一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶及其制备方法和应用。


背景技术：

2.阴道假丝酵母病，又称外阴阴道假丝酵母病，临床上亦称为假丝酵母性阴道炎，是由白假丝酵母菌(俗称念珠菌)引起的妇科常见阴道病，临床症状主要是豆腐渣样白带、烧灼感、痒痛难忍等，统称真菌性阴道炎(又称为霉菌性阴道炎)。
3.流行病学研究表明，75％的妇女一生至少患该病1次。约50％的患者会反复感染多次，给女性生活、工作及精神带来严重影响。目前治疗真菌性阴道炎的方法以外治为主，内服为辅。目前，治疗真菌性阴道炎的药物主要有化学制剂甲硝唑、氟康唑，微生态治疗制剂地衣芽孢杆菌，及中药洗剂洁尔阴、苦参洗剂，但这些药物存在可诱发耐药性、用药不便、复发率高等缺点。双唑泰凝胶能有效减少阴道分泌物菌落数，但其长期应用可产生耐药性；保妇康凝胶能减轻炎症状况，但在减少菌落生长方面存在不足。寻找既能有效治疗阴道炎的药物，也能避免产生耐药性从而更加安全有效的治疗药物极具现实意义。


技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提供一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶，该凝胶安全无副作用，工艺简单，成本低廉，能够较好地抑制白假丝酵母菌的增殖活性，具有显著的抗炎活性，对于白色假丝酵母导致的阴道炎具有显著效果。
5.为了达到上述目的，本发明提供了一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶，包括以下质量百分比的原料：
[0006][0007]
丝瓜入药始载于《本草纲目》，具有通脉络脏腑、去风解毒、消肿化痰、祛痛杀虫的功效。《本草备药》、《陆川本草》、《滇南本草》等著作中也有记载，并在民间有悠久的应用历史。丝瓜富含三萜及皂苷类、黄酮和酚类、油脂和有机酸类以及蛋白质等化学成分，具有利尿消肿、抗炎镇痛、降糖降脂、抗氧化、免疫调节等药理作用。本发明人在研究中发现，丝瓜提取物对包括白假丝酵母在内的多种致病菌具有显著的抑制效果，同时也具有较佳的抗炎效果。鉴于此，本发明人提出采用上述配方制备一种凝胶，尝试用于治疗假丝酵母菌所致阴道炎，动物模型实验结果显示该凝胶效果显著，极具开发价值。
[0008]
申请号为201711212867.3的专利为“一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法”，其成分包含了丝瓜汁，但也包含了蜜蜂全虫粉、芦荟粉等其他成分，因此，一方面该凝胶主要成分与我们的凝胶完全不同，另一方面也不能证明这个凝胶到底是其中什么成分起到了主要的抑菌作用。而本发明的凝胶抑菌活性成分则主要是丝瓜提取物(实施例中具体为苹果丝瓜全汁冻干粉)。除此之外，导致阴道炎的病因较多，上述专利的凝胶类产品并没有显示出可以有效治疗白假丝酵母菌所致阴道炎的作用，这也是本发明凝胶与其他凝胶产品完全不同的地方。而目前已公开专利中发现的其它含有丝瓜的中药组方，由于都还采用了其他众多中药，因此并不能证明在仅有丝瓜的前提下，也能起到治疗妇女慢性盆腔炎及阴道炎症的作用，而本发明凝胶的主要药物活性成分即是丝瓜。总之，本发明经过大量实验验证，在有丝瓜存在的情况下，可以更好地治疗阴道炎，突出显示了丝瓜全汁抗菌、抗炎的重要性，且丝瓜全汁提取物在本发明中实现较好的治疗阴道炎的效果，具有不可或缺性。采用上述配方制备得到的凝胶安全无副作用，工艺简单，成本低廉，能够较好地抑制白假丝酵母菌的增殖活性，具有显著的抗炎活性，对于白色假丝酵母导致的阴道炎具有显著效果。
[0009]
在其中一个实施例中，所述丝瓜提取物为丝瓜全汁冻干粉。
[0010]
