一种检测白果水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱与流程

1.本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种检测白果水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱。


背景技术：

2.目前中国药典项下中药材的鉴别主要有性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别，其中理化鉴别包括物理鉴别、化学鉴别、光谱鉴别、色谱鉴别等，色谱鉴别仍以薄层色谱鉴别为主。而中药材不同品种鉴别在中国药典中甚少体现，主要原因是由于中药材不同品种的物质成分差异研究存在不足，化学信息差异难以把控。
3.中药指纹图谱是一种综合可量化的鉴定手段，主要用于评价中药及其制剂质量的真实性、优良性与稳定性。能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对中药及制剂质量进行整体描述和评价。为了更好地对中药及制剂质量进行控制，保证其临床疗效，建立其成分检测方法全面评价该中药及制剂质量。
4.白果又称银杏，含有多种营养元素，如蛋白质、糖类等，不仅可以为人体的生命活动提供能量，还可以促进抗体的生成，提高机体免疫力。白果性平，味甘、苦、涩，具有敛肺气、定喘嗽的功效，有助于缓解咳嗽、咳痰、哮喘等病症。研究发现，白果种仁中的黄酮甙、萜内酯可用于防治脑血栓、动脉硬化等疾病。目前，药典中收载白果质量控制方面只有性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别和浸出物，由于中药多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的方法。白果中化学成分较多，主要包括有机酸类，酚类、醇类等。有必要对其中的化学成分进行检测，以更好地实现对白果药材及饮片的质量控制和评价。目前关于白果的研究多以醇提取为主，有研究表明，截至目前从中种皮中及种仁中分离出以下化合物，分别为十八烧酸、棕摘酸、二十九烷-10-醇、β-谷甾醇、正三十二烷醇、正二十二烷醇、6-(十五烷基)-水杨酸、6-(8-十五碳稀)-水杨酸、正二十二烷酸-1-甘油酯、正二十烷酸-1-甘油酯、正十六烷酸-1-甘油酯、1,3-十六烷酸-甘油酯，1,3-二亚油酸-甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、银杏内酯b、银杏内酯c、胡萝卜苷、二十六烷酸、棕榈酸、二十九烷-10-醇、正十六烷酸-1-甘油酯、熊果酸、金松双黄酮、银杏黄素、异银杏黄素、胡萝卜苷、银杏内酯a、尿嘧啶、松柏苷、、甘草苷、腺苷、葡萄糖和蔗糖。(“银杏种子资源化学研究”，周桂生，南京中医药大学，2013年)。但临床上中药材的使用多以水提取为主，故针对白果水煎液成分的研究较为欠缺。
5.cn114487204a公开了一种同时检测白果中吡哆醛和吡哆醇的超高效液相色谱-荧光法(uplc-fld)。该方法采用zif-8有机金属骨架材料作为净化材料，结合uplc-fld分析技术，可检测白果中吡哆醛和吡哆醇，仪器检测限分别为0.012mg/l和0.010mg/l，检测限虽然低，但是需要用到zif-8有机金属骨架材料，检测成本较高。
6.因此，开发一种操作简便、成本低、特征性强、准确度高的针对白果水煎液的鉴别方法是本领域的研究重点。


技术实现要素：

7.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测白果水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱，所得指纹图谱特征性强、准确度高，可以对白果药材进行全面的质量评价。
8.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
9.第一方面，本发明提供一种检测白果水煎液指纹图谱的方法，所述方法包括如下步骤：
10.(1)将白果待测药材制备成供试品溶液；
11.(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白果待测药材进行质量评价。
12.本发明提供检测白果药材指纹图谱检测的方法，可利用该方法对白果药材中所含化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立白果药材指纹图谱，该指纹图谱方法专属性强，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰形好，能全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对白果药材进行整体描述和评价。
