠癌的方法。在一些实施方案中，结直肠癌选自由结直肠腺癌、胃肠道基质瘤、原发性结直肠淋巴瘤、胃肠道类癌肿瘤及平滑肌肉瘤所组成的组。在一些实施方案中，结直肠癌为结直肠腺癌。在一些实施方案中，结直肠癌为胃肠道基质瘤。在一些实施方案中，结直肠癌为原发性结直肠淋巴瘤。在一些实施方案中，结直肠癌为胃肠道类癌肿瘤。在一些实施方案中，结直肠癌为平滑肌肉瘤。在一些实施方案中，受试者曾接受结直肠癌的二种或超过二种先前线上疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受结直肠癌的二种先前线上疗法。在一些实施方案中，受试者曾接受结直肠癌的超过二种先前线上疗法。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗受试者之间皮瘤的方法。在一些实施方案中，间皮瘤选自由胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、心包膜间皮瘤及睾丸间皮瘤所组成的组。在一些实施方案中，间皮瘤为胸膜间皮瘤。在一些实施方案中，受试者已经接受胸膜间皮瘤的基于铂的疗法的先前疗法。在一些实施方案中，基于铂的疗法选自由下列所组成的组：卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、奈达铂(nedaplatin)、四硝酸三铂、菲铂(phenanthriplatin)、吡铂(picoplatin)及沙铂(satraplatin)。在一些实施方案中，基于铂的疗法为卡铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为顺铂(cisplatin)。在一些实施方案中，基于铂的疗法为奥沙利铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为奈达铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为四硝酸三铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为菲铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为吡铂。在一些实施方案中，基于铂的疗法为沙铂。在一些实施方案中，受试者曾接受胸膜间皮瘤的培美曲塞的先前疗法。在一些实施方案中，间皮瘤为腹膜间皮瘤。在一些实施方案中，间皮瘤为心包膜间皮瘤。在一些实施方案中，间皮瘤为睾丸间皮瘤。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗体-药物缀合物用于治疗胆管癌的方法。该治疗可应用至具有这些种类的原发性或转移性肿瘤的患者。治疗亦可施用至对常规治疗呈现难治性的患者，或对此类治疗出现反应后又复发的患者。在一些实施方案中，受试者为人类。[0190]单独或呈缀合物形式的本发明知抗体(诸如人源化抗体)为以有效配方施用，表示推迟癌症发生、减少癌症严重性、抑制癌症进一步恶化和/或改善症的至少一种征候或症状的剂量、施用途径及施用频率。若患者已经罹癌，配方可指治疗性有效配方。若该患者相较于一般大众具有较高的罹癌风险但尚未出现症状，则该配方可指预防性有效配方。在一些实施例中，治疗性或预防性疗效可于个体患者中相对于历史对照或相同患者的过去经验比较观察。在其他实施例中，治疗性或预防性疗效可于治疗患者族群相对于未经治疗的对照患者族群的临床前或临床试验中显示。[0191]单克隆抗体的例示性剂量为0.1mg/kg至50mg/kg患者体重、更典型为1mg/kg至30mg/kg、1mg/kg至20mg/kg、1mg/kg至15mg/kg、1mg/kg至12mg/kg或1mg/kg至10mg/kg1、或2mg/kg至30mg/kg、2mg/kg至20mg/kg、2mg/kg至15mg/kg、2mg/kg至12mg/kg或2mg/kg至10mg/kg、或3mg/kg至30mg/kg、3mg/kg至20mg/kg、3mg/kg至15mg/kg、3mg/kg至12mg/kg或3mg/kg至10mg/kg。单克隆抗体或其抗体药物缀合物的例示性剂量为1mg/kg至7.5mg/kg或2mg/kg至7.5mg/kg或3mg/kg至7.5mg/kg患者体重、或0.1至20或0.5至5mg/kg体重(例如0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg)或10至1500或200至1500mg的固定剂量。在一些方法中，患者为经施用至少1.5mg/kg、至少2mg/kg或至少3mg/kg的剂量，每三周施用一次或更高的剂量。剂量取决于施用频率、患者状态、对先前治疗的反应(若有的话)、预防性或治疗性的治疗或急性或慢性病症等其他因素。[0192]施用可为肠胃外、静脉内、经口、皮下、动脉内、颅内、脊椎鞘内、腹膜内、局部、鼻内或肌肉内。施用亦可直接集中至肿瘤内。通过静脉内或皮下施用至系统性循环内为为优选。静脉内施用可通过例如在诸如30至90分钟的期间输注，或通过单一推注注射。[0193]施用频率取决于抗体或缀合物于循环中的半衰期、患者病况及施用途径等其他因素。频率可为每天、每周、每月、每季或因应患者病况的改变或所治疗的癌症的进展而在不规则之间隔施用。