一种盐酸多柔比星脂质体注射液及其制备方法与流程

1.本发明涉及脂质体制剂技术领域，具体为一种盐酸多柔比星脂质体注射液及其制备方法。


背景技术：

2.盐酸多柔比星脂质体注射液是一种脂质体制剂，每瓶10ml，含盐酸多柔比星2mg/ml，用于低cd4(《200cd4淋巴细胞/mm3)及有广泛皮肤粘膜内脏疾病的与艾滋病相关的卡波氏肉瘤的病人。
3.盐酸多柔比星脂质体注射液是将盐酸多柔比星包封于表面结合有甲氧基聚乙二醇的脂质体中，这一过程被称为聚乙二醇化，可以保护脂质体免受单核巨噬细胞系统识别，从而延长其在血液循环中的时间。现有工艺制备技术均采用硫酸铵梯度法制备盐酸多柔比星脂质体注射液，该方法首先使用硫酸铵溶液制备空白脂质体，之后采用交叉流透析等手段除去脂质体外相硫酸铵，从而形成磷脂膜内外的硫酸铵梯度，然后在加热的条件下完成药物的装载。
4.为了解决上述问题，降低注射液体外释放度，提高安全性，本发明提供了一种盐酸多柔比星脂质体注射液及其制备方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种盐酸多柔比星脂质体注射液及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
6.为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种盐酸多柔比星脂质体注射液及其制备方法。
7.一种盐酸多柔比星脂质体注射液，所述脂质体注射液包括以下成分，按照质量百分比计：0.1～0.3％盐酸多柔比星、0.2～2％氢化大豆磷脂酰胆碱、0.05～1％胆固醇、0.05～1％培化磷脂酰乙醇胺、0.002～2％葡甲胺、5～20％糖、0.1～10％缓冲剂，其余为注射用水。
8.较为优化地，所述盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1:10～1:1。
9.较为优化地，所述糖为乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖中的任意一种或多种。
10.较为优化地，所述缓冲剂为组氨酸、甘氨酸中的任意一种或多种。
11.一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，包括以下步骤：
12.s1：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺溶于有机溶剂中，得到有机相；
13.s2:配制葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为3～5，得到内水相溶液；称取内水相溶液，与有机相混合，在45～75℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；
14.s3:将空白脂质体a均质整粒，控制均质次数为3-10次，均质压力为5000～20000psi，得到空白脂质体b；
15.s4:取糖、去离子水，搅拌均匀，得到浓度为5～20wt％的糖溶液；取糖溶液，加入缓冲剂调节ph为5～8，得到外水相溶液；先用内水相溶液，置换空白脂质体b外相的有机溶剂，再用外水相溶液置换空白脂质体b外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；
16.s5:将盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，配制成溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在45～75℃下保温，得到盐酸多柔比星脂质体注射液。
17.较为优化地，s1中，有机溶剂为乙醇、甲醇、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、叔丁醇、异丙醇中的任意一种或多种。
18.较为优化地，s1中，有机溶剂与氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1:1～10:1。
19.较为优化地，s2中，称取内水相溶液，与有机相混合，内水相溶液与氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为20：1～100：1。
20.较为优化地，s3中，空白脂质体b的平均粒径为70～150nm。
21.较为优化地，s5中，将盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，配制成溶液，溶液的浓度为5～20wt％。
22.与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：
23.(1)本发明使用葡甲胺与盐酸多柔比星制备盐酸多柔比星葡甲胺盐，能实现提供一种盐酸多柔比星脂质体注射液。所述盐酸多柔比星葡甲胺盐是以葡甲胺的氨基与盐酸多柔比星羟基生成葡甲胺盐，被磷脂膜包裹，形成脂质体。脂相成分为氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺，内水相成分为葡甲胺溶液，外水相成分为糖溶液。
24.(2)采用新型的内水相-葡甲胺水溶液，葡甲胺水溶液制备成的盐酸多柔比星脂质体注射液较比上市销售的硫酸铵梯度法制备的脂质体，释放更为缓慢，因此安全性更高。本发明采用的脂质体制备方法，工艺简单、易于操作、节省节能，适合工业化生产。
附图说明
25.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