13.优选地，所述供试品溶液采用如下方法制备，所述方法包括：将所述白果待测药材的白果壳和白果仁分离，均粉碎，合并得到混合物，将所述混合物进行一次水提、二次水提，得到水提液，将所述水提液进行稀释得到所述供试品溶液。
14.优选地，所述粉碎后选用过一号筛不过二号筛的白果药材。
15.优选地，所述混合物中白果壳与白果仁的质量比为1:(1.5-2.5)，例如可以为1:1.6、1:1.8、1:2、1:2.2、1:2.4等。
16.本发明尝试将白果直接破碎后进行提取，但在进行重复性实验时，其重复性较差，主要共有峰的rsd值均大于3.0％，推测可能是取样不均导致，因白果壳破碎后较轻，不易与破碎后的白果仁混匀，故考虑将白果壳和白果仁按比例分开取样，结果发现重复性有改善，但在提取过程中发现白果仁粒度较细，易暴沸且糊化，影响提取效率，通过筛选不同粒度的白果仁对重复性试验的影响，结果发现白果壳和白果仁均在1-2号筛之间时，重复性较好，故本发明进行指纹图谱检测时，白果药材均需破碎，且白果壳和白果仁按比例取1-2号筛之间的粒度的药材。
17.优选地，所述一次水提时料液比为1:(7-9)，例如可以为1:7.5、1:8、1:8.5等，以白果壳和白果仁的混合物为1g计，水为7-9ml。
18.优选地，所述二次水提时料液比为1:(5-7)，例如可以为1:5.5、1:6、1:6.5等，以白果壳和白果仁的混合物为1g计，水为5-7ml。
19.优选地，所述一次水提之前还包括浸泡的步骤。
20.优选地，所述浸泡的时间为20-40min，例如可以为25min、30min、35min等。
21.优选地，所述一次水提、二次水提各自独立地保持微沸25-50min，例如可以为30min、35min、40min、45min等。
22.优选地，所述稀释采用的稀释剂为甲醇。
23.优选地，所述稀释时水提液与稀释剂的体积比为1:(0.8-1.2)，例如可以为1:0.9、1:1、1:1.1等。
24.上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
25.优选地，所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为200-250nm，例如可以为210nm、220nm、230nm、240nm等，流动相a为乙腈，流动相b为磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min。例如可以为0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min等，柱温为25-35℃，例如可以为26℃、28℃、30℃、32℃、34℃等。
26.优选地，所述磷酸水溶液中磷酸的质量百分含量为0.05-0.15％，例如可以为0.06％、0.08％、0.1％、0.12％、0.14％等。
27.优选地，所述梯度洗脱的过程为：0-10min，例如可以为2min、4min、6min、8min等，流动相a：5％，流动相b：95％；10-45min，例如可以为12min、14min、16min、18min、20min、22min、24min、26min、28min、30min、32min、34min、36min、38min、40min、42min、44min等，流动相a：5-15％，例如可以为6％、8％、10％、12％、14％等，流动相b：95-85％，例如可以为94％、92％、90％、88％、86％等；45-50min，例如可以为46min、48min、49min等，流动相a：15-25％，例如可以为16％、18％、20％、22％、24％等，流动相b：85-75％，例如可以为84％、82％、80％、78％、76％等；50-60min，例如可以为52min、54min、56min、58min等，流动相a：25％，流动相b：75％。
28.优选地，所述检测方法还包括制备对照品溶液的步骤，以及采用和供试品溶液相同的检测方法，检测对照品溶液得到特征谱图的步骤。
29.优选地，所述对照品溶液采用如下方法进行制备，所述方法包括：将白果对照药材进行水提，得到滤液进行浓缩、稀释、离心，得到所述对照品溶液。
30.优选地，所述水提时料液比为1:(45-55)，例如可以为1:46、1:48、1:50、1:52、1:54等。
31.优选地，所述水提加热回流0.8-1.2h，例如可以为0.9h、1h、1.1h等。
32.优选地，所述浓缩时浓缩至1/4体积。
33.优选地，所述稀释采用甲醇，所述稀释时的料液比为1:(0.8-1.2)，例如可以为1:0.9、1:1、1:1.1等，以浓缩液为1ml计，甲醇的体积为0.8-1.2ml。
34.作为优选技术方案，所述方法包括如下步骤：