示范性静脉施用的频率为在一连续治疗疗程中介于每周二次至每季一次，虽然更高或更低频率的给药亦为可能。其他例示性静脉施用的频率为在一连续治疗疗程中介于每周一次至每四周三次，虽然更高或更低频率的给药亦为可能。以皮下施用而言，例示性给药频率为每天至每月一次，虽然更高或更低频率的给药亦为可能。[0194]施用的剂量次数取决于癌症的特性(例如是否出现急性或慢性症状)及病症对治疗的反应。以急性病症或慢性病症的急性恶化而言，施用1至10次通常足够。有时单次推注剂量(可任意选择地呈分开形式)即足以用于急性病症或慢性病症的急性恶化。治疗可重复用于反复性急性病症或急性恶化。以慢性病症而言，抗体可以规律之间隔施用，例如每周、隔周、每月、每季、每六个月一次至少1、5或10年或患者终生。[0195]用于肠胃外施用的药物组合物为优选地无菌、实质上等渗性且在gmp条件下制造。药物组合物可以单位剂量形式提供(即用于单次施用的剂量)。药物组合物可利用一种或多种生理上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂或助剂调配。调配物取决于所选择的施用途径。以注射而言，抗体可被调配于水性溶液，优选地生理上可相容的缓冲液，诸如hank氏溶液、ringer氏液或生理盐水或醋酸缓冲液(以减少注射部位的不适)。溶液可包含调配剂诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。选择性地，抗体可呈冻干形式以供使用前与适当载具例如无致热原的无菌水构成。抗体于液体调配物中的浓度可为例如1至100mg/ml，诸如10mg/ml。[0196]本发明的抗体治疗可与化学疗法、放射疗法、干细胞治疗、手术及其他能有效对抗所治疗的病症的治疗组合。其他可与本文所述的针对cd228的抗体及抗体-药物缀合物一起施用的剂的有用类别包括例如针对癌性细胞上表达的其他受体的抗体、抗微管蛋白剂(例如澳瑞他汀)、dna次要凹槽结合剂、dna复制抑制剂、烷化剂(例如铂复合物诸如顺铂、单(铂)、二(铂)及三核铂复合物及卡铂)、蒽环类、抗生素、抗叶酸剂、抗代谢物、化学疗法致敏剂、双联霉素、依扥泊苷、氟化嘧啶、离子载体、莱克西托素(lexitropsin)、亚硝基尿素、普拉汀诺(platinol)、预先形成化合物、嘌呤抗代谢物、嘌呤霉素(puromycin)、放射线致敏剂、类固醇、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱及类似物。[0197]抗cd228抗体或抗体-药物缀合物的治疗(可选地单独与上述其他剂或配方的任一者组合或作为抗体药物缀合物)相较于相同治疗(例如化学治疗)但不含单独或作为缀合物的抗cd228抗体可增加肿瘤(例如黑色素瘤、胰腺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、头颈癌、三阴性乳腺癌乳腺癌、结直肠癌、间皮瘤、胆管癌)患者特别是复发或顽固性患者的中位无进展存活期或整体存活期至少30％或40％，但优选地50％、60％至70％或甚至100％或更久。此外或替代地，包括单独或作为缀合物的抗cd228抗体的治疗(例如标准化学治疗)相较于相同治疗(例如化学治疗)但不含单独或作为缀合物的抗cd228抗体可增加肿瘤患者的完全反应率、部分反应率或客观反应率(完全+部分)至少30％或40％，但优选地50％、60％至70％或甚至100％。[0198]一般而言，在临床试验中(例如ii期、ii/iii期或iii期)，经标准治疗加上单独或作为缀合物的抗cd228抗体治疗的患者之前述中位无进展存活期和/或反应率的增加相对于单独接受标准治疗(或加上安慰剂)的对照组患者具有统计显著性，例如p＝0.05或0.01或甚至0.001的水平。完全及部分反应率为由经常用于癌症临床试验中的客观标准决定，例如由美国国家癌症研究所和/或食品药物管理局列示或接受的标准。ix.制造物品及试剂盒[0199]在另一方面中，所提供的制造物品或试剂盒包含本文所述的抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物。制造物品或试剂盒可进一步包含在本发明的方法中使用本文所述的抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物的指示说明。因此，在某些实施方案中，制造物品或试剂盒包含在治疗受试者的癌症(例如黑色素瘤及其他癌，包括胰腺癌、非小肺癌、甲状腺癌、头颈癌、乳腺癌诸如三阴性乳腺癌、结直肠癌、间皮瘤或胆管癌)的方法中使用本文所述的抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物的指示说明，包含向受试者施用有效量的本文所述的抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，癌症为非小肺癌。在一些实施方案中，癌症为甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为头颈癌。在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，该癌为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为间皮瘤。在一些实施方案中，癌症为胆管癌。