一种中药组合物在制备治疗慢性阻塞性肺疾病药物中的应用的制作方法

1.本发明属于中药技术领域，涉及一种中药组合物的新用途，具体涉及一种中药组合物在制备治疗慢性阻塞性肺疾病，上呼吸道感染，自身免疫性肝炎，溃疡性结肠炎，慢性肾炎，类风湿关节炎，干燥综合征，血管炎或过敏性紫癜药物中的应用。


背景技术：

2.慢性阻塞性肺疾病简称慢阻肺(copd)，是一种破坏性的肺部疾病，是以不完全可逆的气流受限为特征的疾病,气流受限通常呈进行性发展并与肺对有害颗粒或气体的异常炎症反应有关。copd是一种可以预防和治疗的慢性气道炎症性疾病，copd虽然是气道的疾病,但对全身的系统影响也不容忽视。主要症状表现为慢性咳嗽、咳痰、气短或呼吸困难、喘息和胸闷等。不完全可逆的气流受限是copd诊断的必备条件，吸入支气管舒张药后fev1/fvc《70％及fev1《80％预计值可确定为不完全可逆性气流受限，有少数患者并无咳嗽，咳痰症状，仅在肺功能检查时fev1/fvc《70％，而fev1≥80％预计值，在除外其他疾病后，亦可诊断为copd。肺气肿是指终末细支气管远端的气道弹性减退，过度膨胀、充气和肺容积增大或同时伴有气道壁破坏的病理状态。按其发病原因肺气肿有如下几种类型：老年性肺气肿、代偿性肺气肿、间质性肺气肿、灶性肺气肿、旁间隔性肺气肿、阻塞性肺气肿。中医病名为肺胀，外感风寒、风热是诱发本病急性发作的重要因素，外感风热、风燥之邪可引起肺失宣肃，痰热蕴肺而病。其病机为气机郁滞，痰阻气道，痰瘀互结，为本虚标实之证，急性发作时多为痰热蕴肺之证。
3.哮喘，又称支气管哮喘(bronchial asthma)，是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、t淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症为特征的异质性疾病，这种慢性炎症与气道高反应性相关，通常出现广泛而多变的可逆性呼气气流受限，导致反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，强度随时间变化。多在夜间和(或)清晨发作、加剧，多数患者可自行缓解或经治疗缓解。支气管哮喘如诊治不及时，随病程的延长可产生气道不可逆性缩窄和气道重塑。发作性伴有哮鸣音的呼气性呼吸困难或发作性咳嗽、胸闷。严重者被迫采取坐位或呈端坐呼吸，干咳或咳大量白色泡沫痰，甚至出现发绀等，有时咳嗽是唯一的症状(咳嗽变异型哮喘)。有的青少年患者则以运动时出现胸闷、咳嗽及呼吸困难为唯一的临床表现(运动性哮喘)。哮喘症状可在数分钟内发作，经数小时至数天，用支气管舒张剂缓解或自行缓解。某些患者在缓解数小时后可再次发作。夜间及凌晨发作和加重常是哮喘的特征之一。中医治疗中医认为肺为气之主，肾为气之根，当哮喘病发作肺虚不能主气，肾虚不能纳气则气逆于上而发于喘急，脾为生化之源，脾虚生痰，痰阻气道，则胸闷气短，因此哮喘病是肾脾虚，湿盛。
4.上呼吸道感染属于中医学中“感冒”、“咳嗽”范畴，临床以鼻塞、流涕、喷嚏、咳嗽、头痛、恶寒、发热、全身不适、脉浮为其特征。从临床观察中发现，上呼吸道感染病因多以风热为主。风热为阳邪，易伤人体阴津、阴液，性善疏泄，中人后多有汗出的症状，腠理玄府的打开一方面有排除邪气的作用，另一方面也是外邪进入人体的通道，尤其在不正当服用药
物或不正当护理后，人体正气损伤，易致疾病反复发作。上呼吸道感染以风热型多见，相当于温病的卫分证。对于卫分证的病因病机，叶天士认为“温邪上受，首先犯肺”，而肺主气属卫，外合皮毛，当温邪犯肺后，造成肺气郁闭，卫阳不得宣发敷布，体表失于温煦，故出现“恶风寒”症状。此证之恶寒并不等同表证恶寒。而杨栗山则明确提出“在温病，邪热内攻，凡见表证，皆里热郁结，浮越于外，虽有表征，实无表邪。”也即卫分证出现表证并非病位在表，而是里热郁结外浮所致。因叶天士曾谓“肺主气，其合皮毛，故云在表”，因此，习惯上仍将卫分证称为表证。《内经》有：“其在皮者，汗而发之”之说，汗法为表证的治疗原则，而温病卫分证病位在肺而非在表，故有温病忌汗之说。叶天士的“在卫汗之可也”意为用辛凉清解的药物治疗，使腠理通达，营卫调和，自然汗出而病解，非发汗之法，其在《幼科要略》中亦说“夫风温春温忌汗”，吴鞠通更是强调
“……
徒发其表无益也。”至此，卫分证的形成机理可以概括为“温邪袭肺，肺气郁闭，郁热内盛”。针对卫分证病机，治疗应以清肺泄热，透邪外达为原则。
5.支气管炎是由生物或非生物因素引起的支气管黏膜及其周围组织的急性或慢性特异性炎症，表现为咳嗽、咳痰不适等症状。急性支气管炎是支气管黏膜的急性炎症，中医学将其归为“咳嗽”，病机主要为肺失宣降、肺气上逆，在治疗上应清热化瘀、宣肺化痰；慢性支气管炎是由于感染或非感染因素引起的气管、支气管及其周围组织的慢性炎症。临床以反复发作的咳嗽、咳痰或伴喘息的慢性病程为特征，病理特征为支气管管壁杯状细胞增殖、气道大量黏液堵塞、巨噬细胞等炎性细胞浸润。目前在治疗上以抗菌、抗炎、抗病毒为主，常用到的西药有阿莫西林、头孢氨苄、美喘清等。中成药制剂已广泛用于不同类型的支气管炎疾病治疗。但是按照目前的临床情况来看，在治疗支气管炎的药物方面还是需要有更好的药物发挥作用，为患者解决疾病带来的身体上和经济上的问题。
6.咽炎(pharyngitis)为咽部的非特异性炎症，是各种微生物感染咽部而产生炎症的统称，可单独存在。急性咽炎是临床耳鼻喉科常见病和多发病之一，在中医学中被称为“急喉痹”。急性咽炎是由病毒、细菌或支原体感染导致的咽部黏膜、黏膜下组织及其淋巴组织的急性炎症，其起病急，发展迅速。炎症可以波及整个咽部，临床初期表现为咽部干燥、灼热、粗糙、微痛，咽痛症状逐渐加重，后出现吞咽疼痛；或者仅仅局限于鼻咽、口咽或者喉咽的一部分，出现咳嗽以及声音嘶哑等症状；还可能出现全身不适，头痛、食欲不振、口干、口渴、畏寒以及四肢酸痛等症状，并常伴发热。此外，部分急性咽炎呈现水肿改变或继发于喉血管神经性水肿；亦可单独发生，但较少见，且易向喉部发展，引起窒息。中医学认为急性咽炎为外邪疫毒侵袭人体而致，病因多与外感风热、肺胃热盛等有关，红肿热痛等热象是临床常见症状，以疏风清热、解毒利咽为主。
7.自身免疫性肝炎(autoimmune hepatis，aih)的临床表现复杂多样、缺乏特异性，多见于女性(70％)，各年龄段、各人群均可发病。2型aih常见于儿童，约20％成人患者60岁后发病，发病率为0.1
‰
～0.2
‰
，常合并其他自身免疫性疾病。少数可能发生暴发性肝炎和肝功能衰竭，部分患者尤其是老年人可能无症状。急性aih的临床表现为黄疸、关节疼痛、食欲不振和乏力，肝组织活检可能是急性肝炎的表现；部分临床表现为急性肝炎的症状，但肝活检则为纤维化或肝硬化等慢性肝病的表现。aih也可能隐匿起病，仅进展到失代偿期肝硬化后才有临床表现，常见于老年人。越来越多的aih是因体检或其他疾病就诊时发现肝脏生化指标异常而诊断的。体格检查可能正常，也可能出现肝肿大、脾肿大、黄疸等慢性肝病表
现。aih的临床特点包括血清氨基转移酶水平升高、高免疫球蛋白g血症、血清自身抗体阳性，肝组织学上存在中重度界面性肝炎等。aih根据血清自身抗体检测分为3型：
①
1型，以抗平滑肌抗体(sma)和(或)抗核抗体(ana)阳性为特征，最常见；
②
2型，以抗肝肾微粒体抗体(lkm-1)阳性为特征，该型成人罕见；
③
3型，特征为抗可溶性肝抗原抗体/抗肝胰抗体(sla/lp)阳性。aih的诊断综合了临床表现、生化指标、血清学指标、组织学特征并排除其他病因。
8.溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)是一种常见的消化系统疾病，以腹痛腹泻、便下黏液和脓血，并伴有里急后重感为主要临床症状，病变范围主要累及结肠、直肠。现代医学认为遗传、环境、心理等多种因素作用下，导致肠黏膜屏障受损，神经内分泌功能失调和免疫失衡，引起肠黏膜局部溃疡进而导致疾病的发生。病情轻重不一，多呈反复发作过程。本病可发生于任何年龄，多见于20～40岁，亦见于儿童或老年，男女发病率无明显差别。西医临床上多以氨基水杨酸类药物或激素类药物进行治疗，常发生各种不良反应。中医认为本病的发生与外感风寒、饮食内伤、湿热蕴结以及脾胃失运等有关。其中医分型主要为大肠湿热、热毒炽盛、脾虚湿盛、寒热错杂、肝郁脾虚、脾肾阳虚及阴血亏虚等，其病位主要在脾胃、大肠，久病及肾。中医药治疗uc主要是在辨证论治的基础上，通过调节免疫、抗氧化、清除氧自由基、调节胃肠激素和肠道茵群，以及调节肠道动力紊乱等机制治疗uc，具有疗效确切、多靶点调控、毒副作用小等优势。
9.慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis，cgn)是一种肾小球疾病，又称慢性肾炎，属于自身免疫性疾病。该病发展缓慢，发病机制复杂，起病方式各异，病情迁延较难治愈。其临床上可表现为蛋白尿、血尿、高血压、水肿等症状，同时伴有不同程度肾功能受损，如严重将会导致肾小球硬化，继而发展成慢性肾功能衰竭。目前西药治疗较少，且治疗多用糖皮质激素和免疫抑制剂，虽有较好的临床疗效，但长期服用药物副作用较大。例如，使用糖皮质激素容易引起皮肤、呼吸道和泌尿系统感染等，还可能会出现皮肤以及软组织的不良反应，如满月脸、水牛背。有时还会出现眼睛的不良反应，比如白内障、青光眼、突眼等。对于心血管系统会产生高胆固醇以及高甘油三酯血症等不良影响，从而增加动脉粥样硬化的风险以及会造成老年患者骨质疏松。使用免疫抑制剂对免疫功能有抑制作用，会造成抵抗外来病原菌的能力会有所下降，更容易发生感染性疾病。同时，免疫抑制剂对血液系统也有一定的影响，可能会出现白细胞、血红蛋白、血小板下降等骨髓抑制的临床表现，还可能对肝功能或者是肾功能有损伤。传统医学中基础理论认为慢性肾炎的发生主要决定于内因与外因两方面的因素，中医认为慢性肾小球肾炎属中医“血尿”、“水肿”等范畴，发生主要决定于内因与外因两方面的因素，外因为风寒湿邪侵袭，伤及脾胃；内因为脾胃虚损，阴阳气血失调致生湿阻、气滞和血瘀病变。中医对慢性肾炎的治疗是采用辩证治疗的原则，从整体入手进行把握。在整体与局部相结合的基础上，全面掌握疾病发生发展的规律，从它的根源出发慢慢调养，副作用比较小可以长期服用。中医在治疗慢性肾炎中还具有很强的抗炎和消炎作用，能辅助西医治疗减少免疫抑制剂的副作用。由于，中医药在缓解患者临床症状、减少西药毒副作用及用量、提高患者生活质量等方面，具有较明显的特色和优势，获得较好的疗效。
10.类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，ra)是一种病因未明以侵蚀性、对称性、多关节炎为主要临床表现的慢性、全身性自身免疫性疾病，可累及全身其他各器官组织，包括皮肤、肌肉、血管、神经、胸膜、心肌和淋巴结等。基本病理改变为滑膜炎、血管翳形成、并
逐渐出现关节软骨和骨破坏，最终可能导致关节畸形和功能丧失。临床多采用消炎镇痛的药物，非甾体类消炎药、慢作用抗风湿药物和糖皮质激素等有可能会导致胃炎、胃溃疡、肝损伤、皮疹及骨质疏松等副作用，不能够长期服用。目前科学界对由免疫细胞或非免疫细胞经刺激而合成或分泌的一类具有广泛生物学活性的细胞因子如il-1、il6、il12、il18、tnf-α在引发该疾病中的关键作用，已经有了深入而广泛的研究。根据众多研究报道，il-1β、il6和tnf-α等是类风湿关节炎发病过程中起主要作用的炎性介质，能刺激软骨细胞、滑膜细胞分泌胶原酶等物质，破坏软骨细胞周围环境促进软骨细胞的凋亡，它们与ra的发病机制改变、治疗及预后密切相关。因此，细胞因子拮抗剂，如单克隆抗体、重组可溶性受体和细胞因子受体拮抗剂等作为药物能够延缓患者关节或软骨的破坏进展。但是，经临床研究发现细胞因子拮抗剂会引起某些不良反应，有报道tnf-α拮抗剂理论上增加肿瘤发生的危险，使用il-1受体拮抗剂anakinra的患者会出现轻微、短暂的注射部位反应等。
11.干燥综合征(sjogren’s syndrome，ss)属于自身免疫性疾病的一种，发病部位多见于泪腺、唾液腺，表现为口舌发干、干燥性结膜炎，严重时导致内脏受损。该病的发病率极高，发病机制也有待探索，其治疗也无根治方法，目前以对症治疗为主，多采用糖皮质激素、羟基氯喹、免疫抑制剂、生物制剂等药物，但是治疗效果并不尽如人意，甚至部分药物会产生较明显的副作用和异常反应，如造成肝肾损伤、白细胞减低、骨质疏松、肥胖和血糖及血压升高等，不能够长期使用。目前，发掘疗效好且副作用小的药物是本领域的研究重点。中医文献无干燥综合征一词，根据其发病和临床表现，将其归属于“燥证”、“燥痹”、“燥毒”等范畴，中医认为本病多因燥邪外袭，风寒热邪化燥伤阴，或素体阴虚，禀赋不足，或汗、吐、下后津液伤亡等，使阴津、气血不足，血瘀络痹所致。病理机制多与肝、脾、肾三脏阴阳失调，阴虚阳盛关系最为密切。中医擅长从“整体观”把握医治方式，在具有“对因治疗”作用的同时，更具有调整、改善人体脏腑、气血功能活动和整体机能，起到了多靶点的治疗，从而改善干燥综合征的症状，延缓病变的进展，并且无副作用。
12.血管炎是血管性疾病的一种，指原发于血管壁及血管周围有炎症细胞浸润有血管损伤，包括纤维素沉积、胶原纤维变性、内皮细胞及肌细胞坏死的炎症，引起的一组疾病，又称脉管炎。共同的病理生理基础是各种原因所致的大小不等的动静脉和微血管的管壁及其周围发生变性、坏死等炎症性病变，进而导致血管内皮坏死、血栓形成、管腔闭塞等血流动力学一级受累器官的功能障碍。发病机理复杂，涉及炎症细胞、内皮细胞等多种成分。某些血管炎轻并有自限性，主要累及一个脏器。另一些累及中等大小血管的血管炎可累及不同脏器造成功能衰竭，严重影响病人生命质量与劳动能力，甚而致残或因心脑肾脏器功能衰竭而死亡，如川崎病(kawasaki disease，kd)。川崎病是一种病因未明的儿童系统性血管炎，临床表现为持续发热、皮疹、颈部淋巴结肿大、眼球结膜充血、肢端和口腔粘膜改变等。如不及时治疗，四分之一的患儿将并发冠状动脉病变，这四分之一的患儿可以称为高危川崎病冠状动脉患儿。kd引发的冠状动脉炎可能导致血管重塑和重建，导致内皮增生和血管狭窄，血管内壁明显增厚，并且kd引发的持续性冠状病变有很高的心脏并发症概率，包括血栓形成或狭窄导致的心肌梗死。因此，川崎病的治疗对于预防其引发的冠状动脉病变具有重要意义。视网膜血管炎(retinal vasculitis，rv)是另一种常见的血管炎是累及视网膜血管的眼内炎症性疾病，好发于20～40岁的青壮年，病因复杂，多与全身疾病相关。典型表现为眼底灰白色血管鞘、渗出、出血、视网膜水肿等改变，临床上rv可分为动脉炎、静脉炎、
毛细血管炎3种类型。目前rv的发病机制尚不明确，多数学者认为与模式识别受体介导的相关，与免疫和炎症反应有关的基因产物有关。如果患者出现明显的视网膜缺血、毛细血管无灌注则需激光治疗。如出现玻璃体出血或视网膜脱离，则行玻璃体切割手术。目前西医临床主要措施是使用皮质激素和各种新型免疫抑制剂，但往往疗程较长，且毒副作用较大，不利于患者的治疗。从中医角度来看，血管炎属于瘀血流注，治疗原则是清热化瘀、活血通络温阳化瘀、清热解毒、去腐生肌，改善肢体的血液循环，使肢体发热、疼痛减轻、肿胀消退，皮肤的颜色的改变，甚至恢复正常。并且还可以清洁创面，促进局部的消炎和伤口的愈合。中医通过调理阴阳，调理气血，祛除风邪、热邪、湿邪等方法内外兼治。
13.过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura，hsp)是一种自发性免疫系统疾病，由iga免疫复合物沉积介导的小血管炎症为主要病变，通常以非血小板减少性皮肤紫癜为特征，发病率约为6.21/10万(0-15岁)，在儿童血管炎性疾病中最为常见。尽管其病因尚未完全清楚，但目前所知暴露于很多抗原性物质及药物极有可能会引发免疫学的改变。该病的临床症状主要表现为皮肤紫癜、关节痛、腹痛和胃肠道出血等，并具有病程长、易反复等特点。中医古代文献并没有“过敏性紫癜”这一病名的记载。但根据临床症状，表现为皮肤紫癜分批出现，此起彼伏，变化莫测，关节肿痛发无定处，时有皮肤瘙痒，符合“风者，善行而数变”及“无风不作痒”的风性特点。中医称之为紫癜，紫斑属“血证”“葡萄疫”“发斑”等疾病范畴，由热毒充血，迫血妄行，灼伤络脉，血液渗出，气不摄血引起，或是疾病久未愈合，气虚无法摄血引起。有学者用伏邪理论阐释过敏性紫癜的病因病机，认为由于先天的禀赋不足加之后天的外感六淫疫疠等邪气引致发病。另有学者认为素体禀赋虚弱，外感风湿热毒可导致发病。素体热盛，迫血妄行，或体弱久病，气血两虚，血失固摄，加之外感风热，则易发病。还有学者认为小儿脏腑娇嫩，接触燥热动风之品，则易与内热相搏，灼伤络脉，迫血妄行，溢于肌表则为紫癜。还有学者认为过敏性紫癜的病机本质为湿热交织，耗血动血，病因归为风、热、湿(毒)、瘀、虚五方面。目前，西医关于过敏性紫癜的治疗方法与病情的轻重有关，如果是单纯的皮肤型，使用抗组胺药或复方甘草酸苷，即非激素类的药物进行治疗。如果过敏性紫癜影响到肾脏，尿里面有蛋白，需要适当的运用激素。但是使用激素会造成骨质疏松，糖脂肪代谢紊乱，血液系统紊乱等，而组胺类药物会引起嗜睡和口干，因此，不能长期使用。中医药在治疗过敏性紫癜采用内治与外治法结合，同时加强饮食、起居等生活护理，防治并发症有着显著的疗效和优势。


