一株苏云金芽孢杆菌NSHZ-14及其应用

一株苏云金芽孢杆菌nshz-14及其应用
技术领域
1.本发明属于微生物技术领域，更具体地说，涉及一株苏云金芽孢杆菌nshz-14及其应用。


背景技术：

2.目前针对松材线虫的生防研究主要集中在杀线植物、真菌和放线菌等几类因子上，而有关细菌用作松材线虫生防因子的报道较少，植物内生细菌对松材线虫的生防研究更是极少。利用内生细菌防治植物病害一直是国内外的研究热点。以前绝大多数植物病害生防菌是从土壤或植物根际土壤微生物中分离筛选得到的。但由于这些土壤微生物易受外界条件的影响，并难于在与土壤、植物根际或叶围习居微生物的竞争中长期占优势，因而极大地影响了其实用价值(李长松，1992)。而植物内生细菌作为生防因子有很多优点：它们分布于植物的不同组织中，有充足的营养物质，同时受到植物组织的保护，不受外部恶劣环境如强烈日光、紫外线风雨等的影响，具有稳定的生态环境(易有金等，2007)。因此，内生细菌相对于其它细菌更易发挥生防作用。利用内生细菌防治植物真菌和细菌病害的研究很多，而在防治线虫病害方面研究的很少。


技术实现要素：

3.针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一株苏云金芽孢杆菌nshz-14，满足使用需求。本发明所要解决的另一技术问题在于提供一株苏云金芽孢杆菌nshz-14的应用。
4.为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
5.一株苏云金芽孢杆菌nshz-14，分类命名为bacillus thuringiensis nshz-14，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc：m 20222105，保藏日期：2022年12月30日，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
6.苏云金芽孢杆菌nshz-14在杀松材线虫中的应用。
7.苏云金芽孢杆菌nshz-14的细菌培养滤液在杀松材线虫中的应用。
8.苏云金芽孢杆菌nshz-14的细菌培养滤液在杀松材线虫中的应用，其特征在于，所述的苏云金芽孢杆菌nshz-14的细菌培养滤液的制备方法为：在na培养基上划线接种活化，30℃恒温培养箱中恒温培养24h；用接种环挑取一环活化好的苏云金芽孢杆菌nshz-14接种于已灭菌的30mlnb培养基中，30℃，200r/min条件下摇培7d，将摇培液4℃条件下11000rpm离心10min，用滤膜孔径为0.22μm的细菌抽滤器抽滤制备获得苏云金芽孢杆菌nshz-14培养滤液。
9.相比于现有技术，本发明的有益效果为：
10.本发明的苏云金芽孢杆菌nshz-14，为火炬松内生细菌，其细菌培养滤液具有很强的杀线作用，细菌培养滤液处理线虫72h后，nshz-14的拮抗活性最强，线虫的校正击倒率达到99.49％，可见该苏云金芽孢杆菌nshz-14在杀线方面将具有很好的应用前景，具有很好
生防作用。
附图说明
11.图1为四株内生细菌培养时间与培养滤液48h杀线活性之间的关系图；
12.图2为依据16srdna基因序列构建的nshz-14菌株的系统发育树图；
13.图3为菌株nshz-14的biolog鉴定结果图。
具体实施方式
14.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。以下实施例中如无特殊说明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
15.从南京林业大学南大山，选取五年生以上的健康火炬松的主干作为试验材料，采样时将样品放入密封袋中，带至实验室进行内生细菌的分离。
16.3年生盆栽黑松。
17.强毒松材线虫虫株ama3由南京林业大学病理实验室提供。
18.na培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，ph7.2～7.4，蒸馏水1l。