在一些实施方案中，受试者为人类。[0200]制造物品或试剂盒可进一步包含容器。合适容器包括例如瓶、小瓶(例如，双室小瓶)、注射器(诸如单室或双室注射器)及试管。在一些实施方案中，容器为小瓶。容器可自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳调配物。[0201]制造物品或试剂盒可进一步包含在容器上或与容器相关的标签或包装仿单，其可标示重构和/或使用调配物的指示。标签或包装仿单可进一步指示调配物可用于或欲用于皮下、静脉内(例如静脉输注)或其他用于治疗受试者的癌症(例如黑色素瘤及其他癌，包括胰腺癌、非小肺癌、甲状腺癌、头颈癌、乳腺癌诸如三阴性乳腺癌、结直肠癌、间皮瘤或胆管癌)的施用模式。容纳调配物的容器可为单次使用小瓶或允许重复施用经重构的调配物的多次使用小瓶。制造物品或试剂盒可进一步包含第二容器，该第二容器包含合适稀释剂。制造物品或试剂盒可进一步包括其他从商业性、治疗性及使用者观点来说所欲的材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器及载有使用说明的包装仿单。[0202]本文中的制造物品或试剂盒可选地进一步包含容器，该容器包含第二药物，其中抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物为第一药物，且该物品或试剂盒在标签或包装仿单上进一步包含使用有效量的第二药物治疗受试者的指示说明。在一些实施方案中，第二药物用于消除或减少一或多起不良事件的严重性。[0203]在一些实施方案中，抗cd228抗体或抗cd228抗体-药物缀合物为以冷冻干燥粉末存在于容器中。在一些实施方案中，冷冻干燥粉末为于标示活性剂的数量的密封容器诸如小瓶、安瓿或小袋中。当该药品通过注射施用时，可提供例如无菌注射用水或盐水的安瓿(可选地作为试剂盒的一部分)以使成分可在施用前混合。该试剂盒可进一步包括若有需要的一种或多种不同的常规药物组分，诸如例如本领域技术人员将显而易知的具有一种或多种药学上可接受的载剂的容器、额外容器等。印制为仿单或标签形式的指示说明亦可包括于试剂盒中，其标示应施用的组分数量、施用准则和/或混合组分的准则。x.其他应用[0204]本文所述的抗cd228抗体(诸如人源化抗cd228)可在临床诊断、临床治疗或研究的情况中用于检测cd228。癌症的cd228的表达提供癌症可由本发明的抗体治疗的指示。抗体亦可作为实验室研究的研究试剂贩卖，以检测带有cd228的细胞及那些对各种刺激的反应。在此类用途中，单克隆抗体可以荧光分子、自旋标示分子、酶或放射性同位素标示，且可以含有实施cd228测定所需的所有试剂的试剂盒形式提供。本文所述的抗体可用于检测cd228蛋白表达及决定癌症是否可使用cd228adc治疗。作为实施例，本文所述的抗体可用于检测黑色素瘤细胞、胰腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、甲状腺癌细胞及头颈癌细胞的cd228表达。抗体亦可用于例如通过亲和力色谱纯化cd228。[0205]所有以上或以下所引述的专利申请案、网站、其他公开数据、编号及类似物为以引用方式整体并入本文以符合所有目的，如同每个个别项目为经具体及个别明示而以引用方式并入的相同范围。若不同版本的序列在不同时间与一编号相关，此处是指在本技术案的有效申请日与该编号相关的版本。有效申请日是指较早的提及该编号的优先权的实际申请日或申请日(若有的话)。同样地，若不同版本的公开数据、网站或该类似物为于不同时间出版，此处是指在最近本技术案的有效申请日以前所发表的版本，除非另外说明。本发明的任何特征、步骤、组件、实施方案或方面可与任何其他者组合使用除非特别说明不可如此。虽然本发明已由说明和示例的方式详加描述以求清晰认识，但显而易见的是某些改变及修饰可在该随附的权利要求的范围内实施。xi.抗体序列[0206]cdr序列：[0207]以下列可变区序列的各者而言，根据kabat编号方案的cdr为画底线且根据imgt编号方案的cdr为呈粗体及斜体。[0208]hl49、27d-ala、27d-gln、27d-tyr、34-ala、34-gln、34-tyr、3x-ala、3x-gln、3x-tyr-重链可变区：[0209]hl49轻链可变区：[0210]27d-ala-轻链可变区：[0211]27d-gln-轻链可变区：[0212]27d-tyr-轻链可变区：[0213]轻链可变区：[0214]34-ala-轻链可变区：[0215]34-gln-轻链可变区：[0216]34-tyr-轻链可变区：[0217]3x-ala-轻链可变区：[0218]3x-gln-轻链可变区：[0219]3x-tyr-轻链可变区：[0220]hl49、27d-ala、27d-gln、27d-tyr、34-ala、34-gln、34-tyr、3x-ala、3x-gln、3x-tyr-架构区：hc-fr1：hc-fr2：hc-fr3：hc-fr4：lc-fr1：lc-fr2：lc-fr3：lc-fr4：[0221]参照下列实施例将能更完整了解本发明。然而，它们不应被解读为限制本发明的范围。应了解此处所描述的例子及实施方案仅供示范的目的，各种对于那些的修饰或改变将由该领域的技术人员建议且将被纳入本技术案的精神与范围及该随附的权利要求的范围内。