一种促进FXR蛋白与Caspase8蛋白相互作用的小分子的制备方法

一种促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用的小分子的制备方法
技术领域
1.本发明属于化学合成技术领域，涉及一种促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用的小分子的制备方法。


背景技术：

2.研究表明，非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,nash)以及肝纤维化状态下伴有显著的肝细胞凋亡。法尼醇x受体(farnesoid x receptor，fxr，又称nr1h4)激动剂对nash等疾病状态下显著升高的肝细胞凋亡状态没有改善作用，是其临床药效局限的主要原因之一。另外，前期研究表明，肝细胞中fxr蛋白与caspase8蛋白之间具有稳定的蛋白-蛋白相互作用。当肝细胞受到凋亡刺激时，fxr与caspase8蛋白之间的相互作用减弱，使得caspase 8与fadd、rip1相互结合形成凋亡复合体，该复合体促进caspase 8的剪切活化，促进凋亡的进程。因此，稳定和增强fxr蛋白与caspase 8蛋白之间的相互作用，是阻断凋亡信号传导及凋亡发生发展的重要策略。然而，fxr蛋白与caspase 8蛋白之间的相互作用如何调控尚且未知。
3.cn2021116814033公开了一种增强剂3c1在制备fxr蛋白和caspase 8蛋白相互作用的增强剂中的应用。增强剂3c1的结构式如下：
[0004][0005]
该增强剂可以促进fxr蛋白和caspase 8蛋白之间的相互作用，进而抑制caspase 8向凋亡复合体的募集，阻断凋亡复合物形成，抑制caspase 8的剪切活化，阻断凋亡进程，抑制细胞凋亡。因此，该增强剂可用于制备治疗具有凋亡表型的肝脏疾病的药物。
[0006]
目前，该增强剂作为一类结构简单的小分子，其合成路线尚不明确。