技术实现要素：

14.有鉴于此，本发明提供了一种中药组合物在制备用于慢性阻塞性肺疾病，上呼吸道感染，自身免疫性肝炎，溃疡性结肠炎，慢性肾炎，类风湿性关节炎，干燥综合征，血管炎药物中的应用，以重量计，该中药组合物包括：厚朴1～100份、焦槟榔1～100份、煨草果1～100份、麻黄1～100份、苦杏仁1～100份、羌活1～100份、生姜1～100份、广藿香1～100份、佩兰1～100份、苍术1～100份、茯苓1～160份、白术1～120份、石膏1～100份、焦山楂1～100份、焦六神曲1～100份、焦麦芽1～100份、地龙1～100份、徐长卿1～100份、绵马贯众1～100份、葶苈子1～100份。所述用于，可以是包括治疗或预防在内的一切有益于改善患者相应症状的方式。所述的组合物可以由原料直接研磨成粉，也可以是经过常规手段制得的提取物或其它形态等。使用的原料也可以以直接研磨成粉、提取物、或者其它加工形态的方式使
用。
15.进一步地，该中药组合物包括：厚朴10～80份、焦槟榔10～80份、煨草果10～80份、麻黄10～60份、苦杏仁10～60份、羌活10～80份、生姜10～60份、广藿香10～80份、佩兰10～60份、苍术10～80份、茯苓10～160份、白术10～120份、石膏10～80份、焦山楂10～50份、焦六神曲10～80份、焦麦芽10～60份、地龙10～80份、徐长卿10～80份、绵马贯众10～60份、葶苈子10～80份。
16.优选地，所述中药组合物可以是：厚朴30～50份、焦槟榔20～30份、煨草果30～50份、麻黄20～30份、苦杏仁20～30份、羌活30～50份、生姜30～50份、广藿香30～50份、佩兰20～30份、苍术30～50份、茯苓120～150份、白术80～100份、石膏30～50份、焦山楂20～30份、焦六神曲30～50份、焦麦芽20～30份、地龙30～50份、徐长卿30～50份、绵马贯众20～30份、葶苈子30～50份。
17.优选地，该中药组合物包括：厚朴50份、焦槟榔30份、煨草果30份、麻黄20份、苦杏仁30份、羌活50份、生姜50份、广藿香50份、佩兰30份、苍术50份、茯苓150份、白术100份、石膏50份、焦山楂30份、焦六神曲30份、焦麦芽30份、地龙50份、徐长卿50份、绵马贯众30份、葶苈子50份。
18.具体地，前述药物包括口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药剂型。所述上呼吸道感染可以是病毒性或细菌性上呼吸道感染；更具体地，可以是甲型流感病毒或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌所致的上呼吸道感染。所述自身免疫性肝炎选自con a介导的自身免疫性肝炎或免疫剂所致的自身免疫性肝损伤。上述免疫剂所致的自身免疫性肝损伤包括但不限于肝s100抗原诱导的自身免疫性肝炎。
19.在本发明的一些具体实施方案中，用于溃疡性结肠炎包括如下任意项：
20.(i)、改善腹泻；和/或
21.(ii)、改善腹痛；和/或
22.(iii)、改善黏液脓血便；和/或
23.(iv)、减轻结肠伤害；和/或
24.(
ⅴ
)、改善炎症。
25.在本发明的一些具体实施方案中，所述减轻结肠伤害包括如下任意项：
26.(i)、增加结肠长度；和/或
27.(ii)、改善结肠溃疡；和/或
28.(iii)、改善结肠黏膜损伤。
29.在本发明的一些具体实施方案中，所述改善炎症包括如下任意项：
30.(i)、改善炎细胞浸润；和/或
31.(ii)、减缓和/或抑制血清炎性因子。
32.在本发明的一些具体实施方案中，所述血清炎性因子包括但不限于il-6。
33.在本发明的一些具体实施方案中，所述血清炎性因子为il-6。
34.本发明药物的剂型按比例称取原料药后，在制备中加入药学可接受的辅料，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等，按照药学领域的常规生产方法制备，制成药剂学可接受的常规剂型，包括但不限于汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、注射剂。
35.本发明还提出了前述任一中药组合物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：
36.称取厚朴、焦槟榔、煨草果、麻黄、苦杏仁、羌活、生姜、广藿香、佩兰、苍术、茯苓、白术、石膏、焦山楂、焦六神曲、焦麦芽、地龙、徐长卿、绵马贯众、葶苈子，分别加水提取两次，第一次加6倍量水，提取1.5h，第二次加4倍量水，提取1.0h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，离心滤过，滤液干燥。
37.进一步地，前述药物的制备方法步骤如下：
38.取厚朴50份、焦槟榔30份、煨草果30份、麻黄20份、苦杏仁30份、羌活50份、生姜50份、广藿香50份、佩兰30份、苍术50份、茯苓150份、白术100份、石膏50份、焦山楂30份、焦六神曲30份、焦麦芽30份、地龙50份、徐长卿50份、绵马贯众30份、葶苈子50份，加入水回流提取2次，第一次加入6倍水，提取1.5h，第二次加入4倍水，提取1.0h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，离心滤过，滤液真空干燥，喷雾干燥粉碎，得中间体组合物，加入三氯蔗糖和糊精，混匀，得颗粒剂。
39.本发明还提出了一种中药组合物在制备用于肺气肿或哮喘，提高免疫力、治疗或预防支气管炎或咽炎，或过敏性紫癜药物中的应用，以重量比计，所述中药组合物包括：厚朴1～100份、焦槟榔1～100份、煨草果1～100份、麻黄1～100份、苦杏仁1～100份、羌活1～100份、生姜1～100份、广藿香1～100份、佩兰1～100份、苍术1～100份、茯苓1～160份、白术1～120份、石膏1～100份、焦山楂1～100份、焦六神曲1～100份、焦麦芽1～100份、地龙1～100份、徐长卿1～100份、绵马贯众1～100份、葶苈子1～100份。其中，所述支气管炎可以是急性或慢性支气管炎，所述咽炎可以是急性咽炎。
40.进一步地，所述中药组合物包括：厚朴30～50份、焦槟榔20～30份、煨草果30～50份、麻黄20～30份、苦杏仁20～30份、羌活30～50份、生姜30～50份、广藿香30～50份、佩兰20～30份、苍术30～50份、茯苓120～150份、白术80～100份、石膏30～50份、焦山楂20～30份、焦六神曲30～50份、焦麦芽20～30份、地龙30～50份、徐长卿30～50份、绵马贯众20～30份、葶苈子30～50份。
41.本发明组合物能显著改善慢性阻塞性肺病大鼠肺功能，减轻肺部炎症及肺气肿；能升高血清α1-at含量，阻止肺泡壁进行性破坏，降低ha、pciii的含量，减轻肺间质纤维化，能显著降低弹性蛋白酶致大鼠肺气肿的血清mmp-9含量，升高timp-1含量，能显著改善哮喘小鼠模型肺泡灌洗液中炎性细胞因子和多种细胞分类计数水平；能显著降低ova致小鼠哮喘模型肺泡灌洗液中il-4、il-5、il-13水平，显著抑制细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、巨噬细胞总数和淋巴细胞总数上升，提示中药组合物可显著抑制气道重塑，减轻肺间质纤维化，抑制肺部炎症，减轻炎性细胞募集，延缓copd病程及哮喘病程，对慢性阻塞性肺病和哮喘均具有较好的治疗作用。
42.本发明组合物能显著调节上呼吸道感染小鼠肺指数，降低血清中炎症因子tnf-α水平，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌致急性上呼吸道感染模型小鼠也有一定的防治作用，从而对上呼吸道感染具有较好的治疗作用，能显著降低大鼠支气管灌洗液及血清中il-6、il-8含量，升高il-10含量，能明显降低mda含量，降低脂质过氧化反应，减轻氧自由基损伤，能显著改善乙型溶血性链球菌感染引起的大鼠咽部黏膜组织充血红肿等病变情况；能显著降低氨水致急性咽炎模型大鼠血清中il-1β、il-6、tnf-α的含量，提示中药组合物可促进咽部黏膜组织局部炎症减轻或消除，提示该中药组合物可显著改善炎症反应及咽炎治疗作
用。
43.本发明组合物能缓解临床症状，使igg恢复正常和组织学无明显活动性炎症，例如，alp(血清碱性磷酸酶)，ast(天冬氨酸转氨酶)，alt(丙氨酸转氨酶)，自身抗体如ana、asma、抗sla/lp、抗lkm-1和抗lc-1等恢复正常，血清免疫球蛋白igg和/或γ-球蛋白水平降低。肝组织学(界面性肝炎、淋巴-浆细胞浸润、肝细胞玫瑰花环及穿入现象等)缓解，对自身免疫性肝炎具有较好的治疗作用。
44.本发明组合物能有效改善dss引起的小鼠急、慢性溃疡性结肠炎症状，抑制疾病发展。
45.本发明组合物可明显降低慢性肾小球肾炎大鼠24小时尿蛋白、血清中尿素氮(bun)和肌酐(scr)含量，降低血清中炎症因子肿瘤坏死因子(tnf-α)、干扰素(ifn-γ)和增加白介素4(il-4)含量，升高大鼠外周血中cd3、cd4和cd4/cd8的水平和降低cd8表达水平。降低大鼠肾脏组织中tnf-α、白介素6(il-6)和白介素1β(il-1β)含量，这提示本技术的中药组合物可保护慢性肾小球肾炎模型大鼠肾脏组织，进而改善肾功能，减轻炎症反应，稳定外周血t淋巴细胞cd3、cd4和cd8亚群比例，对慢性肾炎具有较好的治疗作用。
46.本发明组合物能显著减轻类风湿关节炎大鼠的关节肿胀程度，显著降低血清中il1、il6、tnf-a等免疫调节因子和促炎症细胞因子的含量，提示该组合物可以减轻类风湿关节炎大鼠关节肿胀程度，抑制介导炎症和组织损伤的细胞因子的产生，调节类风湿关节炎大鼠的异常细胞免疫功能。本技术组合物还能显著改善滑膜炎性浸润、滑膜增生、血管翳形成、软骨和骨质侵蚀等组织病理改变，证明组合物可以延缓类风湿关节炎滑膜和软骨损伤的疾病进展。
47.本发明组合物能显著改善原发性干燥性综合征小鼠的唾液流率、饮水量，降低血清相关免疫学指标igg、igm水平，降低抗原诱导的干燥性综合征大鼠的全血黏度、血浆黏度和血清il-6、il-17、igg水平，缓解炎症反应，证明中药组合物可显著调节免疫，抑制炎症反应，延缓病程对干燥性综合征具有较好的治疗作用。
48.本发明组合物能显著降低炎症刺激引起的血管损伤，来缓解川崎病小鼠血管炎性损伤；可明显降低小鼠视网膜血管炎的炎性反应，可以通过降低小鼠视网膜血管区细胞间黏附分子-1(icam-1)的表达作用减少炎性细胞黏附，表明组合物对血管炎具有较好的治疗作用。
49.本发明组合物能显著降低卵白蛋白致大鼠过敏性紫癜的血清免疫球蛋白a(iga)、循环免疫复合物(cic)、白介素6(il-6)含量，同时升高干扰素(ifn-γ)含量。还能显著降低麦胶蛋白致小鼠过敏性紫癜的血清中循环免疫复合物(cic)、尿素氮(bun)、肌酐(cr)的含量，显示中药组合物可显著延缓过敏性紫癜病程，改善炎症反应和肾脏功能，对过敏性紫癜具有较好的治疗作用。
附图说明
50.图1是小鼠肺泡灌洗液中细胞因子水平；
51.图2是小鼠肺泡灌洗液中细胞分型计数；
52.图3是豚鼠喘息性抽搐潜伏期；
53.图4是组合物对类风湿关节炎大鼠踝关节形态学改变的he染色图(a:正常对照组；
b:模型组；c:低剂量组；d:中剂量组；e:高剂量组；f:阳性药组；箭头:滑膜增值、血管翳、炎性细胞浸润、骨质侵蚀；a-f组中第一张是踝关节，第二张是滑膜组织，第三张是软骨组织)。
54.图5是对自身免疫性肝炎小鼠肝脏组织病理形态的影响(he染色，
×
200)。
55.图6是对自身免疫性肝炎小鼠肝脏组织病理形态的影响(he染色，
×
200)。
56.图7是对急性溃疡性结肠炎小鼠结肠长度组织病理形态的影响(he染色，
×
200)。
57.图8是对慢性溃疡性结肠炎小鼠结肠长度组织病理形态的影响(he染色，
×
200)。
具体实施方式
58.如前所述，本发明旨在提供一种中药组合物在制备用于慢性阻塞性肺疾病，上呼吸道感染，自身免疫性肝炎，溃疡性结肠炎，慢性肾炎，类风湿关节炎，干燥综合征，血管炎或过敏性紫癜药物中的应用。以下将结合具体实验的内容进行具体描述。
59.以下实验如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。
60.除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用与本发明。
61.实施例1组合物颗粒剂的制备
62.本实施例中药组合物由以下原料药制成：厚朴50克、焦槟榔30克、煨草果30克、麻黄20克、苦杏仁30克、羌活50克、生姜50克、广藿香50克、佩兰30克、苍术50克、茯苓150克、白术100克、石膏50克、焦山楂30克、焦六神曲30克、焦麦芽30克、地龙50克、徐长卿50克、绵马贯众30克、葶苈子50克。
63.所述中药组合物按照以下方法制备：
64.取上述药材，加入水回流提取2次，第一次加入6倍水，提取1.5h，第二次加入4倍水，提取1.0h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，离心滤过，滤液真空干燥，喷雾干燥粉碎，得中间体组合物，加入三氯蔗糖和糊精，混匀，得颗粒剂。
65.药理试验
66.受试药物：实施例1的颗粒，江苏康缘药业股份有限公司提供
67.实验例1对烟熏和lps复合对copd的影响
68.实验材料
69.动物：sd大鼠，spf级，雄性，共60只，体重130～150g。
70.药物：氨茶碱片，天津力生制药股份有限公司产品，批号：2020009；规格：0.1g/片，100片/瓶。
71.试剂：lps：sigma，大肠杆菌o55：b5提炼，批号039m4004v；0.9％氯化钠溶液，石家庄四药有限公司，规格：500ml/瓶，批号：2012192103；甲醛，南京化学试剂股份有限公司，规格：500ml/瓶，批号：200517018e；水合氯醛，沪试国药集团化学试剂有限公司，规格：250g/瓶，批号：20201129；注射用青霉素钠，哈药集团制药总厂，批号：p2101719；
72.仪器：超低温冰箱(haier公司，型号：dw-86l728)；电子天平(sartorius科学仪器公司型号：bsa224s-cw)；dhg-9076a电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；powerlab8/35生物信号采集系统，澳大利亚adinstruments生产；centrfuge5840型冷冻离
心机，eppendorf；md公司flex-stion3酶标仪。
73.实验方法
74.sd大鼠，雄性，200g左右，于第1、第14天经气管注入200μg/200μl内毒素，第2～30天(第14天除外)将大鼠放入5％香烟(前门牌)烟雾中熏1h/d，2次/天复制copd模型。正常对照组：于第1、第14天同法气管滴注生理盐水不烟熏。本发明中药组合物颗粒不同剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)和氨茶碱片阳性药组，第1天起按10ml/kg剂量灌胃给药1次，连续30d，末次给药30min后，腹腔注射10％水合氯醛0.35g/kg麻醉大鼠检测取材。