实施例实施例1：癌细胞系的cd228表达[0222]在各种癌细胞系的细胞表面上的cd228拷贝数定量为使用鼠cd228mab作为一级抗体及如制造商(dakoa/s，glostrup，denmark)所述的dakoqifikit流式细胞间接测定来测定并使用attunenxt流式细胞仪评估。所得每细胞cd228分子表达数显示于表1。表1：各种细胞系的每细胞的cd228分子实施例2：抗cd228抗体的ph依赖性结合[0223]各种抗cd228抗体结合cd228的能力在ph值范围4.55至7.4下使用标准elisa规程评估。简言之，将100ng的人cd228(r&dsystemscustom02；批号dcwr021505a)或bsa(sigma；目录编号a7030-100g)用pbs稀释且添加至各孔在4℃下隔夜。接着将板以pbs-t(emdmillipore；目录编号5246531ea)洗涤三次。在洗涤之后，将板在室温下以3％(w/v)bsa于pbs-t中阻断1小时。接着移除过量阻断缓冲液，且一级抗体以3倍稀释于稀释缓冲液(0.15m柠檬酸盐-磷酸盐缓冲剂ph4.0至7.5)始于抗体浓度60nm添加。在室温下培育1小时之后，将板洗涤3次，接着以二级抗体(山羊抗人iggfc特异性hrp缀合，jacksonimmunoresearch编号109-035-098)于含1％bsa的pbs-t中培育。在室温下培育30分钟之后，将板洗涤3次。接着将100μltmb底物(lifetechnologies；目录编号002023)添加至各孔。在室温下培育10分钟之后，将100μlh2so4添加至各孔以停止反应，将板覆盖透明板封且在envision上以450nm读取。hl49及轻链cdr的组氨酸经取代成丙氨酸、谷氨酰胺或酪氨酸的九种变体的ph依赖性结合为如图1a至1i所示。各抗体的所得ec50显示于表2。在此测定中，hl49_27d突变体(27d_ala、27d_tyr及27d_gln)比起hl49具有较强亲和力。hl49_34突变体(34_ala及34_gln)在ph7.4下具有与hl49类似的亲和力，但在ph6.3下具有较强亲和力。三突变体整体而言相较于hl49具有较低亲和力。表2：各抗体的ec50(nm)实施例3：抗cd228抗体在中性ph下的细胞结合[0224]使用饱和结合测定在中性ph下评估各种抗cd228抗体结合a375细胞、a2058细胞上的cd228及cd228蛋白的能力。简言之，将分别具有40,000或18,000拷贝数的cd228的1x105个a2058或a375细胞等分至96孔v底板的每孔。添加浓度范围0.66pm至690nm的各cd228抗体并在冰上培育60分钟。使细胞成团块且以pbs/bsa洗涤3x，随后添加10μg/ml的经pe标示的抗人igg山羊二级抗体，并在冰上培育额外60分钟。使细胞成团块且以pbs/bsa洗涤3x，并重悬于125μl的pbs/bsa中。以流式细胞仪分析荧光，使用饱和荧光信号的百分比测定结合百分比且后续计算表观kd。各抗体的所得ec50显示于表3。组氨酸34变体(34_ala、34_gln及34_tyr)比起组氨酸27d变体或3x组氨酸变体显示较低的对细胞的亲和力。组氨酸34变体显示以丙氨酸、谷氨酰胺及酪氨酸取代的巨大差异。令人意外的是，3x突变体的细胞结合与elisa测定之间的亲和力具有巨大差异。表3：各抗体的ec50(nm)实施例4：抗cd228抗体-药物缀合物的体外细胞毒性[0225]使肿瘤细胞与包含所示抗cd228抗体、接头及mmae的cd228抗体-药物缀合物在37℃下培育96至144小时。根据制造商说明使用celltiterglo测量细胞活性。荧光信号为于fusionht荧光板读取仪(perkinelmer,waltham,ma)上测量。将数据标准化至未经处理的细胞，且使用graphpad软件计算x50值。每细胞cd228分子数量及在最高剂量下剩余的存活细胞百分比显示于表4。经各种浓度的抗cd228抗体-药物缀合物处理的a2058细胞的所得存活细胞百分比显示于图2。hl49_34ala的最大杀灭百分比特别不同。其他突变体不具有较高ic50值，但显示较多整体杀灭(表4括号中的数字)。表4：各抗体的ic50(nm)及各抗体-药物缀合物的整体杀灭百分比实施例5：抗cd228抗体的内化[0226]评估抗cd228抗体内化及分解代谢荧光部份af647的能力。colo853细胞系经抗cd228抗体处理，该抗cd228抗体与qf01以每抗体2个分子的近似比例缀合，该qf01包含经由葡萄糖醛酸苷接头(gluc)连接至cy5荧光团的淬熄剂tidequencher5ws琥珀酰亚氨基酯(tq5ws)。当cy5完整在抗体上时维持淬熄，只有在经切割脱离tq5ws淬熄剂时才发出荧光。在30分钟后洗涤2μg/ml的经标示的抗cd228抗体以移除未经结合的经标示的抗cd228抗体。将肿瘤细胞与抗cd228抗体培育且进行成像测定以测定随时间的每细胞荧光强度。以三重复(intriplicate)实施实验且结果显示于图3a至3c。[0227]以连续暴露条件而言，colo853细胞系经抗cd228抗体处理，该抗cd228抗体与qf01以每抗体2个分子的近似比例缀合，该qf01包含经由葡萄糖醛酸苷接头(gluc)连接至cy5荧光团的淬熄剂tidequencher5ws琥珀酰亚氨基酯(tq5ws)。如前段所述，当cy5完整在抗体上时维持淬熄，只有在经切割脱离tq5ws淬熄剂时才发出荧光。