一种羟基频哪酮视黄酸酯（HPR）抗衰组合物的制作方法

一种羟基频哪酮视黄酸酯(hpr)抗衰组合物
技术领域
1.本发明涉及化妆品技术领域，具体而言，涉及一种能够舒缓hpr紫外光损伤及炎症，实现hpr白天适用的产品，尤其涉及一种全天可用的羟基频哪酮视黄酸酯(hpr)抗衰组合物。


背景技术：

2.视黄醇是天然维生素a，与其衍生物诸如视黄酸、视黄醛及各类视黄酯等被统称为“类视黄醇(retinoids)”家族，包括：视黄醛、视黄酸(即“维a酸”或“维甲酸”)、视黄酯类(例如视黄醇棕榈酸酯、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇视黄酸酯等)、β-胡萝卜素等。它们在诸多生理活动中都有重要作用，例如视觉、生殖、细胞生命活动等。其中，视黄醇是第一个美国食品药品监督管理局(fda)认可的抗衰成分，作用机制明确。类视黄醇(retinoids)”家族作用主要包括通过促进角质上皮细胞的分化、增殖，使表皮层增厚；通过促进真皮成纤维细胞表达胶原蛋白与弹性纤维达到紧致、抗皱功效等，但也因其分子结构均存在多个碳碳双键如图1)以至于产生了诸如光敏性、光毒性、热氧温度的不稳定性等不良反应限制了其在美容护肤领域的应用。
3.人类皮肤每天暴露于太阳紫外线(uv)辐射。紫外线诱导的皮肤炎症反应导致过早的皮肤老化(光老化)。前列腺素e2(pge2)是紫外线暴露后由皮肤表皮角质细胞产生的重要炎性介质。pge2合成的增加与皮肤炎症相关，并且导致皮肤发红、肿胀和疼痛，这是过量的紫外线暴露造成的皮肤损伤的标志。另一方面，因为肿瘤坏死因子(tnf-α)促炎症细胞因子引起核因子激活的b细胞的κ-轻链增强(nf-k
b)信号通路的激发，还可以促进细胞产生各种炎症因子，白介素-1(il-1α)，白介素-6(il-6)和白介素-8(il-8)，进而引发皮肤炎症。白细胞产生的白细胞介素il-1α和il-8增加可加剧破化表皮屏障，表皮经水损失增加，tnf-α等炎症因子得活跃可引起发热感。
4.视黄醇家族光毒性、光敏性，是指类视黄醇暴露在自然光尤其紫外光uvb条件下的光敏性。光敏性反应主要包括光异构、光聚合、光氧化和光降解。光敏性中异构化会导致细胞损伤；光降解导致相应功效性下降；光氧化导致活性氧簇(ros)产生从而引起炎症反应及由光能量造成的皮肤损伤(光损伤)。因此视黄醇类被引入化妆品或皮肤科组合物中用于局部应用皮肤时，由于光、氧、金属离子、氧化剂、水的作用，以及特别是暴露于太阳紫外线(uv)辐射时，视黄醇的光异构化、降解等导致各种不必要的副作用，如皮肤红斑或发红、皮肤干燥、皮肤脱皮或剥落，或皮肤刺激，包括但不限于灼烧、刺痛、瘙痒或刺痛等限制了其在美容护肤领域的应用，目前暂无针对性的明确解决方案。
5.羟基频哪酮视黄酸酯(hpr)是va的一种衍生物，具有抗皱紧致的功效，在热氧稳定性方面具有强的优越性，是有效的抗衰成分，但其由于光敏性问题，其白天适用方面仍存在一定的风险性。因此急需找到舒缓hpr紫外光损伤及炎症的方法，从而实现hpr“白天适用，白天更低风险可用”，拓宽含hpr产品在美容护肤抗衰领域中的市场应用潜能。


技术实现要素：

6.为解决上述问题，本发明提供了一种含有hpr的全天可用的抗衰组合物，通过在含有hpr的护肤品中添加e-agse，显著缓解单独hpr暴露在自然光或紫外光时所引起的损伤/红斑和/或皮肤炎症，有效实现含hpr产品“白天适用”，拓宽其在抗衰领域中的市场应用潜能；证明了e-agse在舒缓hpr紫外光损伤及炎症方面的应用，再经机理研究，证明e-agse在舒缓hpr紫外光损伤和炎症中可提高组织活力，抑制sunburn cells的生成，抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达；采用dha和e-agse的组合物用于舒缓hpr紫外光损伤及炎症时，还具有明显的协同增效作用。
7.一方面，本发明提供了一种抗衰组合物，其特征在于，所述抗衰组合物包括e-agse与hpr。
8.本发明所述的e-agse为一种包裹的活性葡萄籽提取物，该葡萄籽提取物制作方法按照美国授权专利us11/890278的实施例8的提取方法，先选取没有任何杂质的葡萄籽，通过在室温下用600毫升100％乙醇提取18小时，乙醇提取物通过whatman滤纸过滤，然后通过旋转蒸发仪去除乙醇，得到浓缩的初级提取物，初级提取物重复上述操作，再经真空干燥箱干燥，被进一步浓缩为最终提取物，研磨得到葡萄籽提取物，经环糊精、卵磷脂双包裹后得到e-agse(cn112043632a)。
9.本发明经研究证明，相比于单独使用hpr产品，添加e-agse后可明显舒缓hpr在紫外光uvb辐射下的损伤以及炎症，减少或减轻hpr产品中出现的副作用，从而有效实现“白天适用”，拓宽含hpr产品在抗衰领域中市场应用潜能。
10.本发明中的“白天适用”、“全天可用”、“白天更低风险可用”、“白天更好使用”指的是降低白天使用hpr的风险性，拓宽适用人群范围。