75.检测指标：将大鼠用10％水合氯醛0.35g/kg麻醉，纵行切开颈部皮肤，暴露气管，在环状软骨下切一个倒“t”型切口，插入连接有三通开关的气管插管，一端连接动物呼吸机，一端连接信号采集系统测量呼吸指标。测定第零点3秒用力呼气容量(fev0.3)、用力肺活量(fvc)、fev0.3/fvc与呼气峰流速(pef)等参数值。
76.结果显示：模型组fvc、fev0.3、fev0.3/fvc、pef较正常组明显下降(p《0.01)，表明造模成功。中药组合物高剂量组与阳性药组fvc、fev0.3、fev0.3/fvc、pef较模型组均有明显改善(p《0.01，p《0.05)。中药组合物中剂量组fev0.3、fev0.3/fvc、pef较模型组相比有明显改善(p《0.01，p《0.05)。结果见表1。
77.造模后，大鼠肺组织il1β、il6和tnfα含量升高(p《0.01，p《0.05)，给予中药组合物能显著降低肺部组织炎症。与模型组相比，中药组合物高剂量组、中剂量组和阳性药组与模型组比较，可显著降低炎性因子水平(p《0.01，p《0.05)，低剂量组il-1β较模型组相比有明显降低(p《0.05)。结果见表2。
78.表1对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能的影响
[0079][0080]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0081]
表2对慢性阻塞性肺疾病大鼠细胞因子的影响
[0082][0083]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0084]
实验例2对弹性蛋白酶致肺气肿的影响
[0085]
动物：sd大鼠，spf级，雄性，共60只，体重140～160g。
[0086]
药物：醋酸地塞米松片，辰欣药业股份有限公司，批号：210915201。
[0087]
试剂：弹性蛋白酶，南京泽朗，批号20220218；0.9％氯化钠溶液，石家庄四药有限
公司，规格：500ml/瓶，批号：2012192103；甲醛，南京化学试剂股份有限公司，规格：500ml/瓶，批号：200517018e；水合氯醛，沪试国药集团化学试剂有限公司，规格：250g/瓶，批号：20201129；
[0088]
仪器：电子天平(sartorius科学仪器公司型号：bsa224s-cw)；centrfuge5840型冷冻离心机，eppendorf；超低温冰箱(haier公司，型号：dw-86l728)；md公司flex-stion3酶标仪
[0089]
实验方法：选取sd大鼠60只，雄性，体重180
ꢀ‑
220g，按体重随机分为6组，每组10只。6组分别为正常对照组，模型组，中药组合物低、中、高剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)，阳性对照组(地塞米松4mg/kg)。采用弹性蛋白酶气管内滴注法复制实验性大鼠肺气肿模型。用10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，暴露气管，用lml注射器取弹性蛋白酶溶液0.5ml(200u/kg)，针头刺入气管内缓慢滴入，立即将大鼠竖起左右摇动使其分布均匀，缝合切口，手术完毕，切口消毒。正常对照组按相同的方法进行手术，按0.4ml/kg气管内滴入生理盐水。术后第二天开始给药，每天一次，阳性药隔日给药一次，连续4周。
[0090]
检测指标：血清中α1-抗胰蛋白酶(α1-at)及透明质酸(ha)与层粘连蛋白(ln)、大鼠ⅲ型前胶原pcⅲ的测定。肺组织基质金属蛋白酶(mmp-9)和timp-1的测定。
[0091]
结果显示：弹性蛋白酶造模后，大鼠血清α1-at含量与正常组比较明显降低，大鼠血清ha及pcⅲ含量明显升高(p《0.01)，ln含量无显著差异。给予中药组合物后，低、中、高剂量组大鼠血清α1-at含量与模型组比较均显著升高(p《0.01)；中、高剂量组大鼠血清ha及pcⅲ含量与模型组比较均显著降低(p《0.01)。结果提示，中药组合物能够升高造模后大鼠血清α1-at含量，阻止肺泡壁进行性破坏，降低大鼠血清ha、pciii的含量，减轻肺间质纤维化。结果见表3。
[0092]
给予弹性蛋白酶造模后，大鼠肺组织mmp-9含量升高和timp-1含量下降，提示肺气肿大鼠气道炎症加深，气道黏膜损伤。与模型组相比，给予中药组合物后，高剂量组和低剂量组大鼠mmp-9含量下降和timp-1含量升高(p《0.01)，提示中药组合物可抑制气道重塑。结果见表4。
[0093]
表3对弹性蛋白酶所致肺气肿大鼠α1-抗胰蛋白酶(α1-at)及ha与ln、pcⅲ含量的影响
[0094][0095]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0096]
表4对弹性蛋白酶所致肺气肿大鼠肺组织因子的影响
[0097][0098]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0099]
本发明所提出的组合物能显著延缓病程，改善呼吸功能，减轻肺间质纤维化及气道重塑。实验例3对ova诱导的小鼠哮喘模型的影响
[0100]
实验材料
[0101]
动物：babl/c小鼠，60只，spf级，雌性，体重18-20g。
[0102]
药物：硫酸沙丁胺醇，江苏亚邦爱普森药业有限公司，批号：201108；规格：2mg/片。
[0103]
试剂：ova，mce，货号：hy-p1489a，规格：100mg/支，批号：119448；ova，sigma，货号：a5503，规格：10g/瓶，批号：slcb8249；氢氧化铝(al(oh)3)，阿拉丁公司，货号：a110525规格：500g/瓶，批号：h2106415；生理盐水，辰欣药业股份有限公司，国药准字h20013310，规格：100ml，批号：2101282721
[0104]
仪器：sartorius bs224s电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；acx-sc-da型动物体重称，上海香川电子衡器有限公司；flexstation 3多功能酶标仪，美国md公司；多功能诱咳引喘仪，上海欣软信息科技有限公司，型号：xr-yls-8a
[0105]
实验方法
[0106]
适应性饲养结束后，选取体重合适的60只小鼠，随机分为空白对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性药对照组，每组10只，雌性。
[0107]
哮喘模型小鼠在第1天和第14天每只腹腔注射抗原混液(ova 100μg/只，氢氧化铝2.25mg/只)致敏。第21天开始用1％ova超声雾化吸入而激发，每天1次，每次30min，共1周。正常对照组小鼠于第1天和第14天用等体积生理盐水腹腔内注射，第21天开始用生理盐水超声雾化吸入，每天1次，每次30min，共1周。给药组小鼠在雾化器前30min给药。从第21天开始灌胃给予相应药物低、中、高剂量组，剂量分别为9.36、18.72、37.44g生药/kg，共1周。正常对照组和哮喘模型组小鼠于第21天开始灌胃给予等体积生理盐水，共1周。
[0108]
检测指标：
[0109]
1.肺泡灌洗液il-4、il-5和il-13等。
[0110]
2.肺泡灌洗液淋巴细胞计数。
[0111]
结果显示：模型组小鼠肺泡灌洗液中的il-4、il-5、il-13、细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、巨噬细胞总数和淋巴细胞总数较正常组明显上升(p《0.05)，表明造模成功。中药组合物中剂量组与阳性对照药组il-4、il-5、il-13、细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、巨噬细胞总数和淋巴细胞总数较模型组均有明显改善(p《0.05)。中药组合物高剂量组il-4、il-5、il-13、细胞总数、巨噬细胞总数和淋巴细胞总数较模型组相比有明显改善(p《0.05)。见图1和图2，表5及表6。
[0112]
表5对ova诱导的小鼠哮喘模型肺泡灌洗液细胞因子的影响
[0113][0114]
与空白对照组相比，p《0.001,标
###
；与模型组相比，p《0.001，标
***
。
[0115]
表6对ova诱导的小鼠哮喘模型肺泡灌洗液细胞分型的影响
[0116][0117][0118]
与空白对照组相比，p《0.001,标
###
；与模型组相比，p《0.05，标
*
；p《0.01，标
**
；p《0.001，标
***
。
[0119]
实验例4对乙酰胆碱和组胺致豚鼠哮喘的影响
[0120]
动物：豚鼠，普通级，体重180-200g
[0121]
药物：氨茶碱片，天津力生制药股份有限公司产品，规格：0.1g/片，批号：1905006。
[0122]
试剂：乙酰胆碱，sigma，规格：25g/瓶，批号：bcbr3675。
[0123]
组胺，sigma，规格：5g/瓶，批号：bcbq3927v。
[0124]
氯化钠溶液，石家庄四药有限公司，规格：500ml/瓶，批号：1803193205。
[0125]
仪器：电子天平，mettler toleod，型号：ms1003s101。
[0126]
动物体重称，上海香川电子衡器有限公司，型号：acx-sc-da。
[0127]
诱咳引喘仪，上海欣软，型号：xr-yls-8a。
[0128]
实验方法：筛选动物：预饲养后，取健康豚鼠，分别放于诱咳引喘仪内，雾化杯中盛入2％乙酰胆碱与0.1％组胺的等量混合液20ml，喷雾10秒钟，观察豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期，小于150秒用于试验。
[0129]
正式试验：将合格动物按体重随机分为6组，每组10只，雌雄各半，各组分别灌胃，模型对照组灌胃给予相同体积的生理盐水(5ml/kg体重)，受试药分别给予低、中、高剂量干预，剂量分别为5.57、11.15、22.30g生药/kg，每天1次，连续7天，末次药后1小时，以同法实验，观察豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期。
[0130]
检测指标：豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期。
[0131]
结果显示：与模型组比较，中药组合物低剂量、中剂量、高剂量和阳性对照药均可显著延长喘息性抽搐潜伏期。结果如图3，表7。
[0132]
表7对乙酰胆碱和组胺诱导的豚鼠喘息潜伏期的影响
[0133][0134][0135]
与模型组相比，p《0.001，标
***
。
[0136]
实验例5对病毒性上呼吸道感染小鼠肺指数及血清tnf-α的影响
[0137]
实验材料
[0138]
动物：balb/c小鼠，spf级，雌雄兼备，共72只，体重18～22g。
[0139]
药物：利巴韦林片，四川美大康药业股份有限公司，批号：h20213197；规格：0.1g/片。
[0140]
药物：组合物颗粒，江苏康缘药业股份有限公司提供。
[0141]
试剂：
[0142]
水合氯醛，沪试国药集团化学试剂有限公司，规格：250g/瓶，批号：30037517；
[0143]
甲型流感病毒a/pr8/34(h1n1)：由中国预防医学科学院病毒研究所提供；
[0144]
tnf-α试剂盒：赛默飞，货号：88-50450-86
[0145]
仪器：
[0146]
电子天平，sartorius，德国，型号：bs224s；
[0147]
体重秤，g&g牌，中国，型号：tc3k；
[0148]
离心机，艾本德，德国，型号：5804r；
[0149]
酶标仪，美谷分子，美国，型号：flexstation3。
[0150]
实验方法
[0151]
spf级健康小鼠72只，雌雄各半，体重18～22g。实验前采用随机数字查表法，把72只小鼠分为6组。每组12只，然后对每组进行标记。分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、组合物低剂量组、组合物中剂量组、组合物高剂量组。给药当日，10％水合氯醛0.35g/kg轻度麻醉下，正常对照组小鼠以生理盐水滴鼻，每鼠30ul。其余各组以4倍ld
50
(半数致死量，ld
50
＝10-1.71
)的甲型流感病毒(a/pr8/34)液滴鼻感染，每鼠30ul，感染量为1倍ld
50
。感染半小时后，正常组(等量生理盐水)、模型数据组(等量生理盐水)、利巴韦林组(150mg
·
kg-1
)、组合物高剂量组(37.44g生药/kg)、组合物中剂量组(18.72生药/kg)、组合物低剂量组(9.36生药/kg)。各组给药的体积都是0.2ml
·
10g-1
，予以灌胃给药，每天1次连续7天。
[0152]
检测指标：
[0153]
①
观察各组小鼠生长情况及行为变化常规观察。
[0154]
②
观察肺指数各组动物于末次给药后，处死动物，摘取小鼠完整肺组织，洁净纱布吸干水分，称重后计算肺指数及肺指数抑制率：
[0155]
肺指数＝肺全重(g)/体重(g)*10
[0156]
抑制率＝(平均肺指数
模型组-平均肺指数
实验组
)*100％
[0157]
③
测定血清中tnf-α水平各组小鼠于末次给药后，摘眼球取血，离心，取血清。采用elisa检测法测定小鼠tnf-α水平。
[0158]
实验结果
[0159]
对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响
[0160]
由表8可见，模型组小鼠肺指数与正常组相比具有显著性差异(p《0.01)。经药物治疗后，利巴韦林组，组合物高剂量、中剂量、低剂量组均能降低上呼吸道感染小鼠肺指数，与模型组比较具有显著性差异(p《0.05)。表明组合物能抑制甲型流感病毒引起的小鼠上呼吸道感染。
[0161]
表8组合物对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响
[0162][0163]
注：与空白对照组比较
▲
p＜0.05，与模型对照组相比
△
p＜0.05，与阳性药组比较
■
p＜0.05。
[0164]
由表9可见，上呼吸道感染模型组与正常组比较，血清中tnf-α水平显著升高，两者
比较具有显著性差异(p《0.05)。经药物治疗后，利巴韦林组、组合物高剂量组降低了血清中tnf-α水平，与模型组比较具有显著性差异(p《0.05)。表明组合物对甲型流感病毒引起的上呼吸道感染抑制作用与降低血清中tnf-α水平有关。
[0165]
表9组合物对上呼吸道感染小鼠tnf-α的影响
[0166][0167]
注：与空白对照组比较
▲
p＜0.05，与模型对照组相比
△
p＜0.05，与阳性药组比较
■
p＜0.05。
[0168]
实验例6对急性细菌性上呼吸道感染小鼠的影响
[0169]
实验材料
[0170]
动物：spf级icr小鼠，体重(20
±
2.0)g，雌雄各半，共72只，体重18～20g。
[0171]
药物：
[0172]
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，美国atcc，货号：atcc43300。
[0173]
盐酸赛罗唑啉鼻用喷雾剂，远大医药(中国)有限公司，批号：210821。
[0174]
仪器：
[0175]
电子天平，sartorius，德国，型号：bs224s；
[0176]
体重秤，g&g牌，中国，型号：tc3k；
[0177]
离心机，艾本德，德国，型号：5804r；
[0178]
酶标仪，美谷分子，美国，型号：flexstation3；
[0179]
细胞计数仪：赛默飞公司，美国，型号：invitrogencountess；
[0180]
正置荧光显微镜：徕卡公司，德国，型号：dm4000b。
[0181]
实验方法
[0182]
选取icr小鼠72只，雌雄各半，体重20-22g，按体重随机分为6组，每组12只。6组分别为空白对照组，模型对照组，中药组合物低、中、高剂量组(9.36g生药/kg、18.72g生药/kg、37.44g生药/kg)，阳性对照组(盐酸赛罗唑啉鼻用喷雾剂0.05g/kg)。实验前耐甲氧西林金黄色葡萄球菌经过小鼠活体接种传代2次，co2环境37℃培养24h，用灭菌生理盐水对培养获得的细菌进行洗脱，浓度为l.2