接着添加2μg/ml的抗体-qf01且允许与细胞结合。不洗涤未与细胞结合的经标示的hl49抗体。将肿瘤细胞与抗cd228抗体培育且进行成像测定以测定随时间的每细胞荧光强度。以三重复(intriplicate)实施实验且结果显示于图3d至3f。[0228]这些实验显示hl49_34ala比起hl49具有优选整体内化作用。hl49_34tyr在结合及洗涤条件下展现较差内化作用，但在连续暴露条件下展现优选内化作用。实施例6：抗cd228抗体的结合动力学[0229]使用生物膜干涉术(bli)技术，于octetred384仪器中使用抗体作为配体及抗原作为分析物测定hl49、hl49_34ala及hl49_tyr的结合动力学。hl49、hl49_34ala及hl49_34tyr的octet结果显示于图4a至c。如表5所示，使用octet测定的结合动力学表明二个组氨酸34突变体具有减少整体亲和力。hl49_34ala相较于野生型hl49具有较快缔合速率但较慢解离速率。相对地，hl49_34tyr相较于野生型hl49具有较慢缔合速率但类似的解离速率，此可解释其对细胞减少的亲和力。表5：抗cd228抗体的结合动力学实施例7：抗cd228adc的体内活性[0230]在裸(nu/nu)小鼠(6只动物/组)植入于25％基质胶中的1xl06个经培养的a375、1x105个或2.5x105个a2058肿瘤细胞。当肿瘤达到100mm3时，开始1mg/kg测试adc的给药(单一剂量腹膜内注射)。使用卡尺监测肿瘤体积，当肿瘤体积达到约1000mm3时安乐死动物。各组的平均肿瘤体积作图持续，直到一或多只动物安乐死(图5a至5d)。所有动物程序根据获得实验动物管理评鉴及认证协会认可的机构中的实验动物照顾及使用委员会所核准的规程实施。[0231]在具有中等量的cd228表达的a2058异种移植模型中，hl49与二个突变体adc(hl49_h34a及hl49_h34y)之间的抗肿瘤活性类似。此活性在当adc以二种不同adc接头及载荷物缀合时维持(图5a及5c)。在较低cd228表达性细胞系衍生性肿瘤异种移植(cdx)模型a375中，当与mdpr-peg(12)-gluc-mmae(8)接头/载荷物缀合时，hl49突变体adc比起hl49具有稍微较劣活性(图5d)。在相同模型中，当与不可通透载荷物(澳瑞他汀t)缀合时，hl49_h34a突变体抗体具有与hl49类似的抗肿瘤活性，然而hl49_h34y突变体抗体具有此载荷物时失去所有抗肿瘤活性(图5b)。这些结果表明抗体结合特征对于取决于cd228表达水平以及接头和载荷物选择两者的adc活性具有独特影响。当前第1页12当前第1页12
技术特征：
1.一种经分离的抗cd228抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区及轻链可变区，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:4的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列，其中轻链cdr的至少一个组氨酸残基经不同氨基酸取代。2.根据权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含与seq id no:7的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，且该轻链可变区包含与seq id no:8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:9的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。4.根据权利要求3的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列且该轻链可变区包含seq id no:21的氨基酸序列。5.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:10的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。6.根据权利要求5的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列且该轻链可变区包含seq id no:22的氨基酸序列。7.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:11的氨基酸序列；