11.进一步地，所述e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系为5:1～20:1。
12.另一方面，本发明提供了e-agse用于制备白天适用的含hpr护肤品的用途。
13.进一步地，所述e-agse通过提高组织活力，或抑制sunburn cells的生成，或抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达，来舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症，实现hpr白天适用。
14.进一步地，所述e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系为5:1～20:1。
15.再一方面，本发明提供了e-agse用于制备舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症制剂的用途。
16.再一方面，本发明提供了e-agse用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的提高组织活力制剂的用途。
17.再一方面，本发明提供了e-agse用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制sunburn cells生成制剂的用途。
18.再一方面，本发明提供了e-agse用于制备舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2表达制剂的用途。
19.再一方面，本发明提供了一种抗衰组合物，所述抗衰组合物包括dha与hpr。
20.二十二碳六烯酸(dha)，是人体所必需的一种多不饱和脂肪酸，在鱼油中含量较多。分子式为c
22h32
o2，是一种含有22个碳原子和6个双键的直链不饱和脂肪酸，具有辅助脑
细胞发育、抗衰老、改善血液循环、降血脂等功效。
21.本发明经研究证明，相比于单独使用hpr产品，添加dha后可明显舒缓hpr在紫外光uvb辐射下的损伤以及炎症，减少或减轻hpr产品中出现的副作用，从而有效实现“白天适用”，拓宽含hpr产品在抗衰领域中市场应用潜能。
22.本发明提供的dha，可以与hpr共同配制成组合物用于制备抗衰功效的护肤品。包含dha与hpr的组合物可以被包含或被并入到所有类型的载体和载剂中。载体或载剂可以是药学上或皮肤病学上可接受的载体和载剂。载体和载剂的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅化合物、硅酮化合物和蜡。变体和其它合适的载体对于熟练技术人员是显而易见的，并且适用于本发明。在某些方面，可以选择化合物、成分和试剂的浓度和组合，使得组合物是化学相容的并且不会形成从成品中沉淀出来的复合物。
23.进一步地，所述dha含量为0.01～1％，hpr含量为0.01～1％，且dha与hpr的比例关系为1:1～10:1。
24.进一步地，所述抗衰组合物还包括e-agse。
25.研究证明，dha中进一步添加e-agse，能更有效地舒缓hpr在紫外光uvb辐射下的损伤以及炎症，减少或减轻hpr产品中出现的副作用，从而有效实现“白天适用”，其中dha和e-agse在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症方面具有明显的协同增效作用。
26.进一步地，所述dha含量为0.01～1％，e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且dha、e-agse与hpr的比例关系在(1～10):(5～20):(1～10)。
27.再一方面，本发明提供了dha用于制备白天适用的含hpr护肤品的用途。
28.进一步地，所述dha通过提高组织活力，或抑制sunburn cells(日晒伤细胞)的生成，或抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达，来舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症，实现hpr白天适用。
29.进一步地，所述dha含量为0.01～1％，hpr含量为0.01～1％，且dha与hpr的比例关系为1:1～10:1。
30.再一方面，本发明提供了dha用于制备舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症制剂的用途。
31.再一方面，本发明提供了dha用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的提高组织活力制剂的用途。