19.nb培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，ph7.2～7.4，蒸馏水1l。
20.pda培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g，蒸馏水1l。
21.淀粉牛肉膏蛋白胨培养基：可溶性淀粉2g，牛肉膏3g，蛋白胨5g，ph7.2～7.4，蒸馏水1l。
22.葡萄糖蛋白胨培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，磷酸氢二钾5g，ph7.0～7.2，蒸馏水1l。
23.西蒙斯柠檬酸盐培养基：柠檬酸钠2g，氯化钠5g，七水合硫酸镁0.2g，磷酸二氢铵1g，三水合磷酸氢二钾1g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1l。
24.明胶培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，明胶120g，琼脂20g，ph7.0～7.2，蒸馏水1l。
25.含硫氨基酸蛋白胨培养基：蛋白胨10g，半胱氨酸0.1g，硫酸钠0.1g，ph7.0～7.4，蒸馏水1l。
26.硝酸盐液体培养基：牛肉膏3g，蛋白胨5g，硝酸钾1g，ph7.0～7.2，蒸馏水1l。
27.lb培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，ph7.0～7.4，蒸馏水1l。
28.实施例1
29.将采集到的火炬松的主干样品用无菌水冲洗，并用无菌纸吸干后，用75％的酒精浸泡30s，无菌水冲洗，转入0.1％的升汞溶液中处理6min，无菌水冲洗四次。
30.样品经表面消毒处理后，削去表皮，将样品中部切成小段，直接放在na固体培养基上，置于30℃培养箱中分离培养3～5d，每处理重复3次。
31.挑取分离培养基中出现的形态差异的菌落，经重复划线纯化后，分离得到25株内生细菌。
32.实施例2
33.1、内生细菌培养
34.平板培养：在na培养基上划线接种活化，30℃恒温培养箱中恒温培养24h。
35.液体培养：用接种环挑取一环活化好的内生细菌接种于已灭菌的30mlnb培养基中，30℃，200r/min条件下摇培7d，将摇培液4℃条件下11000rpm离心10min，用滤膜孔径为0.22μm的细菌抽滤器抽滤制备培养滤液，备用。
36.2、松材线虫培养
37.松材线虫采用灰葡萄孢培养，将线虫ama3接种在长满灰葡萄孢的pda平板上，待线虫吃完灰葡萄孢后，在无菌水中用贝尔曼漏斗法分离，再用无菌水将线虫悬液的浓度调至6000条/ml，备用。
38.3、细菌培养滤液对松材线虫的拮抗作用：
39.取线虫悬液10μl于凹玻片中央的凹穴中，再与95μl的内生细菌培养滤液混合，将其放入培养皿中保湿，置于25℃恒温培养箱中，24h、48h、72h后统计线虫的校正击倒率{校正击倒率(％)＝[(对照存活率-处理存活率)/对照存活率]
×
100}。每处理重复三次，用无菌nb培养液作对照。
[0040]
实验结果如表1所示，所有火炬松主干内生细菌菌株对松材线虫均有拮抗活性，但不同菌株的拮抗活性有差异。另外，随着细菌培养滤液处理线虫时间的延长，各细菌菌株拮抗活性有逐渐增强的趋势。细菌培养滤液处理线虫24h后，菌株nshz-2和nshz-5的拮抗活性最强，线虫的校正击倒率分别达到48.97％和50.63％，而菌株nshz-7、nshz-15、nshz-16、nshz-17、nshz-19、nshz-21、nshz-23和nshz-24几乎无拮抗活性，线虫校正击倒率仅为4.88％-11.46％，与对照差异不显著。细菌培养滤液处理线虫48h后，菌株nshz-1、nshz-4、nshz-5、nshz-6和nshz-14的拮抗活性最强，线虫的校正击倒率分别达到93.10％、89.66％、95.22％、89.02％和96.15％，而其他菌株均显示一定的拮抗活性，线虫校正击倒率与对照差异显著。细菌培养滤液处理线虫72h后，部分菌株的拮抗活性明显增强，此时菌株nshz-1、nshz-2、nshz-4、nshz-5、nshz-10和nshz-14的拮抗活性最强，线虫的校正击倒率达到96.95％-99.49％，而菌株nshz-17的拮抗活性最弱，线虫的校正击倒率仅为29.98％。