×
109个菌落形成单位(cfu)/ml菌液。75％酒精消毒小鼠外鼻孔、口腔和头部，待酒精挥干后，乙醚轻度麻醉状态仰卧位滴鼻，空白组小鼠以灭菌生理盐水滴鼻，其余各组以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌液滴鼻造模，每鼠20μl。
[0183]
从造模当天开始，按以下方式滴鼻给药:空白组和模型组，0.5％吐温-80；阳性组，盐酸赛罗唑啉鼻用喷雾剂；中药组合物低、中、高剂量组(9.36g生药/kg、18.72g生药/kg、37.44g生药/kg)，)。每鼠10μl，一天两次，连续两天。给药完成后第4天脱颈椎处死各组小
鼠。
[0184]
小鼠处死前先用75％酒精消毒外鼻孔、口腔和头部，待酒精挥干后处死小鼠，以灭菌生理盐水做鼻咽部灌洗，每次50μl，灌洗两次。取灌洗液5μl涂布于琼脂平板上，37℃co2环境培养48h后计数菌落数并以cfu/小鼠统计。
[0185]
结果显示：
[0186]
模型组小鼠鼻咽部灌洗液中培养出的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌落数量明显高于空白组小鼠，与空白组比较有显著性差异。阳性组及组合物各剂量组小鼠鼻咽部灌洗液耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌落数量均明显低于模型组小鼠，与模型组比较有显著性差异。结果见表10。
[0187]
表10鼻咽部灌洗液耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌落计数(cfu/只，
×
103)
[0188][0189]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，****p《0.0001。
[0190]
本发明所提出的组合物能显著调节病毒诱导的上呼吸道感染小鼠肺指数，降低血清中炎症因子tnf-α水平，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌致急性上呼吸道感染模型小鼠也有一定的防治作用。
[0191]
实验例7对细菌合并烟熏所致的大鼠急性支气管炎的影响
[0192]
实验材料
[0193]
动物：sd大鼠，spf级，雄性，共60只，体重200～220g。
[0194]
药物：银黄清肺胶囊(湖南安邦制药有限公司，规格：0.15g/粒，批号：191209)。
[0195]
试剂：旱烟烟草叶(自制)，il-6(批号：201912)、il-8(批号：201912)、il-10(批号：201912)elisa检测试剂盒(bio-swamp)；
[0196]
仪器：超低温冰箱(haier，型号：dw-861286)；电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，型号：bs2244)；电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司，型号dhg-9076a型)；酶标仪(molecular devices，型号：flexstation 3)。
[0197]
实验方法
[0198]
sd大鼠60只，按体重随机分为正常对照组，模型对照组，银黄清肺胶囊对照药组(0.18g
·
kg-1)，低、中、高剂量中药组合物颗粒组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)，每组10只动物。除正常对照组不做处理外，采用烟熏法复制大鼠急性支气管炎模型(每组用锯末和烟丝各50g置于熏炉内引燃，避免明火，对烟熏箱内大鼠进行烟熏刺激，30分钟/次，2次/日)，连续2周，造模完成后各组大鼠连续给药7天，每天1次，正常对照组和模型对照组分别灌胃给予等体积纯水。
[0199]
检测指标：将大鼠用10％水合氯醛0.35g/kg麻醉，用1ml生理盐水灌洗左侧肺叶，反复3次，收集肺泡灌洗液。参照试剂盒说明书步骤elisa检测肺泡灌洗液il-6、il-8、il-10含量。
[0200]
结果显示：模型组较正常组大鼠出现呼吸急促，呼吸声加大、咳嗽等症状，il-6、il-8含量升高、il-10含量减少(p《0.01)表明造模成功。与模型对照组比较，中药组合物中、高剂量组肺泡灌洗液中il-6的含量，低、中、高剂量组的il-8含量显著减少(p《0.05)，中、高剂量组肺泡灌洗液中的il-10含量显著增加(p《0.05)。见表11。
[0201]
表11对细菌合并烟熏所致的大鼠急性支气管炎的影响
[0202][0203]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0204]
实验例8对lps所致的大鼠慢性支气管炎的影响
[0205]
动物：sd大鼠，spf级，雄性，共60只，体重180～220g。购买自斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号：scxk(京)2019-0010。
[0206]
药物：咳特灵胶囊，广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂生产，批号4560062。
[0207]
试剂：旱烟烟草叶(自制)；lps(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，批号156m4131v)；白细胞介素(il)-6，il-10elisa试剂盒(上海继锦化学科技有限公司，批号均为20201127)；水合氯醛，沪试国药集团化学试剂有限公司，规格：250g/瓶，批号：20200905；
[0208]
仪器：超低温冰箱(haier，型号：dw-861286)；电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，型号：bs2244)；电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司，型号dhg-9076a型)；酶标仪(molecular devices，型号：flexstation 3)。
[0209]
实验方法：sd大鼠60只，按体重随机分为正常对照组，模型对照组，咳特灵胶囊对照药组(0.11g
·
kg-1)，低、中、高剂量中药组合物颗粒组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)，每组10只动物。采用烟熏联合气管内注射lps的方法复制慢性支气管炎大鼠模型。造模组5组大鼠放置于烟熏箱中，用烟叶150g，点燃对大鼠进行烟熏，每天2次，每次30min，持续30d；正常对照组置于常规环境中饲养。造模组大鼠于第1、15天给予气管内注入lps，每只200μg(1mg/ml)，正常对照组给予气管内注入等体积生理盐水。大鼠于造模第2天开始给药，给药体积均为10ml/kg，连续灌胃30d。
[0210]
检测指标：
①
支气管灌洗液用比色法按照试剂盒说明书检测丙二醛(mda)含量。
②
elisa法检测血清炎症因子il-6和il-10含量。
[0211]
结果显示：采用lps复制的大鼠模型由于缺氧和慢性炎症，细胞耗氧量明显增加，体内产生大量自由基，其肺组织中mda含量较空白组明显升高，给予中药组合物能明显降低mda含量，能显著降低血清促炎因子il-6的含量，显著升高抑炎因子il-10的含量。该中药组合物能够降低脂质过氧化反应，减轻氧自由基损伤，调节炎症反应，从而发挥减轻慢性支气
管炎症气道损伤，保护肺组织的作用。结果见表12。
[0212]
表12对lps所致的大鼠慢性支气管炎的影响
[0213][0214]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0215]
实验例9乙型溶血性链球菌致大鼠感染急性咽炎模型
[0216]
实验材料
[0217]
动物：sd大鼠，spf级，雌雄各半，共60只，体重220～250g。
[0218]
药物：阿莫西林胶囊，哈药集团制药总厂产品，批号：a1406029；规格：0.25g/粒。
[0219]
菌株：乙型溶血性链球菌购自中国食品药品检定研究院。
[0220]
试剂：0.9％氯化钠溶液，石家庄四药有限公司，规格：500ml/瓶，批号：1803193205；水合氯醛，沪试国药集团化学试剂有限公司，规格：250g/瓶，批号：20180629。
[0221]
仪器：电子天平，mettler toleod，型号：ms1003s 101；动物体重称，香川，型号：acx-sc-da。
[0222]
实验方法
[0223]
sd大鼠60只，体重220～250g，雌雄各半，按体质量随机分为6组，分别为正常对照组，模型组，中药组合物低、中、高剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)，阳性对照组(阿莫西林0.275g/kg)每组10只。除正常对照组外，其余各组使用灭菌镊子翻开大鼠口腔，暴露上颌黏膜，用注射器将吸有1
×
109cfu/ml浓度的乙型溶血性链球菌菌液水平方向点刺鼻咽部黏膜，并注射菌液，操作程度以略有点状出血为度，每只0.1ml，连续感染2d，正常对照组在同等条件下注射生理盐水。第1天感染后1h各组动物按10ml/kg灌胃给药，每天1次，连续3d，正常对照组和模型对照组在同等条件下给蒸馏水。第4天观察大鼠咽部组织病变情况，进行咽部体征评分。咽部体征肉眼观察评分标准：0分：上颚无红肿表现；1分：软腭有红肿；2分：软腭、软腭弓或咽后壁有充血红肿；3分：软腭、软腭弓、咽后壁出现红色瘀血点；4分：软腭、软腭弓、咽后壁均出现红色瘀血点，可见覆有白色脓点。
[0224]
结果显示：肉眼观察模型对照组大鼠咽部出现红色瘀血点并附有白色脓点，咽部体征评分显著增高，与正常对照组比较有显著性差异(p＜0.01)，表明造模成功。中药组合物高、中、低3个剂量组大鼠咽部病变均明显减轻，咽部体征评分下降，与模型对照组比较有显著性差异(p＜0.01、p＜0.01、p＜0.05)。结果见表13。
[0225]
表13对乙型溶血性链球菌致大鼠急性咽炎模型的影响
[0226][0227]
注：与模型对照组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。
[0228]
实验例10氨水致大鼠急性咽炎模型
[0229]
动物：sd大鼠，spf级，雌雄各半，共60只，体重150～170g。
[0230]
药物：阿莫西林胶囊，哈药集团制药总厂产品，批号：a1406029；规格：0.25g/粒。
[0231]
试剂：0.9％氯化钠溶液，石家庄四药有限公司，规格：500ml/瓶，批号：1803193205；水合氯醛，沪试国药集团化学试剂有限公司，规格：250g/瓶，批号：20180629；氨水，南京化学试剂有限公司，规格：500ml/瓶，批号：13041230175；白细胞介素-1β(il-1β，货号：sekr-0002)试剂盒、白细胞介素-6(il-6，货号：sekr-0005)试剂盒、肿瘤坏死因子-α(tnf-α，货号：sekr-0009)试剂盒，北京索莱宝科技有限公司。
[0232]
仪器：电子天平，mettler toleod，型号：ms1003s101；动物体重称，香川，型号：acx-sc-da；centrfuge5840型冷冻离心机，eppendorf；喉头喷雾器，江苏平安医疗器械有限公司；酶标仪，美国美谷分子，flexstation 3。
[0233]
实验方法：sd大鼠60只，体重150～170g，雌雄各半，按体质量随机分为6组，分别为正常对照组，模型组，中药组合物低、中、高剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)，阳性对照组(阿莫西林0.36g/kg)，每组10只。除正常对照组外，其余各组使用喉头喷雾器于动物咽部喷15％的氨水，每次喷雾3揿，每天2次，连续3d，制备大鼠急性咽炎模型，正常对照组喷雾等量生理盐水。造模后第4天，各组动物按10ml/kg灌胃给药，每天1次，连续5d，正常对照组与模型组分别给予等体积的蒸馏水，每天观察记录造模后各组大鼠一般状态。末次给药1h后，用10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉采血，离心取血清后以酶联免疫吸附法(elisa)测定血清中il-1β、il-6、tnf-α的含量。
[0234]
结果显示：与正常对照组比较，模型组大鼠血清中il-1β、il-6、tnf-α水平均显著升高(p＜0.01)。与模型组相比，中药组合物高、中、低3个剂量组均可显著降低大鼠血清中il-1β含量(p＜0.01、p＜0.01、p＜0.05)；中药组合物高、中、低3个剂量组均可显著降低大鼠血清中il-6含量(p＜0.01、p＜0.01、p＜0.05)；中药组合物高、中剂量组可显著降低大鼠血清中tnf-α含量(p＜0.01、p＜0.05)。结果见表14。
[0235]
表14对氨水致急性咽炎模型大鼠血清中il-1β、il-6、tnf-α的影响
[0236]
[0237][0238]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0239]
本发明所提出的组合物能显著改善急性咽炎咽部黏膜组织病变情况，促进咽部炎症减轻或消除。
[0240]
实验例11对con a介导的自身免疫性肝炎(aih)小鼠模型的影响
[0241]
实验材料
[0242]
动物：c57bl/6小鼠，spf级，雄性，共60只，体重22g左右。购买自斯贝福生物技术有限公司，许可证号：scxk(京)2019-0010，合格证号：no.110324221105351178。
[0243]
阳性对照药物：硫唑嘌呤，上海信谊药厂有限公司，规格：50mg/片，批号20200109。
[0244]
受试药物：实施例1的颗粒，江苏康缘药业股份有限公司提供。
[0245]
试剂：刀豆蛋白a(concanavalin a，con a)，美国sigma公司，批号：11028-71-0；0.9％氯化钠溶液，石家庄四药有限公司，规格：500ml/瓶，批号：1803193205；甲醛，南京化学试剂股份有限公司，规格：500ml/瓶，批号：160517018e；丙氨酸氨基转移酶(alt)和天冬氨酸氨基转移酶(ast)检测试剂盒，上海仁捷生物科技有限公司，批号080120、080122；il-4，mouse il-4valukine elisa kit，批号：600803，规格：val803；96孔板；tnf-α，mouse tnf-avalukine elisa kit，批号：600609，规格：val609；96孔板。
[0246]
仪器：超低温冰箱，haier公司，型号：dw-86l728；电子天平，sartorius科学仪器公司，型号：bsa224s-cw；电子天平，德国sartorius，型号：bs224s；体重秤，中国g&g牌，型号：tc3k；离心机，德国艾本德，型号：5804r；酶标仪，美国美谷分子，型号：flexstation 3。
[0247]
实验方法
[0248]
随机将60只小鼠分为正常对照组，模型组，本发明中药组合物颗粒不同剂量组(9.36g生药/kg、18.72g生药/kg、37.44g生药/kg)和硫唑嘌呤阳性药(2mg/kg)组，每组10只。模型组，中药组分颗粒低、中、高剂量组和阳性对照组一次性尾静脉注射cona(12mg/kg)制备aih模型，正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。从第1天起按10ml/kg剂量每天灌胃给药1次，在固定时间连续给药5d，末次给药24h后，小鼠摘眼球取血离心取血清，剖开腹腔，取肝脏组织备用。
[0249]
检测指标：
①
血清alt和ast水平测定：将所取全血离心(转速4500r/min)10min，分离血清，分别采用试剂盒检测血清alt和ast水平。
②
he染色观察小鼠肝脏病理改变：分离肝组织，将肝左叶用甲醛固定，经甲醛固定24h后，进行脱水、包埋，切片厚度1μm，常规he染色，观察肝组织病理学改变。