26.图1是本发明实施例1制备的脂质体粒径图；
27.图2是本发明实施例2制备的脂质体粒径图；
28.图3是本发明实施例3制备的脂质体粒径图；
29.图4是本发明实施例4制备的脂质体粒径图；
30.图5是本发明实施例5制备的脂质体粒径图。
31.图6是本发明对比例制备的脂质体粒径图。
具体实施方式
32.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
33.实施例1
34.s1：有机相的配制：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺、乙醇按重
量比1：0.3：0.3：5混合均匀，得到有机相；
35.s2：水化：配制浓度为0.5m的葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为3.5，得到内水相溶液；称取内水相溶液，与有机相混合，在50℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；氢化大豆磷脂酰胆碱与内水相溶液的重量比为1：50；
36.s3：均质：将空白脂质体a用微射流进行均质整粒，均质压力为5000psi，均质10次，得到平均粒径为70～150nm的空白脂质体b；
37.s4：超滤：取葡萄糖、去离子水，搅拌均匀，得到10wt％葡萄糖溶液。用葡萄糖溶液，加入组氨酸调节ph为6.5，得到外水相溶液；先用内水相溶液经超滤装置，置换空白脂质体b外相的乙醇，再用外水相溶液置换空白脂质体b外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；空白脂质体b、内水相溶液、外水相溶液的质量比为1：10：10；
38.s5：脂质体载药：称取盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1：4，配制成浓度为5wt％的溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在50℃下保温30分钟，得盐酸多柔比星脂质体注射液。
39.实施例2
40.s1：有机相的配制：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺、甲醇和乙醚混合物(甲醇与乙醚质量比为1：3)按重量比1：0.2：0.4：7混合均匀，得到有机相；
41.s2：水化：配制浓度为0.5m的葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为3，作为内水相溶液，称取内水相溶液，氢化大豆磷脂酰胆碱与内水相溶液的重量比为1:70，与上述有机相混合，在45℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；
42.s3：均质：将空白脂质体a用微射流进行均质整粒，均质压力20000psi，均质3次，得到平均粒径为70～150nm的空白脂质体b；
43.s4：超滤：取蔗糖、去离子水，搅拌均匀，得到20wt％蔗糖溶液。用蔗糖溶液，加入甘氨酸调节ph为7.5，得到外水相溶液；先用内水相溶液经超滤装置，置换空白脂质体b外相的甲醇和乙醚，再用外水相溶液置换脂质体外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；空白脂质体b、内水相溶液、外水相溶液的质量比为1：10：10；
44.s5：脂质体载药：称取盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1:8，配制浓度为10wt％的溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在65℃保温30分钟，得盐酸多柔比星脂质体注射液。
45.实施例3
46.s1：有机相的配制：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺、二氯甲烷按重量比1：0.5：0.3：3混合溶解至澄清，得到有机相；
47.s2：水化：配制浓度为0.5m的葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为5，作为内水相溶液，称取内水相溶液，氢化大豆磷脂酰胆碱与内水相溶液的重量比为1：20，与上述有机相混合，在60℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；
48.s3：均质：将空白脂质体a用微射流进行均质整粒，均质压力10000psi，均质6次，得到平均粒径为70～150nm的空白脂质体b；
49.s4：超滤：取麦芽糖、去离子水，搅拌均匀，得到5wt％麦芽糖溶液。用麦芽糖溶液，加入甘氨酸调节ph为5.5，作为外水相溶液，先用内水相溶液经超滤装置，置换空白脂质体b外相的二氯甲烷，再用外水相溶液置换空白脂质体b外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；空白
脂质体b、内水相溶液、外水相溶液的质量比为1：10：10；
50.s5：脂质体载药：称取盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1：2，配制浓度为20wt％的溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在70℃保温30分钟，得盐酸多柔比星脂质体注射液。
51.实施例4