[0041]
表1 25株火炬松主干内生细菌培养滤液对松材线虫的拮抗活性
[0042]
[0043][0044]
注：表中同列数据后具不同字母者表示在5％水平差异显著(duncan检验)。
[0045]
5、拮抗菌株最佳培养时间的筛选
[0046]
用接种环挑取一环活化好的对松材线虫具强拮抗活性的内生细菌，接种于已灭菌的30mlnb培养基中，30℃，200r/min条件下分别摇培24h、48h、72h、5d、7d、10d、15d、20d，制备培养滤液以测定其对线虫的拮抗活性，方法同4，48h时针刺法统计线虫校正死亡率{校正死亡率(％)＝[处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)]
×
100}。
[0047]
由图1可知，随着培养时间的延长，四株松树内生细菌培养滤液的杀线活性逐渐提高，当达到一定程度后，杀线活性开始下降。四株松树内生细菌培养24h时，培养滤液的杀线活性较低，线虫的校正死亡率仅达到0.73％-18.28％；培养48h时，菌株nssz-5培养滤液的杀线虫活性明显增加，而其他三株菌的杀线活性增加缓慢；培养48h后多数菌株培养滤液杀线活性增加较快；培养5d时，菌株nssz-2、nshz-5和nshz-14培养滤液对线虫致死率达最高，而nshz-1菌株杀线活性于7d时达到高峰；培养10d后所有菌株的培养滤液杀线活性都开始下降。
[0048]
实施例3
[0049]
1、采用na培养基划线接种筛选得到的对松材线虫有强拮抗活性的菌株nshz-14，30℃恒温培养24h，活化两次，挑取一环接种于nb培养液中，30℃，200r/min条件下摇培5d，得到菌株培养液。
[0050]
2、将松材线虫虫株ama3接种在长满灰葡萄孢的pda平板上，待线虫吃完灰葡萄孢后，在无菌水中用贝尔曼漏斗法分离，再用无菌水将线虫悬液的浓度调至6000条/ml。
[0051]
3、将nshz-14菌株培养液喷雾接种于3年生黑松苗的枝干上，直至枝干湿透为止，接菌1d后，皮接法接种松材线虫，线虫接种量为6000条/株。于接种后7d、14d、21d、30d分别统计感病指数，并于接种30d后统计感病率、死亡率和防治效果。每个处理接种5株黑松苗，同时以5株喷雾nb培养液的黑松苗作为对照，病情分级标准如表2所示。
[0052]
感病指数＝(∑(各级病树株数*代表值)
×
100)/(总株数*发病最高级代表值)；
[0053]
防治效果＝[(对照感病指数-处理感病指数)/对照感病指数]
×
100。
[0054]
接种时间为2011年7月，地点在南京林业大学森林病理温室，温室条件37℃左右，自然光照。
[0055]
表2黑松接种松材线虫后的病情分级标准
[0056]
病级分级标准代表值0植株正常生长0i0～1/4针叶褪绿变黄1ii1/2～3/4针叶变黄，1/4以下针叶变红2iii3/4左右针叶变红3iv针叶全部变红，植株死亡4
[0057]
结果如表3所示，菌株nshz-14培养液对松材线虫病的防效达到65.0％。接种7d后，对照苗木开始出现症状，nshz-14处理苗木正常，感病指数为0；接种21d后，nshz-14处理苗木感病指数仅为20；接种30d后，对照苗木均感病，并且全部死亡，此时nshz-14处理苗木感病率达到100％，但无一株死亡，防治效果为65.0％。
[0058]
表3松树内生拮抗细菌培养液对松材线虫病的防治效果
[0059][0060]
实施例4
[0061]
1、菌株形态学鉴定
[0062]
1)将供试菌株nshz-14在na平板培养基上划线，30℃恒温培养箱中培养1-2d，单菌落出现时开始观察。菌株nshz-14的菌落呈乳白色，呈放射状，边缘完整，表面干燥，有褶皱。
[0063]
2)革兰氏染色鉴定
[0064]