③
elisa法检测肝组织il-4和tnf-α水平：取冻存肝组织，制成匀浆，加100μl肝匀浆于反应孔中，37℃孵育2h；加入对应抗体100μl，孵育2h；加入显色液100μl，避光孵育10～15min；加入终止液终止反应，于450nm处测各孔吸光度od值。
[0250]
小鼠肝功能结果显示：模型组小鼠alt和ast的水平较正常组显著上升(p《0.001)，表明造模成功。中药组合物中剂量、高剂量组及阳性对照组alt和ast水平较模型组均有明显改善(p《0.01，p《0.001)。结果见表15。
[0251]
小鼠肝脏组织tnf-α、il-4结果显示：与正常组比较，模型组小鼠肝脏组织il-4水
平明显下降(p＜0.001)，tnf-α水平明显上升(p＜0.001)；经中药组合物和阳性药治疗后，il-4水平均有大幅度回升(p＜0.001)，tnf-α的表达水平明显受到抑制(p＜0.001)。表明中药组合物可有效促进抑炎因子的释放，抑制促炎因子的分泌。结果见表16。
[0252]
病理结果显示：模型组小鼠可见大范围肝细胞死亡，肝小叶结构紊乱，汇管区有大量炎症细胞浸润，局部可见小灶样坏死，表明小鼠免疫性肝损伤模型复制成功(p《0.001)。中药组合物有减轻肝脏炎症和肝细胞凋亡的作用，其中高、中剂量组效果较好，与模型组相比数据有显著性差异(p《0.01，p《0.001)，具有统计意义。正常对照组小鼠肝脏结构未见明显异常；模型组小鼠见大片肝细胞坏死，肝索排列紊乱，同时伴有炎性细胞浸润；中药组合物各剂量组和阳性对照组病理改变较模型组减轻，且中药组合物高剂量组与阳性对照组只存在轻度肝细胞坏死(图5)。评分结果见表17。
[0253]
表15对自身免疫性肝炎小鼠肝脏组织alt、ast水平的影响
[0254][0255]
注：与正常组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，**p《0.01，***p《0.001
[0256]
表16对自身免疫性肝炎小鼠肝脏组织tnf-α、il-4水平的影响
[0257][0258]
注：与正常组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，***p《0.001。
[0259]
表17对自身免疫性肝炎小鼠肝脏病理评分
[0260][0261]
注：与正常组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0262]
实验例12对免疫剂所致的自身免疫性肝损伤小鼠模型的影响
[0263]
实验材料
[0264]
动物：c57bl/6小鼠，spf级，雄性，共70只，体重22～24g。购买自斯贝福生物技术有限公司，许可证号：scxk(京)2019-0010，合格证号：no.110324221106451175。
[0265]
阳性对照药物：硫唑嘌呤，上海信谊药厂有限公司，规格：50mg/片，批号20200109。
[0266]
受试药物：实施例1的颗粒，江苏康缘药业股份有限公司提供。
[0267]
试剂：完全弗氏佐剂，美国sigma公司，批号：9007-81-2；0.9％氯化钠溶液，石家庄四药有限公司，规格：500ml/瓶，批号：1803193205；甲醛，南京化学试剂股份有限公司，规格：500ml/瓶，批号：160517018e；丙氨酸氨基转移酶(alt)和天冬氨酸氨基转移酶(ast)检测试剂盒，上海仁捷生物科技有限公司，批号080120、080122；il-1β,mouse il-1beta valukine elisa kit，批号：6006403，规格：val601；96孔板；il-6，mouse il-6valukine elisa kit，批号：600504，规格：val604；96孔板；tnf-α，mouse tnf-a valukine elisa kit，批号：600609，规格：val609；96孔板。
[0268]
仪器：超低温冰箱，haier公司，型号：dw-86l728；电子天平，sartorius科学仪器公司，型号：bsa224s-cw；电子天平，德国sartorius，型号：bs224s；体重秤，中国g&g牌，型号：tc3k；离心机，德国艾本德，型号：5804r；酶标仪，美国美谷分子，型号：flexstation 3。amicon ultra-15滤膜，密理博，美国，型号：ufc910096；sepharose色谱柱，pharmacia公司，美国，型号：sepharose cl-2b。
[0269]
实验方法
[0270]
利用肝s100抗原诱导aih模型，通过腹腔注射过量的戊巴比妥钠(2％)处死10只小鼠，剖开腹腔取出肝脏，将肝脏切碎并在冰浴条件下加入pbs匀浆，以150g离心10min。将上清液进一步以100000g离心60min。将所得的上清液利用amicon ultra-15滤膜缩至5ml，然后通过90cm-6b sepharose色谱柱纯化收集s100抗原。将s100抗原利用全弗氏佐剂乳化，质量浓度为1g/l。随机将60只小鼠分为正常对照组10只，模型组50只，模型组小鼠在建模第1天腹膜内注射s100乳化剂，并在第7天重复注射，每次1ml。将建模成功小鼠随机分为模型组、硫唑嘌呤阳性药组(2mg/kg)、中药组合物颗粒不同剂量组(9.36g生药/kg、18.72g生药/kg、37.44g生药/kg)，每组10只。正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃，其余各组动物按10ml/kg剂量每天灌胃给药1次，在固定时间连续给药2周，末次给药24h后，小鼠摘眼球取血离心取血清，剖开腹腔，取肝脏组织备用。
[0271]
检测指标：
①
血清指标：elisa检测血清炎性因子，将所取的全血室温静置30min后离心10min(3000r/min)分离血清，一部分血清样品按照试剂盒说明书加入抗体和显色剂，通过酶标仪检测450nm下的吸光度，根据标准曲线计算il-1β、il-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，tnf-α)的浓度。另一部分血清样品使用试剂盒检测肝损伤指标谷草转氨酶(ast)和谷丙转氨酶(alt)水平。
②
he染色观察小鼠肝脏病理改变：分离肝组织，将肝左叶用甲醛固定，经甲醛固定24h后，进行脱水、包埋，切片厚度1μm，常规he染色，观察肝组织病理学改变。
[0272]
小鼠肝功能结果显示：模型组小鼠alt和ast的水平较正常组显著上升(p＜0.001)，表明造模成功。中药组合物各剂量组及阳性对照组alt和ast较模型组均有明显改善(p《0.05，p《0.001)。结果见表18。
[0273]
小鼠血清炎性因子il-1β、il-6、tnf-α结果显示：与正常组比较，模型组小鼠肝脏组织il-1β、il-6、tnf-α水平明显高于正常组(p＜0.001)；经中药组合物和阳性药治疗后，il-1β、il-6、tnf-α水平均有明显降低(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)。表明中药组合物有效减轻了自身免疫性肝炎小鼠的炎性反应。结果见表19。
[0274]
病理结果显示：正常对照组小鼠的肝脏组织结构正常未见细胞坏死和明显淋巴细胞浸润。模型组小鼠的肝脏在汇管区和小叶中央可见炎性细胞浸润，肝细胞肿胀坏死明显，病理总评分较正常对照组有显著性差异(p＜0.001)。阳性对照组与中药组合物组均能抑制淋巴细胞浸润和肝实质细胞坏死，其中阳性药组和中药组合物高剂量组效果最为明显(p＜0.001)(图6)。评分结果见表20。
[0275]
表18对自身免疫性肝炎小鼠血清中谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast)水平的影响
[0276][0277]
注：与正常组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0278]
表19对自身免疫性肝炎小鼠血清中il-1β、il-6、tnf-α水平的影响
[0279][0280]
注：与正常组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0281]
表20对自身免疫性肝炎小鼠肝脏病理评分
[0282][0283]
注：与正常组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，*p《0.05，***p《0.001。
[0284]
本发明所提出的组合物能显著减轻自身免疫性肝炎模型小鼠肝脏炎症反应，抑制肝细胞凋亡，发挥肝脏保护作用，可能是治疗自身免疫性肝炎的潜在治疗药物，具有较高的应用价值和广阔的发展前景。
[0285]
实验例13：对3％dss致小鼠急性溃疡性结肠炎模型的影响
[0286]
1、实验材料
[0287]
动物：c57bl/6j小鼠，spf级，雄性，共60只，体重18～20g，购自扬州大学比较医学中心。
[0288]
药物：盐酸环丙沙星胶囊，浙江华润三九众益制药有限公司，规格0.25g/片，批号：
211205。
[0289]
试剂：硫酸葡聚糖(dss)，美国mp biomedicals公司，规格：100g，批号：s7102。小鼠il-6elisa检测试剂盒：碧云天，规格：96t，货号：pi326。氯化钠，国药集团化学试剂有限公司(沪试)，规格：500g/瓶，批号：20171221。甲醛，国药集团化学试剂有限公司(沪试)，规格：500ml/瓶，批号：20180313。
[0290]
仪器：电子天平，德国sartorius，型号：bs224s。体重秤，中国g&g牌，型号：tc3k。离心机，德国艾本德，型号：5804r。酶标仪，美国美谷分子，型号：flexstation 3。
[0291]
受试药物：本发明实施例中制得的中药组合物颗粒剂，江苏康缘药业股份有限公司提供；药物剂量：人日用生药量为288g生药，成人(按70kg算)临床剂量为4.1g生药/kg，计算出小鼠等效剂量为37.44g生药/kg，将此剂量设定为高剂量，按照0.25:0.5:1剂量比来设定低、中、高剂量组，剂量分别为9.36、18.72、37.44g生药/kg，分别相当于临床剂量的2.3、4.6、9.1倍。
[0292]
2、实验方法
[0293]
c57bl6/j小鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药环丙沙星组(615mg/kg)、本发明中药组合物低剂量(9.36生药/kg)、本发明中药组合物中剂量(18.72生药/kg)，本发明中药组合物高剂量(37.44生药/kg)。每组10只。除正常对照组自由饮用纯水外，其他各组小鼠给予每日新鲜配制的3％dss溶液，自由饮用7天。自造模第1天起，阳性药(环丙沙星)和本发明中药组合物低、中、高剂量组按照20ml/kg分别灌胃给予相应药物，正常对照组和模型对照组灌胃给予纯水，每日1次，连续给药10天。
[0294]
3、检测指标
[0295]
(1)、疾病活动指数(disease activity index，dai)评分：自实验第1天起，每天于相同时间段内称量并记录各组小鼠体质量，观察各组小鼠大便性状，以湿润的棉球擦拭小鼠肛门观察便血情况，按照表21所示的标准计算dai评分。dai评分＝体质量变化评分+大便性状评分+血便评分。
[0296]
表21dai评分标准
[0297][0298]
(2)、结肠长度及病理评分：末次给药1h后将小鼠麻醉取血，剖腹取回盲部至肛门段结肠并测量结肠长度。取结肠远端1cm处，用10％甲醛溶液固定，后续经脱水和石蜡包埋、切片等步骤进行he染色。病理评分标准见表22。
[0299]
表22结肠组织病理评分标准
[0300][0301][0302]
(3)、elisa法测定血清炎性因子il-6活性水平：取血清，解冻并摇匀。按照elisa试剂盒说明书所示方法进行测定。
[0303]
4、实验结果
[0304]
(1)、本发明中药组合物对急性溃疡性结肠炎小鼠dai评分的影响
[0305]
与正常对照组比较，模型对照组第7～9天dai评分较高(p《0.01)，小鼠体重下降且便血严重，表明造模成功。与模型对照组比较，阳性药环丙沙星组第7～9天dai评分显著降低(p《0.05，p《0.01)，小鼠体重下降较小，便血较轻或没有便血，整体活动状态较好；本发明中药组合物中剂量在第8、9天的dai评分明显降低(p《0.05)；本发明中药组合物高剂量在第7～9天的dai评分显著降低(p《0.05，p《0.01)，小鼠体重下降和便血情况等活动状态不同程度上有所改善。结果见表23。
[0306]
表23本发明中药组合物对小鼠dai评分的影响
[0307][0308]
注：与正常对照组比较，
##
p《0.01；与模型对照组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0309]
(2)、本发明中药组合物对急性溃疡性结肠炎小鼠结肠长度和病理评分的影响
[0310]
与正常对照组比较，模型对照组小鼠结肠长度显著缩短，结肠出现大规模黏膜损
伤、溃疡和炎细胞浸润，病理评分显著升高，表明小鼠急性溃疡性结肠炎模型造模成功(p《0.01)。与模型对照组比较，环丙沙星组结肠长度显著增加，病理显示仅个别小鼠出现轻度溃疡或炎症，评分显著降低，药物疗效较好(p《0.01)；本发明中药组合物中、高剂量组小鼠结肠长度和结肠病理评分指标介于模型对照组与环丙沙星组之间，结肠长度较模型对照组显著增加(p《0.01)，病理评分较模型对照组显著降低，结肠的溃疡和炎细胞浸润等病理状态显著改善(p《0.05，p《0.01)，提示本发明中药组合物可减轻小鼠结肠损伤(图7)。结果见表24。
[0311]
表24本发明中药组合物对小鼠结肠长度的影响
[0312][0313]
注：与正常对照组比较，
##
p《0.01；与模型对照组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0314]
(3)、本发明中药组合物对急性溃疡性结肠炎小鼠血清炎性因子il-6活性的影响
[0315]
与正常对照组比较，模型对照组小鼠血清炎性因子il-6含量显著升高(p《0.01)。与模型对照组相比，环丙沙星组血清中il-6含量显著降低(p《0.01)，本发明中药组合物中、高剂量也可显著降低血清il-6的含量(p《0.01)，说明本发明中药组合物具有减缓炎性因子il-6的释放作用。结果见表25。
[0316]
表25本发明中药组合物对结肠炎小鼠血清il-6含量的影响
[0317][0318]
注：与正常对照组比较，
##
p《0.01；与模型对照组比较，
**
p《0.01。
[0319]
实验例14：对2％dss致小鼠慢性溃疡性结肠炎模型的影响
[0320]
1、实验材料
[0321]
动物：c57bl/6j小鼠，spf级，雄性，共60只，体重18～20g，购自扬州大学比较医学中心。
[0322]
药物：美沙拉嗪肠溶片，葵花药业集团佳木斯鹿灵制药有限公司，规格：0.25g/片，
批号：2005015；
[0323]
试剂：同实验例13。
[0324]
仪器：同实验例13。
[0325]
受试药物：同实验例13。
[0326]
2、实验方法
[0327]
c57bl6/j小鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药美沙拉嗪组(300mg/kg)、本发明中药组合物低剂量(9.36生药/kg)、本发明中药组合物中剂量(18.72生药/kg)，本发明中药组合物高剂量(37.44生药/kg)。每组10只。除正常对照组给予纯水外，其他各组给予2％dss溶液自由饮用5天，然后更换为纯水自由饮用14天，如此重复1个循环，再给予2％dss溶液自由饮用5天，实验周期43天。2％dss溶液每2天配制一次，小鼠每天更换垫料。自造模第1天起，阳性药(美沙拉嗪)和本发明中药组合物低、中、高剂量组按照20ml/kg分别灌胃给予相应药物，正常对照组和模型对照组灌胃给予纯水，每日1次，连续给药43天。
[0328]
3、检测指标
[0329]
(1)结肠长度及病理评分：同实验例13。
[0330]
(2)elisa法测定血清炎性因子il-6活性水平：同实验例13。