32.再一方面，本发明提供了dha用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制sunburn cells生成制剂的用途。
33.再一方面，本发明提供了dha用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2表达制剂的用途。
34.再一方面，本发明提供了一种组合物用于制备白天适用的含hpr护肤品的用途，所述组合物包括dha和e-agse。
35.进一步地，所述组合物通过提高组织活力，或抑制sunburn cells的生成，或抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达，来舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症，实现hpr白天适用。
36.进一步地，所述dha含量为0.01～1％，e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且dha、e-agse与hpr的比例关系在(1～10):(5～20):(1～10)。
37.进一步地，所述组合物通过提高组织活力，或抑制sunburn cells的生成，或抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达，来舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症，实现hpr白天适用。
38.再一方面，本发明提供了一种组合物用于制备舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症制剂的用途，所述组合物包括dha和e-agse。
39.再一方面，本发明提供了一种组合物用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的提高组织活力制剂的用途，所述组合物包括dha和e-agse。
40.再一方面，本发明提供了一种组合物用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制sunburn cells生成制剂的用途，所述组合物包括dha和e-agse。
41.再一方面，本发明提供了一种组合物用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2表达制剂的用途，所述组合物包括dha和e-agse。
42.本发明提供的活性成分或组合物可用于制备抗衰功效的护肤品，在不损本发明效果的范围内，可以根据需要而适宜配合在化妆品、准药品领域中通常配合的各种成分，例如粉末成分、保湿剂、乳化剂，增稠剂、金属离子掩蔽剂、色素、ph调节剂、皮肤营养剂、维生素、防腐剂、抗氧化剂、抗氧化助剂、香料等。
43.本发明所述的护肤产品包括但不限于美容护肤抗衰功效化妆品领域的爽肤水、面膜、眼霜、精华、乳液、膏霜、冻干粉。
44.综上，本发明的有益效果为：
45.1、通过采用e-agse和hpr共同组合使用，实现了hpr白天适用；
46.2、提供了e-agse在舒缓hpr紫外光损伤及炎症，实现hpr白天适用方面的应用；
47.3、提供了e-agse在舒缓hpr紫外光损伤和炎症中可提高组织活力，抑制sunburn cells的生成，抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达方面的应用；
48.4、提供了e-agse和e-agse的组合物在舒缓hpr紫外光损伤及炎症，实现hpr白天适用方面的协同增效作用；
49.5、提供了e-agse和dha的组合物在舒缓hpr紫外光损伤和炎症中可提高组织活力，抑制sunburn cells的生成，抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达方面的协同增效作用。
附图说明
50.图1为各类视黄醇类的分子结构式示意图；
51.图2为实施例6中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对组织活力的影响示意图；
52.图3为实施例7中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对组织形态影响测试结果图；
53.图4为实施例7中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对sunburn cells影响测试结果图；
54.图5为实施例8中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对抑制il-1α表达的测试结果示意图；