35.(1)将白果待测药材的白果壳和白果仁分离，均粉碎至过一号筛不过二号筛，合并得到混合物，将所述混合物进行一次水提、二次水提，一次水提、二次水提各自独立地保持微沸25-50min，得到水提液，将所述水提液进行稀释得到供试品溶液；
36.所述混合物中白果壳与白果仁的质量比为1:(1.5-2.5)；所述一次水提时料液比为1:(7-9)，二次水提时料液比为1:(5-7)；所述稀释采用的稀释剂为甲醇，所述水提液与稀释剂的体积比为1:(0.8-1.2)；
37.(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白果待测药材进行质量评价；
38.所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为200-250nm，流动相a为乙腈，流动相b为磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min，柱温为25-35℃，所述梯度洗脱的过程为：0-10min，流动相a：5％，流动相b：95％；10-45min，流动相a：5-15％，流动相b：95-85％；45-50min，流动相a：15-25％，流动相b：85-75％；50-60min，流动相a：25％，流动相b：75％；
39.所述磷酸水溶液中磷酸的质量百分含量为0.05-0.15％。
40.第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的方法检测得到的指纹图谱，所述指纹图谱包括3个特征峰。
41.优选地，按照出峰顺序，以峰1为参照峰，所述3个特征峰的相对保留时间为1.00、1.09-1.22(例如可以为1.10、1.11、1.12、1.14、1.16、1.18、1.20等)、1.20-1.34(例如可以为1.22、1.24、1.26、1.28、1.30、1.32等)。
42.优选地，按照出峰顺序，以峰1为参照峰，所述3个特征峰的相对保留时间为1.00、1.11、1.21。
43.经表征，峰1所属化合物为吲哚乙酸-谷氨酰胺葡萄糖(iaa-asp-n-glc)，其结构式如下所示：
[0044][0045]
经表征，峰3所属化合物为吲哚乙酸-天冬氨酸葡萄糖(iaa-glu-n-glc)，其结构式如下所示：
[0046][0047]
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0048]
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
[0049]
本发明提供检测白果药材指纹图谱检测的方法，可利用该方法对白果药材中所含化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立白果药材指纹图谱，该指纹图谱方法专属性强，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰形好，能全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对白果药材进行整体描述和评价。
[0050]
本发明处理待测白果样品时，将白果壳和白果仁按比例分开取样，并且对于样品的粒径进行控制，有效提高检测结果的重复性；同时本发明在测试过程中分离出两个暂无报道白果中含有的成分，对于临床白果药材质量控制具有十分重要的意义。
附图说明
[0051]
图1为测试例1中全波长3d色谱图；
[0052]
图2为测试例3检测得到的特征谱图；
[0053]
图3为测试例4检测得到的特征谱图；
[0054]
图4为测试例5检测得到的特征谱图；
[0055]
图5为实施例1检测得到的特征谱图；
[0056]
图6为测试例6中精密度验证检测得到的特征谱图；
[0057]
图7为测试例6中重复性验证检测得到的特征谱图；
[0058]
图8为测试例6中稳定性验证检测得到的特征谱图；
[0059]
图9为测试例6中多批次白果药材验证检测得到的特征谱图。
具体实施方式
[0060]
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
[0061]
本文所用术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，还可包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0062]“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
[0063]
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