本发明人通过实验发现，丝瓜全汁提取物在体外不仅具有较好的抑制白假丝酵母菌增殖的活性，还具有显著的抗炎活性。本发明通过小鼠实验验证了采用其作为原料的凝胶，一方面可以抑制小鼠阴道内白假丝酵母菌的增殖，另一方面还可以有效地缓解小鼠阴道感染症状。
[0011]
本发明还提供了所述凝胶在制备用于治疗阴道炎的药物中的应用。
[0012]
在其中一个实施例中，所述阴道炎为霉菌性阴道炎。
[0013]
在其中一个实施例中，所述霉菌性阴道炎为白假丝酵母菌导致的霉菌性阴道炎。
[0014]
本发明通过实验验证了丝瓜提取物为主要药物活性成分的凝胶，可以通过抑制小鼠阴道内白假丝酵母菌的增殖，降低炎症反应，能够有效缓解小鼠阴道感染症状，在治疗霉菌性阴道炎方面具有广泛的应用前景。
[0015]
本发明还提供了所述凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0016]
制备丝瓜提取物：将丝瓜榨汁后，得到丝瓜全汁，静置，取上清液，过滤，冷冻干燥，得到丝瓜全汁冻干粉；
[0017]
制备凝胶：将丝瓜全汁冻干粉、卡波姆、甘油、三乙醇胺、依地酸二钠、水混合，冷却，得到凝胶。
[0018]
在其中一个实施例中，所述制备丝瓜提取物步骤中，所述静置的温度为4℃；
[0019]
所述制备凝胶步骤中，所述混合的温度为60-80℃。
[0020]
本发明还提供了一种用于治疗阴道炎的药物，该药物包括药学上可接受的辅料和所述凝胶。
[0021]
在其中一个实施例中，所述辅料包括以下原料中的至少1种：赋形剂，润滑剂，抗氧剂，防腐剂，黏合剂，填充剂，或增稠剂。
[0022]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0023]
本发明的一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶及其制备方法和应用，该凝胶安全无副作用，工艺简单，成本低廉，能够较好地抑制白假丝酵母菌的增殖活性，具有显著的抗炎活性，对于白色假丝酵母导致的阴道炎具有显著效果。
具体实施方式
[0024]
为了便于理解本发明，下面将参照相关实施例对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
[0025]
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
[0026]
本实施例所用试剂、材料、设备如无特殊说明，均为市售来源；试验方法如无特殊说明，均为本领域的常规试验方法。
[0027]
实施例1
[0028]
制备丝瓜提取物。
[0029]
取海南产苹果丝瓜洗净，打碎压榨后取全汁。将苹果丝瓜全汁在4℃条件下放置一宿，浮沫下沉，然后取上清部分过滤，并采用冷冻干燥机将其冷冻干燥，得苹果丝瓜全汁冻干粉。
[0030]
实施例2
[0031]
一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶。
[0032]
以下原料的用量按质量百分比计，本实施例的凝胶含有：1％的卡波姆，0.5％的苹果丝瓜提取物(即实施例1制备得到的苹果丝瓜全汁冻干粉)，10％的甘油，2％的三乙醇胺，0.1％的依地酸二钠，余量为超纯水
[0033]
将上述原料在80℃条件下均匀搅拌，冷却。
[0034]
实施例3
[0035]
与实施例2的操作基本相同，区别之处在于苹果丝瓜提取物的添加量为1.5％。
[0036]
对比例1
[0037]
与实施例2的操作基本相同，区别之处在于没有加入苹果丝瓜提取物，将对比例1的凝胶作为空白凝胶。
[0038]
实验例1
[0039]
一、方法与材料。
[0040]
1、菌株。
[0041]
白假丝酵母菌，购于北纳生物。
[0042]
2、苹果丝瓜全汁提取物的体外抑菌试验。
[0043]