在干净玻片上滴一滴无菌水，用接种环挑取在na平板培养基上活化培养16-24h的幼龄菌苔，无菌水中涂片，然后按如下顺序对菌体进行革兰氏染色：涂片
→
干燥
→
固定
→
结晶紫染色1min
→
水洗碘液媒染1min
→
水洗
→
95％酒精脱色20-30s
→
蕃红染色3min
→
水洗
→
干燥
→
镜检。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为对照。
[0065]
3)koh拉丝鉴定
[0066]
在洁净玻片上滴一滴4％koh水溶液，用接种环于na平板培养基上挑取活化培养16-24h的幼龄菌苔少许，在koh溶液中涂布均匀，每几秒钟上提接种环，观察能否拉出丝。
[0067]
4)芽孢染色鉴定
[0068]
用接种环挑取少许在na平板培养基上培养的幼龄菌苔，于干净玻片上涂片，5％孔雀绿染色10min，水洗后蕃红复染2min，无菌水冲洗干净，自然晾干，镜检。
[0069]
松树内生拮抗细菌的菌体特征见表4，菌株nshz-14的菌体，可产生芽孢，革兰氏反应为阳性，可确定菌株nshz-14为芽孢杆菌属。
[0070]
表4松树内生拮抗细菌菌体特征
[0071]
菌株革兰氏染色koh拉丝试验芽孢nshz-14+-+
[0072]
注：“+”表示阳性；
“‑”
表示阴性。
[0073]
2、菌株生理生化特征鉴定
[0074]
1)淀粉水解鉴定
[0075]
用接种针挑取少许在na平板培养基上培养48h的菌株，于淀粉牛肉膏蛋白胨培养基上划十字接种，37℃温箱中倒置培养24-48h，滴加少量碘液于生长菌落及菌落附近培养基，进行检验。如菌落周围出现无色透明圈，记淀粉水解呈阳性。
[0076]
2)甲基红鉴定
[0077]
用接种环挑取少许在na平板培养基上培养48h的菌株，接种于葡萄糖蛋白胨液体培养基中，37℃恒温箱中培养2-4d，沿管壁加入2-3滴甲基红指示剂，进行检验。若菌液呈红色，记为阳性；呈黄色，记为阴性。
[0078]
3)乙酰甲基甲醇鉴定
[0079]
将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨液体培养基中，37℃恒温培养2-4d(阴性菌可适当延长培养时间)。取出后，每试管菌液中滴加10-20滴40％koh溶液，再加入少量肌酸，充分振荡，然后放在水浴锅中沸水浴保温，10-20min后观察。若培养液呈红色，记v.p阳性。
[0080]
4)吲哚鉴定
[0081]
取待测菌株的幼龄菌苔少许，接种于蛋白胨培养液中，置37℃恒温箱中培养1-4d。培养后，加1ml乙醚，充分振荡后静置片刻至分层，沿管壁慢慢加入2-3滴吲哚试剂，此时切忌摇动，观察。若在乙醚层间有红色环出现，记为阳性，阴性结果观察7d。
[0082]
5)柠檬酸盐鉴定
[0083]
在西蒙斯柠檬酸盐斜面培养基上划线待测菌，37℃恒温箱中培养3-7d，取出试管观察。若指示剂变蓝，记为阳性反应，表示该菌能利用柠檬酸盐作为碳源。
[0084]
6)明胶水解鉴定
[0085]
取待测菌于明胶培养基试管中穿刺接种，置20℃恒温培养箱中培养2-5d，观察明胶液化情况，如高于24℃培养，则需经低温处理后再观察。若有明胶液化现象出现，记为阳性反应，阴性结果后续培养3-4周观察。
[0086]
7)产氨鉴定
[0087]
于含硫氨基酸蛋白胨培养液中接种待测菌，将红色石蕊试纸吊在试管塞下端接近
而不接触液面，37℃恒温箱中培养3-5d，观察。若石蕊试纸变蓝即有氨产生。如石蕊试纸变色不明显，可在白瓷六孔中滴入培养液和奈氏试剂进行检查，如有黄色或棕红色沉淀产生，亦可说明有氨产生。
[0088]
8)产硫化氢鉴定
[0089]
于含硫氨基酸蛋白胨培养液中接种待测菌，将醋酸铅试纸吊在试管塞下端接近而不接触液面，37℃恒温箱中培养3-5d，观察。若醋酸铅试纸变黑，即有h2s产生。
[0090]
9)过氧化氢酶鉴定
[0091]
将待测菌接种到na平板培养基上，适温培养。10％的过氧化氢滴在菌苔上，若菌苔产生气泡，则为过氧化氢酶阳性反应，无气泡产生记为阴性反应。
[0092]
10)氧化酶鉴定
[0093]