(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。8.根据权利要求7的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列且该轻链可变区包含seq id no:23的氨基酸序列。9.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:12的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。10.根据权利要求9的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列且该轻链可变区包含seq id no:24的氨基酸序列。11.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:13的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。12.根据权利要求11的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列且该轻链可变区包含seq id no:25的氨基酸序列。13.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：(i)cdr-l1，其包含seq id no:14的氨基酸序列；(ii)cdr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；及(iii)cdr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。14.根据权利要求13的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列且该轻链可变区包含seq id no:26的氨基酸序列。15.根据权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中该重链可变区包含：(i)cdr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；(ii)cdr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；及(iii)cdr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；且其中该轻链可变区包含：
no:31(s239c)的氨基酸序列且该轻链恒定区具有包含seq id no:32的氨基酸序列。29.一种抗体-药物缀合物，其包含与细胞毒性剂或细胞静止剂缀合的根据权利要求1至28中任一项的抗体或抗原结合片段。30.根据权利要求29的抗体-药物缀合物，其中该抗体或抗原结合片段经由接头与该细胞毒性剂或细胞静止剂缀合。31.根据权利要求30的抗体-药物缀合物，其中该接头为mdpr-peg(12)-gluc接头。32.根据权利要求29至31中任一项的抗体-药物缀合物，其中该细胞毒性剂或细胞静止剂为单甲基澳瑞他汀。33.根据权利要求32的抗体-药物缀合物，其中该单甲基澳瑞他汀为单甲基澳瑞他汀e(mmae)。34.根据权利要求33的抗体-药物缀合物，其中该接头附接至单甲基澳瑞他汀e以形成具有下式结构的抗体-药物缀合物：其中ab为该抗体或抗原结合片段，n为12，r
pr
为氢，r
21
为ch3且p表示1至16的数字。35.根据权利要求34的抗体-药物缀合物，其中在该抗体-药物缀合物族群中p的平均值为约8。36.根据权利要求1至22中任一项的抗体-药物缀合物，其中该抗体-药物缀合物由下式结构代表：或其药学上可接受的盐，其中：ab为该抗原结合蛋白或其片段且p表示1至12的数字；下标nn为1至5的数字；下标a'为0且a'为不存在；p1、p2及p3各为氨基酸，其中：该氨基酸p1、p2或p3的第一者带负电；
该氨基酸p1、p2或p3的第二者具有疏水性不大于亮氨酸的脂肪族侧链；且该氨基酸p1、p2或p3的第三者具有低于亮氨酸的疏水性，其中该氨基酸p1、p2或p3的第一者对应p1、p2或p3中任一者，该氨基酸p1、p2或p3的第二者对应剩余二个氨基酸p1、p2或p3中一者，且该氨基酸p1、p2或p3的第三者对应剩余最后一个氨基酸p1、p2或p3，条件是-p3-p2-p1-不是-glu-val-cit-或-asp-val-cit-。37.根据权利要求36的抗体-药物缀合物，其中下标nn为2。38.根据权利要求36或37的抗体-药物缀合物，其中：该三肽的该p3氨基酸呈d-氨基酸构型；该p2及p1氨基酸中一者具有疏水性低于亮氨酸的脂肪族侧链；且该p2及p1氨基酸中另一者带负电。39.根据权利要求36至38中任一项的抗体-药物缀合物，其中该p3氨基酸为d-leu或d-ala。40.根据权利要求36至39中任一项的抗体-药物缀合物，其中该p3氨基酸为d-leu或d-ala，该p2氨基酸为ala、glu或asp且该p1氨基酸为ala、glu或asp。41.根据权利要求36至40中任一项的抗体-药物缀合物，其中-p3-p2-p1-为-d-leu-ala-asp-、-d-leu-ala-glu-、-d-ala-ala-asp-或-d-ala-ala-glu-。42.根据权利要求36至41中任一项的抗体-药物缀合物，其中-p3-p2-p1-为-d-leu-ala-glu-。43.根据权利要求36至42中任一项的抗体-药物缀合物，其中该抗体-药物缀合物由下式结构代表：或其药学上可接受的盐，其中ab为该抗原结合蛋白或其片段且p表示1至12的数字。44.一种核酸，其编码根据权利要求1至28中任一项所定义的重链可变区和/或轻链可变区。45.一种载体，其包含根据权利要求44的核酸。46.根据权利要求45的载体，其中该载体为表达载体。47.一种宿主细胞，其包含根据权利要求44的核酸。48.根据权利要求47的宿主细胞，其中该宿主细胞为中国仓鼠卵巢(cho)细胞。49.一种生产抗cd228抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括在适于生产该抗cd228抗体或其抗原结合片段的条件下培养根据权利要求47或48的宿主细胞。50.根据权利要求49的方法，该方法进一步包括分离由该宿主细胞生产的该抗cd228抗体或其抗原结合片段。51.一种生产抗cd228抗体-药物缀合物的方法，该方法包括在适于生产抗cd228抗体的