取实施例1制备得到的苹果丝瓜全汁冻干粉，以生理盐水配制成2mg/ml溶液，以一次性无菌微孔过滤器滤去杂质和细菌，备用。
[0044]
在96孔板每行的第1～8孔分别加入液体细菌培养基100μl；在第1孔中加入2000μg/ml的苹果丝瓜全汁冻干粉溶液100μl，使第1孔中苹果丝瓜全汁冻干粉的剂量为1000μg/ml，从第2～7孔依次对半稀释至最低质量浓度15.625μg/ml，作为不同给药剂量组；然后在每行的第1～8孔中均分别加入白假丝酵母菌的菌液(1
×
106cfu/ml，均以液体细菌培养基配制)10μl，第8孔作为阴性对照组；同时设置不含菌、只加入液体细菌培养基的空白对照组。将96孔板在37℃条件下培养24h，观察细菌的生长状况。苹果丝瓜全汁冻干粉每个浓度均设置3个复孔。
[0045]
观察各孔中肉汤的澄清度。判断标准：肉汤是透明的，表明细菌没有生长；肉汤是混浊的，表明有细菌生长。
[0046]
3、统计学处理。
[0047]
采用软件spss12.0进行统计学分析：多组间均数比较采用单因素方差分析；方差齐，组间两两比较采用lsd法；方差不齐，采用秩和检验。p＜0.05为差异有统计学意义。
[0048]
二、结果。
[0049]
肉眼观察结果显示，阴性对照组孔培养基浑浊、细菌生长良好，空白对照组孔培养基澄清、无细菌生长。
[0050]
苹果丝瓜全汁提取物对白假丝酵母菌的最低抑菌浓度(mic)为125μg/ml。苹果丝瓜全汁提取物体外抑菌活性检测结果如下表所示。
[0051]
表1苹果丝瓜全汁冻干粉对白假丝酵母菌的体外抑菌结果(n＝3)
[0052][0053]
注：“+”表示培养基浑浊；
“‑”
表示培养基澄清
[0054]
三、结论。
[0055]
苹果丝瓜全汁冻干粉在体外对白假丝酵母菌具有一定的抑制作用，mic为125μg/ml。
[0056]
实验例2
[0057]
一、方法与材料。
[0058]
1、细胞。
[0059]
小鼠巨噬细胞raw264.7，吉林大学提供。
[0060]
2、细胞培养。
[0061]
raw264.7细胞用含体积分数10％的pbs和100u/ml青-链霉素的rpmi-1640培养基复苏，于37℃、体积分数5％ co2细胞培养箱中进行培养，待生长至对数期用于试验。
[0062]
3、实施例1制备得到的苹果丝瓜全汁冻干粉对脂多糖(lps)诱导的raw264.7细胞释放的炎症因子il-1β、il-6和tnf-α的影响。
[0063]
向6孔板内每孔加入处于对数生长期的raw264.7细胞悬液2ml，每孔3
×
105个细胞，培养24h之后，弃去原培养液，每孔加入含有不同浓度的苹果丝瓜全汁冻干粉以及1μg/ml lps的培养液2ml，设置对照组及模型组，每组设3个重复孔，继续培养24h后先收集上清液，根据相关试剂盒说明书进行操作，采用elisa法检测细胞上清液中il-1β、il-6和tnf-α含量。
[0064]
4、统计学处理。
[0065]
采用软件spss12.0进行统计学分析：多组间均数比较采用单因素方差分析；方差齐，组间两两比较采用lsd法；方差不齐，采用秩和检验。p＜0.05为差异有统计学意义。
[0066]
二、结果。
[0067]
苹果丝瓜全汁冻干粉对巨噬细胞raw264.7释放的炎症因子il-6、il-1β和tnf-α浓度的影响如下表所示。
[0068]
表2苹果丝瓜全汁冻干粉对lps诱导raw 264.7细胞释放的炎症因子的影响(n＝3)
[0069][0070]
注：与对照组比较，ap＜0.05，bp＜0.01；与模型组比较，cp＜0.05，dp＜0.01。
[0071]
相对于模型组，苹果丝瓜全汁冻干粉组的苹果丝瓜全汁冻干粉对炎症因子il-6、il-1β和tnf-α的分泌均有显著性抑制作用。
[0072]
三、结论。
[0073]