在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1％水溶液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿。用玻璃棒(不可用镍镉丝)取18～24h的菌苔，涂抹在湿润的滤纸上，在10s涂抹的菌苔现红色者为阳性，10～60s现红色者为延迟反应，60s以上现红色者不计，按阴性处理。
[0094]
11)硝酸盐还原鉴定
[0095]
将待检验的菌株接种与硝酸盐液体培养基中，做一支不接种的对照管，37℃培养5d后，滴一滴格里斯试剂a液和b液，在对照中同样加试剂。当培养液变为粉红色、玫瑰红色时，表示有亚硝酸盐存在，为硝酸盐还原阳性。如无红色出现，则可加1～2滴二苯胺试剂，此时如呈蓝色反应，表示培养基中仍有硝酸盐，如不呈蓝色反应，表示硝酸盐和新形成的亚硝酸盐都已被还原成其他物质，故仍按硝酸盐还原阳性处理。
[0096]
生理生化实验鉴定结果如表5所示，菌株nshz-14的v.p实验、过氧化氢酶实验和氧化酶实验均呈阳性；菌株nshz-14可产生淀粉酶，能利用柠檬酸盐和硝酸盐，具有脱氨酶，能使氨基酸脱氨基。根据以上结果，可初步断定菌株nshz-14为芽孢杆菌属。
[0097]
表5松树内生拮抗细菌生理生化特征
[0098][0099]
注：“+”表示阳性；
“‑”
表示阴性。
[0100]
3、菌株分子生物学鉴定
[0101]
提取细菌dna，进行16srdna测序。细菌基因组dna的提取采用ctab法，参照zhou，j.(1996)和kauffmann，i.m(2004)的报道，并有所改动。
[0102]
(1)取斜面保存的菌种，在低盐lb固体培养基划线培养，37℃培养过夜。
[0103]
(2)挑取单菌落于3mllb液体培养基，37℃培养过夜。
[0104]
(3)将3ml的细菌摇培液，接种于100ml的lb液体培养基中，37℃培养过夜。
[0105]
(4)将100ml细菌过夜培养液，5000rpm离心10分钟，去上清液。
[0106]
(5)加9.5mlte悬浮沉淀，并加0.5ml10％sds，50μl 20mg/ml蛋白酶k，混匀，37℃保温1小时。
[0107]
(6)加1.5ml 5mol/lnacl，混匀。
[0108]
(7)加1.5mlctab/nacl溶液，混匀，65℃保温20分钟。
[0109]
(8)用等体积酚：氯仿抽提，5000rpm离心10分钟，将上清液移至干净离心管。之后，用等体积氯仿抽提，5000rpm离心10分钟，取上清液移至干净离心管中。
[0110]
(9)加1倍体积异丙醇，颠倒混合，-20℃下静止30分钟，沉淀dna。
[0111]
(10)5000rpm离心10分钟，去掉上清，70％乙醇漂洗dna沉淀后，吸干，溶解于1mlte。
[0112]
(11)加入1μlrnaase，37℃ 30min。
[0113]
(12)采用酚氯仿抽提，乙醇沉淀dna，最后溶于100ul的tebuffer中，-20℃保存。
[0114]
以待测菌株dna作为模板，用细菌通用引物27f/1492r进行pcr扩增，pcr反应体系如表6所示：
[0115]
表6细菌鉴定的pcr反应体系
[0116]
成分体积/μl10
×
pcr buffer2.5mgcl2(25mm)0.5dntp(10mm)0.5通用引物27f0.5通用引物1492r0.5稀释菌液模板1rtaq0.1ddh2o18.5
[0117]
扩增产物经2％琼脂凝胶电泳检测，在1500bp左右有明显的条带。扩增产物经南京金斯瑞生物科技有限公司进行16srdna测序，nshz-14的16srdna基因片段序列如seq id no.1所示。
[0118]
将得到的16srdna序列在eztaxon网页上进行比对，从比对结果中选取高相似度菌株的模式菌株，获得其16srdna，利用mega4软件绘制进化树(图2)。根据系统进化树构建结果，初步确定菌株nshz-14为bacillus thuringiensis。
[0119]
4、biolog鉴定
[0120]
1)富集培养
[0121]