[0064]
本发明所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例性地”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本文中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。
[0065]
以下实施例中试剂或仪器来源如下：
[0066]
高效液相色谱仪：lc-2030c 3d plus，岛津；
[0067]
电子分析天平：xrp2.mettler.toledo，瑞士梅特勒-托利多公司；
[0068]
电子分析天平：ml204t/02.mettler.toledo，瑞士梅特勒-托利多公司；
[0069]
白果对照药材：中国食品药品检定研究院提供。
[0070]
测试例1
[0071]
检测波长的选择
[0072]
取白果药材适量，白果壳与白果仁分离后，分别破碎后取过一号筛不过二号筛的白果壳5g，白果仁10g，置同一圆底烧瓶中，加8倍量水(120ml)，浸泡30min，加热至沸腾并保持微沸45min，趁热过滤，收集滤液，药渣再加6倍量水(90ml)，加热至沸腾并保持微沸30min，趁热过滤，合并两次滤液，得到水提液。取2ml水提液，加甲醇2ml，摇匀后离心，取上清液进行全波长扫描，经过多个波长的对比分析，全波长3d色谱图如图1所示，根据检测结果，最终选择波长为225nm。
[0073]
测试例2
[0074]
流动相的选择
[0075]
分别选用甲醇-0.4％磷酸、甲醇-0.5％甲酸、乙腈-0.1％三氟乙酸、乙腈-0.5％甲酸，乙腈-0.1％磷酸进行考察，根据检测结果中呈现的色谱峰个数及基线情况，最终确定采
用乙腈-0.1％磷酸体系，并确定洗脱程如下表所示：
[0076][0077][0078]
测试例3
[0079]
供试品溶液制备方法选择-醇比例
[0080]
方案一：
[0081]
(1)取白果药材适量，白果壳与白果仁分离后，分别破碎后取过一号筛不过二号筛的白果壳5g，白果仁10g，置同一圆底烧瓶中，加8倍量水(120ml)，浸泡30min，加热至沸腾并保持微沸45min，趁热过滤，收集滤液，药渣再加6倍量水(90ml)，加热至沸腾并保持微沸30min，趁热过滤，合并两次滤液，得到水提液；
[0082]
(2)将水提液浓缩至干，加70％甲醇复溶后过滤，进样检测分析。
[0083]
方案二：
[0084]
其与方案一的区别仅在于步骤(2)，本方案步骤(2)为：将水提液浓缩至1/4体积，再加1倍体积量甲醇混匀后过滤，进样检测分析。
[0085]
方案三：
[0086]
其与方案一的区别仅在于步骤(2)，本方案步骤(2)为：将水提液加3倍体积量甲醇混匀后过滤，进样检测分析。
[0087]
方案四：
[0088]
其与方案一的区别仅在于步骤(2)，本方案步骤(2)为：将水提液加2倍体积量甲醇混匀后过滤，进样检测分析。
[0089]
方案五：
[0090]
其与方案一的区别仅在于步骤(2)，本方案步骤(2)为：将水提液加1倍体积量甲醇混匀后过滤，进样检测分析。
[0091]
方案一～方案五检测得到的特征谱图如图2所示，由图可知，方案五得到的谱图中各特征峰分离情况，基线情况，峰形情况均略优于其他谱图，因此本发明选择方案五的供试品制备方法。
[0092]
测试例4
[0093]
供试品溶液制备方法选择-捣碎方式
[0094]
将白果直接破碎后，取15g，置同一圆底烧瓶中，加8倍量水(120ml)，浸泡30min，加热至沸腾并保持微沸45min，趁热过滤，收集滤液，药渣再加6倍量水(90ml)，加热至沸腾并保持微沸30min，趁热过滤，合并两次滤液。取2ml水提液，加甲醇2ml，摇匀后离心，取上清液作为供试品溶液，平行制备5份，进行检测。
[0095]
检测得到的特征谱图如图3所示，由图可知，将白果直接破碎后进行提取，其重复
性较差，主要共有峰的rsd值均大于3.0％，推测可能是取样不均导致，因白果壳破碎后较轻，不易与破碎后的白果仁混匀，因此，考虑将白果壳和白果仁按比例分开取样。
[0096]
测试例5
[0097]
供试品溶液制备方法选择-药材粒径
[0098]
取白果药材适量，白果壳与白果仁分离后，分别过一号筛，称取白果壳5g，白果仁10g，置同一圆底烧瓶中，加8倍量水(120ml)，浸泡30min，加热至沸腾并保持微沸45min，趁热过滤，收集滤液，药渣再加6倍量水(90ml)，加热至沸腾并保持微沸30min，趁热过滤，合并两次滤液。取2ml水提液，加甲醇2ml，摇匀后离心，取上清液作为供试品溶液，平行制备5份，进行检测。
[0099]