55.图6为实施例8中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对抑制il-8表达的测试结果示意图；
56.图7为实施例8中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对抑制tnf-α表达的测试结果示意图；
57.图8为实施例8中不同活性成分在uvb刺激3d表皮皮肤模型中对抑制pge2表达的测
试结果示意图。
具体实施方式
58.下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。
59.以下实施例中采用的hpr属于视黄酸的一种酯类衍生物，具有抗皱紧致的功效，购自美国格兰特化学公司；
60.dha购自武汉中科光谷生物科技有限公司。
61.e-agse为一种包裹的活性葡萄籽提取物，所述的葡萄籽提取物制作方法按照美国授权专利us11/890278的实施例8的提取方法，先选取没有任何杂质的葡萄籽，通过在室温下用600毫升100％乙醇提取18小时，乙醇提取物通过whatman滤纸过滤，然后通过旋转蒸发仪去除乙醇，得到浓缩的初级提取物，初级提取物重复上述操作，再经真空干燥箱干燥，被进一步浓缩为最终提取物，研磨得到葡萄籽提取物，再经环糊精、卵磷脂双包裹后得到e-agse(cn112043632a)，包裹的方法为：取葡萄籽提取物5g加到50g羟丙基-β-环糊精和50ml水中，超声并连续搅拌40h以上，制得包裹体s1，然后将制得的s1加到50g大豆卵磷脂、10g胆甾醇、10g山梨醇酯-80和330ml水中，再利用高压均质机进行微粒化、均匀化，制得包裹完全，颜色很浅，粒径均一的1％葡萄籽提取物双包裹体。
62.实施例1 dha和hpr制备抗衰组合物
63.本实施例采用0.1ml的dha、0.1ml的hpr与99.8ml pbs缓冲液进行混合，搅拌均匀，制得含有0.1％的dha和0.1％的hpr的抗衰组合物。
64.本实施例制备的由dha与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物，可用于制备抗衰功效的护肤品，该护肤品白天适用，对皮肤没有明显的副作用，且具有非常好的抗衰功效。
65.研究证明，在dha含量为0.01～1％，hpr含量为0.01～1％，且dha与hpr的比例关系在1:1～10:1的范围内，dha与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物都可以实现白天适用。
66.实施例2e-agse和hpr制备抗衰组合物
67.本实施例采用1ml的e-agse、0.1ml的hpr与98.9ml pbs缓冲液进行混合，搅拌均匀，制得含有1％的e-agse和0.1％的hpr的抗衰组合物。
68.本实施例制备的由e-agse与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物，可用于制备抗衰功效的护肤品，该护肤品白天适用，对皮肤没有明显的副作用，且具有非常好的抗衰功效。
69.研究证明，在e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系在5:1～20:1的范围内，e-agse与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物都可以实现白天适用。
70.实施例3青蒿油和hpr制备抗衰组合物
71.本实施例采用1ml的青蒿油、0.1ml的hpr与98.9ml pbs缓冲液进行混合，搅拌均匀，制得含有1％的青蒿油和0.1％的hpr的抗衰组合物。
72.实验证明，本实施例制备的由青蒿油与hpr两种活性成分组成的组合物，用于皮肤抗衰时，在紫外光下皮肤会产生明显红斑，存在皮肤损伤和皮肤炎症，对皮肤具有明显副作用，无法实现白天适用。
73.实施例4蛋黄油和hpr制备抗衰组合物
74.本实施例采用1ml的蛋黄油、0.1ml的hpr与98.9ml pbs缓冲液进行混合，搅拌均匀，制得含有1％的蛋黄油和0.1％的hpr的抗衰组合物。
75.实验证明，本实施例制备的由蛋黄油与hpr两种活性成分组成的组合物，用于皮肤抗衰时，在紫外光下皮肤会产生明显红斑，存在皮肤损伤和皮肤炎症，对皮肤具有明显副作用，无法实现白天适用。
76.实施例5 dha、e-agse和hpr制备抗衰组合物
77.本实施例采用0.1ml的dha、1ml的e-agse、0.1ml的hpr与98.8ml pbs缓冲液进行混合，搅拌均匀，制得抗衰组合物。
78.本实施例制备的由dha、e-agse与hpr三种活性成分组成的抗衰组合物，可用于制备抗衰功效的护肤品，该护肤品白天适用，对皮肤没有明显的副作用，且具有非常好的抗衰功效。