技术实现要素：

[0007]
发明目的：本发明目的在于提供一种促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用的小分子的制备方法。目前此类小分子的合成路线尚不明确，本发明提供的制备方法明确了起始原料、合成途径，从而高选择、高产率地得到此类化合物，并且合成方法简易，后处理简便，无需极端条件即可得到产物。
[0008]
技术方案：本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0009]
本发明提供了一种促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用的小分子的制备方法，其合成路线如下：
[0010][0011]
所述小分子具有式i所示结构：
[0012][0013]
其中，
[0014]
r1，r2，r3，r4，r5各自独立地选自卤素或h，
[0015]
所述卤素为f、cl、br或i。
[0016]
本发明还提供了所述小分子的制备方法，包括以下步骤：
[0017]
(1)化合物1与化合物2在弱碱存在下，在有机溶剂中反应得到化合物3；
[0018]
(2)化合物3与劳森试剂在有机溶剂中，加热回流反应得到化合物4；
[0019]
(3)化合物4与化合物5在酸性条件下反应，在弱碱性条件下关环，得到式i化合物。
[0020]
优选地，步骤(1)中，所述弱碱选自n,n-二异丙基乙胺。
[0021]
优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺。
[0022]
优选地，步骤(1)中，-5～5℃下，化合物2与hatu反应10～60min后，加入化合物1和弱碱，室温反应6～18h；所述化合物1、化合物2、hatu与弱碱的摩尔比为1:(1.1～2.0):(1.1～2.0):(1.3～3.0)。
[0023]
优选地，步骤(2)中，所述有机溶剂选自甲苯。
[0024]
优选地，步骤(2)中，化合物3与劳森试剂在40～100℃，反应12h～16h；所述化合物3与劳森试剂的摩尔比为(1.5～3.0):(0.8～1.2)。
[0025]
优选地，步骤(3)中，将化合物4与化合物5溶于混合溶剂中，加入盐酸溶液与乙酸，
于60～90℃下，反应0.5～3h，蒸除溶剂，再加入有机溶剂，用10％naoh溶液调ph＝8-9，60～90℃下反应4～22h；所述化合物4与化合物5的摩尔比为(0.6～1.8):1。
[0026]
进一步地，所述混合溶剂为醇类和水，所述有机溶剂选自乙醇。
[0027]
本发明所述小分子选自以下化合物：
[0028][0029]
本发明提供的制备方法不仅可以合成小分子q1(即增强剂3c1)，还可以合成得到化合物q2、q3、q4、q5。化合物q2-q5的制备方法与化合物q1相同，区别仅在于，起始原料与q1的起始原料结构不同，选择苯环上不同卤素取代的原料进行反应，即可得到化合物q2-q5。
[0030]
采用本发明提供的制备方法，能够制备得到一类促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用的小分子，这些小分子可以用于探究fxr蛋白与caspase 8蛋白之间的相互作用调控；可以开发成为抗凋亡或抗纤维化的药物，疗效好，毒副作用小。所有这些工作将为此类小分子的后续开发提供重要支持。
[0031]
有益效果：
[0032]
本发明提供的小分子制备方法路线新颖，明确了起始原料、合成途径，反应位点的高选择性，导致副产物较少，产率较高，从而高选择、高产率地得到了此类化合物。且本发明制备方法简单，后处理简便，无需极端条件即可得到产物。这对于促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用和肝脏疾病治疗的研究都具有重要意义。
具体实施方式
[0033]
下面通过具体实施例对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。
[0034]
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
[0035]
实施例1
[0036]
(1)n-(3-氯-4-氟苯基)-2-氧代丙酰胺的制备
[0037][0038]
将丙酮酸(764μl，11mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(15ml)中，向其中加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu，4183mg，11mmol)，在0℃下反应30分钟，然后，加入3-氟-4-氯苯胺(1456mg，10mmol)、n,n-二异丙基乙胺(2612μl，15mmol)，
室温反应12小时，反应完成后用乙酸乙酯、水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，5％盐酸溶液、饱和nacl溶液交替洗涤5次，无水na2so4干燥，浓缩，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝8:1，v/v)，得白色固体产品(1219mg，收率56.7％)。
[0039]1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm)8.76(s,1h),7.88(dd,j＝6.5,2.7hz,1h),7.47(ddd,j＝8.9,4.1,2.7hz,1h),7.16(t,j＝8.7hz,1h),2.59(s,3h)。
[0040]
esi-ms(m/z)：214.0069[m+h-]。
[0041]
(2)n-(3-氯-4-氟苯基)-2-硫代丙乙酰胺的制备
[0042][0043]
将n-(3-氯-4-氟苯基)-2-氧代丙酰胺(862mg，4mmol)溶于8ml甲苯中，向其中加入劳森试剂(810mg，2mmol，此试剂购自安耐吉化学)，在78℃下反应14小时，反应完成后，浓缩，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20:1，v/v)，得白色固体产物(469mg，收率50.5％)。
[0044]1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm)10.53(s,1h),8.29(dd,j＝6.5,2.7hz,1h),7.80(ddd,j＝9.0,4.1,2.7hz,1h),7.32
–
7.14(m,1h),2.76(s,3h)。
[0045]
esi-ms(m/z)：299.9835[m+h-]。
[0046]
(3)5-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-6-甲基-1,2,4-三嗪-3(2h)-硫酮的制备(化合物q1)
[0047][0048]
将n-(3-氯-4-氟苯基)-2-硫代丙乙酰胺(231mg，1mmol)、氨基硫脲(91mg，1mmol)溶于3ml乙醇：水(1:1，v/v)溶液中，向其中加入醋酸(0.2ml)、37％盐酸(0.02ml)，在78℃下反应1小时，反应完成后，旋蒸除去溶剂，过滤，水洗滤饼三次，将滤饼溶于10ml乙醇中，用10％naoh溶液调ph＝8～9，在78℃下反应20小时。反应完成后，浓缩，柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝50:1，v/v)，得白色固体产物(140mg，收率51.7％，纯度98.9％)。
[0049]1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm)13.66(s,1h),9.53(s,1h),8.04(dd,j＝6.8,2.6hz,1h),7.75(ddd,j＝9.0,4.5,2.6hz,1h),7.49(t,j＝9.1hz,1h),2.33(s,3h)。
[0050]
esi-ms(m/z)：269.0069[m+h-]。
[0051]
实施例2
[0052]
(1)n-(3-氯-4-氟苯基)-2-氧代丙酰胺的制备
[0053]
将丙酮酸(1390μl，20mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(30ml)中，向其中加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu，7605mg，20mmol)，在-5℃下反应60分钟，然后，加入3-氟-4-氯苯胺(1456mg，10mmol)、n,n-二异丙基乙胺(5224μl，30mmol)，室温反应18小时，反应完成后用乙酸乙酯、水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，5％盐酸溶液、饱和nacl溶液交替洗涤5次，无水na2so4干燥，浓缩，柱层析纯化
(石油醚：乙酸乙酯＝8:1，v/v)，得白色固体产品(982.5mg，收率45.7％)。
[0054]
(2)n-(3-氯-4-氟苯基)-2-硫代丙乙酰胺的制备
[0055]
将n-(3-氯-4-氟苯基)-2-氧代丙酰胺(647mg，3mmol)溶于8ml甲苯中，向其中加入劳森试剂(808mg，2mmol，此试剂购自安耐吉化学)，在100℃下反应12小时，反应完成后，浓缩，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20:1，v/v)，得白色固体产物(210mg，收率45.5％)。
[0056]
(3)5-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-6-甲基-1,2,4-三嗪-3(2h)-硫酮的制备(化合物q1)
[0057]
将n-(3-氯-4-氟苯基)-2-硫代丙乙酰胺(92mg，0.4mmol)、氨基硫脲(60mg，0.66mmol)溶于2ml乙醇：水(1:1，v/v)溶液中，向其中加入醋酸(132μl)、37％盐酸(13.2μl)，在90℃下反应0.5小时，反应完成后，旋蒸除去溶剂，过滤，水洗滤饼三次，将滤饼溶于10ml乙醇中，用10％naoh溶液调ph＝8～9，在90℃下反应4小时。反应完成后，浓缩，柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝50:1，v/v)，得白色固体产物(48mg，收率44.5％，纯度90.1％)。
[0058]
实施例3
[0059]
(1)n-(3-氯-4-氟苯基)-2-氧代丙酰胺的制备
[0060]
将丙酮酸(1043μl，15mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，向其中加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu，5704mg，15mmol)，在5℃下反应10分钟，然后，加入3-氟-4-氯苯胺(1456mg，10mmol)、n,n-二异丙基乙胺(3483μl，20mmol)，室温反应6小时，反应完成后用乙酸乙酯、水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，5％盐酸溶液、饱和nacl溶液交替洗涤5次，无水na2so4干燥，浓缩，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝8:1，v/v)，得白色固体产品(10011mg，收率47.0％)。
[0061]
(2)n-(3-氯-4-氟苯基)-2-硫代丙乙酰胺的制备
[0062]
将n-(3-氯-4-氟苯基)-2-氧代丙酰胺(862mg，4mmol)溶于8ml甲苯中，向其中加入劳森试剂(1293mg，3.2mmol，此试剂购自安耐吉化学)，在40℃下反应16小时，反应完成后，浓缩，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20:1，v/v)，得白色固体产物(237mg，收率32.1％)。
[0063]
(3)5-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-6-甲基-1,2,4-三嗪-3(2h)-硫酮的制备(化合物q1)
[0064]
将n-(3-氯-4-氟苯基)-2-硫代丙乙酰胺(209mg，0.9mmol)、氨基硫脲(46mg，0.5mmol)溶于3ml乙醇：水(1:1，v/v)溶液中，向其中加入醋酸(0.1ml)、37％盐酸(0.01ml)，在60℃下反应2小时，反应完成后，旋蒸除去溶剂，过滤，水洗滤饼三次，将滤饼溶于10ml乙醇中，用10％naoh溶液调ph＝8～9，在60℃下反应22小时。反应完成后，浓缩，柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝50:1，v/v)，得白色固体产物(33mg，收率40.5％，纯度89.7％)。
[0065]
如上所述，尽管参照特定的优选实施例已经表示和表述了本发明，但其不得解释为对本发明自身的限制。在不脱离所附权利要求定义的本发明的精神和范围前提下，可对其在形式上和细节上作出各种变化。