检测得到的特征谱图如图4所示，由图可知，将白果壳和白果仁只过一号筛，得到的药材粒径差异性还是较大，其重复性较差，主要共有峰的rsd值均大于3.0％，推测可能是粒径不均导致，因此，考虑将白果壳和白果仁采用过一号筛不过二号筛的大小，即1-2号筛，来进一步控制药材粒径。
[0100]
实施例1
[0101]
本实施例提供一种检测白果水煎液指纹图谱的方法，所述方法包括如下步骤：
[0102]
(1)取白果对照药材约1g，加水50ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至12ml左右，取浓缩液1ml，加甲醇1ml，混匀，离心(4000转/分钟)5分钟，取上清液，滤过，得到对照品溶液，进样检测分析；
[0103]
(2)取白果药材适量，白果壳与白果仁分离后，分别破碎后取过一号筛不过二号筛的白果壳5g，白果仁10g，置同一圆底烧瓶中，加8倍量水(120ml)，浸泡30min，加热至沸腾并保持微沸45min，趁热过滤，收集滤液，药渣再加6倍量水(90ml)，加热至沸腾并保持微沸30min，趁热过滤，合并两次滤液，得到水提液；取2ml水提液，加甲醇2ml，混匀后过滤，得到供试品溶液，进样检测分析；
[0104]
(3)采用安捷伦poroshell 120ec色谱柱色谱柱，柱温为30℃，检测波长为225nm，流动相a为乙腈，流动相b为0.1％磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，洗脱过程如下表所示：
[0105]
时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0-1059510-455
→
1595
→
8545-5015
→
2585
→
7550-602575
[0106]
检测得到的特征谱图如图5所示。
[0107]
测试例6
[0108]
方法学验证
[0109]
1、精密度
[0110]
将实施例1中得到的供试品溶液连续进样6针进行测定，检测得到的特征谱图如图6所示，检测结果中各特征峰的相对保留时间和相对峰面积的结果如表1所示。
[0111]
由谱图和表格数据可知，供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的相对标准偏差小于0.23％，相似度均不小于0.999，表明该方法精密度良好。
[0112]
表1
[0113][0114][0115]
2、重复性
[0116]
将实施例1中得到的供试品溶液，平行配制5份进行测定，检测得到的特征谱图如图7所示，检测结果中各特征峰的相对保留时间和相对峰面积的结果如表2所示。
[0117]
由谱图和表格数据可知，供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的相对标准偏差小于0.94％，供试品溶液相似度均不小于0.999，表明该方法稳定性良好。
[0118]
表2
[0119][0120]
3、稳定性
[0121]
将实施例1中得到的供试品溶液，分别于0h、3h、6h、9h、15h、24h进行进样检测，检测得到的特征谱图如图8所示，检测结果中各特征峰的相对保留时间和相对峰面积的结果如表3所示。
[0122]
由谱图和表格数据可知，以0h为参照，计算相似度，结果供试品溶液相似度均不小于0.999，表明该方法稳定性良好。
[0123]
表3
[0124][0125]
4、多批次制备
[0126]
使用实施例1的制备方法测定了21批次符合质量分析中的质量要求的白果药材，检测结果如图9所示，并将得到的指纹图谱导入国家药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统2012年a版》，计算相似度(mark峰匹配)，结果相似度均大于0.9，并选择21批次样品指纹图谱中稳定性好、响应值适宜的色谱峰为共有峰，并将其作为白果的特征峰，共标定了3个特征峰。
[0127]
测试例7
[0128]
特征峰归属
[0129]
确定的3个特征峰经与对照药材及已有对照品比对，暂认为其为未知成分，因此暂选择对照药材为参照物，并选择响应较强、保留时间适中、且达到基线分离的峰1为参照峰，并将其标记为峰s。3个未知成分经分离、纯化及高分辨质谱(high resolution mass spectrum)、核磁共振波谱法(nuclear magnetic resonance spectroscopy,nmr)等手段鉴定得知，峰1所代表的成分为iaa-asp-n-glc(化合物1)，峰3所代表的成分为iaa-glu-n-glc(化合物3)，其结构如下，
[0130][0131]
化合物1的正源高分辨电喷雾质谱(positive ion high resolution electrospray ionization mass spectrometry；phresims)图显示其准分子离子峰为m/z453.1504[m+h]+，对应的分子式为c