79.研究证明，在dha含量为0.01～1％，e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且dha、e-agse与hpr的比例关系在(1～10):(5～20):(1～10)的范围内，dha、e-agse与hpr三种活性成分组成的抗衰组合物都可以实现白天适用。
80.实施例6不同活性成分在舒缓hpr紫外光损伤中提高组织活力的作用
81.本实施例采用uvb刺激3d表皮皮肤模型(广东博溪生物科技有限公司)，构建体外皮肤损伤模型进行测试，分别采用实施例1～5制备的5种抗衰组合物，并以单独添加活性物成分hpr作为阳性对照；通过检测各组活性成分作用后的皮肤模型，从组织活力指标定性定量分析该6组物质对hpr在紫外光下的损伤及细胞耐受性，评价该待测样品对hpr在紫外光uvb辐射后的舒缓功效。不作任何处理作为空白对照。
82.实验过程：先模型给药，在对需要进行uvb辐照的组别进行uvb辐照(辐照剂量为600mj/cm2)，辐照后，将模型置于co2培养箱(37℃、5％co2)中继续孵育24h。孵育结束后进行组织活力测试，组织活力测试方法为先经24孔板，并每孔加入0.3mlmtt工作液，co2培养箱(37℃、5％co2)中进行mtt孵育，再经异丙醇浸提，酶标仪读取吸光度(od)值，组织活力(％)＝(给药孔od-调零孔od)/(对照孔od-调零孔od)*100％。结果表示为mean
±
sd。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。p《0.05认为具有显著差异，p《0.01认为具有极显著差异。组织活力测试结果如表1和图2所示。
83.表1、组织活力测试结果
[0084][0085]
与hpr组相比，显著性以
δ
表示，p-value＜0.05表示为
δ
，p-value＜0.01表示为
δδ
。
[0086]
由表1和图2可以看出，在hpr中添加dha、或e-agse，制备的抗衰组合物，都能有效提升组织活力；而当在hpr中添加向日葵籽油、或杏仁油时，虽然日葵籽油、杏仁油也都具有一定的抗氧化、消炎等功效，但却无法改善因hpr紫外光损伤造成的组织活力下降的情况，因此优选在hpr中添加dha、或e-agse。
[0087]
另外，当在hpr中添加dha和e-agse的组合物时，相对于单独添加dha或e-agse，对于提升组织活力还具有明显的协同增效作用。
[0088]
本实施例还经研究证明，在dha含量为0.01～1％，hpr含量为0.01～1％，且dha与hpr的比例关系在1:1～10:1的范围内的dha与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物都可以有效改善因hpr紫外光损伤造成的组织活力下降的情况，明显提升组织活力；在e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系在5:1～20:1的范围内的e-agse与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物也都可以有效改善因hpr紫外光损伤造成的组织活力下降的情况，明显提升组织活力；在dha含量为0.01～1％，e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且dha、e-agse与hpr的比例关系在(1～10):(5～20):(1～10)的范围内，dha、e-agse与hpr三种活性成分组成的抗衰组合物，对于提升组织活力都具有明显的协同增效作用。
[0089]
实施例7不同活性成分在舒缓hpr紫外光损伤中抑制sunburn cells生成的作用
[0090]
本实施例采用uvb刺激3d表皮皮肤模型构建体外皮肤损伤模型进行测试，分别采用实施例1～5制备的5种抗衰组合物，并以添加单独活性物成分hpr作为阳性对照；通过检测各组活性成分作用后的皮肤模型，从sunburn cells模型的组织形态变化指标定性定量分析该6组物质对hpr在紫外光下的损伤及细胞耐受性，评价该待测样品对hpr在紫外光uvb辐射后的舒缓功效。不作任何处理作为空白对照。
[0091]
实验过程：先模型给药，在对需要进行uvb辐照的组别进行uvb辐照(辐照剂量为600mj/cm2)，辐照后，将模型置于co2培养箱(37℃、5％co2)中继续孵育24h。孵育结束后进行mtt孵育计数，sunburn cells阳性率＝sunburn cells数/细胞总数*100％。其中组织形态测试采用组织形态检测的模型，用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定24h后，进行h&e染色检测，显微镜下拍照观察，采集图片并分析。结果表示为mean
±
sd。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。p《0.05认为具有显著差异，p《0.01认为具有极显著差异。组织形态测试结果如图3所示，sunburn cells检测结果如表2或图4所示。