52.s1：有机相的配制：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺、叔丁醇按重量比1：0.3：0.5：10混合溶解至澄清，得到有机相；
53.s2：水化：配制浓度为0.5m的葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为4.5，作为内水相溶液，称取葡甲胺溶液，氢化大豆磷脂酰胆碱与葡甲胺溶液的重量比为1:80，与上述有机相混合，在75℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；
54.s3：均质：将空白脂质体a用微射流进行均质整粒，均质压力15000psi，均质4次，得到平均粒径为70～150nm的空白脂质体b；
55.s4：超滤：取海藻糖、去离子水，搅拌均匀，得到15wt％海藻糖溶液。用15％海藻糖溶液，加入组氨酸调节ph为8.0，作为外水相溶液，先用外水相溶液经超滤装置，置换空白脂质体b外相的叔丁醇，再用外水相溶液置换空白脂质体b外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；空白脂质体b、内水相溶液、外水相溶液的质量比为1：10：10；
56.s5：脂质体载药：称取盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1：5，配制浓度为15wt％的溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在55℃保温30分钟，得盐酸多柔比星脂质体注射液。
57.实施例5
58.s1：有机相的配制：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺、异丙醇与三氯甲烷混合物(异丙醇与三氯甲烷质量比为4：1)按重量比1：0.1：0.2：2混合溶解至澄清，得到有机相；
59.s2：水化：配制浓度为0.5m的葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为4，作为内水相溶液，称取葡甲胺溶液，氢化大豆磷脂酰胆碱与葡甲胺溶液的重量比为1:100，与上述有机相混合，在55℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；
60.s3：均质：将空白脂质体a用微射流进行均质整粒，均质压力8000psi，均质8次，得到平均粒径为70～150nm的空白脂质体b；
61.s4：超滤：用10wt％乳糖溶液，加入组氨酸调节ph为7.0，作为外水相溶液，先用外水相溶液经超滤装置，置换空白脂质体b外相的异丙醇和三氯甲烷，再用外水相溶液置换空白脂质体b外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；空白脂质体b、内水相溶液、外水相溶液的质量比为1：10：10；
62.s5：脂质体载药：称取盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1:6，配制浓度为12wt％的溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在75℃保温30分钟，得盐酸多柔比星脂质体注射液。
63.实验
64.实验中使用立幸上市销售的盐酸多柔比星脂质体注射液(规格：25ml：50mg，批号：2201181)作为对比例。取实施例1-实施例5、对比例制备的盐酸多柔比星脂质体注射液进行体外释放度检测。称取氯化铵5.35g、l-组氨酸1.55g，加水40ml溶解后，用2mol/l盐酸溶液
调节ph至6.5，并定容至50ml，摇匀，即得释放液。精密量取样品1ml，置于10ml量瓶中，加水溶解稀释定容至刻度，制成供试品溶液。量取供试品溶液3ml，加释放液1ml，混匀，平行制备两份，分别置2个试管中，放置于52℃水浴中。按释放时间要求，分别在0.5h、1h、2h、3h、4h，分别立即取出置冰水浴中冷却，按包封率的检测方法检测释放后的包封率。释放％＝原包封率％-释放后的包封率％。
65.取凝胶柱g-25轻敲让填料至管底，去红色帽盖并放入2ml离心管中，加入500μl水，30min后以8000转/分钟离心5min，弃滤液后，再加入500μl水，15min后以8000转/分钟离心5min，弃滤液后加0.9％氯化钠溶液500μl以8000转/分钟离心5min，弃滤液，再离心5min，更换离心管备用。精密量取样品200μl至活化好的g-25柱上，等10分钟后，以8000转/分钟离心5分钟，再加入500μl水于g-25柱上以8000转/分钟离心5分钟，合并滤液至10ml容量瓶中，用甲醇洗涤离心管3次并转移至容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积记为a包封。上述g-25柱再依次以50％乙醇3ml、100％乙醇5ml分次离心洗脱，洗脱液全部转移至另一10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积记为a游离。精密量取悬浮液200μl至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，照含量测定项下的色谱方法，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积记为a总药物。通过两主峰面积分别计算两主要的原包封率和释放后的包封率。
[0066][0067]