技术特征：
1.一种促进fxr蛋白与caspase 8蛋白相互作用的小分子的制备方法，其特征在于，其合成路线如下：所述小分子具有式i所示结构：其中，r1，r2，r3，r4，r5各自独立地选自卤素或h，所述卤素为f、cl、br或i。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)化合物1与化合物2在弱碱存在下，在有机溶剂中反应得到化合物3；(2)化合物3与劳森试剂在有机溶剂中，加热反应得到化合物4；(3)化合物4与化合物5在酸性条件下反应，在弱碱性条件下关环，得到式i化合物。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述弱碱选自n,n-二异丙基乙胺。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述有机溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，-5～5℃下，化合物2与hatu反应10～60min后，加入化合物1和弱碱，室温反应6～18h；所述化合物1、化合物2、hatu与弱碱的摩尔比为1:(1.1～2.0):(1.1～2.0):(1.3～3.0)。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述有机溶剂选自甲苯。7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，化合物3与劳森试剂在40～100℃下，反应12h～16h；所述化合物3与劳森试剂的摩尔比为(1.5～3.0):(0.8～1.2)。8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将化合物4与化合物5溶于混合溶剂中，加入盐酸溶液与乙酸，于60～90℃下，反应0.5～3h，蒸除溶剂，再加入有机溶剂，用10％naoh溶液调ph＝8-9，60～90℃下反应4～22h；所述化合物4与化合物5的摩尔比为(0.6～1.8):1。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述混合溶剂为醇类和水，所述有机溶剂选自乙醇。10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述小分子选自以下化合物：

技术总结
本发明公开了一种促进FXR蛋白与Caspase 8蛋白相互作用的小分子的制备方法。本发明式I所示的小分子可通过三步合成。本发明提供的小分子制备方法路线新颖，明确了起始原料、合成途径，从而高选择、高产率地得到了此类化合物。且本发明制备方法简单，后处理简便，无需极端条件即可得到产物。本发明制备的小分子可以用于探究FXR蛋白与Caspase 8蛋白之间的相互作用调控；可以开发成为抗凋亡或抗纤维化的药物。物。物。


技术研发人员：郝海平 徐小为 马士贞 王洪 胡洋
受保护的技术使用者：中国药科大学
技术研发日：2023.06.08
技术公布日：2023/9/12