苹果丝瓜全汁冻干粉在体外抗炎活性显著。
[0074]
实验例3
[0075]
一、方法与材料。
[0076]
1、菌株。
[0077]
白假丝酵母菌，购于北纳生物。
[0078]
2、动物。
[0079]
spf级昆明种雌性小鼠50只，6～8周龄，20～22g，购于辽宁长生生物技术股份有限公司(动物许可证号：scxk(辽)2020-0001)。
[0080]
3、白假丝酵母菌菌液制备。
[0081]
标准菌株白假丝酵母菌于沙氏葡萄糖液体培养基中培养，接种时将菌液浓度调整为1.5
×
108cfu/ml，备用。
[0082]
4、白假丝酵母菌致小鼠阴道炎模型造模方法。
[0083]
小鼠适应性饲养1周后，随机选取雌性小鼠10只为正常组，剩余小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇(每只0.05ml)和阴道内注入双抗溶液(青霉素和链霉素混合液，每只0.03ml，含青霉素10000u
·
ml-1
、链霉素10mg
·
ml-1
)，每隔2d注射1次，连续3次。末次注射完后用带有灌胃针头的1ml注射器在小鼠阴道内约1cm处注入0.9％氯化钠溶液清洗2～3次，按每只0.03ml注射菌液，而后将动物按头低尾高体位倾斜放置，5min后放回笼内。每2d造模1次，连续3次。
[0084]
5、白假丝酵母菌致小鼠阴道炎模型炎症反应评分。
[0085]
接种后每天肉眼观察阴道，于首次接种后第7、10、14天取阴道分泌物做镜检，直到白色念珠球菌为阳性，并将其分泌物用沙氏葡萄糖琼脂培养基培养，证实白假丝酵母菌的存在，合并肉眼观察阴道黏膜有无红斑、水肿、糜烂、分泌物增多等炎症发生，确定造模成功。
[0086]
根据小鼠的炎症程度制定白假丝酵母菌致小鼠阴道炎模型的评价标准，如下表所示。按照评分标准和分级标准分组，极轻度炎症为0～4分，轻度炎症5～8分，中度炎症9～12分，重度炎症13～16分。
[0087]
表3白假丝酵母菌致小鼠阴道炎模型炎症反应评分标准
[0088][0089][0090]
6、动物分组。
[0091]
造模后3d，肉眼观察小鼠阴道外周炎症变化，根据炎症标准将造模小鼠按极轻度、轻度、中度、重度4个等级进行分类。将极轻度炎症的6只小鼠剔除实验组，剩余34只小鼠按重度、中度、轻度顺序依次分层随机分组，分为模型组、苹果丝瓜凝胶低剂量、苹果丝瓜凝胶高剂量组；每组小鼠10只，剩余轻度炎症的4只小鼠则剔除实验组。所有实验组小鼠经阴道给药，每天2次，连续给药14d。苹果丝瓜提取物凝胶组每天往阴道内注入0.02ml苹果丝瓜凝胶(即苹果丝瓜提取物凝胶低剂量、高剂量组分别注入实施例2和实施例3的凝胶)，正常组和模型组给予等量的空白凝胶(即对比例1的凝胶)。
[0092]
7、指标观察。
[0093]
阴道炎小鼠的症状
[0094]
观察：给药第1、7、14天分别观察小鼠外阴的红肿程度、分泌物情况、分泌物培养情况并评分，同时观察药物治疗的效果。
[0095]
8、统计学处理。
[0096]
采用软件spss12.0进行统计学分析：多组间均数比较采用单因素方差分析；方差齐，组间两两比较采用lsd法；方差不齐，采用秩和检验。p＜0.05为差异有统计学意义。
[0097]
二、结果。
[0098]
1、各组小鼠一般状况比较。
[0099]
正常组小鼠毛发光滑，阴道口无明显红斑、水肿，阴道内分泌物较清亮，分泌物涂板无白假丝酵母菌生长。模型组小鼠，阴道分泌物较多，有红斑和水肿。经苹果丝瓜提取物凝胶各剂量组给药后小鼠阴道红斑、水肿减轻，分泌物也逐渐减少。
[0100]
2、沙氏培养基培养情况评分。
[0101]
与正常组比较，模型组及各苹果丝瓜提取物凝胶治疗组小鼠分泌物沙氏培养基培养情况评分在给药第1天差异有统计学意义(p＜0.01)。与模型组比较，在给药第7天和第14天，受试苹果丝瓜提取物凝胶各组差异有统计学意义(p＜0.01)，苹果丝瓜凝胶各剂量组可以减少白假丝酵母菌菌落的生长，如下表所示。