[0092]
表2、sunburn cells测试结果
[0093][0094][0095]
与hpr组相比，显著性以
δ
表示，p-value＜0.05表示为
δ
，p-value＜0.01表示为
δδ
。
[0096]
由表2和图4可以看出，在hpr中添加dha或e-agse，制备的抗衰组合物，都能有效抑制sunburn cells的产生，尤其是e-agse的效果非常好，几乎没有sunburn cells产生；而当在hpr中添加向日葵籽油、或杏仁油时，虽然向日葵籽油、杏仁油也都具有一定的抗氧化、消炎等功效，但却无法改善因hpr紫外光损伤造成的sunburn cells大量产生的情况，因此优选在hpr中添加dha、或e-agse。
[0097]
本实施例还经研究证明，在dha含量为0.01～1％，hpr含量为0.01～1％，且dha与hpr的比例关系在1:1～10:1的范围内的dha与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物都可以有效抑制因hpr紫外光损伤造成的sunburn cells的产生；在e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系在5:1～20:1的范围内的e-agse与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物也都可以有效抑制因hpr紫外光损伤造成的sunburn cells的产生。
[0098]
另外图3中也可以明显看出，含有hpr的皮肤模型经紫外光照射后会产生大量的sunburn cells(圆圈内)，而在hpr中添加dha或e-agse，或两者的组合物后，可以明显抑制sunburn cells的产生。
[0099]
实施例8不同活性成分在舒缓hpr紫外光损伤中抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2表达的作用
[0100]
本实施例采用uvb刺激3d表皮皮肤模型(广东博溪生物科技有限公司)，构建体外皮肤损伤模型进行测试，分别采用实施例1、2、5制备的3种抗衰组合物，并以不添加任何成分作为nc对照，添加单独活性物成分hpr作对照；通过检测各组活性成分作用后的皮肤模型，从检测紫外光辐射后的促炎因子(il-1α&il-8&tnf-α)含量和炎性介质(pge2)含量指标来定量分析评价该待测样品对hpr在紫外光uvb辐射后的舒缓功效。不作任何处理作为空白对照。
[0101]
实验过程：先模型给药，在对需要进行uvb辐照的组别进行uvb辐照(辐照剂量为600mj/cm2)，辐照后，将模型置于co2培养箱(37℃、5％co2)中继续孵育24h。孵育结束后进行elisa测试，收集3d表皮皮肤模型培养液于ep管中，收集完后将用于elisa检测的样品置于-80℃冰箱冷冻保存，分别根据il-1αelisa试剂盒、pge2 elisa试剂盒、il-8elisa试剂盒、tnf-αelisa进行检测分析。结果表示为mean
±
sd。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。p《0.05认为具有显著差异，p《0.01认为具有极显著差异。抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2表达的测试结果分别如表3和图5、表4和图6、表5和图7、表6和图8所示。
[0102]
表3、抑制il-1α表达的测试结果
[0103][0104]
与hpr组相比，显著性以
δ
表示，p-value＜0.05表示为
δ
，p-value＜0.01表示为
δδ
。
[0105]
表4、抑制tnf-α表达的测试结果
[0106][0107]
与hpr组相比，显著性以
δ
表示，p-value＜0.05表示为
δ
，p-value＜0.01表示为
δδ
。
[0108]
表5、抑制il-8表达的测试结果
[0109][0110]
与hpr组相比，显著性以
δ
表示，p-value＜0.05表示为
δ
，p-value＜0.01表示为
δδ
。
[0111]
表6、抑制pge2表达的测试结果
[0112][0113][0114]
与hpr组相比，显著性以
δ
表示，p-value＜0.05表示为
δ
，p-value＜0.01表示为
δδ
。
[0115]
由表3～6和图5～8可以看出，在hpr中添加dha、或e-agse，制备的抗衰组合物，都能有效抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达；当在hpr中添加dha和e-agse的组合物时，相对于单独添加dha或e-agse，对于抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达还具有明显的协同增效作用。