[0331]
4、实验结果
[0332]
结果显示：通过反复给予2％dss饮水制备小鼠慢性溃疡性结肠炎模型，小鼠结肠长度较正常对照组显著缩短，结肠病理评分和血清il-6含量显著升高(p《0.01)，表明小鼠慢性溃疡性结肠炎模型造模成功。阳性药美沙拉嗪组和本发明中药组合物低、中、高剂量组均能显著增加结肠长度，改善结肠溃疡、炎细胞浸润和黏膜损伤病理状态，抑制血清炎性因子il-6释放(p《0.05，p《0.01)(图8)，表明本发明中药组合物能有效改善小鼠慢性溃疡性结肠炎。结果见表26。
[0333]
表26本发明中药组合物对慢性溃疡性结肠炎小鼠结肠长度、病理评分和血清il-6含量的影响
[0334][0335]
注：与正常对照组比较，
##
p《0.01；与模型对照组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0336]
本发明中药组合物能有效改善dss引起的小鼠急、慢性溃疡性结肠炎症状，抑制疾病发展。
[0337]
实验例15：中药组合物对小牛血清白蛋白c-bsa诱导的慢性肾小球肾炎的影响
[0338]
阳离子化的牛血清白蛋白(c-bsa)的制备
[0339]
参考border方法，用67ml无水乙二胺(eda，天津市大茂化学试剂厂，批号：20210103)加500ml双蒸水，然后缓慢加入6mol/l盐酸350ml(北京索莱宝科技有限公司，批号：p1022)，调ph至4.75，保持溶液温度在25℃。将5g牛血清白蛋白(bsa，美国sigma公司，批号：a1933)溶解于25ml双蒸水，再将此溶液缓慢加入无水乙二胺溶液，不断搅拌，溶液温恒定25℃，加入1.8g碳化二亚胺(edc，麦克林，批号：n808856)。2小时后用ph为4.75的醋酸缓冲液30ml终止反应，即得等电点的c-bsa溶液，用4℃双蒸水透析c-bsa溶液72小时(每3-5小时换水一次)，冷冻干燥，得等电点(pi)为8.4以上的c-bsa粉剂，保存于-20℃备用。
[0340]
建立慢性肾炎动物模型
[0341]
选取80只spf级，雄性，200g左右sd大鼠，适应性喂养1周，禁食不禁水12小时。第1周，将适量阳离子化牛血蛋白溶于磷酸缓冲液(ph7.2～7.4)中，浓度为2mg/ml，与等体积不完全弗氏佐剂(美国sigma公司，批号:slbt5128)混成终浓度为1mg/ml的乳白色悬液，在大鼠双侧腋下、腹股沟处多点皮下注射，2ml/只。第2周，将溶有阳离子化牛血蛋白的pbs与等体积的完全弗氏佐剂(美国sigma公司，批号:slbv6895)混匀成终浓度为1mg/ml的乳白色悬液，以相同方式皮下注射，2ml/只。第3周，取适量阳离子化牛血蛋白溶于pbs中，浓度为2.5mg/ml，对大鼠进行隔日尾静脉注射，1ml/只，连续3周。给予尾静脉注射阳离子化牛血蛋白3周后收集各大鼠24小时内的全部尿液，测定24小时尿蛋白含量，以24小时尿蛋白＞10mg为标准，表示模型复制成功。正常对照组大鼠同日同部位注射等体积的生理盐水。
[0342]
本技术实施例1制备的中药组合物颗粒按照不同剂量组(6.48生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)和醋酸泼尼松片(广东华南药业集团有限公司，批号：140502)阳性药组，第1天起按10ml/kg剂量，灌胃大鼠给药1次，连续4周，正常对照组及模型组灌胃等体积的生理盐水。末次给药1小时后，收集24小时内的全部尿液。末次给药24小时后，腹腔注射10％水合氯醛0.35g/kg麻醉大鼠，收集血清样本进行检测。
[0343]
检测指标：
①
将给药4周后收集的各大鼠24小时内的全部尿液，采用考马斯亮兰试剂盒(南京建成科技有限公司，货号：a045-2)测定大鼠24小时尿蛋白含量。
[0344]
②
用水合氯醛麻醉大鼠，暴露腹主动脉后采血，4℃离心(台式高速冷冻离心机上海卢湘仪实验室仪器有限公司，型号：tgl-16m)取血清，使用尿素氮(bun)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20220517)、肌酐(scr)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20220630)测定肾功能指标肌酐(scr)和血尿素氮(bun)并采用tnf-α、ifn-γ、il-4试剂盒(invitrogen公司，批号分别为305271-004、282909-006、271790-002)检测大鼠血清中炎症因子tnf-α、il-4和ifn-γ的含量，使用多功能酶标仪读取数值。(molecular devices公司，型号：flexstation3)
[0345]
③
取各组大鼠眼眶静脉血至流式管中，分别加10μl入cd3、cd4和cd8单抗和50μl edta抗凝血(乙二胺四乙酸二钠国药集团化学试剂有限公司，批号：20130528)，混合均匀，避光孵育20min，每管加入2ml溶血素(美国bd公司，货号：349202)，避光孵育20min，2000r/min离心10min，弃去上清，每管2ml pbs混匀，离心弃去上清，重复洗涤2次，弃上清，加2ml pbs重悬混匀后流式(美国艾森生物科学公司，型号：novecyte)分析外周血t淋巴细胞亚群cd3、cd4和cd8比例。(美国ebioscience公司，批号d160312、d160328、d160407)
[0346]
结果显示：与正常对照组比较，模型组大鼠24小时尿蛋白及血清中scr、bun含量显
著升高，差异均有统计学意义(p《0.01)。与模型组比较，中药组合物颗粒不同剂量组及醋酸泼尼松组大鼠的24小时尿蛋白及血清scr、bun含量明显降低，差异均有统计学意义(p《0.01，p《0.05)。见表27。
[0347]
表27中药组合物对慢性肾小球肾炎大鼠24小时尿蛋白、血清尿素氮和肌酐的影响(x
±
s，n＝10)
[0348][0349][0350]
注：*p《0.01，与正常组比；
▲
p《0.05，
▲▲
p《0.01，与模型组比。
[0351]
正常对照组比较，模型组大鼠血清中tnf-α、ifn-γ含量显著升高，il-4含量显著降低(p＜0.01)。与模型组比较，除中药组合物颗粒低剂量组大鼠血清il-4、ifn-γ含量差异无统计学意义外，中药组合物颗粒其它剂量组的大鼠血清tnf-α、ifn-γ含量显著降低，il-4含量显著升高(p＜0.01，p＜0.05)。见表28。
[0352]
表28中药组合物对慢性肾小球肾炎大鼠血清炎症因子的影响(x
±
s，n＝10)
[0353][0354]
注：*p《0.01，与正常组比；
▲
p《0.05，
▲▲
p《0.01，与模型组比。
[0355]
与正常对照组比较，模型组大鼠外周血中的cd3、cd4和cd4/cd8均显著降低(p《0.01，p《0.05)，cd8显著升高(p《0.01，p《0.05)。与模型组比较，中药组合物颗粒低、中、高剂量组大鼠外周血中的cd3、cd4和cd4/cd8显著升高(p《0.01，p《0.05)，cd8显著降低(p《0.01，p《0.05)。见表29。
[0356]
表29中药组合物对慢性肾小球肾炎大鼠外周血t淋巴细胞亚群的影响(％，x
±
s，n＝10)
[0357][0358]
注：*p《0.01，与正常组比；
▲
p《0.05，
▲▲
p《0.01，与模型组比；。
[0359]
实验例16中药组合物对阿霉素诱导大鼠的慢性肾小球肾炎的影响
[0360]
取雄性spf级200g左右sd大鼠85只，于第1、14天两次尾静脉注射阿霉素(盐酸表柔比星海正辉瑞制药有限公司，批号:15029611)，正常组尾静脉注射相应体积的生理盐水。注射后第21天收集大鼠24小时内的全部尿液，24小时尿蛋白总量＞50mg/kg表示模型构建成功。正常对照组大鼠同日同部位注射等体积的生理盐水。
[0361]
将本技术实施例1制备的中药组合物颗粒的不同剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)和醋酸泼尼松片阳性药组，第1天起按10ml/kg剂量灌胃给药1次，连续30天。空白对照组及模型组大鼠灌胃等体积的生理盐水。末次给药1小时后，收集24小时内的全部尿液。末次给药24小时后，腹腔注射10％水合氯醛0.35g/kg麻醉大鼠，收集血清样本及摘取肾脏进行检测。
[0362]
检测各项指标：
①
收集给药30天后，各大鼠24小时内的全部尿液，采用尿蛋白定量试剂盒(南京建成生物科技有限公司，批号：202009123)用终点法测定各组大鼠24小时尿蛋白含量。
[0363]
②
采用水合氯醛麻醉大鼠，暴露腹主动脉后采血，离心取血清，测定检测血清中scr、bun及肾组织中tnf-α、il-6和il-1β的含量(invitrogen公司，批号分别为305271-004、324017-001，1102060222)，使用多功能酶标仪读取数值。
[0364]
③
取各组大鼠眼眶静脉血至流式管中，分别加10μl入cd3、cd4和cd8单抗和50μl edta抗凝血，混合均匀，避光孵育20min，每管加入2ml溶血素，避光孵育20min，2000r/min离心10min，弃去上清，每管2ml pbs混匀，离心弃去上清，重复洗涤2次，弃上清，加2ml pbs重悬混匀后流式分析外周血t淋巴细胞亚群cd3、cd4和cd8比例。
[0365]
结果显示：与正常对照组比较，模型组大鼠24小时尿蛋白及血清scr、bun含量显著升高，差异均有统计学意义(p＜0.01)。与模型组比较，除中药组合物颗粒低剂量组大鼠血清中bun含量差异无统计学意义外，中药组合物颗粒其他剂量组及醋酸泼尼松组大鼠的24小时尿蛋白及血清中scr、bun含量明显降低，差异均有统计学意义(p＜0.01)。见表30。
[0366]
表30对慢性肾小球肾炎大鼠24小时尿蛋白、血清尿素氮和肌酐的影响(x
±
s，n＝10)
[0367][0368]
*p《0.01，与正常组比；
▲
p《0.01，与模型组比。
[0369]
与正常对照组相比，模型组大鼠的肾脏组织中tnf-α、il-6和il-1β含量均显著升高(p＜0.05)。与模型组相比，药物干预30天后，中药组合物颗粒不同剂量组和阳性药物组均可显著降低大鼠肾脏组织中tnf-α、il-6和il-1β含量，进而减轻阿霉素诱导的肾炎症反应(p＜0.05)。见表31。
[0370]
表31对慢性肾小球肾炎大鼠肾脏组织炎症因子的影响(x
±
s，n＝10)
[0371][0372]
注：*p《0.01，与正常组比；
▲
p《0.01，与模型组比。
[0373]
与正常对照组比较，模型组大鼠外周血中的cd3、cd4和cd4/cd8均显著降低(p《0.01，p《0.05)，cd8显著升高(p《0.01，p《0.05)。与模型组比较，中药组合物颗粒低、中、高剂量组大鼠外周血的cd3、cd4和cd4/cd8显著升高(p《0.01，p《0.05)，cd8显著降低(p《0.01，p《0.05)。见表32。
[0374]
表32中药组合物对慢性肾小球肾炎大鼠外周血t淋巴细胞亚群的影响(％，x
±
s，n＝10)
[0375][0376]
注：*p《0.01，与正常组比；
▲
p《0.05，
▲▲
p《0.01，与模型组比。
[0377]
本技术所提出的组合物可保护慢性肾小球肾炎模型大鼠肾脏组织，改善肾功能，减轻炎症反应。
[0378]
实验例17：组合物对ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠的影响
[0379]
将spf级体重150-160g的健康sd大鼠150只，雌雄各半分组。适应性喂养1周后进行胶原诱导关节炎(cia)造模。先用微量注射器于大鼠尾根部进行多点皮下注射，首次免疫的注射量为等量的ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(cfa)混合而成的cii-cfa乳剂0.2ml(牛ii型胶原(cii)，chondrex公司，货号：220176；完全弗氏佐剂(cfa)，sigma，货号：slcl4383)，并于实验第14天时在相同部位加强免疫一次，注射量为cii-ifa(不完全弗氏佐剂(ifa)，sigma，货号：slcl0729)乳剂0.15ml。将正常对照组大鼠以相同方法注射等体积量的生理盐水(山东科伦药业有限公司，货号：b21050102b)。注射14天后每天观察大鼠关节足趾肿胀度，进行关节炎评分。
[0380]
具体为，选出胶原性关节炎模型建立成功的大鼠(关节炎评分加和≥4；0分：脚爪正常或无炎症；1分：趾关节肿胀或轻度发红；2分：趾关节和足跖发红并且肿胀；3分：踝关节以下的整个脚爪全部发红并且肿胀；4分：踝关节严重发红且肿胀，关节有变形迹象)，选出胶原性关节炎模型建立成功的大鼠进行随机分组。
[0381]
将实施例1制备的中药组合物颗粒不同剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)和甲氨蝶呤阳性药组(上海源叶生物科技有限公司，货号：sn1125ra18)第1天起按10ml/kg剂量灌胃给药1次，连续28天，末次给药30min后，腹腔注射10％水合氯醛3ml/kg麻醉大鼠取材检测(10％水合氯醛溶液，上海创赛科技有限公司，货号：pm22473)。
[0382]
检测指标：
①
给药前和给药过程中每周用足趾容积测量仪(成都泰盟软件有限公司，pv-200型)测量大鼠后双足体积，后双足体积肿胀的平均值作为最终的大鼠足肿胀体积。计算公式：肿胀度＝(第i天足容积-致炎前足容积)
÷
致炎前足容积
×
100％
②
实验终点将大鼠用10％水合氯醛0.35g/kg麻醉后，腹主动脉取血，分别按照il1β、il6、tnf-ɑ
elisa试剂盒说明书，利用酶标仪(spectramax m2e型)检测大鼠血清il1β、il6、tnf-ɑ
含量(tnf-a检测试剂盒，il-1β酶联免疫试剂盒，il6酶联免疫试剂盒武汉赛培生物科技有限公司，货号：202205，202203，202203)。
③
取大鼠一侧踝关节组织固定于10％福尔马林内，进行常规石蜡切片，he染色进行显微镜检查。病理评分标准如下：(1)滑膜细胞增殖评分:0＝无增殖；1＝轻微增殖，2～4层滑膜细胞；2＝中度增殖，4层以上滑膜细胞；3＝滑膜细胞过度增殖，侵蚀软骨和骨，关节间隙消失。(2)细胞侵蚀评分:0＝无侵蚀；1＝较少的1至2个细胞侵蚀灶；2＝2至5个的局部细胞侵蚀灶；3＝5个以上广泛细胞侵蚀到关节囊。(3)血管翳评分:0＝无改变；1＝两个部位出现血管翳；2＝四个部位出现血管翳，伴有软骨表面的侵蚀；3＝四个以上部位出现血管翳或二个部位出现大范围的血管翳。(4)炎症评分:0＝正常；1＝轻度炎症，出现1个聚集物或少量散在炎性细胞(t细胞、b细胞、巨噬细胞及浆细胞)浸润；2＝中度炎症，2个或2个以上的白细胞聚集物；3＝重度炎症，炎细胞大量浸润，大量白细胞聚集，分散浸润明显。(5)骨质侵蚀评分:0＝正常；1＝微量侵蚀，1～2个小的浅部位；2＝少量侵蚀，1～4个中等大小和深度部位；3＝中等侵蚀，5个以上部位，局部侵蚀到骨皮质；4＝重度侵蚀，多重损伤，局部或完全侵蚀到骨皮质；5＝广泛损伤，皮质穿透骨长度的25％以上。
[0383]
结果显示
[0384]
cia大鼠造模后，足趾肿胀度显著增加，血清炎症因子il1β、il6、tnf-ɑ
含量显著升高。与模型组相比，给予中药组合物能显著降低cia大鼠的踝关节足趾肿胀程度，并显著降低血清il1β、il6、tnf-ɑ
水平，提示中药组合物可以显著减轻类风湿关节炎大鼠的关节肿胀
程度、降低炎性细胞因子的表达，抑制炎症反应和组织损伤。结果见表33、表34。
[0385]
表33组合物对类风湿关节炎大鼠关节肿胀度的影响(％，x
±
sd)
[0386][0387]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0388]
表34组合物对类风湿关节炎大鼠血清炎症细胞因子的影响(n＝6，x
±
sd)
[0389][0390]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0391]
病理结果显示
[0392]