20h24
n2o
10
(理论计算值为453.1486；不饱和度为10)。通过与文献比较，该化合物被鉴定为已知化合物iaa-asp-n-glc，其nmr数据如表4所示：
[0132]
表4
[0133]
position.δ
ha
(j in hz)δ
cb
,mult.hmbcc(h
→
c)27.331,s124.47,ch3,3a,7a,8,1
′
3 109.34,qc 3a 128.11,qc 47.549,d(7.8)119.04,ch3,6,7a57.015,t(7.2)119.16,ch3a,767.121,t(7.8)121.29,ch4,7a,77.511,d(8.4)110.52,ch3a,57a 136.50,qc 83.563,d(6.0)32.13,ch22,3,3a,99 170.18,qc 104.489,d(6.6)48.76,ch12,1311 172.69,qc 12a2.686,dd(16.2,6.6)36.85,ch210,1312b
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10,13132.574,dd(16.2,6.0)171.92,qc 1
′ꢀ
84.43,ch2,7a,2
′
,3
′2′
5.392,d(9.0)72.51,ch1
′
,3
′3′
3.662-3.772,m77.62,ch 4
′
3.401-3.458,m 3.255,69.91,ch3
′
,5
′
,6
′5′
t(9.0)79.38,ch 6
′
a3.401-3.458,m60.93,ch
2 6
′
b3.662-3.772,m
ꢀꢀ
oh3.401-3.458,m
ꢀꢀ
oh4.593,br s
ꢀꢀ
nh5.083,br s 9oh8.292,d(6.0)
ꢀꢀꢀ
12.994,br s
ꢀꢀ
[0134]
化合物3的正源高分辨电喷雾质谱(positive ion high resolution electrospray ionization mass spectrometry；phresims)图显示其准分子离子峰为m/z467.1653[m+h]+，对应的分子式为c
21h26
n2o
10
(理论计算值为467.1660；不饱和度为10)。通过与文献比较，该化合物被鉴定为已知化合物iaa-glu-n-glc，其nmr数据如表5所示：
[0135]
表5
[0136]
position.δ
ha
(j in hz)δ
cb
,mult.hmbcc(h
→
c)27.339,s124.48,ch3,3a,7a,3 109.45,qc 3a 128.09,qc 47.555,d(7.8)118.99,ch3,6,7a57.024,t(7.2)119.13,ch3a,767.131,t(7.8)121.27,ch4,7a,77.510,d(8.4)110.53,ch3a,57a 136.49,qc 83.557,s32.20,ch22,3,3a,99 170.17,qc 104.179,d(5.4)51.73,ch 11 174.09,qc 121.854,dd(16.2,7.8)27.11,ch
2 132.268,s30.89,ch
2 14 173.62,qc 1
′
5.392,d(9.0)84.43,ch2,7a,2
′2′
3.660-3.720,m71.86,ch1
′
,3
′3′
3.374-3.454,m 3.252,t77.60,ch 4
′
(9.0)69.90,ch5
′
,6
′5′
3.374-3.454,m79.37,ch 6
′
a3.660-3.720,m60.93,ch
2 6
′
b3.374-3.454,m
ꢀꢀ
oh5.092,br s
ꢀꢀ
nh8.110,s
ꢀꢀ
[0137]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局
限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.一种检测白果水煎液指纹图谱的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将白果待测药材制备成供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白果待测药材进行质量评价。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液采用如下方法制备，所述方法包括：将所述白果待测药材的白果壳和白果仁分离，均粉碎，合并得到混合物，将所述混合物进行一次水提、二次水提，得到水提液，将所述水提液进行稀释得到所述供试品溶液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述粉碎至过一号筛不过二号筛；优选地，所述混合物中白果壳与白果仁的质量比为1:(1.5-2.5)。