[0116]
本实施例还经研究证明，在dha含量为0.01～1％，hpr含量为0.01～1％，且dha与hpr的比例关系在1:1～10:1的范围内的dha与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物都可以有效抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达；在e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系在5:1～20:1的范围内的e-agse与hpr两种活性成分组成的抗衰组合物也都可以有效抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达；在dha含量为0.01～1％，e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且dha、e-agse与hpr的比例关系在(1～
10):(5～20):(1～10)的范围内，dha、e-agse与hpr三种活性成分组成的抗衰组合物，对于抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达具有明显的协同增效作用。
[0117]
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

技术特征：
1.一种抗衰组合物，其特征在于，包括e-agse与hpr。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述e-agse含量为0.1～10％，hpr含量为0.01～1％，且e-agse与hpr的比例关系为5:1～20:1。3.e-agse用于制备白天适用的含hpr护肤品的用途。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述e-agse通过提高组织活力，或抑制sunburn cells的生成，或抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达，来舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症，实现hpr白天适用。5.e-agse用于制备舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症制剂的用途。6.e-agse用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的提高组织活力制剂的用途。7.e-agse用于制备在舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制sunburn cells生成制剂的用途。8.e-agse用于制备舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症中的抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2表达制剂的用途。9.一种组合物用于制备白天适用的含hpr护肤品的用途，其特征在于，所述组合物包括dha和e-agse。10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述组合物通过提高组织活力，或抑制sunburn cells的生成，或抑制il-1α、il-8、tnf-α或pge2的表达，来舒缓hpr紫外光损伤和/或炎症，实现hpr白天适用。

技术总结
本发明提供了一种羟基频哪酮视黄酸酯(HPR)抗衰组合物，通过在含有HPR的护肤品中添加活性葡萄籽提取物(E-AGSE)，显著缓解单独HPR暴露在自然光或紫外光时所引起的损伤/红斑和/或皮肤炎症，有效实现含HPR产品“白天适用，白天更好使用”，拓宽其在抗衰领域中的市场应用潜能；证明了E-AGSE在舒缓HPR紫外光损伤及炎症方面的应用，再经机理研究，证明E-AGSE在舒缓HPR紫外光损伤和炎症中可提高组织活力，抑制Sunburncells的生成，抑制白介素-1(IL-1α)，白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)或前列腺素E2(PGE2)的表达；采用二十二碳六烯酸(DHA)和E-AGSE的组合物用于舒缓HPR紫外光损伤及炎症时，还具有明显的协同增效作用。用。用。


技术研发人员：陶侃 李小静 郭莉莉 黄虎
受保护的技术使用者：上海中翊日化有限公司
技术研发日：2022.05.16
技术公布日：2023/8/16