[0102]
表4白假丝酵母菌性阴道炎小鼠分泌物沙氏培养基培养情况评分(n＝10)
[0103][0104]
注：与正常组比较，ap＜0.05，bp＜0.01；与模型组比较，cp＜0.05，dp＜0.01。
[0105]
3、小鼠炎症反应评分。
[0106]
在给药7d和14d后，苹果丝瓜提取物凝胶各组对小鼠炎症情况均有改善，与模型组比较差异有统计学意义(p＜0.01)，表明受试苹果丝瓜提取物凝胶能改善白假丝酵母菌性阴道炎小鼠炎症反应，显示出较好疗效，如下表所示。
[0107]
表5白假丝酵母菌性阴道炎小鼠炎症反应评分(n＝10)
[0108][0109]
注：与正常组比较，ap＜0.05，bp＜0.01；与模型组比较，cp＜0.05，dp＜0.01。
[0110]
三、结论。
[0111]
苹果丝瓜提取物凝胶能能通过抑制阴道内白假丝酵母菌的增殖，降低阴道炎症反应，治疗白假丝酵母菌性阴道炎效果显著。
[0112]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0113]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来
说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

技术特征：
1.一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶，其特征在于，包括以下质量百分比的原料：2.根据权利要求1所述的凝胶，其特征在于，所述丝瓜提取物为丝瓜全汁冻干粉。3.权利要求1-2中任一项所述的凝胶在制备用于治疗阴道炎的药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述阴道炎为霉菌性阴道炎。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述霉菌性阴道炎为白假丝酵母菌导致的霉菌性阴道炎。6.权利要求1-2中任一项所述的凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备丝瓜提取物：将丝瓜榨汁后，得到丝瓜全汁，静置，取上清液，过滤，冷冻干燥，得到丝瓜全汁冻干粉；制备凝胶：将丝瓜全汁冻干粉、卡波姆、甘油、三乙醇胺、依地酸二钠、水混合，冷却，得到凝胶。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述制备丝瓜提取物步骤中，所述静置的温度为4℃；所述制备凝胶步骤中，所述混合的温度为60-80℃。8.一种用于治疗阴道炎的药物，其特征在于，该药物包括药学上可接受的辅料和权利要求1-2中任一项所述的凝胶。9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述辅料包括以下原料中的至少1种：赋形剂，润滑剂，抗氧剂，防腐剂，黏合剂，填充剂，或增稠剂。

技术总结
本发明涉及一种用于抗白假丝酵母菌的凝胶及其制备方法和应用，涉及医药技术领域。用于抗白假丝酵母菌的凝胶包括以下质量百分比的原料：丝瓜提取物0.1-10％，卡波姆0.3-2％，甘油3-20％，三乙醇胺1-3％，依地酸二钠0.1-0.2％，余量为水。该凝胶安全无副作用，工艺简单，成本低廉，能够较好地抑制白假丝酵母菌的增殖活性，具有显著的抗炎活性，对于白色假丝酵母导致的阴道炎具有显著治疗效果。酵母导致的阴道炎具有显著治疗效果。


技术研发人员：黄小柯 李井涛
受保护的技术使用者：长春诺艾普生物科技有限公司
技术研发日：2023.07.21
技术公布日：2023/9/9