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述一次水提时料液比为1:(7-9)；优选地，所述二次水提时料液比为1:(5-7)；优选地，所述一次水提、二次水提各自独立地保持微沸25-50min。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述稀释采用的稀释剂为甲醇；优选地，所述稀释时水提液与稀释剂的体积比为1:(0.8-1.2)。6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为200-250nm，流动相a为乙腈，流动相b为磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min，柱温为25-35℃；优选地，所述磷酸水溶液中磷酸的质量百分含量为0.05-0.15％。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的过程为：0-10min，流动相a：5％，流动相b：95％；10-45min，流动相a：5-15％，流动相b：95-85％；45-50min，流动相a：15-25％，流动相b：85-75％；50-60min，流动相a：25％，流动相b：75％。8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述检测方法还包括制备对照品溶液的步骤，以及采用和供试品溶液相同的检测方法，检测对照品溶液得到特征谱图的步骤。9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将白果待测药材的白果壳和白果仁分离，均粉碎至过一号筛不过二号筛，合并得到混合物，将所述混合物进行一次水提、二次水提，一次水提、二次水提各自独立地保持微沸25-50min，得到水提液，将所述水提液进行稀释得到供试品溶液；所述混合物中白果壳与白果仁的质量比为1:(1.5-2.5)；所述一次水提时料液比为1:(7-9)，二次水提时料液比为1:(5-7)；所述稀释采用的稀释剂为甲醇，所述水提液与稀释剂的体积比为1:(0.8-1.2)；(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白果待测药材进行质量评价；所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为200-250nm，流动相a为乙腈，流动相b为磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2ml/min，柱温为25-35℃，所述梯度洗脱的过程为：0-10min，流动相a：5％，流动相b：95％；10-45min，流动相a：5-15％，流动相b：95-85％；45-50min，流动相a：15-25％，流动相b：85-75％；50-60min，流动相a：25％，流动相b：75％；
所述磷酸水溶液中磷酸的质量百分含量为0.05-0.15％。10.一种如权利要求1-9任一项所述的方法检测得到的指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱包括3个特征峰；优选地，按照出峰顺序，以峰1为参照峰，所述3个特征峰的相对保留时间为1.00、1.09-1.22、1.20-1.34。

技术总结
本发明提供一种检测白果水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱，所述方法包括如下步骤：(1)将白果待测药材制备成供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白果待测药材进行质量评价。本发明提供检测白果药材指纹图谱检测的方法，可对白果药材中所含化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立白果药材指纹图谱，该指纹图谱方法专属性强，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰形好，能全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对白果药材进行整体描述和评价。整体描述和评价。整体描述和评价。


技术研发人员：韩豫 王亚茹 成亮 魏茂陈
受保护的技术使用者：上海硕方医药科技有限公司
技术研发日：2023.06.19
技术公布日：2023/9/9