在na培养基中将菌株活化培养2～3d，用接种针挑单菌落划线接种至bug+m+t/bug+b培养基上，革兰氏阳性芽孢杆菌的培养为避免产生过多的芽孢影响鉴定结果，采用“十”字交叉法接种，挑取在培养基上形成的十字外部活力较高的菌体进行后续的实验。将菌株置于30℃培养16～24h，生长缓慢的菌株可适当延长时间至48h。
[0122]
2)菌悬液的制备
[0123]
革兰氏阳性芽孢杆菌采用干管分散技术收集菌体。用无菌吸管移取3～5mlgn/gp-if接种液，加至分散良好的干管中，再用一支无菌棉签将试管内的菌落洗一下于gn/gp-if均匀混合，再加适量gn/gp-if配制一定的浊度。
[0124]
3)调整浊度
[0125]
与菌株类型相应的标准比浊管进行对比，调整到规定浊度。
[0126]
4)鉴定板的接种、培养及数据读取
[0127]
将制备好的菌悬液倒入加样槽中，使用八道电动移液器，将其接种于微平板的96孔中，gp鉴定微平板接种量为150μl/孔。鉴定板标明菌株号，置于30℃培养，并做一定的保湿处理。分两次上机读数，在接种鉴定板16～18h第一次读数，24h第二次读数，36h第三次读数。
[0128]
biolog鉴定结果显示(图3)，biolog为nshz-14内生拮抗细菌给出的鉴定结果的prob，达到98％以上，sim值大于0.5，基本上可以认为鉴定结果是可靠的。
[0129]
菌株nshz-14的系统进化树表明，其与bacillus thuringiensis的进化距离最近，结合biolog鉴定结果，可确定nshz-14为bacillus thuringiensis。

技术特征：
1.一株苏云金芽孢杆菌nshz-14，分类命名为bacillus thuringiensis nshz-14，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc：m 20222105，保藏日期：2022年12月30日，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。2.权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌nshz-14在杀松材线虫中的应用。3.权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌nshz-14的细菌培养滤液在杀松材线虫中的应用。4.根据权利要求3所述的苏云金芽孢杆菌nshz-14的细菌培养滤液在杀松材线虫中的应用，其特征在于，所述的苏云金芽孢杆菌nshz-14的细菌培养滤液的制备方法为：在na培养基上划线接种活化，30℃恒温培养箱中恒温培养24h；用接种环挑取一环活化好的苏云金芽孢杆菌nshz-14接种于已灭菌的30ml nb培养基中，30℃，200r/min条件下摇培7d，将摇培液4℃条件下11000rpm离心10min，用滤膜孔径为0.22μm的细菌抽滤器抽滤制备获得苏云金芽孢杆菌nshz-14培养滤液。

技术总结
本发明公开了一株苏云金芽孢杆菌NSHZ-14及其应用，属于微生物技术领域。本发明的苏云金芽孢杆菌NSHZ-14，分类命名为Bacillus thuringiensis NSHZ-14，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC：M20222105，保藏日期：2022年12月30日，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。本发明的苏云金芽孢杆菌NSHZ-14，为火炬松内生细菌，其细菌培养滤液具有很强的杀线作用，细菌培养滤液处理线虫72h后，NSHZ-14的拮抗活性最强，线虫的校正击倒率达到99.49％，可见该苏云金芽孢杆菌NSHZ-14在杀线方面将具有很好的应用前景，具有很好生防作用。具有很好生防作用。具有很好生防作用。


技术研发人员：谈家金 王学南 刘宇茜
受保护的技术使用者：南京林业大学
技术研发日：2023.03.27
技术公布日：2023/8/24