模型组大鼠的踝关节主要病理表现为：关节滑膜衬里层细胞明显增厚，滑膜组织呈绒毛状或指状肥大，滑膜内可见淋巴细胞、浆细胞以及巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润，并趋向和形成淋巴样小结或淋巴滤泡；滑膜血管增多，血管壁及其周围炎性细胞浸润明显；关节软骨表面有剥脱、缺损，尤其在滑膜与软骨和软骨下骨连接区，增生的滑膜细胞、聚集的炎性细胞、血管炎形成血管翳组织，侵蚀破坏相邻的关节软骨、软骨下骨和周围肌腱，甚至侵入骨组织内，关节间隙消失。不同剂量的药物显著减轻滑膜内炎性细胞浸润及血管炎，减轻关节软骨面损伤、软骨及软骨下骨质侵蚀。其中高剂量减轻程度与模型组病变程度相比，数据有显著性差异，具有统计意义。结果见图4，表35。
[0393]
表35组合物对类风湿关节炎大鼠踝关节组织病理评分的影响
[0394][0395]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0396]
实验例18中药组合物对佐剂诱导的类风湿关节炎大鼠的影响
[0397]
将体重60～80g雄性wistar大鼠72只(斯贝福生物技术有限公司，合格证号：
110324221104520838，动物生产许可证号为：scxk(京)2019-0010)适应性喂养1周后，使用弗氏完全佐剂(cfa)(美国sigma公司，货号：slcl4383)诱导进行造模。先将同一批号的卡介苗(北京生物制品研究所，批号2022-1公司，货号：202208)置80℃水浴(dk-8d型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司)中灭活1小时，与弗氏完全佐剂配成15g/l的乳剂，充分乳化。于大鼠足趾皮内注射cfa乳剂0.1ml/只致炎，14天后选明显足趾肿胀的大鼠进行随机分组。
[0398]
按照中药组合物颗粒不同剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)和甲氨蝶呤阳性药组，自第1天起按10ml/kg剂量灌胃给药1次，连续28天，末次给药30min后，腹腔注射10％水合氯醛3ml/kg麻醉大鼠取材检测。
[0399]
检测指标：
①
给药前和给药过程中每周用足趾容积测量仪测量大鼠后双足体积，后双足体积肿胀的平均值作为最终的大鼠足肿胀体积。
②
实验终点将大鼠用10％水合氯醛3ml/kg麻醉，腹主动脉取血。使用酶标仪(infinite m200pro酶标仪，tecan公司)按照il1β、il6、tnf-ɑ
elisa试剂盒说明书检测大鼠血清il1β、il6、tnf-ɑ
含量。
③
取大鼠一侧踝关节组织固定于10％福尔马林内，进行常规石蜡切片，he染色，由专业病理人员显微镜检查并评分。
[0400]
结果显示
[0401]
佐剂性关节炎大鼠造模后，足趾肿胀度显著增加，血清炎症因子il1β、il6、tnf-ɑ
含量显著升高，给予中药组合物能显著降低cia大鼠的踝关节足趾肿胀程度，显著降低血清il1β、il6、tnf-ɑ
水平，提示中药组合物可以显著减轻类风湿关节炎大鼠的关节肿胀程度、降低炎性细胞因子的表达，抑制炎症反应和组织损伤。结果见表36、表37。
[0402]
表36组合物对佐剂诱导类风湿关节炎大鼠关节肿胀度的影响(％，x
±
sd)
[0403][0404][0405]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0406]
表37组合物对佐剂诱导类风湿关节炎大鼠血清炎症因子的影响
[0407][0408]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0409]
病理结果显示
[0410]
模型组大鼠踝关节主要病理表现为：关节滑膜衬里层细胞明显增厚，滑膜组织呈绒毛状或指状肥大，滑膜内可见淋巴细胞、浆细胞，以及巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润，并趋向和形成淋巴样小结或淋巴滤泡；滑膜血管增多，血管壁及其周围炎性细胞浸润明显；关节软骨表面有剥脱、缺损，尤其在滑膜与软骨和软骨下骨连接区，增生的滑膜细胞、聚集的炎性细胞、血管炎形成血管翳组织，侵蚀破坏相邻的关节软骨、软骨下骨和周围肌腱，甚至侵入骨组织内，关节间隙消失。不同剂量的药物显著减轻滑膜内炎性细胞浸润及血管炎，减轻关节软骨面损伤、软骨及软骨下骨质侵蚀。其中高剂量减轻程度与模型组病变程度相比，数据有显著性差异，具有统计意义。结果见表38。
[0411]
表38中药组合物对佐剂诱导类风湿关节炎大鼠踝关节组织病理评分的影响
[0412][0413]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0414]
本技术的组合物能够减轻类风湿关节炎大鼠关节肿胀程度，抑制介导炎症反应和组织损伤的细胞因子的产生，改善类风湿关节炎滑膜增生、炎性浸润、血管翳形成和软骨损伤的组织病理学变化，显著延缓类风湿关节炎疾病进程。
[0415]
实验例19中药组合物对n49多肽诱导干燥综合征模型小鼠的影响
[0416]
抗原制备：将m3多肽n49(上海英骏生物技术有限公司)用0.01mol/l、ph为7.2的pbs溶液(南京森贝伽生物科技有限公司)稀释成200μg/ml溶液，再分别与同体积的完全弗氏佐剂(美国sigma公司)冰浴中充分乳化，即配制成为100μg/ml的m3多肽n49诱导制剂。
[0417]
造模：选取雌性，5周龄体重(16
±
2)g的balb/c小鼠60只，每组10只随机分为空白对照组、模型组、中药组合物颗粒(实施例1制备)不同剂量组(9.36g生药/kg、18.72g生药/kg、37.44g生药/kg)和羟基氯喹片阳性药组(5.23mg/kg)(上海中西药业有限公司，0.1g/片)。
[0418]
采用以上制备好的抗原多次免疫balb/c小鼠的方法制备干燥综合征动物模型。各组小鼠于免疫后第14天开始给予相应药物或等体积的生理盐水(上海碧云天生物技术有限公司)灌胃，每日1次，连续给药28天。
[0419]
检测指标
[0420]
①
唾液流率、饮水量的检测：待最后1次给药24小时后，测定每只小鼠24小时的唾液流率及饮水量，唾液流率＝唾液量/10min。
②
眼球取血1ml，用高速冷冻离心机(eppendorf，型号：by-20)离心后分离血清，吸取上层血清。采用酶联免疫吸附法用小鼠免疫球蛋白igg、igm elisa试剂盒(联科生物)检测血清中igg、igm的浓度，用酶标仪读取数值(perkinelmer p，型号：enspire)。
[0421]
结果显示
[0422]
模型组相较空白对照组的唾液流率下降，饮水量增加(p＜0.001)；中药组合物高
剂量与羟基氯喹组相较模型组唾液流率增加，饮水量下降(p《0.001，p《0.01)；中药组合物中剂量组相较模型组唾液流率增加，饮水量下降(p《0.001，p《0.01)。结果见表39。
[0423]
表39对干燥综合征小鼠唾液流率和饮水量的影响(n＝10)
[0424][0425]
注:与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，**p＜0.001
[0426]
elisa实验结果显示，模型组小鼠血清中免疫球蛋白igg、igm的水平升高，与正常小鼠相比(p＜0.001)。中药组合物高剂量组与羟基氯喹组相较模型组igg、igm的水平明显下降(p＜0.01)。结果见表40。
[0427]
表40对干燥综合征小鼠血清igg、igm水平的影响(n＝10)
[0428][0429][0430]
注:与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，**p＜0.001
[0431]
实验例20中药组合物对弗氏完全佐剂及抗原联合诱导干燥综合征大鼠模型的影响
[0432]
采用弗氏完全佐剂(上海碧云天生物技术有限公司)及sd大鼠颌下腺抗原联合诱导干燥综合征动物模型。
[0433]
首先，将sd大鼠在超净工作台上解剖取出颌下腺，剔除腺体包膜及结缔组织。称重后剪碎、匀浆、反复离心后，取上清液，用bca试剂盒测定蛋白抗原含量。将蛋白抗原与弗氏完全佐剂充分乳化，用bca微量蛋白检测试剂盒检测得到终浓度为0.75mg/ml的蛋白抗原(上海碧云天生物技术有限公司)。然后，挑选60只spf级，雄性体重180-200g sd大鼠，按体重随机分为6组，每组10只。6组分别为正常对照组，模型组，中药组合物低、中、高剂量组(6.48g生药/kg、12.96g生药/kg、25.92g生药/kg)和阳性对照羟基氯喹片组(3.62mg/kg)(上海中西药业有限公司，0.1g/片)。除正常对照组外，向每只大鼠两后足的足跖部皮下注射上述蛋白抗原，每只鼠注射0.2ml，正常对照组于相同部位注射等体积生理盐水，当大鼠出现饮水量增加、唾液分泌减少，表明造模成功。中药组合物低、中、高剂量组和阳性对照组
每天灌胃给药1次，连续给药30天。正常对照组与模型组以等体积生理盐水灌胃。
[0434]
检测血液流变学指标：30天后将大鼠解剖，股动脉取血5ml，取3ml采用血液黏度测试仪(lg-r-80b北京世帝科学仪器公司)测定各组大鼠血液流变学指标全血高切黏度、低切黏度和血浆黏度。再取大鼠剩余血液静置15min后，离心机3000r/min离心15min分离血清(eppendorf，型号：by-20)，采用白介素17(il-17)和白介素6(il-6)elisa试剂盒(南京川博生物技术有限公司)测定血清中il-6、il-17水平，用多功能酶酶标仪读取数值。
[0435]
结果显示
[0436]
模型组相较正常对照组全血黏度、血浆黏度升高(p＜0.001，p＜0.01)；中药组合物高剂量与羟基氯喹组相较模型组全血黏度降低(p《0.001，p《0.01)；中药组合物中剂量组相较模型组全血黏度(高切)、血浆黏度降低(p《0.01)。
[0437]
表41中药组合物对大鼠血液流变学的影响(n＝10)
[0438][0439]
注:与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，**p＜0.001
[0440]
elisa实验结果显示，模型组大鼠il-6、il-17的表达升高，与正常小鼠相比(p＜0.001)，中药组合物高、中剂量与羟基氯喹组较模型组大鼠il-6、il-17的表达明显下降(p＜0.01)。
[0441]
表42中药组合物对大鼠血清il-6、il-17水平的影响(n＝10)
[0442][0443]
注:与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，**p＜0.001
[0444]
本发明所提出的组合物能显著改善干燥性综合征大鼠血清中的炎性细胞因子指标，降低血粘度。能够延缓干燥性综合征病程，调节免疫，抑制炎症反应。
[0445]
实验例21对腹腔注射干酪乳杆菌细胞壁诱导的小鼠川崎病(kd)血管炎模型的影响
[0446]
取干酪乳杆菌(lcwe)菌粉适量(上海莼试生物技术有限公司，批号:
20210307002)，制备浓度为1mg/ml的lcwe溶液，选取spf级，体重18～22g雄性balb/c小鼠60只，经腹腔单次注射新配制的lcwe溶液0.5ml建立kd模型，注射后0-4天内观察小鼠行为，若小鼠出现进食饮水活动量减少、皮毛无光泽、鼻子和嘴巴区域轻微红肿及颤抖现象表明造模成功。
[0447]
将造模成功的50只小鼠随机分为模型组、实施例1制备的中药组合物低、中、高(9.36，18.72，37.44g生药/kg)剂量组和阿司匹林组(250mg/kg)。低、中、高剂量的中药组合物及阿司匹林(上海士锋生物科技有限公司，批号:202103004001，规格:0.5g/片)分别用生理盐水(石家庄四药有限公司，批号:2103193205)配制成0.936g/ml，1.872g/ml，3.744g/ml和0.025g/ml的混悬液。中药组合物和阿司匹林均按0.1ml/10g的体积灌胃给药。各组均连续给药7d，1次/天，另外的10只小鼠作为正常对照组和模型组均按0.1ml/10g的体积灌胃给予生理盐水。
[0448]
检测指标：
①
各组小鼠均于给药期间称量小鼠体重，观察小鼠毛发、饮食量等基本状况。
②
末次给药12小时后，摘取眼球取血，3000rpm离心10min(by-220a医用离心机，北京白洋医疗器械有限公司)，分离后取血清，使用血管内皮素(et)酶联免疫吸附(elisa)试剂盒(cayman chemical，批号:583151-480)、血管内皮生长因子(vegf)elisa试剂盒(武汉菲恩生物科技有限公司，批号:em0205)、白细胞介素-6(il-6)elisa试剂盒和肿瘤坏死因子-α(tnf-α)elisa试剂盒(invitrogen，批号:225266-025，批号:234889-005)和白细胞介素-1β(il-1β)elisa试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号:ml301814)，按试剂盒说明书分别检测血清tnf-α、il-1β、il-6、et、vegf含量，用酶标仪读取数值(enspire酶标仪，perkinelmer)。
[0449]
小鼠一般情况观察结果显示：与正常对照组相比，模型组小鼠出现颤抖、毛发稀疏、饮食活动减少等现象，体重显著下降(p《0.01)；与模型组相比，中药组合物低、中、高剂量组及阿司匹林组小鼠毛发稀疏、饮食活动减少等现象均有不同程度的改善，且体重显著上升(p《0.05，p《0.01)，中药组合物各剂量组的上述指标呈剂量依赖性。结果见表43。
[0450]
表43中药组合物对川崎病小鼠的体重影响(g，n＝10)
[0451][0452][0453]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0454]
各组小鼠血清中的炎性细胞因子tnf-α、il-1β、il-6含量检测结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠血清的tnf-α、il-1β、il-6含量显著升高(p《0.01)；与模型组相比，中药组合物低、中、高剂量组及阿司匹林组小鼠血清tnf-α、il-1β、il-6含量显著降低(p《0.01)，且中药组合物各剂量组均呈剂量依赖性。结果见表44。
[0455]
表44中药组合物对川崎病小鼠血清中的tnf-α、il-1β、il-6含量影响(pg/ml，n＝10)
[0456][0457]
注：与模型组相比，**p《0.01。
[0458]
各组小鼠血清中的血管内皮损伤标志物内皮素(et)、血管内皮生长因子(vegf)含量检测结果显示：与正常对照组相比，模型组小鼠血清et、vegf含量显著升高(p《0.01)；与模型组相比，中药组合物低、中、高剂量组及阿司匹林组小鼠血清et、vegf含量显著降低(p《0.01)，且中药组合物各剂量组均呈剂量依赖性。见表45。
[0459]
表45中药组合物对川崎病小鼠血清血管内皮损伤标志物et、vegf含量影响(pg/ml，n＝10)
[0460][0461]
注：与模型组相比，**p《0.01。
[0462]
实验例22中药组合物对小鼠自身免疫性葡萄膜视网膜血管炎模型的影响
[0463]
选取60只spf级雄性c57bl/6小鼠，8～10周龄，体重(20
±
5)g。将小鼠适应性饲养1周后，随机分为6组，每组10只，分别是正常对照组、模型组、阳性药组、中药组合物低剂量组、中剂量组和高剂量组。
[0464]
待小鼠活动稳定后，除正常对照组外，其余组小鼠用盐酸塞拉嗪(长沙拜特生物科技研究所公司，批号：20210102)注射麻醉，将100μl的irbp溶液(5mg/ml)(美国med chem express公司，批号：298202-25-2)与100μl含5mg/ml结核分枝杆菌的完全弗氏佐剂(美国sigma公司，批号：9007812)充分混匀成白色乳剂后，再用以上乳剂分别在小鼠的头颈部、双侧大腿根部、尾根部行皮下注射；经主动免疫之后，小鼠腹腔注射100μl百日咳毒素(北京博蕾德科技发展有限公司，批号：211242a1)，作为免疫佐剂，以增强免疫效果。对照组小鼠给予等体积生理盐水(石家庄四药有限公司，批号：2103193205)皮下注射，以及等体积生理盐水腹腔注射。