条件下培养根据权利要求47或48的宿主细胞；分离该宿主细胞所生产的该抗cd228抗体；及将该抗cd228抗体与细胞毒性剂或细胞静止剂缀合。52.根据权利要求51的方法，其中该抗cd228抗体经由接头与该细胞毒性剂或细胞静止剂缀合。53.根据权利要求52的方法，其中该接头为mdpr-peg(12)-gluc接头。54.根据权利要求51至53中任一项的方法，其中该细胞毒性剂或细胞静止剂为单甲基澳瑞他汀。55.根据权利要求54的方法，其中该单甲基澳瑞他汀为单甲基澳瑞他汀e(mmae)。56.根据权利要求55的方法，其中该接头附接至单甲基澳瑞他汀e以形成具有下式结构的抗体-药物缀合物：其中ab为该抗体或抗原结合片段，n为12，r
pr
为氢，r
21
为ch3且p表示1至16的数字。57.根据权利要求56的方法，其中在该抗体-药物缀合物族群中p的平均值为约8。58.根据权利要求55的方法，其中该接头附接至单甲基澳瑞他汀e以形成由下式结构代表的抗体-药物缀合物：或其药学上可接受的盐，其中：ab为该抗原结合蛋白或其片段且p表示1至12的数字；下标nn为1至5的数字；下标a'为0且a'为不存在；p1、p2及p3各为氨基酸，其中：该氨基酸p1、p2或p3的第一者为带负电；该氨基酸p1、p2或p3的第二者具有疏水性不大于亮氨酸的脂肪族侧链；且该氨基酸p1、p2或p3的第三者具有低于亮氨酸的疏水性，其中该氨基酸p1、p2或p3的第一者对应p1、p2或p3中任一者，该氨基酸p1、p2或p3的第
二者对应剩余二个氨基酸p1、p2或p3中一者，且该氨基酸p1、p2或p3的第三者对应剩余最后一个氨基酸p1、p2或p3，条件是-p3-p2-p1-不是-glu-val-cit-或-asp-val-cit-。59.根据权利要求58的方法，其中下标nn为2。60.根据权利要求58或59的方法，其中：该三肽的该p3氨基酸为呈d-氨基酸构型；该p2及p1氨基酸中一者具有疏水性低于亮氨酸的脂肪族侧链；且该p2及p1氨基酸中另一者为带负电。61.根据权利要求58至60中任一项的方法，其中该p3氨基酸为d-leu或d-ala。62.根据权利要求58至61中任一项的方法，其中该p3氨基酸为d-leu或d-ala，该p2氨基酸为ala、glu或asp且该p1氨基酸为ala、glu或asp。63.根据权利要求58至62中任一项的方法，其中-p3-p2-p1-为-d-leu-ala-asp-、-d-leu-ala-glu-、-d-ala-ala-asp-或-d-ala-ala-glu-。64.根据权利要求58至63中任一项的方法，其中-p3-p2-p1-为-d-leu-ala-glu-。65.根据权利要求58至64中任一项的方法，其中该抗体-药物缀合物为由下式结构代表：或其药学上可接受的盐，其中ab为该抗原结合蛋白或其片段且p表示1至12的数字。66.一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用根据权利要求1至28中任一项的抗体或抗原结合片段或根据权利要求29至43中任一项的抗体-药物缀合物。67.根据权利要求66的方法，其中该受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且对该治疗无反应，其中该一种或多种治疗剂不是该抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。68.根据权利要求66的方法，其中该受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且在该治疗之后复发，其中该一种或多种治疗剂不是该抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。69.根据权利要求66的方法，其中该受试者先前已经接受一种或多种治疗剂的治疗且在治疗期间经历疾病进展，其中该一种或多种治疗剂不是该抗体、抗原结合片段或抗体-药物缀合物。70.根据权利要求66至69中任一项的方法，其中该癌症为晚期癌症。71.根据权利要求70的方法，其中该晚期癌症为第3期或第4期癌症。72.根据权利要求70或71的方法，其中该晚期癌症为转移性癌症。73.根据权利要求66至72中任一项的方法，其中该癌症为反复性癌症。74.根据权利要求66至73中任一项的方法，其中该癌症无法切除。