取实施例1-实施例5、对比例备的盐酸多柔比星脂质体注射液40ul，加0.9％氯化钠溶液1960ul，摇匀，取此混悬液，置自动粒径仪中测定粒径。
[0068]
粒径实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5对比例平均粒径(nm)848886858584pdi0.0500.0440.0350.0350.0260.078
[0069]
结论：由表上数据可知，本发明实施例1-5制备的盐酸多柔比星葡甲胺盐是以葡甲胺的氨基与盐酸多柔比星羟基生成葡甲胺盐，被磷脂膜包裹，形成脂质体。实施例1-5制备
得到的盐酸多柔比星脂质体注射液的体外释放度要小于对比例的的体外释放度，释放更为缓慢，因此安全性也更高。本发明实施例1-5制备的盐酸多柔比星脂质体注射液pdi(多分散系数)均小于对比例的pdi，说明以葡甲胺制备的盐酸多柔比星脂质体注射液粒径的均一性较好，粒径分布更集中，产品更稳定。空白脂质体均质整粒换成挤出整粒，对产品的粒径均一性有更进一步提高。
[0070]
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种盐酸多柔比星脂质体注射液，其特征在于：所述脂质体注射液包括以下成分，按照质量百分比计：0.1～0.3％盐酸多柔比星、0.2～2％氢化大豆磷脂酰胆碱、0.05～1％胆固醇、0.05～1％培化磷脂酰乙醇胺、0.002～2％葡甲胺、5～20％糖、0.1～10％缓冲剂，其余为注射用水。2.根据权利要求1所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液，其特征在于：所述盐酸多柔比星和氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1:10～1:1。3.根据权利要求1所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液，其特征在于：所述糖为乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖中的任意一种或多种。4.根据权利要求1所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液，其特征在于：所述缓冲剂为组氨酸、甘氨酸中的任意一种或多种。5.一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：s1：将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺溶于有机溶剂中，得到有机相；s2:配制葡甲胺水溶液，用稀盐酸调节ph为3～5，得到内水相溶液；称取内水相溶液，与有机相混合，在45～75℃的水浴中保温搅拌进行水化，得到空白脂质体a；s3:将空白脂质体a均质整粒，控制均质次数为3-10次，均质压力为5000～20000psi，得到空白脂质体b；s4:取糖、去离子水，搅拌均匀，得到浓度为5～20wt％的糖溶液；取糖溶液，加入缓冲剂调节ph为5～8，得到外水相溶液；先用内水相溶液，置换空白脂质体b外相的有机溶剂，再用外水相溶液置换空白脂质体b外相的葡甲胺，得到空白脂质体c；s5:将盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，配制成溶液，将该溶液和空白脂质体c混合，在45～75℃下保温，得到盐酸多柔比星脂质体注射液。6.根据权利要求5所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于：s1中，有机溶剂为乙醇、甲醇、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、叔丁醇、异丙醇中的任意一种或多种。7.根据权利要求5所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于：s1中，有机溶剂与氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为1:1～10:1。8.根据权利要求5所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于：s2中，称取内水相溶液，与有机相混合，内水相溶液与氢化大豆磷脂酰胆碱的重量比为20：1～100：1。9.根据权利要求5所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于：s3中，空白脂质体b的平均粒径为70～150nm。10.根据权利要求5所述的一种盐酸多柔比星脂质体注射液的制备方法，其特征在于：s5中，将盐酸多柔比星溶于外水相溶液中，配制成溶液，溶液的浓度为5～20wt％。

技术总结
本发明涉及脂质体制剂技术领域，公开了一种盐酸多柔比星脂质体注射液及其制备方法。本发明使用葡甲胺与盐酸多柔比星制备盐酸多柔比星葡甲胺盐，能实现提供一种盐酸多柔比星脂质体注射液。所述盐酸多柔比星葡甲胺盐是以葡甲胺的氨基与盐酸多柔比星羟基生成葡甲胺盐，被磷脂膜包裹，形成脂质体。脂相成分为氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺，内水相成分为葡甲胺溶液，外水相成分为糖溶液。本发明使用葡甲胺水溶液制备成的盐酸多柔比星脂质体注射液释放缓慢，安全性高、易于操作、节省节能，适合工业化生产。适合工业化生产。适合工业化生产。


技术研发人员：王彬彬 高辉 岳岭
受保护的技术使用者：常州金远药业制造有限公司
技术研发日：2023.06.12
技术公布日：2023/8/9