[0465]
造模24小时后，各组小鼠灌胃给药，频率为每日1次，灌胃体积均为0.02ml/g。其中，正常对照组、模型组组灌胃0.02ml/g生理盐水；中药组合物低、中、高剂量组分别灌胃9.36，18.72，37.44g生药/kg，阳性药组给予腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批号0820221)，剂量1.3mg/kg，1次/日。21天后，各组摘取小鼠眼球取血，3000rpm，离心10min(by-220a医用离心机，北京白洋医疗器械有限公司)，分离后取上清液，
于-20℃冰箱保存备用。按照小鼠白介素(il-1β)(上海酶联生物科技有限公司，批号:ml301814)、小鼠细胞间粘附分子-1(icam-1)酶联免疫吸附测定试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司，批号：ek0371)说明书进行操作，采用酶标仪(enspire酶标仪，美国perkinelmer公司)于450nm处进行吸光度测定，绘制标准曲线，测定小鼠血清中的il－1β和icam-1水平。
[0466]
各组小鼠血清il-1β和icam-1含量检测结果显示：与正常对照组相比，模型组小鼠血清il-1β和icam-1含量显著升高(p《0.01)；与模型组相比，中药组合物低、中、高剂量组及阳性药组小鼠血清il-1β和icam-1含量显著降低(p《0.01)，且中药组合物各剂量组呈剂量依赖性。见表46。
[0467]
表46中药组合物对视网膜血管炎小鼠血清中il-1β、icam-1含量的影响(pg/ml，n＝10)
[0468][0469]
注：与模型组相比，**p《0.01。
[0470]
组合物能显著降低炎症刺激引起的血管损伤，来缓解川崎病小鼠血管炎性损伤。能显著降低兔视网膜血管炎的炎性反应，可以通过降低视网膜血管区icam-1的表达作用减少炎性细胞黏附。
[0471]
实验例23中药组合物对卵蛋白致过敏性紫癜大鼠血清指标因子的影响
[0472]
配制制备过敏性紫癜大鼠模型所需的药物
[0473]
分别取干姜(亳州市万珍中药饮片厂)、荜茇、胡椒(亳州市万珍中药饮片厂)以1:1:1的比例加入16倍水，武火煮沸，文火煮2小时，过滤，药渣再以16倍水煮2小时，合并滤液，浓缩至0.125g/ml，置4℃冰箱储存备用；
[0474]
配制卵白蛋白与弗氏完全佐剂乳液
[0475]
配制100ml乳液,称取1g卵白蛋白(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)完全溶于50ml生理盐水(辰欣药业股份有限公司)后，加入50ml弗氏完全佐剂(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)，搅拌至乳液滴水中5min不散开即配制成功，卵白蛋白乳液浓度为10mg/ml；
[0476]
配制0.3％的卵白蛋白生理盐水溶液：称取0.21g卵白蛋白完全溶于70ml生理盐水，搅拌均匀，即得到浓度为0.3％的卵白蛋白生理盐水溶液。
[0477]
制备受试药和阳性药
[0478]
称取504.06g实施例1制备的组合物颗粒溶于400ml的蒸馏水中，配制成1.260g/ml的组合物颗粒高剂量溶液，称取252.04的组合物颗粒溶于400ml的蒸馏水中，配制成0.630g/ml的组合物颗粒中剂量溶液；称取126.03g的组合物颗粒溶于400ml的蒸馏水中，配制成0.315g/ml的组合物颗粒低剂量溶液。
[0479]
称取0.0220g的醋酸地塞米松片(浙江仙琚制药股份有限公司，规格：0.75mg/片)，充分研磨后溶于400ml的蒸馏水中，配制成0.055mg/ml的地塞米松水溶液。
[0480]
过敏性紫癜大鼠模型造模、给药和生物样本采集
[0481]
将60只spf级3周龄，体重60-80g的雄性大鼠适应性喂养1周后，按体重随机分为6组，6组分别为正常对照组，模型对照组，中药组合物低、中、高剂量组(3.15g颗粒/kg、6.30g颗粒/kg、12.60g颗粒/kg)和阳性对照组(地塞米松0.55mg/kg)。每组10只。造模大鼠灌胃干姜-荜茇-胡椒水煎液0.15g/kg，每日1次，正常对照组大鼠灌胃同等体积的生理盐水(辰欣药业股份有限公司)，连续灌胃3周。从第4周的第1天起，造模大鼠腹腔注射卵白蛋白与弗氏完全佐剂混合乳液(10mg/kg)，正常对照组大鼠腹腔注射同等体积的生理盐水，每周1次，连续注射3周。第3次腹腔注射上述卵蛋白乳液后间隔3天，将造模大鼠背部皮肤脱毛，分5点皮内注射1ml 0.3％的卵白蛋白生理盐水溶液，正常对照组注射生理盐水。从第6周开始，各给药组灌胃相应剂量的药物，连续9天，正常对照、模型对照组灌胃同等体积的生理盐水。第7周第1天下午5点，造模组大鼠尾静脉注射0.25ml卵白蛋白生理盐水溶液(10mg/kg)建立模型。末次给药后，禁食不禁水12小时，10％水合氯醛(上海源叶生物科技有限公司)腹腔注射麻醉大鼠，随后腹主动脉取血，静置0.5小时以上，用医用离心机(北京白洋医疗器械有限公司，型号：by-220a)3500rpm离心10min，吸取血清于-80℃冰箱保存待用。
[0482]
使用大鼠iga、ifn-γelisa试剂盒(abcam货号：ab157735、ab239425)；大鼠cic、il-6elisa试剂盒(武汉华美生物工程有限公司货号：csb-e17938r、csb-e04640r)检测血清中iga、cic、ifn-γ、il-6含量，用酶标仪读取数值(珀金埃尔默股份有限公司，型号：enspire)。
[0483]
结果显示：模型对照组免疫球蛋白a(iga)、循环免疫复合物(cic)、白介素6(il-6)较正常组明显升高(p《0.001)，干扰素(ifn-γ)较正常组明显降低(p《0.01)，表明造模成功。给予中药组合物能显著延缓过敏性紫癜病程，与模型对照组相比，中药组合物低、中、高剂量组iga、cic、ifn-γ、il-6较模型组相比均有明显改善(p《0.05，p《0.01，p《0.001)，地塞米松组iga、cic、ifn-γ、il-6较模型对照组相比也有一定程度的改善(p《0.05，p《0.01，p《0.001)。结果见表47。
[0484]
表47组合物对过敏性紫癜大鼠血清指标因子的影响
[0485][0486][0487]
注：与空白对照组相比，
###
p《0.001，；与模型组相比，
*
p《0.05，
**
p《0.01，
***
p《0.001。
[0488]
实验例24对麦胶蛋白过敏性紫癜药物小鼠模型血清细胞因子等指标的影响
[0489]
配制制备过敏性紫癜药物小鼠模型所需的药物
[0490]
用移液枪准确量取360μl的印度墨水(北京百诺威生物科技有限公司)溶于90ml的生理盐水(辰欣药业股份有限公司)中，配制成4mg/ml的印度墨水生理盐水溶液。
[0491]
用移液枪量取2ml的hcl溶液(6mol/l)(南京化学试剂股份有限公司)，溶于2000ml的蒸馏水中，配制成6mmol/l的酸化水；精密称取1.5g的麦胶蛋白(北京百诺威生物科技有限公司)，充分研磨后溶于1500ml酸化水中，配制成含麦胶蛋白的酸化水溶液，室温促溶10日后，置于4℃保存；
[0492]
用移液枪量取50μl的hcl溶液(6mol/l)(南京化学试剂股份有限公司)，溶于60ml的蒸馏水中，配制成5mmol/l的酸化水，置于4℃保存。
[0493]
制备受试药和阳性药
[0494]
称取546.04g的实施例1制备的组合物颗粒溶于300ml的蒸馏水中，配制成1.820g/ml的组合物颗粒高剂量溶液，称取273.01g的组合物颗粒溶于300ml的蒸馏水中，配制成0.910g/ml的组合物颗粒中剂量溶液；称取136.54g的组合物颗粒溶于300ml的蒸馏水中，配制成0.455g/ml的组合物颗粒低剂量溶液；称取0.0189g的地塞米松片，充分研磨后溶于300ml的蒸馏水中，配制成0.063mg/ml的地塞米松水溶液。
[0495]
过敏性紫癜小鼠模型造模、给药和生物样本采集：
[0496]
采用印度墨水和麦胶蛋白(北京百诺威生物科技有限公司)构建实验性小鼠过敏性紫癜模型，选取spf级体重18-22g的icr小鼠，雌雄各半共60只，按体重随机分为6组，6组分别为正常对照组，模型对照组，中药组合物低、中、高剂量组(4.55g颗粒/kg、9.10g颗粒/kg、18.2g颗粒/kg)和阳性对照组(地塞米松0.63mg/kg)，每组10只。具体地，造模前3周，除正常组外，其余各组尾静脉注射4mg/ml的印度墨水生理盐水溶液0.2ml/只。每周1次，连续注射3周，正常组注射等体积生理盐水。从第4周开始，除正常组外，其余各组隔日1次灌胃含麦胶蛋白的酸化水溶液0.5ml/只，连续灌胃至第14周的周末，正常组灌胃等体积的酸化水。灌胃最后3日，除正常组外，其余各组尾静脉注射含麦胶蛋白的pbs溶液(1mg麦胶蛋白加入5mmol/l hcl酸化的0.01mmol/l ph7.4的pbs中)，0.2ml/20g，1次/日，连续3日，正常组尾静脉注射等量5mmol/l hcl酸化的0.01mmol/l的pbs溶液(北京索莱宝科技有限公司)。末次给药后，禁食不禁水12小时，眼球取血，静置0.5小时以上，随后3500rpm离心10min，吸取血清于-80℃冰箱保存。
[0497]
使用小鼠cic elisa试剂盒(武汉华美生物工程有限公司货号：csb-e16553m)和小鼠bun、cr试剂盒(南京建成生物工程研究所货号：c013-2-1、c011-2-1)检测血清中cic、bun、cr的含量。
[0498]
结果显示：麦胶蛋白造模后，小鼠血清中cic、bun、cr含量升高，提示过敏性紫癜小鼠炎症加深，肾脏功能受损。给予中药组合物能显著延缓hsp病程，与模型组相比，过敏性紫癜小鼠cic、bun、cr含量下降，提示中药组合物对过敏性紫癜有一定的治疗作用。结果见表48。
[0499]
表48组合物对麦胶蛋白所致过敏性紫癜小鼠血清因子的影响
[0500][0501]
注：与空白对照组相比，
###
p《0.001；与模型组相比，
*
p《0.05，
**
p《0.01，
***
p《0.001。
[0502]
本技术所提出的组合物能显著延缓过敏性紫癜病程，改善炎症反应及肾脏功能。
[0503]
本发明的上述实施例仅是为了能够清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

技术特征：
1.一种中药组合物在制备用于慢性阻塞性肺疾病，上呼吸道感染，自身免疫性肝炎，溃疡性结肠炎，慢性肾炎，类风湿关节炎，干燥综合征或血管炎药物中的应用，其特征在于，该中药组合物包括：厚朴1～100份、焦槟榔1～100份、煨草果1～100份、麻黄1～100份、苦杏仁1～100份、羌活1～100份、生姜1～100份、广藿香1～100份、佩兰1～100份、苍术1～100份、茯苓1～160份、白术1～120份、石膏1～100份、焦山楂1～100份、焦六神曲1～100份、焦麦芽1～100份、地龙1～100份、徐长卿1～100份、绵马贯众1～100份、葶苈子1～100份。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，该中药组合物包括：厚朴10～80份、焦槟榔10～80份、煨草果10～80份、麻黄10～60份、苦杏仁10～60份、羌活10～80份、生姜10～60份、广藿香10～80份、佩兰10～60份、苍术10～80份、茯苓10～160份、白术10～120份、石膏10～80份、焦山楂10～50份、焦六神曲10～80份、焦麦芽10～60份、地龙10～80份、徐长卿10～80份、绵马贯众10～60份、葶苈子10～80份。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物包括：厚朴30～50份、焦槟榔20～30份、煨草果30～50份、麻黄20～30份、苦杏仁20～30份、羌活30～50份、生姜30～50份、广藿香30～50份、佩兰20～30份、苍术30～50份、茯苓120～150份、白术80～100份、石膏30～50份、焦山楂20～30份、焦六神曲30～50份、焦麦芽20～30份、地龙30～50份、徐长卿30～50份、绵马贯众20～30份、葶苈子30～50份。4.根据权利要1所述应用，其特征在于，所述中药组合物包括：厚朴50份、焦槟榔30份、煨草果30份、麻黄20份、苦杏仁30份、羌活50份、生姜50份、广藿香50份、佩兰30份、苍术50份、茯苓150份、白术100份、石膏50份、焦山楂30份、焦六神曲30份、焦麦芽30份、地龙50份、徐长卿50份、绵马贯众30份、葶苈子50份。5.如权利要求1～4任一所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包含口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药制剂。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述慢性阻塞性肺疾病药物包括汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、凝胶剂、喷雾剂、注射液。7.根据权利要求1～4任一所述的应用，其特征在于，所述中药组合物制备方法包括：取厚朴50份、焦槟榔30份、煨草果30份、麻黄20份、苦杏仁30份、羌活50份、生姜50份、广藿香50份、佩兰30份、苍术50份、茯苓150份、白术100份、石膏50份、焦山楂30份、焦六神曲30份、焦麦芽30份、地龙50份、徐长卿50份、绵马贯众30份、葶苈子50份，加入水回流提取2次，第一次加入6倍水，提取1.5h，第二次加入4倍水，提取1.0h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15，离心滤过，滤液真空干燥，喷雾干燥粉碎，得中间体组合物。8.根据权利要求1～4任一所述的应用，其特征在于，所述治疗慢性阻塞性肺疾病药物选自颗粒剂，所述颗粒剂还包括三氯蔗糖和糊精。9.一种中药组合物在制备用于肺气肿或哮喘，提高免疫力，支气管炎或咽炎，或过敏性紫癜药物中的应用，其特征在于，以重量比计，所述中药组合物包括：厚朴1～100份、焦槟榔1～100份、煨草果1～100份、麻黄1～100份、苦杏仁1～100份、羌活1～100份、生姜1～100份、广藿香1～100份、佩兰1～100份、苍术1～100份、茯苓1～160份、白术1～120份、石膏1～100份、焦山楂1～100份、焦六神曲1～100份、焦麦芽1～100份、地龙1～100份、徐长卿1～100份、绵马贯众1～100份、葶苈子1～100份。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述中药组合物包括：厚朴30～50份、焦
槟榔20～30份、煨草果30～50份、麻黄20～30份、苦杏仁20～30份、羌活30～50份、生姜30～50份、广藿香30～50份、佩兰20～30份、苍术30～50份、茯苓120～150份、白术80～100份、石膏30～50份、焦山楂20～30份、焦六神曲30～50份、焦麦芽20～30份、地龙30～50份、徐长卿30～50份、绵马贯众20～30份、葶苈子30～50份。

技术总结
本发明涉及一种中药组合物在用于慢性阻塞性肺疾病药物中的应用，其特征在于，该中药组合物包括：厚朴1～100份、焦槟榔1～100份、煨草果1～100份、麻黄1～100份、苦杏仁1～100份、羌活1～100份、生姜1～100份、广藿香1～100份、佩兰1～100份、苍术1～100份、茯苓1～160份、白术1～120份、石膏1～100份、焦山楂1～100份、焦六神曲1～100份、焦麦芽1～100份、地龙1～100份、徐长卿1～100份、绵马贯众1～100份、葶苈子1～100份。1～100份。1～100份。


技术研发人员：肖伟 杨昊 陈颖 张弟 王超 雷易朋 王妍鳕 王东帆 陶晓倩 柯志鹏 苏真真 刘婧 曹玉梅 李志强 刘莉娜 李良 吕耀中 张新庄 章晨峰 王振中 曹亮
受保护的技术使用者：江苏康缘药业股份有限公司
技术研发日：2023.04.28
技术公布日：2023/8/13