75.根据权利要求66至74中任一项的方法，其中该受试者曾接受该癌症标准照护疗法的先前治疗且该先前治疗失败。76.根据权利要求66至75中任一项的方法，其中该癌症选自由黑色素瘤、胰腺癌、间皮瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、胆管癌、食道癌及头颈癌所组成的组。77.根据权利要求76的方法，其中该癌症为黑色素瘤。78.根据权利要求77的方法，其中该黑色素瘤为皮肤黑色素瘤。79.根据权利要求78的方法，其中该皮肤黑色素瘤选自由表浅扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、肢端小痣性黑色素瘤、小痣性恶性黑色素瘤及结缔组织增生性黑色素瘤所组成的组。80.根据权利要求79的方法，其中该肢端小痣性黑色素瘤为甲下黑色素瘤。81.根据权利要求78至80中任一项的方法，其中该受试者曾接受pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂的先前疗法。82.根据权利要求81的方法，其中该受试者曾接受pd-1抑制剂的先前疗法。83.根据权利要求77的方法，其中该黑色素瘤为皮肤下黑色素瘤。84.根据权利要求83的方法，其中该皮肤下黑色素瘤为眼黑色素瘤或黏膜黑色素瘤。85.根据权利要求77的方法，其中该黑色素瘤为非皮肤黑色素瘤。86.根据权利要求76的方法，其中该癌症为间皮瘤。87.根据权利要求86的方法，其中该间皮瘤选自由胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、心包膜间皮瘤及睾丸间皮瘤所组成的组。88.根据权利要求87的方法，其中该间皮瘤为胸膜间皮瘤。89.根据权利要求88的方法，其中该受试者已经接受基于铂的疗法的先前疗法。90.根据权利要求89的方法，其中该基于铂的疗法为顺铂。91.根据权利要求88至90中任一项的方法，其中该受试者曾接受培美曲塞(pemetrexed)的先前疗法。92.根据权利要求76的方法，其中该肺癌为非小细胞肺癌。93.根据权利要求92的方法，其中该非小细胞肺癌具有突变形式的表皮生长因子受体(egfr)。94.根据权利要求92的方法，其中该非小细胞肺癌具有野生型egfr。95.根据权利要求94的方法，其中该受试者已经接受基于铂的疗法的先前疗法。96.根据权利要求92或94的方法，其中该受试者曾接受pd-1抑制剂或pd-l1抑制剂的先前疗法。97.根据权利要求96的方法，其中该受试者曾接受pd-1抑制剂的先前疗法。98.根据权利要求76的方法，其中该乳腺癌选自由her2阳性、her2阴性、雌激素受体(er)阳性、er阴性、助孕素受体(pr)阳性、pr阴性及三阴性乳腺癌所组成的组。99.根据权利要求98的方法，其中该乳腺癌为her2阴性乳腺癌。100.根据权利要求99的方法，其中该受试者曾接受her2阴性乳腺癌的一种或多种先前线上疗法。101.根据权利要求100的方法，其中该一种或多种先前线上疗法包含紫杉烷(taxane)的治疗。
102.根据权利要求99或100的方法，其中该受试者为荷尔蒙受体阳性。103.根据权利要求102的方法，其中该受试者曾接受cdk4/6抑制剂的先前疗法。104.根据权利要求102或103的方法，其中该受试者曾接受荷尔蒙导向疗法的先前疗法。105.根据权利要求76的方法，其中该结直肠癌选自由结直肠腺癌、胃肠道基质瘤、原发性结直肠淋巴瘤、胃肠道类癌肿瘤及平滑肌肉瘤所组成的组。106.根据权利要求105的方法，其中该受试者曾接受结直肠癌的二种或超过二种先前线上疗法。107.根据权利要求76的方法，其中该胰腺癌为外分泌癌或神经内分泌癌。108.根据权利要求107的方法，其中该外分泌癌选自由胰腺癌、腺泡细胞癌、囊腺癌、胰母细胞瘤、腺鳞癌、戒环细胞癌、肝样癌、胶体癌、未分化癌及胰黏液性囊状肿瘤所组成的组。109.根据权利要求108的方法，其中该胰腺癌为胰管腺癌。110.根据权利要求108或109的方法，其中该受试者曾接受胰腺癌的一种或多种先前线上疗法。111.根据权利要求66至110中任一项的方法，其中该抗体或抗原结合片段或抗体-药物缀合物在药物组合物中，该药物组合物包含该抗体或抗原结合片段或抗体-药物缀合物及药学上可接受的载剂。112.根据权利要求66至111中任一项的方法，其中该受试者为人。113.一种试剂盒，其包含：(a)根据权利要求1至28中任一项的抗体或抗原结合片段或根据权利要求29至43中任一项的抗体-药物缀合物；及(b)按照根据权利要求66至112中任一项的方法使用该抗体或抗原结合片段或抗体-药物缀合物的指示说明。114.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至28中任一项的抗体或抗原结合片段或根据权利要求29至43中任一项的抗体-药物缀合物及一种或多种选自由生理上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂及助剂所组成的组的剂。115.一种与cd228结合的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物缀合物，其用于根据权利要求66至112中任一项的方法。116.与cd228结合的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物缀合物在制备用于在根据权利要求66至112中任一项的方法中使用的药物中的用途。

技术总结
本发明提供新颖的抗CD228抗体和抗体-药物缀合物及使用该抗CD228抗体和抗体-药物缀合物以治疗癌症的方法。合物以治疗癌症的方法。合物以治疗癌症的方法。


技术研发人员：S
受保护的技术使用者：思进股份有限公司
技术研发日：2021.08.03
技术公布日：2023/8/9